肾上腺髓质素在人肾小管上皮细胞系对转化生长因子β1的拮抗作用

目的探讨肾上腺髓质素(AM)在人肾小管上皮细胞系(HK-2)对转化生长因子β1(TGF-β1)生物学效应的影响.观察系膜增生性肾小球肾炎患者血浆AM水平与肾小管间质病变的关系.方法体外细胞培养实验分为4组(1)TGF-β1组;(2)AM组;(3)AM+TGF-β1组;(4)对照组.以3H-TdR掺入法测定细胞增殖;细胞总胶原的合成和分泌以3H-脯氨酸掺入量及培养液内3H-羟脯氨酸放射性活性来判断;E1.ISA法检测培养液中的纤连蛋白(FN)含量;FN、Ⅳ型胶原和TIMP-1mRNA的表达采用RT-PCR法;25例系膜增生性肾小球肾炎患者血浆AM水平测定采用放射免疫法.并设对照组.结果(1)AM对TGF-β1的生长抑制作用无明显影响;(2)AM呈浓度依赖性抑制TGF-β1刺激的胶原合成和分泌,与TGF-β1组相比,AM(10-8mol/L)分别抑制了8%(P＞0.05)和30%(P＜0.05)的胶原合成和分泌,AM(10-7mol/L)则分别抑制了57%(P＜0.05)和64%(P＜0.01);并且AM明显抑制TGF-β1刺激的FN分泌,AM+TGF-β1组FN分泌(20ng/μl±5ng/μl)较TGF-β1组(28ng/μl±6ng/μl)降低了30%(P＜0.05);AM显著抑制TGF-β1刺激的Ⅳ型胶原、FN及TIMP-1mRNA的表达;(3)肾小管间质轻度病变组重度病变组患者血浆AM水平较对照组分别增加了1.2倍和2.2倍(P＜0.01),其中重度病变组较轻度病变组血浆AM水平高出0.5倍(P＜0.01).结论在HK-2细胞,AM具有拮抗TGF-β1促进细胞外基质沉积的作用;原发性肾小球肾炎患者血浆AM水平较正常人明显升高,且与小管间质病变程度有关.     

肾上腺髓质素对上皮性卵巢癌细胞增殖的影响

目的观察肾上腺髓质素（AM）对体外培养的人上皮性浆液性卵巢癌细胞株（CAOV3细胞）增殖的影响。方法将CAOV3细胞进行体外培养,以不同浓度的AM（1-52）（1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L）分别处理CAOV3细胞24小时、48小时、72小时,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞的增殖率。结果在AM（1-52）浓度为1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L时均可促进CAOV3细胞增殖（P〈0.05）,随着AM（1-52）浓度的增高及作用时间的延长细胞的增殖率呈增高趋势（P〈0.05）。结论AM能促进CAOV3细胞的增殖。     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

肾上腺髓质素及其受体在中枢神经系统的表达和作用

肾上腺髓质素(adrenomedullin，ADM)是一种新型的多功能生物活性肽，在体内分布广泛，其特殊的结构特征及其效应受体的多样性使其具有多种生物学功能。最初，ADM的发现者Kitamura等报道，脑内未见有ADM的存在，但近年来的研究表明，ADM在中枢神经系统内亦有广泛表达，且作为一种神经递质或调质起着多种生物学作用。     

胰岛素样生长因子-Ⅱ和肾上腺髓质素在急性链球菌感染后肾小球肾炎患儿中的变化

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ）和肾上腺髓质素 （ADM）在急性链球菌感染后肾小球肾炎（APSGN）中的变化及临床意义.方法应用放射免疫法测定36例APSGN患儿（观察组）入院和住院第15 d时血清IGF-Ⅱ与ADM水平,并与正常儿童（对照组）进行比较.结果入院时APSGN患儿与正常儿的血清IGF-Ⅱ、ADM的含量间差别均有显著性意义（P＜0.05）;入院第15 d时APSGN患儿与正常儿血清IGF-Ⅱ含量间差别仍有显著性意义（P＜0.05） ,而血清ADM含量间差别无显著性意义（P＞0.05）.结论 APSGN患儿存在着IGF-Ⅱ和ADM水平改变.ADM增高可能与APSGN急性期患儿因机体防御作用使血压升高有关;IGF-Ⅱ降低可能与APSGN患儿肾功能受损和免疫功能失调有关,但其在APSGN发病中的作用值得进一步研究探讨.     

