星形胶质细胞机械性损伤后内皮性脂酶的表达

目的研究星形胶质细胞划痕损伤后内皮性脂酶（EL）的表达情况。方法取新生大鼠脑皮质,体外分离培养、纯化星形胶质细胞,对其进行划痕损伤,取损伤后不同时间点0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h及正常对照,用Western blot和免疫组化标记检测EL的表达变化及其与凋亡促进因子caspase-3的关系。结果与正常对照组比较,胶质细胞在损伤后6 h EL的表达增高十分明显（P〈0.01）,在损伤后1h出现caspase-3的表达增高（P〈0.01）。结论星形胶质细胞机械性损伤后1 h出现caspase-3表达增高,随后出现EL表达增高,提示星形胶质细胞于损伤后早期即出现凋亡现象,EL在中枢神经系统损伤后修复与再生过程中起重要作用。     

视神经慢性受压后视神经胶质细胞的病理变化

目的:观察视神经慢性受压后视神经胶质细胞的病理改变,探讨胶质细胞与神经元的相互作用,为慢性视神经损伤的修复研究提供基础。方法:30只成年家猫随机等分为正常对照组、假手术组、压迫1周组、压迫2周组、压迫4周组和压迫8周组(n=5)。后4组利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型。各组动物灌注固定,取视神经组织,行透射电镜观察和免疫组织化学染色,观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)、碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)和ED-1的表达变化。结果:电镜下正常视神经髓鞘结构完整,各髓板清晰、排列紧密;受压2周后见轻微脱髓鞘;4周后出现板层分离、髓鞘泡状解离,并可见变性的胶质细胞;8周后髓鞘崩解更为明显,大部分髓鞘明显变薄,并可见凋亡小体形成。免疫组化染色在受压2周后无明显改变;4周后视神经MBP染色出现排列紊乱,有缺失现象;8周后染色缺失更为明显。受压4周后视神经压迫区出现CAⅡ染色紊乱,有缺失现象;8周后更为明显。非压迫区在受压8周后CAⅡ染色仍基本正常。受压4周后视神经直接受压区GFAP染色强度下降,损伤区近侧端染色强度增加;至8周时更为明显。正常视神经内可见散在的ED-1染色阳性细胞;受压4周后损伤区周围ED-1染色阳性细胞明显增多;8周后更为明显。结论:视神经慢性受压后损伤区出现胶质细胞变性和坏死,损伤区周围出现星形胶质细胞增殖和小胶质细胞激活,提示胶质细胞改变参与了慢性视神经损伤的病理过程。     

睾丸酮对小鼠脑缺血损伤后神经元和星形胶质细胞凋亡的影响

目的:研究睾丸酮对小鼠脑缺血损伤后神经元和星形胶质细胞(AST)凋亡的影响。方法:采用免疫组化法,观察切除睾丸及补充睾丸酮后小鼠脑缺血损伤后星形胶质细胞凋亡情况。结果:正常对照组没有细胞凋亡出现。睾丸切除+睾丸酮治疗组、脑缺血损伤组、睾丸切除+脑缺血损伤组、睾丸切除+脑缺血损伤+睾丸酮治疗组均检测到细胞凋亡。以上各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:睾丸酮对小鼠脑缺血损伤后神经元和星形胶质细胞的凋亡作用不明显。     

