中国发现基因3型戊型肝炎病毒

目的通过对中国华东地区分离出的2株基因3型戊型肝炎病毒株进行同源性分析，探讨其分子起源和传播问题。方法收集华东某地区13个养猪场的133份猪粪便标本，利用巢式RT—PCR技术扩增戊肝病毒基因组的开放读码区2（ORF2）和RNA依赖的RNA聚合酶区（RdRp，ORF1），并进行基因同源性分析。结果戊肝病毒RNA检出率为43．61％（58／133）。其中，在同一个养猪场检出的2份阳性标本与23条戊肝病毒基因3型全长序列在ORF2和ORF1区的同源性分别为77．10％～92．64％和77．49％～91．14％，被划分为基因3型。另外12个养猪场的56份阳性标本均为基因4型。同时发现，某些日本分离的基因3型病毒株比其他基因3型株更接近本次分离的病毒株。结论这是在中国大陆地区首次发现基因3型戊肝病毒。同时证明在一个较为局限的群体中基因3型和4型病毒可以共存。     

上海地区猪戊型肝炎感染状况及病毒序列分析

[目的] 调查上海地区猪戊型肝炎感染现况,掌握上海市猪感染戊型肝炎病毒的型别,以进一步探讨猪戊型肝炎感染与病人感染的可能关系。[方法]采集上海市3个区的不同季度的3月龄猪血样,用ELISA法检测抗-HEV 特异性抗体水平,并用RT-nPCR方法检测猪粪便中HEV病毒,进行RNA核酸序列分析和基因进化树分析。 [结果] 共检测猪血清标本1 798份,HEV抗体阳性率为89．38％;44份猪粪便样品中17份RT、-nPCR为阳性,HEV RNA阳性率为38．64％,病毒序列经同源性分析,与戊型肝炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为78．5％-84．0％、76．5％-80．7％、 77．3％-82．7％、84．6％-90．7％,基因进化树的分析显示,病毒序列与HEVⅣ型的ⅣA形成同一分支。[结论] 上海地区的猪戊型肝炎感染率较高,戊型肝炎病毒型别属基因型Ⅳ型。     

兰州市猪戊型肝炎血清学及病毒基因型分析

目的 调查甘肃省兰州市猪戊型肝炎病毒(HEV)感染情况以及基因型。方法 收集兰州市部分地区猪血清,用ELISA诊断试剂盒分别检测HEV抗原和抗体;其中抗原阳性的血清,采用HEVORF2引物进行套式逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)扩增,对阳性扩增产物进行克隆和测序,并对序列进行分析,确定其基因型。结果 3月以下猪戊型肝炎病毒抗原、抗体阳性率分别为1.56%和90.27%,3个月以上分别为2.35%和86.99%,抗原、抗体水平在3月龄以上和以下二者中差异无统计学意义,抗原阳性血清共有22份,其中7份为HEV核酸阳性,其核苷酸序列与HEV4型的同源性为82.2%～99.3%,分别为4a、4d和4f亚型。结论 兰州市猪群存在HEV感染,且为基因4型。     

安徽省戊型肝炎基因分型及临床特征研究

目的研究安徽省戊型病毒性肝炎的基因型及其分布特点,为预防和控制戊型病毒性肝炎和疫苗的研制提供科学依据。方法按照戊型病毒性肝炎诊断标准及处理原则（GB17011-1997）于2006年12月～2007年12月从安徽省的4家综合性三甲医院收集戊型病毒性肝炎132例,分析临床特征,其中采集血清50份,用RT-nPCR法检测戊型肝炎病毒基因型。结果HEV RNA阳性率为22%（11/50）,经测序证实为戊型肝炎病毒（Hepatitis Evirus,HEV）的基因序列;用DNA STAR软件分析,11例的病毒株中2例为HEVⅠ型,9例为HEVⅣ型。Ⅳ型中又有ⅣA型3例和ⅣD型6例。结论安徽省急性散发性戊型肝炎的病毒基因型以HEVⅣ型为主,Ⅰ型次之,而Ⅳ型又有不同的亚型,主要为ⅣA和ⅣD型。     