肾上腺髓质素对内皮素心肌损伤的保护

本实验在离体灌流大鼠心脏模型上观察了肾上腺髓质素（ＡＭ）和内皮素的相互作用。发现应用内皮素（１０－９ｍｏｌ／Ｌ）灌流可引起冠脉严重痉挛、心脏功能和组织损伤。ＡＭ（１０－８，１０－７ｍｏｌ／Ｌ）与内皮素同时灌流能有效地减轻内皮素所引起的心脏损伤，显著）曾加冠脉流量和ＬＶ±ｄｐ／ｄｔｍａｘ，抑制心室内压急剧升高和心肌脂质过氧化物形成，减少细胞内酶（ＬＤＨ）漏出、心肌ＭＤＡ释放和心肌钙含量的增高。ＡＭ的保护作用是剂量依赖的。提示，作为内源性内皮素拮抗剂，ＡＭ对防治心肌缺血损伤有临床意义。     

肾上腺髓质素在肺血管功能调节中的作用

肾上腺髓质素(Adrenomedullin，ADM)是1993年发现的一种新型的生物活性肽，在哺乳动物体内广泛分布。现已证明，ADM具有扩张血管、降低血压、抑制血管平滑肌迁移和增殖、排钠利尿等多种生理作用。近年的研究表明，ADM可能是一种新的循环激素和局部激素，通过旁分泌、自分泌和胞内分泌的方式，直接与间接地参与多种生理功能的调节，     

肾上腺髓质素对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:研究肾上腺髓质素(ADM)对幼年大鼠心肌成纤维细胞(FBC)增殖的影响,并探讨其可能的作用受体.方法:用差速贴壁分离法获得心肌成纤维细胞为材料,用免疫组化的方法鉴定细胞,并绘制生长曲线.用MTT比色法测定细胞增殖.结果:①ADM对基础状态下的FBC增殖无明显抑制作用,但能呈浓度依赖性地抑制Ang Ⅱ刺激的FBC增殖.②CGKP8-37和ADM22-52均能部分拮抗ADM对Ang Ⅱ的抑制作用,而二者合用几乎能完全拮抗.CGRP8-37对ADM的拮抗作用强于ADM22-52.结论:①M具有浓度(10-8M～10-5M)依赖性地抑制Ang Ⅱ介导的FBC增殖的作用.②心肌成纤维细胞上可能同时存在CGRP受体和ADM特异性受体,但其作用可能更多通过CGRP受体.     

ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶对醛固酮促进肾小管上皮细胞合成转化生长因子β1的作用

目的探讨ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径在醛固酮(ALDO)促进肾小管上皮细胞系(HKC)合成转化生长因子β1(TGF-β1)中的作用。方法利用体外培养的HKC细胞行如下试验。(1)不同浓度MAPK三种支通路特异性阻滞剂对其分别进行阻断,以酶联免疫吸附方法(ELISA)检测外源性ALDO作用下HKC合成TGF-β1量的改变。(2)不同浓度及不同作用时间的外源性ALDO刺激HKC,以Western印迹方法检测细胞裂解物中磷酸化ERK1/2以及总ERK1/2表达,并对ERK1/2相对表达量(磷酸化ERK1/2/总ERK1/2)与相应刺激条件下TGF-β1合成量进行相关分析。(3)在不同浓度的安体舒通和糖皮质激素受体阻滞剂RU486作用细胞后,以外源性ALDO刺激HKC,同上方法检测细胞裂解物中磷酸化ERK1/2及总ERK1/2表达。结果(1)15μmol/L及25μmol/LERK1/2通路阻滞剂(U0126)分别使TGF-β1的合成量减低至(87±11)pg/ml及(75±19)pg/ml,而仅使用10-7mol/LALDO刺激作用下HKC中TGF-β1的合成量(121±10)pg/ml,与前者比较差异有统计学意义(P<0·05),而JNK和P38两条支通路阻滞剂(SP600125、SB203580)未使TGF-β1合成量出现显著性变化(均P>0·05)。(2)外源性ALDO可使HKC对ERK1/2相对表达量呈现剂量依赖性增加。10-9及10-7mol/LALDO刺激组ERK1/2相对表达量分别为0·67±0·06及0·80±0·05,显著高于0mol/LALDO组(P<0·05或0·01)。相应浓度醛固酮刺激下ERK1/2相对表达量与TGF-β1合成量之间具有显著正相关关系(R=0·793,P<0·01);10-7mol/LALDO刺激HKC15min后,磷酸化ERK1/2开始出现显著性增加并达到高峰(P<0·01),其相对表达量为0·84±0·06,此后逐渐减低,至360min时其表达量为0·49±0·08,与0min比较差异无统计学意义(P>0·05)。(3)10-7mol/LALDO与10-9、10-7mol/L安体舒通共同孵育HKC30min,可使ERK1/2的相对表达量分别为0·62±0·08及0·60±0·04,显著低于0mol/L安体舒通组(P<0·05或P<0·01),但其表达量仍显著高于未加任何刺激的对照组(P<0·05);10-7mol/LALDO与相应浓度的RU486共同刺激HKC30min未使ERK1/2相对表达量显著低于0mol/LRU486组(P>0·05)。结论ERK1/2信号转导通路可能是介导醛固酮促HKC合成TGF-β1的主要通路之一,醛固酮与胞质内受体结合是其通过活化ERK1/2途径而发挥上述病理作用的重要条件。     

