不同剂量1,25-(OH)_2D_3对哮喘小鼠肺内高迁移率族蛋白B1及IL-17表达的影响

目的观察不同剂量1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对哮喘小鼠肺内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及IL-17表达的影响。方法将50只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。卵清蛋白混合液致敏并雾化吸入建立哮喘小鼠模型,低、中、高剂量组在每次激发前分别按1、4、10μg/kg给予腹腔注射1,25-(OH)2D3混合液,对照组和哮喘组以生理盐水替代。采用苏木精-伊红染色观察小鼠气道结构变化;免疫组化染色观察HMGB1、IL-17蛋白表达的变化,RT-PCR检测HMGB1及IL-17m RNA水平的表达变化。结果哮喘组气道壁厚度、HMGB1和IL-17的m RNA及蛋白表达水平均明显高于对照组(P0.05);低、中剂量组气道壁厚度、HMGB1和IL-17的m RNA及蛋白表达水平均明显低于哮喘组,且上述指标在中剂量组均明显低于低剂量组(P0.05);但高剂量组中气道壁厚度、HMGB1和IL-17的m RNA及蛋白表达水平均高于哮喘组(P0.05)。结论 HMGB1及IL-17可能参与哮喘气道重塑过程;适量1,25-(OH)2D3能改善哮喘小鼠气道重塑,大剂量1,25-(OH)2D3可加重气道重塑。     

1,25-（OH）2D3对哮喘小鼠肺内高迁移率族蛋白B1及Toll样受体4表达的影响

目的 观察1,25-（OH）2D3 对哮喘小鼠气道重塑、肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及Toll样受体4（TLR4）表达的影响。方法 30 只雌性BALB/c 小鼠随机分为对照组、哮喘组和1,25-（OH）2D3 干预组。采用卵清蛋白腹腔注射致敏联合雾化吸入激发建立哮喘小鼠模型,干预组于每次激发前0.5 h 给予腹腔内注射1,25-（OH）2D3,对照组以生理盐水代替。苏木精-伊红染色观察小鼠气道结构变化;采用RT-PCR 法从mRNA水平及免疫组化法从蛋白质水平检测HMGB1 及TLR4 表达的变化;同时对相关变量进行Pearson 相关分析。结果 哮喘组气道壁厚度较对照组明显增厚,干预组较哮喘组气道壁增厚程度明显减轻（P<0.05）。哮喘组HMGB1、TLR4 的mRNA 和蛋白表达水平均较对照组增高（均P<0.05）;而干预组HMGB1、TLR4 的mRNA 和蛋白表达水平均较哮喘组降低,但仍高于对照组（均P<0.05）。肺组织内HMGB1 蛋白与TLR4 蛋白的表达呈正相关（P<0.01）,HMGB1 mRNA 及TLR4 mRNA 的表达亦呈正相关（P<0.01）。结论 在哮喘气道重塑模型中,HMGB1 及TLR4 可能参与哮喘气道重塑过程;1,25-（OH）2D3 可改善哮喘小鼠气道重塑,其机制可能与降低哮喘小鼠肺内HMGB1 及TLR4 的表达有关。     