贵州省2019-2021年人源和猪源戊型肝炎病毒基因特征

目的 分析贵州省部分地区人源和猪源戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)流行株基因特征。方法 2019-2021年在贵州省医疗机构收集急性HEV感染者(抗-HEV IgM阳性)血清标本,在屠宰场收集猪胆汁和血清标本,提取HEV核酸,对HEV ORF2区基因进行扩增和测序,构建系统进化树,分析基因型、基因亚型及其核苷酸和氨基酸同源性。结果 从450例急性HEV感染者标本和196份猪标本中共获得53条人源和2条猪源HEV序列。人源序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为81.39%-100%和95.92%-100%,猪源序列分别为87.40%和100%;人源和猪源HEV均与HEV基因4型参考株的核苷酸同源性最高,分别为89.93%和89.83%。55条HEV序列位于系统进化树的3个分支,其中24条与4b亚型、20条与4a亚型、11条与4d亚型参考株处于同一分支,且核苷酸同源性最高,分别为95.54%、93.10%、95.72%。2条人源序列各发生1个位点的氨基酸替换。结论 2019-2021年贵州省部分地区人群和猪群中HEV优势流行株为基因4型,包括4b、4a和4d亚型,氨基酸...     

新疆猪戊型肝炎病毒株CHN-XJ-SW33全基因组序列分析

目的测定从新疆南部地区分离的猪戊型肝炎病毒(HEV)株全基因组序列,并在此基础上分析猪HEV与人源HEV的关系。方法设计HEV基因4型通用PCR引物,用逆转录巢式聚合酶链反应法(RT-nPCR)分段扩增猪HEV株CHN-XJ-SW33的全基因组序列;用cDNA末端快速扩增法(RACE)扩增其末端序列;对扩增的目的片段进行克隆测序,并对拼接后的基因组进行序列比对和进化分析。结果除3′poly(A)尾外,CHN-XJ-SW33基因组全长为7 238 nt,由3个开放读码框(ORF1-3)组成,分别编码1 706、674和114个氨基酸。CHN-XJ-SW33全基因组序列与HEV基因1-3型病毒株同源性仅为72.1%~74.9%,而与HEV基因4型病毒株同源性高达82.8%~95.5%,其中与日本人源中国输入型HEV株JKO-ChiSai98C同源性最高,为95.5%。基因进化分析显示,CHN-XJ-SW33属于HEV4a基因亚型。结论猪HEV与人HEV在全基因组核苷酸序列上高度同源,提示基因4型HEV可能由猪传染给人。     

戊型肝炎病毒基因Ⅲ型病毒样颗粒的表达与抗原性分析

目的观察戊型肝炎病毒（HEV）基因Ⅲ型（GⅢ）ORF2全长片段在昆虫细胞中的表达和病毒样颗粒（VLP）的装配情况,对纯化的VLP进行抗原性分析。方法应用含Ⅲ型HEV全长ORF2的pVL 1393-GⅢ ORF2质粒,体外与杆状病毒同源重组后,转染昆虫细胞Sf9细胞与在rrn5细胞中表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和western blot检测表达产物,超速离心法纯化,检测是否形成病毒样颗粒,用免疫电镜和ELISA分析病毒样颗粒的抗原性。结果Ⅲ型ORF2全长基因在Sf9和Tn5昆虫细胞中表达可获得72、64、58、56、53 kD的蛋白质,在Tn5细胞中有56、53kD的蛋白质分泌到培养液。纯化后可获得6．7mg／mL的蛋白质,分子量为53kD,电镜观察发现了直径约为25nm的VLP,浮密度为1．291g／cm^3。检测基因Ⅳ型戊肝感染病人血清,GⅢ VLP与GⅠVLP具有同样的灵敏度,均能检测到滴度分别为1：204800和1：102400的IgM和IgG抗体。同时GⅢ VLP在戊肝病人血清和IgM阳性猪血清孵育发生凝集反应。结论戊型肝炎病毒基因Ⅲ型ORF2全长基因片段可以在昆虫细胞表达系统高效表达。形成的VLP具有HEV病毒颗粒类似的抗原活性,可用于制备HEV抗体诊断试剂和开发预防用疫苗。     