未成熟鼠慢性缺氧缺血脑损伤胶质细胞及髓鞘相关蛋白变化

目的 观察3日龄未成熟大鼠慢性缺氧缺血脑损伤胶质细胞凋亡及髓鞘相关蛋白（MBP和PLP）变化,研究早产儿脑损伤的发病机制。方法 将164只3日龄同窝生SD未成熟新生大鼠随机分为实验组92只和对照组72只,对照组仅切开颈部皮肤,而实验组结扎双侧颈总动脉,造成未成熟鼠缺氧缺血脑损伤,分别于不同时间点处死大鼠,采用组织切片苏木精-伊红染色、少突胶质细胞抗体O4和细胞凋亡免疫组化双标记、RT—PCR实时绝对荧光定量检测等方法,观察未成熟鼠脑损伤的病理变化、少突胶质细胞凋亡及MBP和PLP mRNA的表达。结果 实验组未成熟鼠出现脑白质液化疏松、小胶质细胞增生和脑室扩大等病理变化,深部白质凋亡细胞计数在损伤后24、48、72h和1周较对照组增多（P〈0．05）,以48h两组差异最为显著,损伤后2周两组无统计学差异（P〉0．05）。凋亡细胞经双标显示以少突胶质细胞为主。髓鞘相关蛋白mRNA的表达在损伤后较对照组减少。结论 3日龄未成熟新生大鼠缺氧缺血脑损伤后,出现以脑白质少突胶质细胞损伤为主的病变,有助于理解早产儿脑损伤发病机制和神经病理变化,并可作为研究早产儿缺氧缺血脑损伤的动物模型。     

痉证方与痿证方对大鼠脊髓持续性压迫损伤局部细胞凋亡的影响

目的研究大鼠脊髓持续性压迫后细胞凋亡的变化,探讨痉、痿证方对大鼠脊髓持续性慢性损伤局部细胞凋亡的影响。方法大鼠颈椎前路螺钉压迫颈脊髓,螺钉留置持续压迫30d以产生慢性损伤,用原位末端标记技术的TUNEL法对模型组及用药组的细胞凋亡进行检测。结果脊髓受压后,灰、白质均有明显的神经细胞和胶质细胞凋亡,并以白质为明显,经药物干预后,阳性染色的神经细胞和胶质细胞减少,染色变浅。与假手术组相比,各模型组细胞凋亡数明显增高,不同压迫程度组之间有显著性差异。治疗组与模型组以及治疗组之间相比,具有非常显著性差异;痿证方组作用强于痉证方组。结论脊髓持续性压迫损伤后,受压区神经细胞和胶质细胞都有明显的凋亡;痉证方、痿证方对脊髓慢性损伤后脊髓组织神经细胞和胶质细胞的凋亡有抑制作用,痿证方强于痉证方。     

肝细胞生长因子对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的：研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧、缺糖诱导的星形胶质细胞（As）损伤及凋亡的影响。方法：以缺氧、缺糖来诱导原代培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞损伤。用不同终浓度（20～100ng/mL）的HGF处理星形胶质细胞,以乳酸脱氢酶（LDH）漏出率作为细胞损伤指标,四甲基偶氮唑盐（MTT）还原试验检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡细胞,透射电镜观察细胞超微结构。结果：缺氧缺糖引起LDH漏出率增高,细胞活力下降,细胞凋亡率增高。HGF处理后,LDH漏出率降低,细胞活力增高,同时细胞凋亡率降低（P＜0.05）,最大效应剂量为60ng/mL。结论： HGF对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤具有保护作用,能减少星形胶质细胞凋亡,并呈一定的剂量依赖关系。     

痴呆症与脑脂肪酸转运代谢异常的研究

阿尔茨海默病与代谢综合症（糖尿病）关系较密切,而代谢综合症时血脂增高对中枢神经系统的影响较血糖升高更为明显,我们的前期研究已证明,不同月龄肥胖型小鼠（KKay）认知障碍非常明显（Morris 水迷宫）,脑免疫组化、神经生物学的研究证实,脑星形胶质细胞的形态和功能损伤明显早于、重于神经元的损伤。体外研究证实,高糖（35 mmol·L-1）对神经元和星形胶质细胞的损伤较轻（24~72） h,而脂肪酸的损伤作用较重,尤其是对星形胶质细胞的损伤作用明显大于对神经元的损伤。我们最近研究了棕榈酸（脂肪酸）对星形胶质细胞和神经元的损伤机理。进一步证实,棕榈酸主要通过转运体CD36 摄入细胞,棕榈酸进入细胞后可激活Src-PTK-PLC-LP3 信号通路,引起细胞内Ca2+ 水平升高,同时引起细胞内ROS 水平升高,线粒体损伤,星形胶质细胞的BPNF 合成分泌减少,对谷氨酸的摄取能力下降,此外,棕榈酸进入细胞后可在神经酰胺合成的关键酶SPT作用下,转化为神经酰胺,产生神经毒作用。其抑制剂L-CS 可抑制这一作用,减少星形胶质细胞的凋亡。CD36 阻断剂SSO 抑制棕榈酸的摄入,减少棕榈酸的上述毒性作用。我们的研究还发现在星形胶质细胞上,CD36 的表达及功能明显高于神经元中的表达、进一步解释了脂肪代谢异常对星形胶质细胞的毒性作用大于对神经元毒性的机理。因而抑制脂肪酸对星形胶质细胞的损伤将有望成为治疗神经退行性疾病保护脑功能的新思路和新方法。     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

