TRAIL重组蛋白诱导肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的研究重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白诱导肝癌细胞HepG2的凋亡作用和意义。方法HepG2细胞经重组人可溶性TRAIL蛋白处理后,以MTT法测定细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果TRAIL蛋白对HepG2的作用存在较好的量效和时效关系,其最佳作用剂量和最佳作用时间分别为1 000 ng/ml和24h;1 000 ng/ml的TRAIL蛋白作用24 h后,HepG2肝癌细胞的存活率降至45%,凋亡指数达51%。结论TRAIL重组蛋白能通过诱导细胞凋亡的方式杀伤一定量的HepG2肝癌细胞,有可能成为潜在的抗肝癌新药。     

RAIL泰素帝协同诱导人肺腺癌细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL）和化疗药物泰素帝（TXT）联合应用对体外培养人肺腺癌A549细胞的凋亡诱导作用,并初步探讨其作用机制。方法：通过形态学观察和MTT比色法检测TRAIL、TXT及二者联合应用对A549细胞的形态学影响和细胞增殖的抑制作用； Annexin Ⅴ FITC/PI染色，流式细胞术检测A549细胞的凋亡率；半定量RT PCR检测TXT对A549细胞死亡受体DR4、DR5基因表达的影响。结果：①TXT对A549细胞的生长有明显的抑制作用，且呈显著的剂量依赖性，IC50为62.1?ng/ml；而A549对TRAIL不敏感，100?ng/ml的抑制率仅为（6.84±1.14）%，1600?ng/ml的抑制率为（26.10±4.02）%。4?ng/ml TXT与100?ng/ml TRAIL联合应用有显著的协同抑制作用（P＜0.05），抑制率为（19.98±4.15）%；②100?ng/ml TRAIL、4?ng/ml TXT单独作用A549细胞24?h的凋亡率为4.44%和12.26%。100?ng/ml TRAIL与4?ng/ml TXT联合作用A549细胞24?h的凋亡率为16.84%；③4?ng/ml TXT作用前后，死亡受体DR4、DR5mRNA表达水平无明显改变。结论：人肺腺癌细胞A549对TRAIL不敏感，但TRAIL与TXT联合有显著的协同诱导细胞凋亡作用，这种协同作用机制与DR4、DR5的表达无关。     

TRAIL联合顺铂体外杀伤前列腺癌PC-3细胞株的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物顺铂(DDP)对前列腺癌PC-3细胞株的体外杀伤作用. 方法 分别采用不同浓度的DDP(1.0μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml)与TRAIL(10.0ng/ml、20.0ng/ml、50.0ng/ml、100.0ng/ml、200.0ng/ml)作用PC-3细胞株,24h后MTT法检测细胞的吸光度;DDP(5.0ng/m1)与TRAIL(50.0ng/ml)联合作用PC-3细胞4h、8h、12h、16h、20h、24h后,MTT法检测检测细胞的吸光度;并按细胞的抑制率(100%)=(1-实验组吸光度/阳性对照组吸光度)×100%计算DDP组、TRAIL组及两者联合应用对细胞的抑制率,比较组间细胞抑制率的差异. 结果 单独应用DDP或者TRAIL对PC-3细胞体外杀伤作用有浓度依赖性,浓度增高一定程度时对PC-3细胞的抑制作用会处于一个相对平台期;联合应用DDP+TRAIL组与单独应用同浓度的DDP及TRAIL组相比,其对PC-3细胞的体外杀伤作用明显增强,P<0.05,差异具有显著性意义;联合应用DDP与TRAIL对PC-3细胞的体外杀伤作用具有明显的时间依赖性. 结论 DDP能明显提高TRAIL对前列腺痛PC-3细胞株的杀伤作用,其机制与死亡受体DR5的表达上调有关.     

紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的 探讨紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对前列腺癌细胞的抑制作用。方法 MTT法测定紫杉醇、TRAIL及紫杉醇联合TRAIL作用于LNCAP、Du145、PC3细胞后的细胞生存率，同时，用流式细胞技术测定3种细胞的凋亡率。结果 2ng／ml TRAIL对LNCAP、PC3细胞有明显的抑制作用，但对Du145细胞抑制作用不明显；当TRAIL与紫杉醇联用则对3种癌细胞均显示出明显的抑制作用，且发生在给药24h后，72h时抑制作用最强。TRAIL对3种癌细胞有诱导凋亡作用，5ng／ml较2ng／ml作用强；紫杉醇与TRAIL联用明显增强诱导凋亡作用。结论 紫杉醇与TRAIL联合应用能明显增强对LNCAP、Du145、PC3细胞的抑瘤效果和诱导凋亡作用。     