肾上腺髓质素对人牙髓干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）对人牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）增殖、成牙本质分化能力的影响。方法 体外培养的人DPSCs传至第3代,培养液中加入不同浓度ADM（10^-6、10^-7及10^-8 mol/L）处理细胞24 h,并设置空白对照组。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,定量PCR和蛋白质印迹法检测成牙本质分化标记物碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的mRNA及蛋白表达。结果 细胞周期检测结果显示,3种浓度ADM干预DPSCs后G₂/S/M期细胞比例均较空白对照组上升（P<0.05）,但各干预组间差异无统计学意义; 细胞凋亡检测结果显示,3种浓度ADM干预组的Annexin Ⅴ⁺/PI^-标示细胞比例均较空白对照组下降（P<0.05）,但各干预组间差异无统计学意义; 定量PCR及蛋白质印迹检测结果显示,DPSCs中ALP mRNA及蛋白表达较空白对照组上升（P<0.01）,但各干预组间差异无统计学意义。结论 ADM具有促进DPSCs的增殖、抑制凋亡及促其向成牙本质分化的作用。     

水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠肾小管上皮-间质转分化的干预作用

目的:探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠小管上皮-间质转分化的干预作用。方法:利用单侧输尿管梗阻诱导建立肾小管间质纤维化大鼠模型,56只SD大鼠随机分为模型组24只、治疗组24只、假手术组8只。治疗组给予水飞蓟素30mg/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组给予生理盐水灌胃。模型组和治疗组分别于实验第7d、14d、21d各收获大鼠8只,假手术组于第21d一次处死大鼠,进行肾组织病理学观察。用免疫组化方法检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:实验第7d模型组大鼠出现小管损伤和炎症细胞浸润,随病程进展,上述病变呈进行性加重。水飞蓟素治疗组大鼠在各时间点组织学的改变与模型组相比有明显减轻。免疫组化显示水飞蓟素治疗组在各观察时间点能显著下调TGF-β1和α-SMA在肾小管间质中的表达。结论:水飞蓟素通过下调TGF-β1的表达,有效干预上皮-间质转分化达到改善肾脏纤维化的作用。     

