bFGF、VEGF在大鼠创伤脑组织中的表达及关系

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大鼠创伤脑组织中不同时间的表达及其它们之间的关系，从分子水平探讨颅脑损伤后的病理机制，为临床治疗脑损伤的新途径提供实验基础。方法 改进Marmarou大鼠加速弥漫性脑损伤模型，制作成弥漫性轴索损伤同时合并局灶性脑挫伤的新的动物模型。SD雄性大鼠48只，随机分为8组。每组6只。取挫伤灶周围脑组织免疫组化染色观察bFGF、VEGF基因表达情况。结果 脑挫伤灶周围脑组织，bFGF基因表达在伤后1h明显增加。伤后12h达高峰；VEGF基因表达伤后逐渐增加，24h达高峰，12h恢复到对照水平。结论 bFGF、VEGF基因表达与脑损伤密切相关，作为生长因子，bFGF、VEGF可能参与颅脑损伤后神经元保护及损伤后修复过程。     

bFGF、VEGF在大鼠创伤海马脑组织中的表达

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大鼠创伤海马组织中不同时间的表达及其它们之间的关系，从分子水平探讨颅脑损伤后的病理机制，为临床治疗脑损伤的新途径提供实验基础。方法 改进Marmarou大鼠加速弥漫性脑损伤模型，取海马区创伤脑组织免疫组化染色观察bFGF、VEGF基因表达情况。结果 海马CAl区伤后6h，bFGF基因表达增加，12h达高峰；VEGF基因表达伤后24h达高峰，72h回复到对照水平。结论 bFGF、VEGF基因表达与脑损伤密切相关，作为生长因子，bFGF、VEGF可能参与颅脑损伤后神经元保护及损伤后修复过程。     

弥漫性颅脑损伤后脑水肿与血清镁离子变化及意义

目的探讨弥漫性颅脑损伤后脑组织含水量及血清中Mg2 含量的变化规律及意义。方法应用SD雄性大鼠55只,随机分为两组:假手术对照组(n=5)和弥漫性脑损伤组(n=50)。损伤组损伤后不同时间处死大鼠,按Elliott等的方法测定脑组织含水量;应用全自动生化分析仪检测血清中Mg2 浓度。结果弥漫性颅脑损伤后脑组织含水量短期内就增加,伤后6h达较高水平,约130h达高峰,随后缓慢下降,损伤后336h仍然高于正常水平(P<0.05);损伤后的血清中的Mg2 含量迅速下降,约60h达到最低,虽然以后有所恢复,但伤后336h仍低于对照组(P<0.01)。结论①大鼠弥漫性脑损伤后短期内脑组织含水量快速增加,伤后6h就达到较高水平。②大鼠弥漫性脑损伤后血清中Mg2 含量约伤后60h降到最低,以后逐渐回升。③弥漫性脑损伤后补充镁剂应从伤6h就开始,补充时间应不低于两周。     

大鼠二次脑损伤后脑内c-fos基因表达和血浆β-内啡肽的变化及意义

目的 探讨脑内c-fos基因表达及血浆β-内啡肽的变化在二次脑损伤（SBI）中的作用。方法 125只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、颅脑损伤组和SBI组。分别采用免疫组化及放免分析测定大鼠脑内c-fos蛋白与血浆β-EP的含量，并对脑组织进行病理学观察。结果 SBI组c-fos基因表达分别于伤后3h、24h出现两个高峰．伤后3～48hc-fos基因表达均明显高于颅脑损伤组及脑缺血组（P〈0．05）。SBI组大鼠血浆β-EP水平在伤后1h达高峰，至伤后48h仍未恢复正常（P〈0．05），伤后各时间点均明显高于颅脑损伤组和脑缺血组（P〈0．05）。在伤后12hSBI组脑含水量达高峰；伤后3～48h明显高于颅脑损伤组及脑缺血组（P〈0．05）。伤后648hSBI组神经元损伤数目明显高于颅脑损伤组及脑缺血组（P〈0．05）。结论 伤后大鼠脑内c-fos基因表达增加、血浆β-EP水平明显升高参与了SBI后病理生理过程，提示两者同SBI发展密切相关。     