姜黄素联合吉西他滨对肝癌细胞HepG2增殖、凋亡的影响

目的:观察姜黄素、吉西他滨单药及联合用药对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法:使用不同浓度的姜黄素、吉西他滨以及两药联合分别作用肝癌细胞HepG2 24h、48h、72h。MTT法检测上述药物单用或联用对HepG2细胞的生长抑制作用;采用流式细胞仪检测其对HepG2细胞凋亡率的影响。结果:姜黄素、吉西他滨单药及联合用药对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,存在时间剂量依赖关系,均可诱导HepG2细胞凋亡,联合用药有协同作用。结论:姜黄素、吉西他滨能够抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,两药联用有协同作用。     

水飞蓟宾诱导人肝癌细胞HepG2死亡及机制研究

目的：探讨水飞蓟宾对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用及其机制。方法不同浓度水飞蓟宾处理HepG2细胞,采用MTT法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测水飞蓟宾诱导HepG2细胞的凋亡情况。利用ROS荧光探针二氢乙啶（DHE）检测水飞蓟宾是否诱导HepG2细胞ROS的产生,并用ROS抑制剂抗坏血酸预处理后检测水飞蓟宾对HepG2的杀伤活性及诱导凋亡的能力。结果水飞蓟宾可显著抑制HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。水飞蓟宾处理后HepG2细胞的ROS显著增高（P〈0.05,P〈0.01）,用抗坏血酸预处理后水飞蓟宾对HepG2的增殖抑制作用降低,并抑制水飞蓟宾诱导的凋亡。结论水飞蓟宾通过诱导ROS的产生引起人肝癌细胞发生凋亡。     

MicroRNA 122促进吉西他滨对体外非小细胞肺癌细胞系A549的杀伤作用

目的 探讨microRNA 122（miRNA122）对细胞毒性化疗药吉西他滨对体外杀伤非小细胞肺癌细胞株的影响.方法 利用脂质体转染miRNA122的表达载体;CCK-8测定系列浓度梯度吉西他滨检测对非小细胞肺癌细胞株A549的抑制率,计算IC50值;平板克隆实验检测吉西他滨对A549细胞杀伤的影响;流式细胞仪-Annexin/PI双染实验检测吉西他滨诱导A549细胞凋亡率.结果 吉西他滨对A549细胞具有明显地体外杀伤作用,其IC50值为（78.65±5.25）nmol/L,转染miRNA122能够上调吉西他滨的活性,其IC50值为（10.26±1.18）nmol/L;流式细胞术结果显示：A549细胞凋亡率诱导转染空载体组为26.24％±1.94％,诱导转染miRNA122组为63.30％±3.96％.miRNA122能够显著上调吉西他滨诱导A549细胞凋亡率.RT-PCR和蛋白印迹实验表明,转染miRNA122能够显著上调A549细胞内miRNA122的表达水平,降低miRNA122靶基因和调控基因的表达水平.结论 miRNA122能够上调吉西他滨对非小细胞肺癌细胞系A549的体外杀伤作用.     

重组人可溶性TRAIL分子诱导细胞凋亡机理探讨

目的 探讨重组人可溶性TRAIL蛋白（rhsTRAIL）诱导细胞凋亡的机理。方法 应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡；流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局，荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性。结果 100ng/ml人可溶性TRAIL蛋白分子对外周血淋巴细胞无明显毒性，但可诱导肿瘤细胞凋亡，不同的肿瘤细胞凋亡率有差异。凋亡范围在26%-57%。不同细胞表面TRAIL受体表达量不同，外周血淋巴细胞的死亡受体DR4，DR5受体表达5%，而诱骗受体DcR1表达55%，相反肿瘤细胞上的DR4，DR5表达高（40%——88%）。而DcR1表达很低（8%-17%），rhsTRAIL诱导HL-60细胞发生凋亡，其细胞内Caspase-3活性增高，ActD可增加TRAIL抑制细胞生长活性。结论 重组人可溶性TRAIL蛋白分子可诱导肿瘤细胞凋亡，凋亡活性TRAIL受体类型及Caspase-3活性增高有关。     

PDTC增强TRAIL对人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对EBV阳性的人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测TRAIL（1、10、100ng／mL）及TRAIL（1、10、100ng／mL）＋100μmol／mLPDTC时Raji细胞的生长抑制率;原位末端酶标记技术（TUNEL）检测Raji凋亡细胞。结果①TRAIL 1、10ng／mL组12hRaji细胞生长抑制率分别为-35．52％及-15．07％;TRAIL 100ng／mL组12hRaji细胞生长抑制率为6．68％,并且呈时间依赖性（P〈0．05）。②TRAIL（1、10、100ng／mL）加入PDTC后,12hRaji细胞生长抑制率分别为1．18％、4．96％、14．63％,均显著高于TRAIL单用组（均P〈0．01）。③TRAIL（100ng／mL）联合PDTC时Raji细胞凋亡指数最高为79．49％,较TRAIL 100ng／mL（28．84％）有显著性升高,1、10ng／mL TRAIL联合PDTC后Rail凋亡细胞也均显著高于TRAIL单用组（均P〈0．01）。与MTT法检测结果具有一致性。结论TRAIL能诱导Raji细胞凋亡但作用不敏感。PDTC能显著增强TRAIL对Raji细胞的诱凋亡作用。     