鼠尾草酸增加1,25(OH)2D3诱导HL-60细胞分化及其机制研究

目的：已证实1, 25(OH)2D3可以诱导HL-60细胞向成熟单核细胞分化,但其不足之处是高钙血症和形成耐药株。该实验应用鼠尾草酸（CA）联合1, 25(OH)2D3研究对HL-60细胞分化的影响及引起细胞内活性氧（ROS）水平和细胞内钙离子浓度的改变。方法：应用鼠尾草酸,1,25（OH）2D3单独和联合应用处理HL-60细胞,共分为5组：空白对照组;低浓度1,25（OH）2D3（1 nmol/L）组、鼠尾草酸组;联合处理组（10 μmol/L鼠尾草酸和1 nmol/L 1,25（OH）2D3）;高浓度1,25（OH）2D3（100 nmol/L）组。每24 h监测1次,通过四唑氮蓝(MTT)法观察细胞生长,共72 h;收集处理后72 h的HL-60细胞,通过光学显微镜观察细胞形态,用流式细胞仪（FCM）检测不同处理组细胞周期及单核细胞分化标记CD14的表达,ROS和细胞内钙离子浓度。结果：72 h后,联合处理组HL-60细胞与空白对照组相比,细胞增殖明显受抑制（Ab= 0.560±0.020; P<0.01）,细胞形态具有成熟单核细胞特征,CD14的表达率升高（57.62%;P<0.01）,G0/G1 期细胞显著增多, ROS水平下降［（52.67±10.76）%,P＜0.01］;联合处理组细胞内钙离子水平同空白对照组比较差异无显著性（115.64±17.74 nmol/L,P>0.05）,但与高浓度1,25（OH）2D3组相比细胞内钙离子水平明显下降(P<0.01)。结论：鼠尾草酸可增强1,25（OH）2D3对HL-60细胞的诱导分化、增强抑制HL-60细胞增殖作用,细胞阻滞于G0/G1期,细胞内活性氧水平降低,这可能与细胞的诱导分化机制有关,且这一联合作用不增高细胞内钙离子水平。     

1,25-(OH)2D3抑制脂多糖诱导的脐血CD4+T细胞IL-13和IL-17的表达

目的 本研究旨在探讨生命早期脂多糖(LPS)对脐血CD4+T细胞白介素-13(IL-13)和白介素-17(IL-17)表达的影响及1,25-(OH)2D3对其表达的干预作用,为维生素D的临床合理应用及其对哮喘等变态反应性疾病的防治提供理论依据。方法 选取顺产的足月新生儿12例,断脐后立即取胎盘端脐静脉血50 mL,采用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(CBMCs),磁珠分选CD4+T细胞后依据不同的处理方法分为空白刺激组、LPS(10 μg/mL)单独刺激组和LPS(10 μg/mL)+1,25-(OH)2D3(10-8 mmol/L)共刺激组。培养72 h后采用双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和Real-Time PCR分别检测培养上清液中IL-13和IL-17水平及CD4+T细胞中IL-13和IL-17 mRNA表达。结果 与空白刺激组相比,LPS单独刺激组培养上清液中IL-13和IL-17水平及CD4+T细胞中IL-13和IL-17 mRNA表达水平明显升高(均P<0.01),而1,25-(OH)2D3处理可降低其表达水平(均P<0.05),但仍高于空白刺激组(均P<0.01)。结论 LPS可促进脐血CD4+T细胞IL-13和IL-17的表达;1,25-(OH)2D3对于LPS诱导的脐血CD4+T细胞IL-13和IL-17表达具有抑制作用,提示1,25-(OH)2D3可能在变应原致敏的早期发挥一定保护作用。     

25(OH)D免疫功能的研究进展

维生素D不仅具有调节体内钙磷代谢的作用,在体内免疫调节也发挥着重要的作用,与自身免疫性疾病、感染性疾病的发生、发展及干预、转归有密切关系.文章就维生素D与免疫的相关关系及研究进展做一综述.     

SDF-1及CXCR4在哮喘小鼠肺组织中的表达及布地奈德的干预作用

目的：探讨哮喘小鼠发病过程中基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其受体CXCR4在肺内表达的变化及布地奈德的干预影响。方法：清洁级雄性BALB/c小鼠30只,随机分为对照组、干预组及哮喘组。观察卵蛋白激发及用布地奈德干预后哮喘小鼠气道的病理变化;免疫组织化学染色观察SDF-1表达的变化;RT-PCR法观察CXCR4 mRNA表达的变化。结果：SDF-1及CXCR4 mRNA在对照组中呈低表达,在哮喘组中表达明显增加,使用布地奈德进行干预后SDF-1及CXCR4 mRNA的表达明显降低（0.426±0.052 vs 0.361±0.065;0.829±0.027 vs 0.723±0.094; P<0.05）,且二者表达量均与气道壁厚度呈正相关（r=0.744,P<0.01;r=0.553, P<0.01）。结论：SDF-1及其受体CXCR4可能参与了哮喘小鼠气道重塑过程,布地奈德干预改善哮喘小鼠的气道重塑可能与降低 SDF-1及CXCR的表达有关。［中国当代儿科杂志,2010,12（3）：215-218］     