河南省1157份人免疫缺陷病毒1型毒株亚型分析

目的 了解河南省人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)毒株的亚型状况及序列变异、流行特征,分析其传染来源及传播规律,为河南省艾滋病防治策略提供依据.方法 对2005-2006年在河南全省收集的1157例HIV-1感染者抽取静脉血,分离单个核细胞(PBMC),用套式聚合酶链反应(nest-PCR)对单个核细胞中前病毒脱氧核糖核酸(DNA)的膜蛋白(env)基因进行扩增,并对其C2V3区核苷酸序列进行了测定和分析.结果 1157份样本中存在B'、C亚型及BC、AE 2个重组亚型.其在所有分析样本中的比例分别为96.456%(1116/1157)、0.346%(4/1157)、2.593%(30/1157)、0.605%(7/1157).与国内及国际的参考毒株RL42、C.95in21068、07-BC.CN.97.C54A、01AE.TH.90.CM240间的离散率分别为(8.971±3.182)%、(5.109±0.112)%、(3.568 4±0.254)%、(4.775±0.128)%.B'亚型以既往有偿献血人员为主,BC亚型以性传播为主,AE亚型以性传播及既往献血途径为主,C亚型以性传播为主.结论 目前河南省艾滋病感染者中有B'、C亚型及BC、AE两个重组亚型.泰国B'亚型依然占主导地位.在局部地区,非B'亚型有聚集的现象,应引起当地卫生机构的注意,加大对流动人员的检测.     

中国南方某农村地区人与猪戊型肝炎病毒的检测和部分序列分析

目的调查中国南方某农村地区戊型肝炎病毒（HEV）人株与猪株的相关性。方法应用逆转录-巢式聚合酶链法（RT—nPCR）对一般人群中HEV-IgM阳性者、急性戊型肝炎患者和当地某养猪场的猪进行HEV RNA检测，并对HEV RNA阳性标本进行克隆测序和序列分析。结果132份猪粪便标本中13份为HEV RNA阳性；26份IgM阳性一般人群血清标本中有4份HEV RNA阳性；4例急性戊型肝炎患者中有1例的血清和粪便标本为阳性。序列分析发现该地区HEV人株与猪株在ORF2部分区域的核苷酸序列同源性为89．3％～100．0％，这10株HEV序列与HEVⅠ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型在同一区域的核苷酸序列的同源性分别为78．7％～84．7％、83．3％～85．3％、76．0％～80．0％和84．7％～95．3％。结论该地区人群及猪群中流行的HEV同属基因Ⅳ型。     

南宁市朝阳溪污水中诺如病毒GⅡ.4型变异株基因分析

目的了解南宁市朝阳溪污水中诺如病毒(Norovirus,NV)GⅡ.4变异株的基因特征。方法 2011年1~12月采集72份南宁市朝阳溪污水,经实时荧光逆转录-聚合酶反应(Realtime RT-PCR)方法进行NV核糖核酸(RNA)检测,阳性标本进行基因克隆测序和遗传进化分析。结果 72份污水中均能检测到NV RNA,基因Ⅰ组(GenogroupⅠ,GⅠ)NV RNA阳性率为70.83%,基因Ⅱ组(GenogroupⅡ,GⅡ)阳性率则达100.00%,共为16个基因型,有18株为GⅡ.4型,其中2株为2006b变异株,其余16株均为2010变异株。检测到的2006b变异株和2010变异株在衣壳蛋白N/S区第94位氨基酸均发生变异,而在第6位、第15位仅2010变异株发生了变异,2006b变异株(除SW2011041-2株外)均无变异。这些变异株与同年南宁市腹泻病例中NV GⅡ.4型变异株核苷酸型内同源性分别为96.70%~98.93%和97.42%~99.64%。结论南宁市朝阳溪污水中NV存在很高的遗传多样性,其来源可能是周边居民中的感染者;GⅡ.4型NV中2010变异株为优势株,其在人群中可能存在隐性感染;污水监测是人间NV感染监测的重要补充。     

登革2型病毒深圳分离株的鉴定及E基因序列分析

分支上,核苷酸同源性最高,达99.8%,氨基酸同源性为100%,与Indonesia-76、Somalia-84和Sri Lanka-90同属基因Ⅳ亚型.结论 首次从深圳市登革热患者血清中分离到1株登革2型病毒,证实该毒株可能来源于马来西亚.     