吉西他滨对人非小细胞肺癌A549、H1299细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究吉西他滨对人非小细胞肺癌A549及H1299细胞增殖及凋亡的影响。方法:应用MTT法及流式细胞技术测定不同浓度的吉西他滨对A549及H1299细胞体外增殖的抑制作用。结果:(1)MTT法检测不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60μg/ml)吉西他滨分别作用于A549及H1299细胞24、48、72h后,其对A549和H1299细胞的抑制作用逐渐增强,且具有一定的剂量和时间依赖性,但是随着时间的延长,吉西他滨对A549具有药物耐受性,而对H1299具有药物敏感性;(2)A549及H1299细胞随着培养时间的延长,细胞生长逐渐进入对数期,后进入平台期;(3)倒置显微镜下观察发现,A549及H1299对照组细胞贴壁生长,生长状态良好,形态大多数为多角形、或梭形,贴壁牢固,细胞间连接紧密。随着药物作用时间的增加,细胞逐渐皱缩、坏死、碎裂;(4)流式细胞仪检测不同浓度的吉西他滨(0、2.5、5、10、20、40μg/ml)对A549及H1299细胞凋亡具有明显的剂量依赖关系。结论:吉西他滨对A549及H1299细胞增殖有较强的抑制作用;呈现一定的浓度抑制作用和时间抑制作用。随着时间的延长,吉西他滨对A549细胞耐药,而对H1299细胞敏感。     

TRAIL重组蛋白联合扶正抑瘤方诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究

目的:研究重组人可溶性TRAIL蛋白联合扶正抑瘤方诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用和意义。方法:HepG2细胞经重组人可溶性TRAIL蛋白及联合扶正抑瘤方处理后,以MTT法测定细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果:扶正抑瘤方对促进TRAIL蛋白诱导的HepG2的凋亡作用存在较好的量效和时效关系,其最佳作用剂量和最佳作用时间分别为105mg/ml和24小时。结论:扶正抑瘤方能加强TRAIL诱导HepG2肝癌细胞凋亡作用。     

TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡及其与FHIT基因突变关系的初步研究

目的:分析原核重组表达的人可溶性TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡,并观察凋亡作用与FHIT基因突变的关系.方法:观察人可溶性TRAIL对28株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用,RT-PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失突变情况.结果:1～100 mg/L的重组人可溶性T RAIL蛋白即可诱导19株细胞(包括人肿瘤细胞株)如1990(胰腺导管癌)、MCF-7(乳腺癌)、A5 4 9(肺癌)、U251(星形胶质瘤)、HepG-2(肝细胞癌)、M85(胃癌)、CNE-2(鼻咽癌)、Hep-2( 喉癌)、AT-29(结肠癌)、3AO(卵巢癌)和B16-MB(黑色素瘤),髓性恶性细胞如Jurkat、K56 2、U937、6T-CEM,鼠源性S180(肉瘤)、Ehrlich(腹水瘤)和Lewis(肺癌),以及人内皮细胞株ECV304等发生凋亡;而其他9株细胞,如SK-N-SH(人神经母细胞瘤)、8898(人胰腺导管癌)、HeLa(人宫颈癌)、SMMU7721(人肝癌)、HL60(人白血病)、COS-7(猴肾)、人成纤维细胞、L929(鼠成纤维细胞)、Wish(人羊膜细胞)等需大于100 mg/L的TRAIL才能使其凋亡;观察到上述部分对TRAIL敏感的人源细胞的FHIT基因有缺失突变,而不敏感的人源细胞FHIT 基因完整.结论:原核表达的人可溶性TRAIL具有明显诱导多种肿瘤细胞凋亡的活性,其机制可能与FHIT基因的缺失有关.     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

Antitumor Effects of Soluble TRAIL in Human Hepatocellular Carcinoma

TNF related apoptosis inducing ligand(TRAIL) is a promising cancer therapeutic agent,which appears to specifically kill transformed cells,and spare most normal cells[1, 2]. In the presentstudies, we investigated the expression of TRAILand TRAIL receptors in 60 HCC tissues, 20 nor mal liver samples and two HCC cell lines (HepG2and SMMC 7721). The effects of TRAIL on pro moting apoptosis in the HCC cell lines were ana lyzed after the cells exposed to the…     

DR5上调在5，7-二甲氧基黄酮增敏TRAIL诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的 研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)是否能增强人肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)介导细胞凋亡的敏感性及其作用机制.方法 体外培养人肝癌Hep 3B细胞.MTT法测定细胞毒性;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;免疫酶联吸附法测定caspase-3和caspase-8的活性.Western blot 分析DR4和DR5表达.结果 5,7-DMF能增强Hep 3B细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性和诱导DR5表达.5,7-DMF与TRAIL合用诱导Hep 3B细胞凋亡依赖于caspase-3和caspase-8活化.DR5特异拮抗性嵌合抗体减弱5,7-DMF增强TRAIL诱导Hep 3B细胞凋亡作用.结论 5,7-DMF通过上调DR5增强TRAIL诱导人肝癌细胞凋亡.     