大鼠弥漫性颅脑损伤后脑水肿和病理学变化

目的探讨大鼠弥漫性颅脑损伤后病理学变化规律及意义。方法成年健康SD雄性大鼠100只，以自由落体法建立大鼠弥漫性颅脑损伤模型，随机平均分为对照组及外伤后1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d和14d等10组．检测大鼠脑组织含水量并观察脑组织中炎症反应、毛细血管和神经元的结构变化。结果外伤后脑皮层组织含水量呈上升趋势．3h含水量有较大幅度升高，24h达高峰，其后下降，14d时仍处于较高水平，伤后6、12、24、48和72h组与对照组相比．脑组织含水量明显高于对照组（P〈0．05）。脑组织炎症反应、毛细血管和神经元结构变化与脑水肿变化相平行。结论弥漫性颅脑损伤后发生缺血、缺氧．导致微循环障碍，最终血-脑屏障结构破坏，神经细胞的代谢活动紊乱，使脑组织发生继发性脑损伤。弥漫性颅脑损伤后脑水肿是造成继发性脑损伤病理学变化的基础。     

大鼠弥漫性颅脑损伤后脑红蛋白mRNA变化的实验研究

目的研究弥漫性颅脑损伤后大鼠脑组织中脑红蛋白（NGB）mRNA的表达变化情况，初步探讨NGB与颅脑损伤的关系。方法选择Marmarou自由落体打击装置制作弥漫性颅脑损伤模型．采用实时、定量PCR检测伤后不同时间脑组织中NGB mRNA的表达情况，并对所得数据进行统计学分析。结果在伤后30min，脑组织中NGB mRNA的表达出现首个高峰．此后逐渐下降，至6h恢复至正常水平；伤后12h再次升高，于伤后48h达高峰，此后下降，至伤后5d仍高于正常水平。结论弥漫性颅脑损伤后，脑组织中NGB mRNA表达呈“双峰”，提示其可能参与神经元损伤后应激及继发缺血、缺氧性脑损害的应答机制。     

局灶性脑缺血大鼠血管内皮生长因子的表达及意义

目的 :研究大鼠局灶性脑缺血后血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达的动态变化。方法 :采用尼龙线栓法制作大鼠局灶性永久性大脑中动脉闭塞模型 ,用免疫组织化学方法观察大鼠缺血后 3、6、12h和 1、2、3、7d时 ,VEGF表达的情况。结果 :大鼠缺血后 3h ,缺血侧脑组织开始出现VEGF表达 ,2 4h明显增多 ,2d达高峰 ,7d时仍有少量表达。各时间占VEGF的表达主要集中在梗死灶周围。结论 :VEGF可能参与缺血性脑损伤的病理发展及修复过程     

血管内皮细胞生长因子的表达对创伤后脑组织含水量的影响

目的探讨颅脑创伤后挫裂伤脑组织中血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowth{actor,VEGF）的表达与颅脑创伤后继发脑水肿的关系。方法选用成年、健康、雄性Wiste大鼠60只,随机分为实验组和对照组。前者按损伤后不同时间点分为3h、72h、7d组,每组15只大鼠。我们采用Marmarou自由落体撞击法建立局灶性脑挫裂伤动物模型,实验组大鼠损伤后按预定的时间点断头处死,开颅切除损伤及邻近损伤区标本,而对照组则不致伤,监测内容同损伤组。采用免疫组化技术（SP法）及显微镜观察阳性细胞数,检测创伤后不同时间点脑损伤组织中VEGF表达情况。采集的标本采用干湿重法测定损伤脑组织的含水量。结果正常脑组织未检测到VEGF蛋白表达;脑创伤后3h脑组织中VEGF表达明显增加,72h达到高峰,7d后表达减少,与相同时间点脑组织含水量呈正相关。结论VEGF可能在颅脑创伤后继发脑水肿发生、发展中起重要作用。     

成年大鼠脑创伤后脑组织碱性成纤维细胞生长因子表达的变化

目的:研究液压冲击性脑损伤后成年大鼠脑组织碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达时程和空间分布的变化。方法:制作液压冲击性脑损伤模型,免疫组织化学法动态检测内源性bFGF的变化。结果:在正常脑组织中,bFGF免疫活性低水平表达,且主要位于胶质细胞核及神经元细胞质中。液压冲击伤后bFGF免疫活性增强,聚集核周边。此外,部分bFGF免疫活性聚集于神经元周围间隙中半定量分析显示液压冲击伤后3d,大脑皮质bFGF阳性细胞数量较正常对照组升高4.8倍;伤后7 d,bFGF免疫活性达高峰,伤后30 d消失。结论:液压冲击伤后,损伤的胶质细胞和神经元暂短地合成bFGF,并以旁分泌和自分泌形式起作用。     

