2型糖尿病患者血清抵抗素水平的变化研究

目的探讨人血清抵抗素水平与2型糖尿病的关系.方法 2型糖尿病患者48例和正常对照组47例,采用酶联免疫分析法检测空腹血清抵抗素、胰岛素水平;同时测血糖、血压、血脂、身高、体重,计算腰围、臀围、体重指数、腰臀比值和胰岛素敏感指数、胰岛素抵抗性、胰岛B细胞功能.结果 2型糖尿病组的体重指数、甘油三酯、血清抵抗素水平显著高于正常对照组（P＜0.05）;相关分析显示血清抵抗素水平与体重指数、腰围、空腹胰岛素、血压呈正相关.在正常对照组,血清抵抗素水平与胰岛素敏感指数、胰岛素抵抗性、胰岛B细胞功能相关.而且血清抵抗素水平在糖尿病肥胖组显著高于糖尿病非肥胖组和正常对照组（P＜0.05）.结论 2型糖尿病患者血清抵抗素水平升高,与肥胖相关,血清抵抗素可能是联系肥胖和2型糖尿病的重要因素.     

肥胖与抵抗素

肥胖是一种多因素的慢性代谢性疾病，高脂膳食、能量摄人过多、体力活动少和遗传是肥胖的主要原因。在发达国家及发展中国家，肥胖都是一个常见的公共健康问题，它使许多疾病的发生危险增加，包括：冠状动脉疾病、2型糖尿病、高血压、高脂血症、肝胆疾病等，死亡率也随肥胖程度的加重而相应增加。通过减轻体重，可以有效降低血压与血脂、改善糖代谢、减少冠心病及脑血管疾病的发生，降低死亡率。     

抵抗素与老年糖尿病合并高血压的相关性研究

目的 探讨抵抗素对老年糖尿病合并高血压的影响及其与相关代谢指标的关系.方法 将153例2型糖尿病分为合并高血压组70例和单纯糖尿病组83例,并选取同期健康体检55例老年人作为健康对照组.均测定体质量指数（BMI）、空腹血糖（FBG）、餐后2h血糖（2 h PG）、空腹胰岛素（FINS）、糖化血红蛋白（HbA1c）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）及抵抗素水平,分析抵抗素与其他各项代谢指标的相关性.结果 与健康对照组比较,合并高血压组和单纯糖尿病组2hPG、BMI、FBG、FINS、HOMA-IR、HbA1c、TG及血清抵抗素水平均明显升高,HDL-C明显下降,差异均有统计学意义（P ＜0.01,P＜0.05）;与单纯糖尿病组比较,合并高血压组HOMA-IR、血清抵抗素水平明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;血清抵抗素水平与BMI、HOMA-IR呈显著正相关（r =0.278,P=0.034;r =0.492,P=0.000）.结论 老年2型糖尿病合并高血压患者血清抵抗素水平明显升高,提示血清抵抗素可能通过某种机制和途径促进糖尿病患者的动脉硬化进程,促发高血压.     