STAT6和ORMDL3在哮喘小鼠肺组织中的表达及布地奈德的干预作用

目的 探讨信号转导和转录激活因子6（STAT6）以及哮喘易感基因血清类黏蛋白1 样蛋白3（ORMDL3）在哮喘小鼠气道重塑中的作用,并观察布地奈德（BUD）对上述两种物质水平的干预作用。方法 BALB/c 雌性小鼠30 只,随机分为对照组、哮喘组和BUD 组。应用鸡卵清蛋白（OVA）激发试验建立哮喘小鼠模型,BUD 组在每次激发前30 min 应用生理盐水溶解的BUD 雾化液进行雾化吸入,对照组应用生理盐水替代OVA 溶液。苏木精-伊红染色及Masson 染色观察各组小鼠气道病理学改变;ELISA 法检测各组小鼠肺组织匀浆中IL-13 水平;RT-PCR 法检测各组肺组织STAT6 及ORMDL3 的mRNA 表达。结果 哮喘组气道病理学改变较正常组和BUD 组明显,而BUD 组气道病理学变化较哮喘组减轻。哮喘组和BUD 组IL-13 水平、STAT6 及ORMDL3 的mRNA 表达均明显高于对照组（PPr=0.676,P=0.032）。结论 STAT6 和ORMDL3 可能参与了小鼠气道重塑过程,BUD 可能通过下调STAT6和ORMDL3 的mRNA 表达,改善气道重塑。     

细菌脂多糖对哮喘小鼠血清IL-4、IL-8及肺组织VEGF表达的影响

目的：观察细菌脂多糖（LPS）对支气管哮喘小鼠血清IL-4、IL-8及肺组织血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨LPS在哮喘发生过程中的调节作用。方法：27只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和LPS干预组,每组9只。采用ELISA法检测哮喘小鼠血清IL-4、IL-8的浓度,免疫组织化学染色法检测肺组织中VEGF的表达。结果：哮喘组血清IL-4和IL-8水平明显高于对照组（P<0.05）;而LPS干预组IL-4和IL-8水平明显低于哮喘组（P<0.05）,但仍高于对照组（P<0.05）。哮喘组气道VEGF表达显著高于对照组（P<0.05）;LPS干预组其表达明显低于哮喘组（P<0.05）,但仍高于对照组（P<0.05）。结论：LPS可能通过降低哮喘小鼠血清IL-4和IL-8水平及气道VEGF表达,减轻气道炎症,减少气道血管重塑的发生。     

布地奈德对慢性支气管哮喘小鼠肺组织HIF-1α和VEGF表达及气道重塑的影响

目的：研究布地奈德对慢性哮喘小鼠缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子(VEGF)表达的调控和对血管生成、气道重塑的影响。方法：30只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。卵清蛋白（OVA）激发试验建立哮喘小鼠模型,治疗组从第28天开始每日在OVA激发前1 h雾化吸入布地奈德100 μg/kg,对照组以PBS代替OVA。苏木精-伊红染色分析气管管壁厚度变化,Masson染色分析肺组织胶原沉积,免疫组织化学染色法检测肺组织血管生成情况,免疫组织化学染色法和Western blot检测HIF-1α、VEGF表达水平。分析气管管壁厚度、血管面积百分比与VEGF、HIF-1α表达的相关性。结果：模型组较对照组气道管壁增厚,肺组织胶原沉积、血管面积、HIF-1α和VEGF表达显著增加;治疗组较模型组气道管壁厚度、肺组织胶原沉积及血管面积减少,HIF-1α和VEGF表达显著下降。气道管壁厚度、血管面积分别与HIF-1α及VEGF表达呈正相关,HIF-1α与VEGF表达亦呈正相关。结论：布地奈德通过抑制HIF-1α、VEGF表达,明显减轻哮喘小鼠肺组织血管生成和气道重塑。     