颅脑创伤后脑红蛋白表达变化的实验研究

目的 研究弥漫性颅脑创伤后大鼠脑组织中脑红蛋白的表达变化情况,探究脑红蛋白与颅脑创伤的关系.方法 选择Marmarou自由落体打击装置复制颅脑创伤模型,分别采用实时定量PCR技术及免疫组化技术检测伤后不同时间脑组织中脑红蛋白的核酸、蛋白表达情况,并对所得数据进行统计学分析.结果 (1)核酸表达:在伤后0.5 h,脑组织中脑红蛋白核酸表达出现首个高峰,此后逐渐下降,至6 h恢复至正常水平;伤后12 h再次升高,于伤后48 h达高峰,此后下降,至伤后120 h仍高于正常水平;(2)蛋白表达:致伤区皮层神经元脑红蛋白表达分别于伤后2 h、72 h呈现出两次高峰表达.结论 弥漫性颅脑创伤后脑组织中脑红蛋白表达呈"双峰",提示脑红蛋白可能与创伤后神经元保护相关.     

Impact of experimental acute hyponatremia on severe traumatic brain injury in rats: influences on injuries,permeability of blood-brain barrier,ultrastructural features,and aquaporin-4 expression

The effects of acute hyponatremia on severe traumatic brain injury (TBI) in 35 adult male Sprague-Dawley rats were studied in a replicated focal and diffuse injury rat model. Such effects were assessed by the cerebral contusion volume and axonal injury (AI) densities, determined by quantitative immunoreactivity of beta-amyloid precursor protein, by blood-brain barrier (BBB) permeability based on endogenous IgG immunostaining, and by ultrastructural features. Significant increase of contusion volume (P < 0.05) and of AI in the segment of corpus callosum beneath the contusion (P < 0.05) and ipsilateral thalamus (P < 0.05) were observed at 4 h postinjury during the hyponatremic phase. No change in BBB permeability was observed in the hyponatremia + TBI (HT) groups. Significant swelling of perivascular astrocytic foot processes in the HT groups was seen at 4 h (P < 0.01) and 1 day postinjury (P < 0.01) by quantitative image analysis of ultrastructures. However, attenuated swelling of perivascular astrocytic foot processes in severely edematous medulla oblongata with simultaneous swelling of perikaryal astrocytic processes was observed in the HT 1-day group. The ultrastructural features were also correlated with the down-regulation of aquaporin-4 (AQP4) mRNA expression (P < 0.05). Results suggest that acute hyponatremia acts as one of the secondary insults following severe TBI. Such exacerbation may not be attributable to further disruption of BBB permeability, but rather to the ischemia resulting from the swelling of perivascular astrocytic foot processes impeding microcirculation. Down-regulated AQP4 mRNA expression may be one of the molecular mechanisms maintaining water homeostasis in diffusely injured brain exposed to acute hyponatremia.     

大鼠颅脑创伤后肝细胞生长因子表达变化的实验研究

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在颅脑创伤后的表达趋势,为颅脑创伤治疗中的HGF干预策略提供前期研究基础. 方法 96只wistar大鼠按随机数字表法分为实验组和假手术组,实验组为液压冲击中度颅脑创伤大鼠,并分为伤后2h、6h、12h、24 h、72h、168 h、336 h组,假手术组不致伤,每组再分为两个亚组.每亚组6只,一组行HE及免疫组化染色,观察伤后病理变化及HGF的表达部位和表达量,另外一组用RT-PCR的方法 观察创伤后HGF mRNA表达情况.结果 在创伤后的大鼠大脑皮层组织中,HGF在蛋白水平以及基因水平都出现表达增高的情况.创伤边缘区HGF阳性细胞数从伤后24 h开始增多,168 h达高峰,336 h有所下降,但仍高于伤前水平,差异有统计学意义(P<0.05).HGF mRNA表达量从创伤后72 h开始增加,168 h达高峰,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 HGF作为神经营养因子和血管生长因子,可能参与了颅脑创伤后神经元的保护和组织的修复、再生.     