2型糖尿病大鼠大网膜和皮下脂肪组织抵抗素基因的表达

目的：观察实验性2型糖尿病大鼠大网膜与皮下脂肪组织抵抗素基因的表达，探讨抵抗素与胰岛素抵抗的关系。 方法：实验于2003-09／2004-06在郑州大学第一附属医院内分泌实验室完成．选择雌性Wistar大鼠30只，随机抽签法分为普通饲料组（8只）和高脂饲料组（22只），高脂饲料组大鼠采用0．1mol／L链脲佐菌素尾静脉注射加高脂喂养的方法建立2型糖尿病模型15只，随机抽取8只作为糖尿病组，普通饲料组为正常对照组，检测两组大鼠的空腹血糖、胰岛素、胰岛素敏感性指数、血清胆固醇及三酰甘油。采用反转录-聚合酶链反应检测两组大鼠大网膜和皮下脂肪组织中抵抗素基因的表达。 结果：纳入动物16只，均进入结果分析。①糖尿病组大鼠胰岛素敏感性指数与正常对照组大鼠相比明显降低（分别为-4．89&;#177;0，20．-2．63&;#177;0．42，P〈0．01），空腹血糖．胰岛素，三酰甘油和胆固醇明显升高[空腹血糖分别为（12.89&;#177;1．18）．（4．86&;#177;0．68）mmol／l；胰岛素分别为（10．51&;#177;1．93），（3．07&;#177;1．15）μU／L；三酰甘油分别为（2．63&;#177;0．71），（1．13&;#177;0．17）mmol／L：胆固醇分别为（1．73&;#177;0．15），（1．25&;#177;0．17）mmol／L，P〈0．011。②以A值比表示，糖尿病组大网膜脂肪组织的抵抗索基因表达与正常对照组皮下和大网膜脂肪组织、糖尿病组皮下脂畴组织比较明显升高（分别为0．27&;#177;0．03，0．15&;#177;0．02，0．15&;#177;0．03．0．17&;#177;0．02，P〈0．01），而后三者间相比差异无显著性（P〉0．01）。 结论：抵抗素基因在2型糖尿病大鼠大网膜脂肪组织中表达升高，可能是腹型肥胖更易导敛胰岛素抵抗的重要原因之一。     

改良胃旁路术对GK大鼠抵抗素的影响

目的:探讨改良胃旁路手术(improved gastric bypass)对2型糖尿病GK大鼠(Goto-Kakizaki rats)的降糖作用及其机制。方法:20只雄性GK大鼠随机分为手术组和对照组,每组10只。对手术组大鼠行改良胃旁路术,对照组大鼠在十二指肠球部远端0.5cm处切断吻合。检测术前1周及术后第8周两组GK大鼠体重、空腹血糖(FPG)、血脂、血浆胰岛素、血浆抵抗素水平。结果:术后8周,手术组大鼠FPG由术前的(5.2±0.3)mmol/L降至(4.0±0.2)mmol/L,血浆抵抗素由术前的(9.9±1.7)mmol/L降至(5.7±1.0)mmol/L,与术前相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:改良胃旁路术能降低GK大鼠的血糖,并且能够降低GK大鼠的血脂和血浆抵抗素,其可能是胃旁路术治疗2型糖尿病的机制之一。     

2型糖尿病患者血清抵抗素浓度与血脂代谢水平的相关研究

目的：了解2型糖尿病患者血清抵抗素浓度与空腹血糖、血脂的关系。方法：选择50例2型糖尿病患者和50例健康中老年人，分别分为糖尿病组和非糖尿病组，用竞争性酶联免疫吸附法测定各组空腹血浆抵抗素水平，同时检测空腹血糖、血脂各项指标。结果：糖尿病空腹血浆抵抗素水平显著高于对照组（p〈0．05）。抵抗素与甘油三脂、空腹血糖呈正相关关系（r=0．687，p〈0．05，r=0．824，p〈0．05），而抵抗素与其余各项血脂耗标、性别之间无明显相关性。结论：血清抵抗素水平与2型糖尿病关系密切．抵抗素水平可能影响体内能量代谢和平衡．与糖代谢．脂代谢的关系更为密切。     

姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:脂肪细胞分化障碍是肥胖引发胰岛素抵抗的途径之一,观察中药姜黄提取物姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响,在细胞水平分析姜黄素防治糖尿病可能的机制。方法:实验于2005-12/2006-03在哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室完成。以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,在常规培养时,分别加入0,5,10,15,20,25,30,35,40,50,80和100μmol/L浓度的姜黄素(购自美国Sigma公司),每个剂量设12个平行孔,培养3d,在此期间,分别在24,48,72h时,于姜黄素各剂量组中分别选取4个平行孔,以MTT法测定其增殖情况。在诱导分化时,设一组空白对照,实验组与诱导液同步加入0,2.5,5,10,15和20μmol/L的姜黄素,于诱导分化的第6天,采用油红O染色方法测定3T3-L1前脂肪细胞分化程度。结果:①姜黄素作用3T3-L1前脂肪细胞48h,5,10μmol/L剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加(0.67±0.01,0.69±0.02,0.57±0.01,P<0.01),15μmol/L剂量组细胞吸光度值与空白对照相比差异无显著性意义(0.54±0.01,P>0.05),其余剂量组(20,25,30,35,40,50,80和100μmol/L)细胞吸光度值显著降低(0.53±0.01,0.47±0.01,0.42±0.03,0.45±0.03,0.18±0.01,0.2±0.01,0.16±0.04,0.44±0.05,P<0.01)。②姜黄素作用细胞48h时,促进或抑制细胞增殖的作用最强,40μmol/L以上浓度的姜黄素出现细胞毒性作用,大部分细胞成片脱落死亡。72h时,15～35μmol/L姜黄素组细胞的生长率有所增加,而40μmol/L以下姜黄素处理组细胞生长率仍维持在较低水平。③脂肪细胞油红O染色分光光度法结果显示2.5,5,10,15和20μmol/L姜黄素剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加(0.38±0.05,0.49±0.04,0.56±0.06,0.75±0.06,0.77±0.1,0.83±0.06,0.38±0.05,P<0.05～0.01)。结论:不同浓度姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞具有促进增殖和抑制增殖双重作用,低浓度姜黄素促进细胞增殖,高浓度姜黄素抑制细胞增殖。姜黄素通过促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,从而增加脂肪细胞对胰岛素的敏感性,这可能是其防治糖尿病的机制之一。     

初诊2型糖尿病患者血清抵抗素与颈动脉内中膜厚度的关系

目的 探讨初诊2型糖尿病(T2DM)患者血清抵抗素水平与颈动脉内中膜厚度(CIMT)的关系.方法 选取新诊断的T2DM患者共122例,根据CIMT分为两组:CIMT正常组(CIMT<1.0 mm)70例和CIMT增厚组(CIMT≥1.0 mm,伴或不伴斑块)52例.采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清抵抗素水平,并采用高频彩色多普勒超声测定CIMT.结果 与CIMT正常组相比,CIMT增厚组的血清抵抗素水平明显升高(P<0.05);Spearman相关性分析结果 显示,血清抵抗素水平与CIMT具有显著相关性(r=0.247,P=0.028),而且经校正性别、年龄、BMI后,血清抵抗素水平仍与CIMT显著相关(r=0.198,P=0.034);Logistic多因素回归分析结果 显示,血清抵抗素与CIMT增厚呈显著性关联(OR=1.39,95%CI:1.08～2.04,P=0.037).结论 血清抵抗素是T2DM患者CIMT增厚的独立相关因素.     