肾上腺髓质素对慢性缺氧性肺动脉高压大鼠的保护作用

目的 :探讨肾上腺髓质素 (AM)对慢性缺氧性肺动脉高压的作用及其机制。方法 :1 8只大鼠随机分为 3组 :①缺氧组 ,②AM组 ,③空白对照组。缺氧 1 4d后采用导管检测右室收缩压 (pRVS)、体动脉平均压 ( pSA) ,处死动物后 ,分离心室 ,测重后计算右心室质量 / (左心室质量 +室间隔质量 ) (mRV/ (mLV+mSP) )值 ,取右下叶肺 ,常规石蜡切片 ,维多利亚蓝染色 ,图像分析计算肺小动脉中膜厚度与外径之比、中膜面积与横截面积比 ,免疫组化检测内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)表达的变化。结果 :pRVS在AM组为 (4 4 .0± 5 .5 )mmHg(1mmHg =0 .1 33kPa) ,显著低于缺氧组的 (6 2 .7± 4 .2 )mmHg ,而各组间 pSA均无显著差异。AM组mRV/ (mLV+mSP)值为 0 .32 7± 0 .0 36 ,显著低于缺氧组的 0 .4 1 6± 0 .0 30 ,肺小动脉中膜厚度与外径之比、中膜面积与横截面积比在AM组为 0 .1 4 6± 0 .0 2 9、0 .2 6 8± 0 .0 4 8,显著低于缺氧组的 0 .2 5 6± 0 .0 86、0 .4 4 0± 0 .1 1 2 ,eNOS的表达在AM组高于缺氧组。结论 :AM能够降低慢性缺氧的肺动脉压力 ,改善肺血管重构 ,有望用于肺动脉高压的治疗。     

肾上腺髓质素在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其与微血管密度的关系

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其与上皮性卵巢癌的临床病理特征和血管生成的关系。方法采用ADM多克隆抗体免疫组织化学染色法检测83例上皮性卵巢肿瘤(恶性66例、良性17例)患者ADM的表达情况,以CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞,观察83例肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果恶性上皮性卵巢肿瘤组ADM的阳性表达率高于良性上皮性卵巢肿瘤组(69.70%vs 41.18%)(P<0.05)。在上皮性卵巢癌中,组织学分级3级的ADM阳性表达率高于1~2级(95.24%vs 57.78%)(P<0.05)。有淋巴结转移组ADM的阳性表达率高于无淋巴结转移组(90.00%vs 57.78%)(P<0.05)。ADM的表达与上皮性卵巢癌患者的年龄、疾病的临床分期、组织学类型无显著相关性(P>0.05)。上皮性卵巢癌中MVD值为(34.30±21.47)个/400×,显著高于良性卵巢肿瘤组织中MVD值(16.35±8.84)个/400×(P<0.05)。上皮性卵巢癌中ADM的表达与MVD无相关性(P>0.05)。结论 ADM可能在上皮性卵巢癌的发生、发展中起作用,该作用可能并非通过促进血管生成而实现。ADM与上皮性卵巢癌的恶性程度及不良预后有关,对其检测将有助于卵巢癌早期高危患者的识别、恶性程度的判断及预后评估。     

内源性结缔组织生长因子介导转化生长因子β1对肾小管上皮细胞的转分化效应

目的：探讨内源性结缔组织生长因子（CTGF）在人肾小管上皮细胞（HK2）转分化过程中的作用。方法：将HK2细胞分为4组：对照组;转化生长因子β1（TGF-β1）5ng／ml刺激组;TGF-β1 5ng／ml刺激4-CTGF反义0DN 3 mmol／L干预组;TGF-β1 5ng／ml刺激＋CTGF正义ODN3mmol/L对照组。用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化,用RT-PCR检测各组细胞中CTGF、上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）mRNA表达变化。结果：TGF-β1刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形;下调E-cadherinmRNA表达。上调CTGF、α-SMA和FNmRNA表达．且CTGFmRNA表达变化在时间上早于E-cadherin、α-SMA和FNmRNA表达变化;CTGF反义ODN可对抗TGF-β1引起的细胞形态学改变和E-cadherin、CTGF、α-SMA、FiNmRNA表达变化效应。结论：内源性CTGF介导了TGF-β1对HK2细胞的转分化效应。     

肾上腺髓质素真核表达质粒的构建及其在大鼠近端肾小管上皮细胞中的表达

目的构建大鼠肾上腺髓质素(ADM)真核表达质粒,观察其在大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的表达。方法提取大鼠肾上腺组织总RNA,RT-PCR扩增ADM全长cDNA;将扩增产物连接于pMT-18T载体,双酶切及测序鉴定重组质粒。用限制性内切酶BamHⅠ/EcoRⅠ分别对pMT-18T-ADM和真核表达质粒pcDNA3.1双酶切;将目的基因定向克隆到pcDNA3.1载体上;对重组质粒进行双酶切鉴定。将重组质粒通过脂质体介导转染NRK-52E,RT-PCR检测ADM表达。结果特异扩增出ADM片段,大小为585 bp;片段成功插入pcDNA3.1载体中。RT-PCR方法证明NRK-52E中存在ADM高表达。结论成功构建大鼠ADM真核表达质粒,并将其成功转染NRK-52E。     