小胶质细胞的凋亡及其机制

小胶质细胞是中枢神经系统的主要免疫细胞,具有提呈抗原、分泌多种细胞因子、吞噬病原体和坏死组织的作用.最近用单克隆抗体研究证实小胶质细胞与单核细胞和巨噬细胞非常相似[1].当大脑受到哪怕是十分微小的损伤,都会激活作为脑内主要免疫细胞的小胶质细胞,然后引起小胶质细胞的增殖以及向损伤地区的移行,粘附在损伤的神经元上面,代替突触的输入端,在增殖之后渐渐向四周的实质组织内移行,然后开始出现数目的衰减.在一些外来病原的侵入过程中,小胶质细胞的凋亡一方面控制炎症的扩大,另一方面也为疾病提供了继续发展的机会.我们就小胶质细胞凋亡的意义及其机制进行了综述.     

雌激素对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的研究雌激素对缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞(As)损伤和凋亡的影响。方法原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,并建立缺氧、缺糖诱导的细胞损伤模型;用不同终浓度的雌激素(1~100nmol/L)预处理星形胶质细胞,以吉姆萨染色观察细胞形态学变化,以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原实验检测细胞活力,以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,以流式细胞术检测凋亡细胞。结果缺氧、缺糖处理后可引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,细胞凋亡率增高。雌激素预处理后,与缺氧、缺糖损伤组相比,细胞活力增高、LDH漏出率降低,同时细胞凋亡率也降低(p&lt;0.05),最大效应剂量为20nmol/L。结论雌激素能够减轻缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞损伤、降低其凋亡率,并呈一定的剂量依赖关系。     

Apoptosis and P53 protein expression after rat spinal cord injury

AworkshopwasorganizedbytheNationalIn-stituteofNeurologicaDisordersandStrokeinSeptember1995.TheobjectiveofthisworkshopwastopromoteinquiryandtofosterapplicationofresearchinDNAdamageandrepairaftercentralnervoussystem(CNS)injury['].Nowinvestiga-torshavefoundthereareextensiveDNAdamageinmodelsoffocalcerebralischemiaandtraumaticbrain,withneuronsapoptosis.DNAfragmenta-tioncorrelatedgenes(hsp,IEGs,bcl-2,bax.p53)expression["']'Buttherehavebeenonlyfewstud-iesonDNAdamageandcorrelativegenesexpres…     

大剂量甲基强的松龙联合胶质细胞源神经生长因子治疗急性脊髓损伤对细胞凋亡的影响

目的观察甲基强的松龙（MP）和胶质细胞源神经生长因子（GDNF）联合对大鼠急性脊髓损伤（SCI）后的治疗作用,探讨治疗脊髓损伤的有效方案。方法将大鼠脊髓损伤后,分为单纯脊髓损伤组（A组）、大剂量甲基强的松龙治疗组（B组）、胶质细胞源神经生长因子组（C组）、甲基强的松龙（MP）和胶质细胞源神经生长因子（GDNF）组（D组）,损伤后1、4、7、14、21d对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）（免疫组化法）以及活性氧表达的测定（流式细胞仪）,采用计算机图像分析技术进行定量分析。结果与对照组相比,MP和GDNF联合治疗显著减轻炎症细胞的浸润和继发损伤的发生。促进了脊髓运动神经轴索的再生和下肢运动功能的恢复（P〈0．05）。结论MP联合GDNF治疗脊髓损伤,对损伤后脊髓结构和功能恢复有明显的促进作用,是治疗脊髓损伤的有效的治疗方案。     