2型糖尿病大鼠大网膜和皮下脂肪组织抵抗素基因的表达

目的:观察实验性2型糖尿病大鼠大网膜与皮下脂肪组织抵抗素基因的表达,探讨抵抗素与胰岛素抵抗的关系。方法:实验于2003-09/2004-06在郑州大学第一附属医院内分泌实验室完成。选择雌性Wistar大鼠30只,随机抽签法分为普通饲料组(8只)和高脂饲料组(22只),高脂饲料组大鼠采用0.1mol/L链脲佐菌素尾静脉注射加高脂喂养的方法建立2型糖尿病模型15只,随机抽取8只作为糖尿病组,普通饲料组为正常对照组。检测两组大鼠的空腹血糖、胰岛素、胰岛素敏感性指数、血清胆固醇及三酰甘油。采用反转录-聚合酶链反应检测两组大鼠大网膜和皮下脂肪组织中抵抗素基因的表达。结果:纳入动物16只,均进入结果分析。①糖尿病组大鼠胰岛素敏感性指数与正常对照组大鼠相比明显降低(分别为-4.89±0.20,-2.63±0.42,P<0.01),空腹血糖、胰岛素、三酰甘油和胆固醇明显升高[空腹血糖分别为(12.89±1.18),(4.86±0.68)mmol/L;胰岛素分别为(10.51±1.93),(3.07±1.15)μU/L;三酰甘油分别为(2.63±0.71),(1.13±0.17)mmol/L;胆固醇分别为(1.73±0.15),(1.25±0.17)mmol/L,P<0.01]。②以A值比表示,糖尿病组大网膜脂肪组织的抵抗素基因表达与正常对照组皮下和大网膜脂肪组织、糖尿病组皮下脂肪组织比较明显升高(分别为0.27±0.03,0.15±0.02,0.15±0.03,0.17±0.02,P<0.01),而后三者间相比差异无显著性(P>0.01)。结论:抵抗素基因在2型糖尿病大鼠大网膜脂肪组织中表达升高,可能是腹型肥胖更易导致胰岛素抵抗的重要原因之一。     

不同糖化血红蛋白水平的2型糖尿病患者中抵抗素及血脂情况分析

目的 研究不同糖化血红蛋白水平2型糖尿病患者血清抵抗素、血脂情况.方法 以60例为研究对象,分为A组HBA1c＜7％,B组HBA1c≥7％,测糖化血红蛋白、空腹血糖、抵抗素、体重指数、收缩压和舒张压、甘油三酯、总胆固醇.结果 两组抵抗素水平差异有统计学意义(P＜0.01),两组年龄、性别、血糖、甘油三酯、总胆固醇、体重指数、收缩压和舒张压差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 2型糖尿病患者不同糖化血红蛋白水平可能与血清抵抗素有关系,本次结果与血脂情况无关.     

利培酮抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化

目的研究利培酮对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法采用经典的激素鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,油红O染色观察。向诱导培养基中加入利培酮研究其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果用激素鸡尾酒法成功地将3T3-L1前脂肪细胞诱导为成熟的脂肪细胞。0.1、1、10μmol/L的利培酮均能够抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。结论利培酮能够抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。     

大黄素对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的作用

目的:观察大黄素(emodin)对3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化作用,并探讨其可能机制。方法:采用油红O染色、三酰甘油(TG)含量测定及3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)活性测定等方法检测脂肪细胞的分化程度;用实时定量PCR法检测大黄素对脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)mRNA、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA和脂肪酸结合蛋白ap2mRNA表达的影响;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定3T3-L1前脂肪细胞的增殖;运用表面等离子体共振技术(SPR)测定大黄素与PPARγ2的亲和力。结果:大黄素呈剂量依赖性促进3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化,50μmol/L大黄素可使脂肪细胞内TG含量和GPDH活性分别增加约22%及60%。大黄素可显著升高脂肪细胞的PPARγ2mRNA、C/EBPαmRNA及脂肪酸结合蛋白ap2mRNA表达水平。同时,50μmol/L大黄素可使前脂肪细胞的细胞增殖率下降约17%。SPR检测结果显示,大黄素具与PPARγ2结合活性,提示其可能是PPARγ2的配体。结论:大黄素作为PPARγ2的配体,能促进脂肪细胞分化、抑制前脂肪细胞增殖,而该过程可能是通过上调PPARγ2、C/EBPα的表达来实现的。     