转化生长因子β1在鼻息肉中的表达

目的 :探讨TGF - β1在息肉组织中的分布及在鼻息肉发生发展过程中的作用。 方法 :检测标本 84份 ,其中 6 5份是鼻息肉、12份是慢性鼻窦炎 ,7份是正常鼻黏膜 ,用免疫组化 (SP法 )检测TGF - β1的表达。结果 :TGF - β1在绝大部分息肉 (5 5 /6 5 )中呈Ⅲ～Ⅳ级表达 ,11例鼻窦炎 (11/12 )为Ⅱ～Ⅲ级表达 ,3例正常鼻黏膜 (3/7)为Ⅱ级表达 ,3组间两两比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。炎细胞、上皮细胞和纤维母细胞是TGF- β1的主要染色细胞。 结论 :TGF - β1由息肉中炎性细胞和结构细胞等产生 ,参与息肉的发生发展 ,在息肉的组织增生和化生中起重要作用     

人肾小管上皮细胞在转化生长因子β1诱导下桩蛋白表达研究

目的 探讨不同浓度重组人转化生长因子β1（human recombinant transforming growth factor β1,rhTGFβ1）对人近端肾小管上皮细胞株（human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKC）表达桩蛋白（paxillin,Pax）的影响。方法 将体外培养的HKC随机分为3组：对照组（C组）：无血清培养基（free serum mudium,FSM）培养;TGFβ1培养组（T1、T2组）：分别用含不同浓度的TGFβ1（T1组：5ng／ml,T2组：10ng／ml）的FSM培养,48h后分别用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）、免疫组化方法和Western blot检测HKC的Pax mRNA及蛋白表达情况。结果 ①C组：Paxillin mRNA及蛋白有基础的表达;②T1和T2组：Pax mRNA及蛋白表达均明显增加,T2组和T1组相比,Pax的mRNA及蛋白表达量增加更显著（P〈0．01）。结论 TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HKC合成Pax。     

水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠肾小管上皮-间质转分化的干预作用

炎症细胞浸润( P <0.05),随病程进展,上述病变呈进行性加重(P <0.05),水飞蓟素治疗组动物在各时间点组织学的改善同梗阻组相比有明显减轻( P <0.05).免疫组织化学显示水飞蓟素在各观察时间点能显著下调TGF- β1和α-SMA在肾小管间质中的表达(P <0.01).结论 水飞蓟素通过下调TGF-β1的表达,有效干预上皮-间质转分化达到改善肾脏纤维化的作用.     

肾上腺髓质素对离体肺动脉缺氧性收缩作用机制的研究

目的　探讨肾上腺髓质素 (ADM)在缺氧性肺血管收缩发生中的作用及其与内源性一氧化氮 (NO)的关系。方法　取日本长耳白兔制备内皮完整的离体肺动脉环 18个 ,随机分为对照组、ADM组和ADM +Nω-硝基 -L -精氨酸 (L -NNA)组。利用离体血管环张力测定技术 ,观察去甲肾上腺素(NA)预收缩肺动脉环在急性缺氧介质中的收缩反应 ,并观察ADM和ADM +L -NNA孵育对缺氧收缩反应的影响。结果　在常氧条件下 ,经ADM孵育的肺动脉环NA预收缩反应张力较对照组降低 2 4 .9% (P<0 .0 1) ,而ADM +L -NNA共同孵育的肺动脉环NA预收缩反应张力明显高于ADM组 (P <0 .0 1) ,但与对照组比较无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;NA预收缩的肺动脉环在急性缺氧介质中立即出现明显的缺氧收缩峰 ,而经ADM孵育的肺动脉环NA预收缩后缺氧收缩峰的幅度较单纯NA预收缩的肺动脉环降低了 36 .4 % (P <0 .0 5 ) ;而ADM +L -NNA共同孵育肺动脉环NA预收缩后的缺氧收缩张力与对照组比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　ADM可抑制缺氧性肺动脉收缩 ,其作用可能是由NO介导的。