乙型肝炎病毒对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导凋亡的影响及其机制

目的：研究乙型肝炎病毒（HBV）转染后,细胞对肿瘤坏死因子（TNF）相关的凋亡诱导配体（TRAIL）诱导 的凋亡的敏感度变化及作用机制。通过人肝癌细胞HepG2及转染了HPV全基因组的HepG2.2.15细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感度研究,探讨HBV感染对细胞凋亡的影响及其机制。方法：流式细胞仪检测TRAIL诱导的凋亡反应和细胞表面TRAIL蛋白的表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中分泌型TRAIL蛋白质的表达,半定量逆转录聚合酶链反应检测TRAIL受体和其转导通路中凋亡拮抗分子FLIP的表达。结果：HepG2和HepG2．2．15对TRAIL诱导的凋亡率分别为51．60％和9．12％。与HepG2相比,HepG2．2．15细胞表面TRAIL蛋白质及其受体的表达都有不同程度的下调,而抵抗细胞凋亡的分子－FLI的表达却显著上调（P＜0．01）,两细胞系上清中分泌型TRAIL的表达量差异无显著意义（P＞0．05）。结论：HBV转染可以抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡,可以下调细胞表面TRAIL蛋白质及其受体的表达,但使FLIP的表达显著上调。这能从一定程度上解释HBV感染逃逸机体免疫监视,持续存活,导致相应病理变化的机制。     

三氧化二砷通过抑制NF-κB增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用研究

【摘要】 目的 研究三氧化二砷(As2O3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及对核转录因子-kappaB(NF-κB)表达的影响。方法 采用As2O3、TRAIL单用和联合作用于体外培养的A549细胞,以四甲基偶氮唑蓝比色法测细胞增殖抑制率和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达,Western blot检测NF-κB蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)检测NF-κB的活性。结果 As2O3与TRAIL联用对A549细胞增殖的抑制作用均比单药组强(P<0.05);联合用药组诱导凋亡作用强于单药组(P<0.05);联合用药组明显抑制NF-κB表达,并抑制其活性(P<0.05)。NF-κB mRNA、蛋白及其活性与细胞凋亡率呈负相关（P均<0.05）。结论 As2O3可能通过NF-κB通路,增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用。     

Induction of apoptosis in osteogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand and chemotherapeutic agents

Background Osteosarcoma is one of the most common primary malignant tumors of bone with poor prognosis. TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) is a member of the tumor necrosis factor (TNF) cytokine family. TRAIL induces apoptosis in various tumor cell lines but is not found to be cytotoxic to many normal cell types in vitro. We investigated the cytotoxic activity of TRAIL and chemotherapeutic agents, including methotrexate (MTX), doxorubicin (DOX) and cisplatin (CDDP), on established osteosarcoma cell line—OS-732.Methods OS-732 cells were incubated with chemotherapeutic agents MTX,DOX and CDDP at various peak plasma concentrations(PPC), 0.1PPC,1PPC and 10PPC, alone or with 100 ng/ml of TRAIL for 24 hours or 48 hours. MTT was used to evaluate the cytotoxic activity of different agents on OS-732. The apoptosis proportion was assayed by flow cytometry. Cellular morphologic changes were observed by phase contrast microscope, scan electron microscope, and transmission electron microscope.Results The inhibitory rate was (24.438±3.414)% with TRAIL of 100 ng/ml for 24 hours. The cells were responsive to DOX and CDDP with a dose-effect relationship (P&lt;0.05). In OS-732 cells, DOX and CDDP cooperated synergistically with TRAIL when incubated the cells with them for 24 hours (the combined inhibitory rate is (58.360±2.146)% and (54.101±2.721)%, respectively). TRAIL alone or drugs alone induced the apoptosis rate was less than 25% (P&lt;0.05). However, the combination of TRAIL and MTX did not present synergistic effects on OS-732 cells (P&gt;0.05, compared with TRAIL alone). Conclusions Osteosarcoma OS-732 cells were not responsive to TRAIL-induced apoptosis. DOX and CDDP sensitize osteosarcoma OS-732 cells to TRAIL-induced apoptosis. The combination of TRAIL and MTX presented no synergistic effects on killing OS-732 cells.