Fas蛋白在鼠急性脊髓组织损伤中分布特点的初步研究

目的 :探讨大白鼠急性脊髓损伤后损伤区Fas蛋白的表达及其分布特点。方法 :Wistar雌性大鼠 4 2只 ,使用改良Allen氏法制作急性脊髓损伤模型 36只 ,采取HE、Nissl染色和免疫组化方法 ,检测损伤后 1 ,4 ,8,2 4 ,72h及 7d的脊髓组织。结果 :在损伤后 4h ,损伤段灰质可见Fas阳性细胞 ,8h表达达高峰。正常组未见Fas阳性细胞表达。高倍镜观察 ,阳性细胞具有凋亡细胞的特征。结论 :Fas蛋白可能在诱导脊髓损伤后神经细胞凋亡的过程中 ,发挥着重要作用     

黄芪甲苷对脊髓损伤及脊髓胶质细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS)对脊髓损伤(SCI)及脊髓胶质细胞凋亡的影响。 方法实验分为对照组、SCI组(SCI模型)、AS低剂量组(AS-L组)、AS高剂量组(AS-H组)。比较各组大鼠运动功能、脊髓组织水肿、细胞凋亡、氧化反应情况；蛋白免疫印迹分析各组脊髓组织核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)水平。 结果与对照组比较,SCI组脊髓组织促凋亡相关的蛋白cleaved Caspase-3和Bax表达升高,出现明显广泛的神经元死亡、胶质细胞凋亡和氧化应激反应,并伴有更严重的功能缺陷。而AS能够呈剂量依赖性逆转上述趋势,且AS-L组、AS-H组脊髓组织Nrf2和HO-1水平高于对照组和SCI组。 结论AS通过调节Nrf2/HO-1信号通路具有抗氧化和抗凋亡作用,进而改善大鼠脊髓损伤,为脊髓损伤的治疗提供新的思路。     

鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡的保护作用

目的：探讨鹿茸多肽（VAP）联合胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的雪旺细胞（SCs）对β淀粉样蛋白25-35（Aβ_25-35）诱导的脊髓神经元凋亡的保护作用,阐明其作用机制。方法：制备胎鼠脊髓细胞,取对数生长期的脊髓神经元,采用Aβ_25-35诱导脊髓神经元凋亡,将脊髓神经元分为正常细胞组（正常脊髓神经元）、诱导凋亡组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元）、SCs组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+SCs）、GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF）、SCs+GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF转染的SCs）和VAP联合组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+VAP联合GDNF转染的SCs）。流式细胞术检测各组脊髓神经元凋亡率,免疫组织化学染色检测各组脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数。结果：胎鼠脊髓神经元悬液接种后初始脊髓神经元大多为圆形。流式细胞术检测,与诱导凋亡组比较,SCs组、GDNF组、SCs+GDNF组和VAP联合组脊髓神经元凋亡率降低（P<0.05）;与SCs+GDNF组比较,VAP联合组脊髓神经元凋亡率明显降低（P<0.05）。免疫组织化学检测,各组脊髓神经元中均有caspase-3表达,SCs组、GDNF组和SCs+GDNF组细胞着色差异不明显,脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数差异不大,但与诱导凋亡组比较明显减少（P<0.05）。结论：VAP联合GDNF转染的SCs对脊髓神经元凋亡有保护作用,该作用通过下调脊髓神经元中caspase-3表达来实现。     

Sina基因同源类似基因1在大鼠脊髓损伤过程中的表达变化

目的观察Sina基因同源类似基因1（SIAH1）在大鼠脊髓损伤过程中的表达情况,分析它们与神经元存活和死亡、胶质细胞活化增殖等生物学的关系,探讨它们在脊髓损伤和修复过程中的生物学功能。方法制作脊髓损伤模型,利用Western blot、免疫组织化学、免疫荧光技术观察SIAH1在损伤脊髓中的表达变化、组织分布与细胞定位,在此基础上探讨SIAH1在脊髓损伤后的病理生理意义。结果 Western blot结果显示SIAH1经历了在损伤后8h、1d和2 d的增加后开始下降,直到损伤后14 d仍没有明显上凋的变化趋势。免疫组化结果显示在脊髓损伤后1d,SIA H1的阳性信号在临近损伤中心的脊髓中明显增加,而在脊髓损伤后7 d,SIAH1阳性的细胞数明显减少。免疫荧光结果显示SIAH1与神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞存在共定位。结论脊髓损伤后脊髓中SIAH1的表达上调可能参与神经元的凋亡过程以及星形胶质细胞和小胶质细胞的活化的病理生理过程。     

