洛铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨洛泊对体外培养的浆液性卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用。方法体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及流式细胞仪检测洛铂对SKOV3细胞株的凋亡率。结果体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡。结论卵巢癌SKOV3细胞对洛泊敏感,洛泊对卵巢癌细胞的杀伤作用是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

重离子对人肝癌细胞细胞凋亡及bcl-2/bax基因表达的研究

目的 探讨重离子诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及bal-2／bax的表达在重离子治癌中的作用。方法 应用流式细胞技术、MTT法及免疫组化法,观察重离子诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡和bal-2／bax表达的情况,并应用AO／BE荧光染色,在荧光显微镜下,观察各组织细胞凋亡的形态学变化。结果 经MTT比色法测定细胞增殖能力,可见随辐射剂量的增加,细胞存活率逐渐降低。流式细胞仪检测重离子对SMMC-7721细胞的DNA含量变化,结果显示2．0、3．0Gy组的SMMC-7721细胞在G2／M期所占细胞比率较对照组及1．0、1．5Gy组增高（P〈0．01）。免疫组化法观察随辐射剂量的增加,bax的表达显著上调,而bcl-2的表达则受抑制。结论 重离子能在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡,且具有剂量依赖性;重离子在一定剂量时,使细胞增殖能力降低;重离子能诱导SMMC-7721细胞bax蛋白表达上调。而bcl-2表达降低,从而诱导细胞凋亡。     

功能失调性子宫出血和细胞凋亡与bcl-2及bax基因表达的关系

目的研究功能失调性子宫出血与细胞凋亡及其相关基因表达产物的关系。方法应用TUNEL技术检测30例正常月经周期的增生期子宫内膜,28例简单增生,2例复杂增生子宫内膜标本的凋亡指数（AI）。应用免疫组化方法检测bcl-2及bax基因在子宫内膜的表达。结果简单增生和复杂增生子宫内膜AI比正常增生期AI高（P〈0.05）;bcl-2基因在正常增生期表达比在简单增生和复杂增生表达略高,差异无显著性（P〉0.05）;bax基因在简单增生和复杂增生表达比在正常增生期表达高（P〈0.05）。结论功能失调性子宫出血的发病与细胞凋亡有关,且与bcl-2,bax表达相关。     

252锎中子放疗对宫颈癌细胞凋亡及bcl-2、bax的影响

目的探讨中子放疗前后宫颈癌细胞凋亡、凋亡相关基因bcl-2、bax表达的变化及意义.方法应用TUNEL法、免疫组化检测宫颈鳞癌放疗前后的细胞凋亡、凋亡相关基因bcl-2、bax表达变化.结果20例患者宫颈癌细胞凋亡阳性率和凋亡指数(AI)分别由放疗前的35%和(4.22±4.14)%增加至放疗后的85%和(34.64±24.36)%,差异显著(P＜0.01).放疗前后bcl-2表达无明显变化(P＞0.05),且与凋亡无明显相关(P＞0.05).bax表达阳性率和平均标记指数分别由放疗前的25%和(8.35±3.06)%增加至放疗后的80%和(16.43±6.05)%,差异显著(P＜0.01),且放疗后与凋亡呈正相关(r=0.852 0,P＜0.01).结论 252锎中子射线诱导了肿瘤细胞的凋亡,可能是其治疗作用的重要机制之一;bax表达是252锎中子射线诱导细胞凋亡的途径之一,其机制可能与bcl-2/bax间的平衡改变有关.     

神经酰胺对人内皮细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的 观察外源性神经酰胺(C2-ceramide)对内皮细胞凋亡及相关基因bax和bcl-2表达变化的影响.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞,加药组加入终浓度分别为5、12.5、25、50 μmol/L的C2-ceramide,对照组加入体积分数为0.1%的无水乙醇.采用TUNEL法检测细胞凋亡,用RT-PCR、Western blot技术对bax mRNA、bcl-2 mRNA及蛋白表达进行分析.结果 加药组内皮细胞的凋亡阳性率显著高于对照组(P＜0.05),且具有时间和剂量依赖性;加药组bax mRNA及蛋白的表达较对照组显著升高(P＜0.05),bcl-2 mRNA及蛋白的表达较对照组则显著降低(P＜0.05).结论 外源性神经酰胺通过上调bax及下调bcl-2表达水平,改变bax/bcl-2值,从而诱导内皮细胞凋亡.     