戊型肝炎病毒基因Ⅳ型病毒样颗粒的表达和抗原性分析

目的表达戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅳ型(G4)结构蛋白ORF2截短的基因片段,观察病毒样颗粒(VLP)的装配情况,对纯化的VLP进行抗原性分析。方法为了制备HEV病毒样颗粒,将结构蛋白ORF2的N末端111个氨基酸残基截掉,然后将112至660共549个氨基酸残基的基因与杆状病毒基因重组,在昆虫细胞Tn5表达。首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳和WesternBlotting检测基因是否正确表达,再用超速离心检测是否形成病毒样颗粒,最后用免疫电镜和ELISA分析病毒样颗粒的抗原特异性。结果含有截掉了N末端111个氨基酸残基的HEVG4的ORF2基因的重组杆状病毒感染昆虫细胞Tn5,除了可以表达最初的产物(相对分子质量为58×103的蛋白分子)外,也产生了一些可能经过宿主细胞酶类处理的蛋白分子,相对分子质量分别为57×103、56×103和54×103,并分泌到培养液中。经超速离心和密度梯度离心,电镜观察发现只有54×103的蛋白分子可以自行组装成VLP,颗粒直径为23~24nm,浮密度为1·285g/cm3,与HEVG1比较,G4VLP具有相同的大小和浮密度,但表达量低。G4VLP与HEV病人血清可以发生抗原抗体反应,用G4VLP作抗原可以检测HEV的G1、G3、G4型特异性IgM和IgG抗体。结论该研究证实截短的HEVG4的ORF2结构蛋白基因可以在重组杆状病毒表达系统高效表达。形成的VLP具有HEV病毒颗粒类似的抗原活性,可用于制备抗HEV诊断试剂和开发预防用疫苗。     

埃柯19型病毒的鉴定及VP1区基因特征分析

[目的]研究河南省埃柯19型病毒分离株VP1区基因特征。[方法]从2009年手足口病例标本中分离病毒,提取RNA并逆转录,应用VPl区特异型引物扩增VPl区全长基因片段并进行序列测定、系统发生树构建和核苷酸同源性分析。[结果]从2009年河南省手足口病人标本中分离出的肠道病毒,其中一株VP1区扩增成功,VPl全基因序列测定和同源性比较分析表明,该分离株为埃柯19型肠道病毒,且与山东省2009年分离株同源性最高,达到97.3%。[结论]河南省手足口病原谱中存在埃柯19型病毒,并与山东分离株属同一分支。     

高危型人乳头状瘤病毒、人巨细胞病毒、人疱疹病毒4型、解脲脲原体感染与宫颈病变的关系

目的探讨高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)合并人巨细胞病毒(CMV)、人疱疹病毒4型(EBV)、解脲脲原体(UU)感染在宫颈上皮内瘤变中的作用,并分析年龄与宫颈上皮内瘤变的相关性。方法选取2015年1-12月该院收治的宫颈高级别病变(HSIL)患者46例、低级别病变(LSIL)患者42例、未明确意义的非典型鳞状上皮细胞不排除病变(ASCUS)患者41例和正常对照(NILM)患者107例为研究对象。通过流式荧光杂交和实时荧光定量基因扩增法分别检测HR-HPV、CMV、EBV、UU感染情况。并通过SPSS 17.0软件运用χ~2检验和多项Logistic回归分析其感染状态与宫颈病变的相关性。结果UU感染率在各组中均为最高,其次是CMV,EBV感染率最低。UU、CMV感染及年龄在各病变组间差异有统计学意义(P0.01);两种及以上微生物合并HR-HPV感染在各组间差异有统计学意义(P0.01)。结论 CMV、EBV、UU合并HR-HPV感染分别与宫颈上皮内瘤变呈正相关,随年龄增大,病变风险增大。且UU更容易合并HR-HPV感染。HR-HPV及微生物联合检测在宫颈癌的预防治疗中具有重要作用。     