大鼠脊髓急性损伤后凋亡相关基因的表达

目的：检测大鼠脊髓损伤后凋亡相关基因的表达,以探讨神经细胞凋亡的分子机制。方法：大鼠脊髓T8-9经中度压迫损伤后,分别在30min,2、4、8、24、48和72h处死取材（n=6）,应用免疫组化及原位杂交技术对脊髓组织进行标记,以检测p53,bcl-2,bax的表达。结果：损伤4h后P53,Bax蛋白及p53mRNA大量表达,其中P53蛋白在24h达到高峰,而Bcl-2仅有少量表达,bcl-2mRNA未见表达。结论：脊髓损伤后凋亡基因（p53,bax)大量表达,并可能在神经细胞的凋亡过程中起重要作用。     

大鼠椎管减压与细胞凋亡的相关性研究

目的:观察在大鼠脊髓压迫性损伤后椎管减压与神经细胞凋亡的关系.方法:健康成年SD大鼠36只,随机分为两组:(1)椎管减压组30只,每组10只,采用自制压迫装置于L_1水平制做椎管减压模型;(2)假手术组6只,只做全椎板切除不做脊髓压迫.用HE、Nissl、TUNEL、免疫组化和Western blot等方法,分别于脊髓压迫6、12 h和24 h后去除压迫装置,观察减压段脊髓组织病理变化、细胞凋亡与caspase-3的表达变化情况.结果:TUNEL(+)细胞数于6 h减压时开始增高(9.62±3.54),24 h减压时达峰值(26.09±4.11),与假手术组(3.38±1.04)相比具有显著性差异(P<0.05);各减压组间比较有显著性差异(P<0.05).caspase-3免疫反应与TUNEL(+)细胞数量表达变化相符.结论:大鼠脊髓损伤后,神经细胞凋亡的改变与脊髓受压时间长度相关;早期进行椎管减压可减少继发性神经细胞凋亡,加快神经功能恢复.     

大鼠脊髓损伤后DNA损伤与P53蛋白的表达

目的：检测大鼠脊髓损伤后神经细胞的ＤＮＡ损伤、凋亡及Ｐ５３蛋白的表达。方法：采用大鼠脊髓急性压迫损伤模型，应用原位末端标记、ＤＮＡ凝胶电泳、免疫组化等方法，对大鼠损伤脊髓进行检测。结果：脊髓损伤后４ｈ开始出现凋亡细胞及Ｐ５３蛋白表达，并在２４ｈ达到高峰。两者阳性细胞形态及分布有相似之处。ＤＮＡ电泳可见２４ｈ组出现特征性条带。结论：大鼠脊髓损伤后出现大量的ＤＮＡ损伤和神经细胞凋亡。Ｐ５３蛋白可能参与了诱导神经细胞凋亡的过程     

红花黄素对大鼠脊髓损伤局部SOD、MDA和细胞凋亡的影响

目的:探讨红花黄素对大鼠脊髓损伤的保护作用。方法:将30只SD大鼠用改良Allen法制备脊髓损伤(SCI)模型后随机均分为2组,红花黄素组腹腔注射红花黄素40 mg/kg,对照组注射等体积生理盐水,共14 d。第1、2、34、7、d取损伤的脊髓组织测定其SOD、MDA含量,观测细胞凋亡情况,采用改良BBB评分法进行行为学评分。结果:与对照组比较,红花黄素组SCI后各时间点SOD活性均显著增高,MDA含量显著降低;细胞凋亡数明显减少2,周后BBB评分明显增高(P均<0.05)。结论:红花黄素能抑制大鼠脊髓损伤局部自由基生成、脂质过氧化和细胞凋亡,对大鼠脊髓损伤有保护作用。