血管内皮细胞生长因子在颅脑外伤脑组织中的表达

目的了解颅脑外伤后血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在脑组织中的表达,探讨ⅥEGF与脑损害严重程度的关系。方法采用免疫组织化学法检测30例急性颅脑外伤患者及正常脑组织的VEGF表达水平。结果外伤组及正常组脑组织中VEGF阳性率分别为73.3％和20％(x-±s)分别为42.1％±14.2％和14.8％±7.5％),两组比较差异有显著性(P＜0.05)。在变性坏死神经细胞数达到40％之前,VEGF阳性率与之呈明显正相关(r=0.6348,P＜0.05);当变性坏死神经细胞数超过40％时,其与VEGF阳性率呈明显负相关(r=-0.6657,P＜0.05)。结论颅脑外伤后脑缺血状态能诱导VEGF表达,VEGF可能在继发性脑损害的内源性防卫机制中发挥作用。     

VEGF-165基因对创伤性脑损伤脑血流动力学影响的实验研究

目的 研究外源性血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因治疗大鼠创伤性脑损伤(TBI)后脑灌注的变化,了解其血流动力学改变.方法 创伤性脑损伤大鼠模型建立后随机分为3组:治疗组,质粒对照组,外伤组.通过RT-PCR检测脑伤后1h、6h、24h、3d、7d、14 d VEGF mRNA在损伤局部的表达改变;应用CT灌注像(CTP)研究不同时间脑血流量(CBF)、脑血容量(CBV)等参数在VEGF-165基因治疗前后的动态变化.结果 VEGF-165基因治疗创伤性脑损伤大鼠后经RT-PCR扩增的VEGF mRNA绝对积分光密度值水平显著高于外伤组和质粒对照组(P＜0.05).CTP参数和伪彩图均显示基因治疗组脑灌注在伤后24h CBF、CBV有增高趋势,伤后3d、7d脑灌注明显高于TBI 组(P＜0.05),虽然伤后14 d CBF、CBV开始降低,但和TBI组比较仍然较高.结论 本研究结果显示大鼠创伤性脑损伤后外源性VEGF基因能够提高脑损伤组织的脑灌注,改善脑损伤部位微循环,为损伤组织的恢复提供基础.     

Concomitant upregulation of nuclear factor-kB activity, proinflammatory cytokines and ICAM-1 in the injured brain after cortical contusion trauma in a rat model

BACKGROUND: Nuclear factor kappa B (NF-kB), proinflammatory cytokines and intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) are frequently upregulated in the injured brain after traumatic brain injury (TBI). However, the temporal pattern of upregulation is not well defined. AIMS: The current study was undertaken to investigate the temporal profile of the expression of NF-kB, proinflammatory cytokines and ICAM-1 in the injured brain after cortical contusion trauma of the rat brain. SETTINGS AND DESIGN: A rat model of cortical contusion was produced by a free-falling weight on the exposed dura of right parietal lobe. The rats were randomly divided into control group and TBI groups at hours 3, 12, 24 and 72, and on day 7. MATERIAL AND METHODS: NF-kB binding activity in the surrounding brain of injured area was studied by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). The levels of TNF-alpha and IL-6 were detected using ELISA and ICAM-1 expression studied by immunohistochemistry. STATISTICAL ANALYSIS: The data were analyzed by one-way ANOVA followed by Student-Newman-Keuls post hoc test. Relation between variables was analyzed using bivariate correlation with two-tailed test. RESULTS: Compared with that of control group, NF-kB binding activity in the injured brain was significantly increased through 12 h and 7 days postinjury, with the maximum at 72 h. The concentrations of TNF-alpha and IL-6 in the injured brain were significantly increased from 3 h to 7 days and maximal at 24 h postinjury. The number of ICAM-1 immunostained microvessels was significantly increased in the injured brain from 24 h to 7 days postinjury, with its peak at 72 h. Concomitant upregulation of TNF-alpha, IL-6, ICAM-1 and the cytokine mediators NF-kB in the injured brain was observed in the injured brain after cortical contusion, and there was a highly positive relation among these variables. CONCLUSIONS: Cortical contusion trauma could induce a concomitant and persistent upregulation of NF-kB binding activity, TNF-alpha, IL-6 and ICAM-1 in the injured rat brain which might play a central role in the injury-induced immune response of brain.