牛磺酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

目的:有研究发现,喂食牛磺睃的糖尿病鼠脂肪细胞摄糖的能力增加,但牛磺酸是否能影响脂肪细胞分化,目前还尚不清楚.本实验观察牛磺酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,并探讨牛磺酸影响3T3-L1前脂肪细胞分化的机制.方法:实验于2006-07/09在中南大学湘雅三医院实验中心完成.①实验材料:实验中应用的3T3-L1细胞由中国科学院上海细胞库提供.②实验方法:将3T3-L1细胞用含体积分数为0.10胎牛血清的高糖DMEM培养液培养,内含108 u/L青霉素,80×1010U/L链霉素.细胞达汇片后,按5×107L-1密度接种于培养瓶中,应用0.5mmol/L IBMX、0.5mg/L胰岛素和1μmol/L地塞米松诱导分化,实验组加入牛磺酸,对照组未实施牛磺酸干预.油红O染色观察脂肪细胞分化情况.10, 20 mmol/L牛磺酸分别干预C3T3-L1前脂肪细胞24,48 h,抽提实验组和对照组细胞RNA及蛋白.③实验评估:采用RT-PCR及Western-blot方法观察脂肪分化相关基因的表达变化.结果:①10 mmol/L牛磺酸干预后14 d,实验组油红O染色阳性脂肪细胞明显少于对照组.②10,20 mmol/L牛磺酸分别干预3T3-L1前脂肪细胞24.48 h后,对脂肪分化相关基因Insig-2蛋白、PPAR、Insing-2、脂联素、脂联素受体、GLUT-4、AP-2 mRNA表达无明显影响.结论:牛磺酸可抑制前脂肪细胞分化,但具体机制还需要进一步研究.     

GEM基因在3T_3-L_1脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化

目的观察3T3L1前体脂肪细胞诱导分化过程中GEM基因表达水平的变化,探讨GEM基因与肥胖发生的关系。方法体外培养3T3L1前体脂肪细胞,采用RTPCR技术检测分化不同时段的3T3L1脂肪细胞中GEM基因的mRNA表达水平。结果在3T3L1脂肪细胞的诱导分化过程中,GEM基因mRNA表达水平无显著变化(P>0.05)。结论GEM基因在脂肪细胞分化、脂质合成和积聚过程中的作用有待进一步研究。     

姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的：脂肪细胞分化障碍是肥胖引发胰岛素抵抗的途径之一，观察中药姜黄提取物姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响，在细胞水平分析姜黄素防治糖尿病可能的机制。方法：实验于2005—12／2006—03在哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室完成。以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞，在常规培养时，分别加入0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，80和100μmol／L浓度的姜黄素（购自美国Signm公司），每个剂量设12个平行孔，培养3d，在此期间，分别在24，48，72h时，于姜黄素各剂量组中分别选取4个平行孔，以MTF法测定其增殖情况。在诱导分化时，设一组空白对照，实验组与诱导液同步加入0，2．5，5，10，15和20μmol／L的姜黄素，于诱导分化的第6天，采用油红0染色方法测定3T3-L1前脂肪细胞分化程度。结果：①姜黄素作用3T3-L1前脂肪细胞48h，5，10μmol／L剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加（0．67&;#177;0．01，0．69&;#177;0．02，0．57&;#177;0．01，P〈0．01），15μmol／L剂量组细胞吸光度值与空白对照相比差异无显著性意义（0.54&;#177;0．01，P〉0．05），其余剂量组（20，25，30，35，40，50，80和100μmol／L）细胞吸光度值显著降低（0.53&;#177;0．01，0．47&;#177;0.01，0．42&;#177;0.03，0.45&;#177;0.03，0.18&;#177;0.01，0.2&;#177;0.01，0.16&;#177;0.04，0.44&;#177;0．05，P〈0．01）。②姜黄素作用细胞48h时，促进或抑制细胞增殖的作用最强，40μmol／L以上浓度的姜黄素出现细胞毒性作用，大部分细胞成片脱落死亡。72h时，15-35μmol／L姜黄素组细胞的生长率有所增加，而40μmol／L以下姜黄素处理组细胞生长率仍维持在较低水平。⑧脂肪细胞油红0染色分光光度法结果显示2．5。5，10，15和20μmol／L姜黄素剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加（0．38&;#177;0.05，0．49&;#177;0.04，0．56&;#177;0.06，0．75&;#177;0.06，0．77&;#177;0.1，0．83&;#177;0.06。0．38&;#177;0．05。P〈0．05-0．01）。结论：不同浓度姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞具有促进增殖和抑制增殖双重作用，低浓度姜黄素促进细胞增殖，高浓度姜黄素抑制细胞增殖。姜黄素通过促进3T3-L1前脂肪细胞的分化，从而增加脂肪细胞对胰岛素的敏感性，这可能是其防治糖尿病的机制之一。     