1,25-(OH)2D3对糖尿病大鼠肾脏Nephrin蛋白表达的影响

目的探讨1,25-(OH)2D3对糖尿病(DM)大鼠肾脏Nephrin蛋白表达的影响。方法Wistar大鼠分为对照组、DM组、1,25-(OH)2D3组。建立糖尿病大鼠模型,实验12周末观察各组血尿、蛋白尿、肾组织光镜电镜、免疫组织化学,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其肾皮质NephrinmRNA及蛋白的表达。结果与对照组及1,25-(OH)2D3组相比,DM组大鼠尿红细胞及尿蛋白排泄明显增多,肾小球细胞数亦增加(P<0.01,0.05),NephrinmRNA及蛋白质表达明显下调(Pa<0.01)。1,25-(OH)2D3组肾小球细胞数、NephrinmRNA及蛋白质表达与对照组相比无统计学差异(Pa>0.05)。结论1,25-(OH)2D3可减轻血尿、蛋白尿,上调NephrinmRNA及蛋白质的表达而有肾保护作用。     

REDUCED SERUM 1,25-(OH)2 VITAMIN D3 LEVELS IN PREDNISONE-TREATED ADOLESCENTS WITH SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS

Abstract. The serum levels of 1,25-(OH)₂ vitamin D₃ were assayed in samples from 12 adolescent patients with SLE. Subnormal levels were observed in 7 of these 12 patients. Low levels of the metabolically active polar metabolite of vitamin D₃ may contribute to the development of osteopenia observed in this disease. The cumulative effects of the osteoporotic and anti vitamin D effects of long term steroid therapy in children with SLE may require the cautious administration of supplemental vitamin D.     

支气管哮喘儿童血清25-（OH）D3和总免疫球蛋白E的变化

目的：研究支气管哮喘儿童血清25-羟维生素D3［25-（OH）D3］和总免疫球蛋白E（TIgE）的变化及临床意义。方法采用放射免疫分析法,检测30例支气管哮喘、40例喘息性支气管炎患儿及40例正常对照儿童血清25-（OH）D3及TIgE含量,比较3组间其血清含量的差异。结果支气管哮喘组血清25-（OH）D3含量（18±3 ng/mL）明显低于喘息性支气管炎组（43±3 ng/mL）和正常对照组（43±3 ng/mL）,且TIgE含量（192±16 IU/mL）明显高于喘息性支气管炎组（123±14 IU/mL）和正常对照组（118±15 IU/mL）,差异均有统计学意义（P＜0.01）。支气管哮喘组血清25-（OH）D3与TIgE呈负相关（r=-0.783,P＜0.01＝,喘息性支气管炎组、正常对照组血清25-（OH）D3与TIgE均无相关性。结论血清25-（OH）D3缺乏可能是导致儿童支气管哮喘发作的原因。血清25-（OH）D3水平增高可以抑制IgE的过度表达,这可能成为预防和治疗支气管哮喘等过敏性疾病的一种新的有效途径。     

Renal Osteodystrophy in Children Treated with 1,25-Dihydroxy-Cholecalciferol [1,25-(OH)2D3]: Histologic Bone Studies

ABSTRACT. Eleven uremic children with osteodystrophy aged 3 to 17 years were studied during administration of l, 25-(OH)₂D, for periods up to 21 months. Nine children presented with pure hyperparathyroidism, one with osteomalacia and one with mixed bone disease. Bone biopsies were performed before initiation of therapy and after 6 to 21 months of treatment following double tetracycline labeling. Skeletal lesions were improved but not cured in 5 of 9 children with hyperparathyroidism. In three instances lesions remained unchanged and worsened in one. No significant change was observed in the child with osteomalacia. Moderate improvement was noted in the patient with mixed bone disease. The propensity to develop hypercalcemia was the major factor associated with treatment failure since it precluded administration of adequate amounts of medication. Therapy with l, 25-(OH)₂D₃ was associated with a spectacular improvement in growth velocity in two of six children under age twelve.     