前列腺癌p53、bcl-2、bax基因表达与凋亡、增殖的关系

目的:研究前列腺癌组织中细胞增殖与细胞凋亡,及其相关蛋白表达意义。方法:采用原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)及免疫组织化学ABC法对36例前列腺癌(Pca)和11例正常前列腺(NP)组织石蜡切片p53、bcl鄄2、bax、PCNA蛋白及细胞凋亡检测。结果:前列腺癌细胞的增殖指数和细胞凋亡指数较NP明显增高,且AI/PI比值较正常组织AI/PI低(P<0.01);随着肿瘤分级的增加,细胞增殖水平明显增加(P<0.01)。p53蛋白表达与前列腺癌细胞增殖水平相关;bcl鄄2蛋白表达与细胞凋亡水平相关(P<0.05);bax基因表达与凋亡无关,但发现它们的bcl鄄2/bax的比值与凋亡有关。表明高bcl鄄2/bax比值多见于低凋亡组,低bcl鄄2/bax比值多见于高凋亡组。结论:细胞增殖与细胞凋亡均参与了前列腺癌的发生、发展。p53基因与细胞增殖水平的调控有关。bcl鄄2和bax在细胞凋亡调节中起到重要作用,由于bcl鄄2蛋白过量表达引起bcl鄄2/bax失平衡,在前列腺癌发生、发展过程中起到重要作用。     

复方中药对慢性萎缩性胃炎细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

【目的】观察胃萎Ⅰ号治疗慢性萎缩性胃炎的临床效果,并从细胞凋亡和相关基因的表达方面探讨其作用机理。【方法】120例患者均经胃镜与病理检查证实为慢性萎缩性胃炎,分成两组,分别采用胃萎Ⅰ号、三九胃泰冲剂治疗,原位末端标记法（Tunel）检测细胞凋亡,免疫组化检测bcl-2、bax的表达。【结果】治疗组（胃萎Ⅰ号）综合疗效优于对照组（三九胃泰）（P〈0．05）。治疗组细胞凋亡率和bax表达率分别从21．81％、41．18％升高至40．52％、61．76％;而bcl-2表达率从85．71％下降至22．86％（P〈0．05）。对照组上述指标无明显变化。【结论】胃萎Ⅰ号能有效治疗慢性萎缩性胃炎,其机理可能是通过增强bax表达而抑制bcl-2表达,诱导胃黏膜细胞凋亡。     

褪黑素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 探讨褪黑素(MLT)、卡铂(CBP)单独及联合应用在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT和CBP的药物协同作用。 方法: 将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、MLT组(1和2 mmol·L^-1)、CBP组(12.5、25.0和50.0mg·L^-1)、联合用药组(不同浓度MLT及CBP联合用药)。应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率及凋亡情况,并应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定各组SKOV3细胞中Bcl-2和Bax基因表达水平。 结果: MTT法检测,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于MLT组,且高于 50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2 mmol·L^-1MLT联合50mg·L^-1CBP 组效果最佳,增殖抑制率为(70.7±4.2)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05)。流式细胞术检测,联合用药组SKOV3细胞凋亡率高于MLT组,且高于50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2mmol·L^-1MLT 联合50mg·L^-1CBP组SKOV3细胞凋亡率为(58.9±2.0)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。与同浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞中Bax基因表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2基因表达水平明显降低(P<0.05)。 结论: MLT可增强CBP在体外对卵巢癌SKOV-3细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,通过增强Bax基因表达及下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的　观察同型半胱氨酸 (Hcy) 对人血管平滑肌细胞 (VSMCs) 凋亡以及bax、bcl-2表达的影响。方法　采用组织贴块法体外培养人VSMCs; 采用流式细胞仪检测细胞凋亡率; 逆转录 -聚合酶链反应法检测Bax、bcl-2mRNA的表达。结果　体外培养的人VSMCs在终浓度为 0 (对照组)、100、200、500、1 000μmol/LHcy的培养液中孵育 24h后的细胞凋亡率分别为 ( 2. 68±0. 23 )%、 ( 2. 79±0 .12 )%、( 8. 45±2. 41 )%、 ( 13. 37±4 .71 )%、(23. 75±5 .56)%, 表明Hcy诱导人VSMCs细胞凋亡呈浓度依赖性; baxmRNA相对表达量分别为 0 .86±0. 01、0 .92±0 .03、1. 51±0 .02、1. 82±0 .03、1 .91±0 .02, bcl-2mRNA相对表达量分别为 1. 38±0 .04、1. 32±0 .03、1. 28±0 .03、1 .21±0. 02、1 .09±0. 02, 表明Hcy呈浓度依赖性诱导人VSMCsbax基因表达显著上调, bcl-2基因表达轻度下调, bax/bcl-2比值升高。结论　Hcy诱导人VSMCs凋亡可能是通过上调bax基因表达来实现的, 诱导人VSMCs凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化作用的机制之一。     

杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡诱导作用

目的:观察杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制及凋亡诱导作用,并探讨其可能机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,按杨梅素给药浓度将细胞分为对照组和低、中、高浓度杨梅素组,杨梅素给药浓度分别为0、20、40和60 mg·L^-1。MTT法检测各组SKOV3细胞存活率;激光共聚焦显微镜观察各组SKOV3细胞核形态变化并计算异常细胞核比率;免疫荧光法检测各组SKOV3细胞中凋亡相关蛋白-活化半胱氨酸蛋白酶3(active Caspase-3)的表达;Western blotting法检测各组SKOV3细胞中DNA损伤相关蛋白γ-H₂AX的表达水平。结果:与对照组比较,低、中和高浓度杨梅素组SKOV3细胞存活率明显下降(t=-12.35,t=-11.42,t=-10.21,P<0.05);激光共聚焦显微镜下各浓度杨梅素组细胞出现核皱缩等凋亡形态学改变,且细胞中异常细胞核比率高于对照组(t=6.87,t=9.35,t=7.22,P<0.05),高浓度杨梅素组异常细胞核比率高于低、中浓度杨梅素组(t=9.55,t=7.25,P<0.05);随着杨梅素给药浓度的增加,SKOV3细胞中active Caspase-3的表达水平有升高趋势,各浓度杨梅素组SKOV3细胞中γ-H₂AX的表达水平高于对照组(t=5.41,t=3.21,t=6.58,P<0.05)。结论:杨梅素可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡,DNA双链断裂可能是其促凋亡的机制之一。     

雄黄诱导卵巢癌细胞珠SKOV3和COC1凋亡的实验研究

目的:探讨雄黄对卵巢癌细胞株SKOV3和COC1增殖能力的影响及可能机理。方法:采用不同浓度雄黄溶液作用于两珠细胞,用MTT法检测生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态学。结果:不同浓度的雄黄溶液对卵巢癌细胞株SKOV3及COC1均有不同程度的生长抑制作用,具有浓度和时间依赖性,且COC1比SKOV3对雄黄更敏感。结论:雄黄对卵巢癌细胞有生长抑制作用,诱导细胞发生G1期阻滞是雄黄抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

细胞凋亡调控蛋白bcl-2/bax与子宫内膜异位症关系探讨

目的探讨子宫内膜异位症(EMS)患者内膜细胞中bcl-2及bax蛋白含量变化及其对EMS发病的影响。方法采用免疫组化ABC法检测30例EMS患者(实验组)和20例对照组女性不同月经周期的内膜细胞bcl-2及bax蛋白含量。结果对照组bcl-2表达增生期明显高于分泌期(P<0.01),实验组在位内膜增生期bcl-2表达明显高于分泌期(P<0.01),且明显高于同期对照组(P<0.01);实验组异位内膜增生期bcl-2表达与分泌期比较差异无显著性,与实验组在位内膜相近(P>0.05),但明显高于对照组(P<0.01)。实验组在位内膜分泌期bax表达高于增生期(P<0.01),但较同期对照组下降(P<0.05);实验组异位内膜分泌期bax的表达高于增生期,差异有显著性(P<0.05),但分泌期却明显低于同期实验组在位内膜(P<0.01)。结论EMS患者的内膜细胞具有与正常内膜不同的增殖凋亡特性。bcl-2/bax可作为判断子宫内膜异位活性的指标之一。     

人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞免疫功能及凋亡的影响

目的:探讨人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞(DC)免疫表型、细胞因子分泌及凋亡的影响。方法:采用外周血单个核细胞培养DC,以PBS溶液为对照,应用流式细胞仪检测人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,其凋亡的发生率、免疫表型的表达,应用酶标记免疫吸附分析法(ELISA)检测DC白细胞介素-12(IL-12)的分泌情况。结果:人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,可诱导DC发生凋亡,DC的CD80、CD83及人类白细胞(位点)DR抗原(HLA-DR)等表型明显下调,IL-12分泌明显下降,与对照组相比差异显著(P<0.05),且IL-12分泌随SKOV3作用时间的延长,其抑制作用更加明显。结论:人卵巢癌细胞系SKOV3可明显抑制DC的免疫功能,并诱导其凋亡。     

米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和CEACAM6表达的影响

目的  观察米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和癌胚抗原相关黏附分子6（CEACAM6）表达的影响。方法  不同浓度米非司酮（空白对照、1×10-7、1×10-6、1×10-5、5×10-5mol/L）干预卵巢癌细胞系SKOV3 24、48、72h;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对SKOV3的抑制作用;逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记（Western blot）检测不同浓度米非司酮干预下CEACAM6 mRNA和蛋白表达水平的差异,并进行半定量分析。结果  与空白对照组比较,1×10-7和1×10-6mol/L米非司酮对SKOV3的生长没有明显的抑制作用（P＞0.05）;5×10-5mol/L米非司酮显著抑制SKOV3的生长（P＜0.01）,并降调SKOV3细胞中CEACAM6 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论  米非司酮可明显抑制SKOV3的体外增殖,其作用机制可能与抑制CEACAM6的表达有关。     