Minimal effects of Darunavir on adipocyte differentiation and metabolism in 3T3-L1 cells

Darunavir (DRV) has been confirmed to be an effective option for antiretroviral-naïve and experienced patients. It results in a more favorable lipid and glucose profile than other antiretrovirals. The objective of this study was to investigate the molecular mechanisms that could underline the lack of toxicity of DRV to metabolism and the better profile observed in HIV-infected patients in comparison with other drugs. The effects of DRV on adipogenesis were evaluated by oil red O staining after 8 days of induction of differentiation in 3T3-L1 cells, a very adequate and convenient cell culture model for investigation of adipose function. Several adipogenic genes (C/EBPα, PPARγ, Pref-1, and AP2) were analyzed by real time-PCR. Fully differentiated adipocytes were also incubated with DRV for 24 h and glucose utilization and lactate and glycerol production were quantified by use of an autoanalyzer. No effects of DRV on murine adipocyte differentiation were observed. Significant decreases in lipolysis, glucose uptake, and lactate production were observed at the highest concentration used (50 μM) (p < 0.01–p < 0.001). However, DRV treatment did not modify the percentage of glucose transformed into lactate. Co-treatment with RTV did not induce any further effects on lipolysis and glucose metabolism. This study suggests that the decrease in lipolysis observed after DRV treatment could explain, at least in part, the lower plasma lipids observed in patients under DRV/r treatment in comparison with other drugs. The lack of effects of RTV co-treatment on glucose and lipid metabolism emphasizes the safety of this treatment.     

3T3-L1前脂肪细胞的体外培养及胰岛素样生长因子1对其增殖、分化的作用

背景：前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化潜力的特异化的前体细胞，如果能够找到可以强力促进前脂肪细胞增殖和分化的因子或药物，在脂肪组织移植的同时使用，则有希望提高脂肪组织的移植效果。目的：摸索体外培养经典的3T3-L1前脂肪细胞的最佳培养环境并积累培养经验，观察胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响，并探求胰岛素样生长因子1的最佳作用剂量。设计、时间及地点：以细胞为对象的对照观察实验，于2007—10／2008-02在辽宁医学院科学实验中心完成。材料：3T3-L1前脂肪细胞株购于上海中科院生命科学院；胰岛素样生长因子1购于美国Biological公司。方法：根据3T3一L1前脂肪细胞的体外培养条件分为6组：空白对照组应用含体积分数为0．1的胎牛血清的标准高糖DMEM培养基培养；各实验组分别应用含有5，10，20，50，100ug／L胰岛素样生长因子1的含体积分数为0．1的胎牛血清的高糖DMEM培养基培养。主要观察指标：倒置显微镜下观察各组3T3-L1前脂肪细胞的生长、增殖及分化情况并拍照记录。待细胞铺满瓶底达到单层汇合时，应用流式细胞仪检测细胞周期，应用四甲基偶氮唑盐比色法测定3T3-L1前脂肪细胞的增殖率；应用油红O染色提取法测定3T3-L1前脂肪细胞内脂肪含量的增殖率。结果：①倒置显微镜下观察分化前3T3-L1前脂肪细胞呈梭形，胞浆内无脂滴，分化后3T3-L1前脂细胞呈圆形，胞浆内含有大量的脂滴，脂滴聚集于核周，被油红O染成橙红色，形成“戒环”样形态。②四甲基偶氮唑盐比色法和油红O染色提取法检测结果均显示，不同剂量的胰岛素样生长因子1组中3T3．L1前脂肪细胞的增殖率及细胞内脂肪含量的增殖率均高于空白对照组（P〈0．05），胰岛素样生长因子120ug／L组对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化作用最为明显（P〈0．05）；流式细胞仪的分析结果与四甲基偶氮唑盐比色法及油红O染色提取法的检测结果基本一致。结论：体外细胞培养实验表明，胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化有明显促进作用，其促进作用与浓度并非成正比，而是达到一定剂量后，其促进作用不再增加，而这个剂量接近本实验的最佳剂量值，即20ug/L。     

类胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的作用

目的:证实类胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的作用,并摸索该细胞因子对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化作用的最佳质量浓度。方法:实验于2004-03/2004-07在辽宁医学院科学实验中心完成。实验材料:小鼠胚胎3T3-L1前脂肪细胞株由ATCC提供,购于上海中科院生命科学院;类胰岛素样生长因子1购于美国Biological公司。实验方法:对照组为标准的高糖DMEM培养基,实验组为含有1,5,10,20,50,100μg/L类胰岛素样生长因子1的高糖DMEM培养基。用含体积分数为0.1胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、体积分数为0.05 CO2的孵箱内培养3T3-L1前脂肪细胞,每48h换液1次。实验评估:在倒置显微镜下观察类胰岛素样生长因子1作用前后3T3-L1前脂肪细胞的生长情况及形态学改变。待细胞铺满瓶底后,应用流式细胞仪检测细胞周期,应用噻唑蓝法测定3T3-L1前脂肪细胞增殖率:增殖率=实验组A值/对照组A值×100%,采用油红O染色提取法测定3T3-L1前脂肪细胞内脂肪含量增长率:增长率=实验组B值/对照组B值×100%。结果:①倒置显微镜下观察分化前3T3-L1前脂肪细胞呈梭形,胞浆内无脂滴,分化后3T3-L1前脂细胞呈圆形,胞浆内含有大量的脂滴,脂滴聚集于核周,被油红O染成橙红色,形成“戒环”样的形态。②噻唑蓝法检测结果和油红O染色提取法检测结果均显示,不同质量浓度类胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的作用,与空白对照组相比差异显著[培养1d:(1.18±0.02)%,(1.29±0.01)%,(1.35±0.03)%,(1.47±0.04)%,(1.46±0.03)%,(1.47±0.05)%,(1.00±0.01)%;培养2d:(1.40±0.03)%,(1.56±0.04)%,(1.67±0.02)%,(1.82±0.05)%,(1.81±0.02)%,(1.82±0.09)%,(1.00±0.01)%,P<0.05],20μg/L类胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的作用最为明显(P=0.0382);流式细胞仪分析结果与噻唑蓝法及油红O染色提取法基本一致。结论:体外细胞培养实验表明,类胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化有明显促进作用,其促进作用与质量浓度并非正比,而是达到一定的质量浓度后,其促进作用不再增加,而这个质量浓度接近本实验的最佳质量浓度值,即20μg/L。     

小鼠SIK2重组腺病毒载体在3T3-L1脂肪细胞中的表达

目的利用小鼠盐诱导基因(Salt induced kinase2,SIK2)的重组腺病毒载体,研究脂肪细胞中SIK2的表达。方法重组小鼠SIK2基因腺病毒载体经脂质体转染293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3-L1脂肪细胞,通过real-time PCR及免疫印迹法检测鼠SIK2在3T3-L1脂肪细胞中的表达。结果纯化后的病毒滴度达0.5×1012病毒颗粒/ml。重组腺病毒载体能在成熟3T3-L1脂肪细胞中高表达鼠SIK2 mRNA和SIK2蛋白。结论重组腺病毒载体可介导外源小鼠SIK2基因在脂肪细胞的表达,建立了小鼠SIK2高表达脂肪细胞模型,为进一步研究SIK2的脂代谢功能奠定了基础。