毛细支气管炎患儿血清25-（OH）D3与免疫球蛋白水平的变化

目的：研究毛细支气管炎患儿血清25-（OH）D3与免疫球蛋白水平的变化及临床意义。方法采用酶联免疫法检测35例毛细支气管炎患儿急性期和恢复期及20例健康儿童血清25-（OH）D3水平,速率散射比浊法测定免疫球蛋白含量。结果毛细支气管炎患儿急性期血清25-（OH）D3、IgG及IgA水平明显低于健康儿童组,而血清IgE明显高于健康儿童组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。毛细支气管炎患儿恢复期血清25-（OH）D3水平较急性期增高,而IgE水平较急性期降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。与健康儿童组比较,毛细支气管炎患儿恢复期血清25-（OH）D3及IgA水平明显降低,而血清IgE明显增高,差异亦有统计学意义（P＜0.05）。毛细支气管炎患儿急性期血清25-（OH）D3水平与IgG、IgA呈正相关（分别r=0.36,P＜0.05;r=0.63,P＜0.01）,与IgE呈负相关（r=-0.72,P＜0.01）。毛细支气管炎患儿恢复期血清25-（OH）D3水平与IgE呈负相关（r=-0.34,P＜0.05）。结论毛细支气管炎患儿血清25-（OH）D3水平降低及免疫球蛋白水平失衡,提示25-（OH）D3及免疫球蛋白在其发病中起重要作用。     

骨桥蛋白在哮喘小鼠肺组织中的表达及地塞米松的干预作用

目的 探讨哮喘气道炎症与骨桥蛋白(OPN)表达的相关性,以及地塞米松(DXM)对OPN表达的影响.方法 50只小鼠随机分为正常对照组、不同程度哮喘组(卵清蛋白OVA激发1周和2周组)及DXM治疗1周和2周组,每组10只;OVA致敏、激发建立急性哮喘模型;苏木精-伊红染色观察各组小鼠气道炎症情况;ELISA法检测血清OVA-sIgE水平;免疫组化和Western blot法分别定位和定量分析肺组织OPN表达;Real-time PCR检测肺组织OPN mRNA水平.结果 哮喘组气道病理学改变较对照组和DXM组明显,且OVA激发2周哮喘组改变较激发1周组明显.哮喘组血清OVA-sIgE水平较对照组和DXM组明显升高(PPPP结论 OPN可能是哮喘发病机制中的重要因素,哮喘气道炎症越重,OPN表达水平可能越高;DXM可能通过抑制OPN的表达来减轻哮喘炎症.     

孕期哺乳期大鼠补充维生素D3对子代大鼠哮喘模型肺组织维生素D受体表达的影响

目的探讨给予孕期及哺乳期大鼠不同剂量1,25-二羟维生素D3,对其子代大鼠哮喘模型肺组织维生素D受体(VDR)表达的影响。方法雌性Wistar大鼠32只,随机分配到维生素D低、中、高剂量组,在孕期及哺乳期给予不同剂量的1,25-二羟维生素D3,并设对照组。子代大鼠断乳后,各组随机取8只,用卵清蛋白致敏并激发,建立哮喘模型。采用real-time PCR和免疫组织化学方法分别从mRNA和蛋白水平检测子代大鼠VDR的表达。结果与对照组相比,中剂量组子代大鼠支气管痉挛收缩、管壁增厚、管腔内黏液分泌增加、肺部炎症浸润等变化最轻,低剂量组其次,高剂量组反而较对照组严重。免疫组织化学染色显示,与对照组相比,低剂量组和中剂量组子代大鼠的VDR表达明显减少,且中剂量组较低剂量组更明显,差异有统计学意义(P均<0.01);高剂量组的VDR表达则较对照组增多,差异亦有统计学意义(P<0.01)。real-time PCR结果显示,与对照组比较,低剂量组和中剂量组子代大鼠肺组织中VDR mRNA水平降低,而高剂量组的VDR mRNA水平增高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论孕期及哺乳期补充适量维生素D可减少子代大鼠哮喘模型VDR的表达,减轻气道炎症反应,而过量补充维生素D则增加VDR表达,可能加重气道炎症反应。