人巨细胞病毒临床分离株的鉴定及UL148基因分析

目的:研究广州地区先天性感染患儿体内人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株的鉴定及其UL148基因的序列特征分析。方法:收集广州地区感染HCMV的新生儿尿液标本,从中分离低传代临床病毒株,应用多重PCR方法鉴定,对其进行UL148基因全序列扩增,扩增产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析。结果:成功分离出3株HCMV低传代病毒株(D2、D3、D52),经鉴定后的UL148基因序列被GenBank收录,序列号为:DQ180380,DQ180363和DQ180354。序列分析显示,3株临床分离株中UL148序列高度保守;在UL148全基因序列951个核苷酸中,所有变异均为碱基替换,无插入及缺失突变;编码蛋白由316个氨基酸残基组成,氨基酸序列也比较保守,各分离株中变异率为0.3%～1.9%;编码蛋白翻译后修饰位点包括细胞黏附相关的特征序列、PKC磷酸化位点、酪氨酸激酶II磷酸化位点、cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点等;其编码蛋白等电点为9.17～9.37。结论:广州地区HCMV UL148基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列极为保守,但仍具有一定的多态性,提示UL148 ORF可能是一个重要的功能基因。     

对戊型病毒性肝炎患者实施健康教育的效果分析

戊型病毒性肝炎是由戊型肝炎病毒所引起的急性消化道传染病。主要经污染的水源传播,也可通过食物和日常生活接触传播,但水型流行较为多见。具有传染性强、流行面广、发病率高等特点。近年来由于人口流动大。公共场所增多,饮食卫生习惯等因素导致该病发病率呈逐年上升态势。已成为目前影响人类健康的公共卫生问题。为加强对戊型肝炎的预防和治疗,     

高危型人乳头状瘤病毒及病毒载量对宫颈癌癌前病变的相关性分析

目的探讨高危型人乳头状瘤病毒(HPV)及病毒载量对宫颈癌癌前病变的相关性分析,为临床诊断提供依据。方法选择2012年4月-2013年10月在医院接受诊治的宫颈癌癌前病变患者263例,其中慢性宫颈炎患者45例、宫颈上皮瘤样病变(CIN)Ⅰ期患者62例、CINⅡ患者89例、CINⅢ患者67例,采用荧光定量PCR术检测HPV-DNA高危型分型及病毒载量,采用统计软件SPSS17.0进行统计分析。结果 263例宫颈癌癌前病变患者中感染高危型HPV患者185例,阳性率为70.34%,其中最常见的高危型亚型以HPV16、HPV18为主,分别占30.81%、21.62%;CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ患者HPV高危型阳性率及病毒载量均显著高于慢性宫颈炎患者,差异均有统计学意义(P<0.05);而CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ患者HPV高危型阳性率比较,差异无统计学意义,且病毒载量随着宫颈癌癌前病变严重程度的增加而增加。结论宫颈癌癌前病变的发生与高危型HPV及病毒载量密切相关,病毒载量随着宫颈癌癌前病变严重程度的增加而增加,宫颈病变越重感染率越高,宫颈癌癌前病变发生高度与高危型HPV感染相关;故高危型HPV及病毒载量为宫颈癌癌前病变影响的重要危险因素。     

女性性工作者人乳头状瘤病毒流行概况及型别分布

人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌、鳞状上皮内病变及尖锐湿疣等诸多疾病相关,而女性性工作者是HPV感染的核心人群,对HPV在该人群中的流行情况研究意义重大.不同文献报道的该人群的HPV的感染率差别较大,从新加坡报道的14.4%到越南报道的84.8%不等.研究女性性工作者中HPV流行概况及其型别分布,有利于制定最佳的疫苗接种方案,使HPV疫苗发挥最大作用.此文对这一人群的HPV流行概况及型别分布等研究作了综述.