丙戊酸对体外培养的卵巢癌细胞上皮性钙粘附素表达的影响

目的：探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞上皮性钙粘附素（E cadherin）表达的影响。方法：将VPA以不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)不同作用时间(24、48、72?h)作用于SKOV3细胞,相差显微镜下观察细胞形态的变化；用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖；用流式细胞仪测定细胞周期动力学变化；用免疫细胞化学方法检测E cadherin蛋白表达情况；用流式细胞术测定SKOV3细胞E cadherin蛋白含量。结果：①3?mmol/L作用48?h后SKOV3细胞形态出现明显变化；②不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)VPA作用不同时间(24、48、72?h)后, SKOV3细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P<0.05) ；不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)VPA作用不同时间(48、72?h)后,首先引起细胞周期分布的改变,随剂量的加大和用药时间的延长,凋亡率逐渐升高；③3?mmol/L VPA作用48?h后,与对照相比，SKOV3细胞浆中的棕色颗粒明显增多；④VPA作用48?h后, SKOV3细胞E cadherin蛋白含量明显增多(P<0.05)。结论：VPA可以抑制SKOV3的生长，并且在蛋白水平上调卵巢癌细胞分泌E cadherin。     

沉默Nek2基因对卵巢癌SKOV3细胞周期的影响

目的：研究RNA干扰NIMA相关激酶2（Nek2）表达对卵巢癌细胞SKOV3细胞周期的影响及其相关的分子机制。方法将针对Nek2基因的siRNA转染至SKOV3细胞中,采用流式细胞技术检测SKOV3细胞周期变化,并用Westernblot技术检测Nek2‐siRNA转染入卵巢癌SKOV3细胞48h后,与细胞周期相关的因子cyclinB1、CDK1及P27蛋白表达水平以及ERK1／2磷酸化水平的变化。结果空白对照组、阴性对照组和RNA干扰组中处于G2／M期的细胞比例分别为13．72％、12．27％和1．56％,与两对照组比较,处于G2／M期的干扰组细胞明显减少（P＜0．05）。Nek2基因沉默后,与两对照组比较,SK‐OV3细胞内cyclinB1和CDK1的蛋白表达水平明显下降,P27的蛋白表达水平明显上调,SKOV3细胞内ERK1／2磷酸化水平明显下降（P＜0．05）。结论沉默Nek2基因,可阻止卵巢癌SKOV3细胞启动有丝分裂,从而抑制其增殖。     

Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:以人卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,探讨Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡的机制。方法:通过MTT法检测S1作用下卵巢癌细胞的生存率;S1 10μmol/L作用不同时间,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测凋亡相关蛋白Mcl-1的变化。结果:与对照组相比S1能明显抑制SKOV3的生存率;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞凋亡明显升高;蛋白水平检测S1作用8 h能明显抑制SKOV3细胞Mcl-1蛋白表达。结论:S1可能通过抑制Mcl-1蛋白诱导人卵巢癌细胞凋亡。     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株SKOV_3端粒酶活性表达的影响

目的:探讨三氧化二砷对卵巢癌细胞株SKOV3端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的AS2O3溶液作用卵巢癌细胞株SKOV3,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;TRAP-银染法观察端粒酶活性的变化。结果:AS2O3溶液对SKOV3有生长抑制的作用,与药物浓度和作用时间相关。AS2O3作用SKOV3细胞24h,其端粒酶活性无明显改变,随着作用时间的延长,端粒酶活性逐渐下降,随着药物浓度的升高端粒酶活性也呈不断下降趋势,以致消失。结论:AS2O3对于人卵巢癌细胞株的生长具有抑制作用,该作用可能与AS2O3能够抑制癌细胞的端粒酶活性密切相关。     

hTERT基因反义cDNA转染对卵巢癌细胞系SKOV3生物学行为的影响

目的: 研究反义hTERT基因对卵巢癌细胞系SKOV3生物学行为的影响.方法: 构建反义hTERT基因的真核表达载体,采用LIPOFCTAMINETM Reagent转染卵巢癌细胞系SKOV3,通过RT-PCR、Trap-ELASA、生长曲线、裸鼠体内致瘤能力等方法比较转染前后细胞hTERT基因表达、端粒酶活性、细胞生长、致瘤性等方面的变化.结果:转化细胞系细胞hTERT基因的表达受到抑制,端粒酶活性下调,肿瘤细胞的增殖与生长速度明显降低,细胞的克隆形成能力及裸鼠体内的成瘤能力下降,肿瘤的恶性表型部分逆转.结论:应用反义技术下调hTERT基因表达可有效降低端粒酶活性并部分逆转卵巢癌细胞的恶性表型,hTERT基因可望成为卵巢癌基因治疗的新靶点.