gp96多肽复合物对树突状细胞成熟及功能的影响

目的探讨gp96多肽复合物对树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟及功能的影响.方法应用液相层析技术从胃癌组织中提取gp96多肽复合物,用SDS-PAGE和Western blot进行性质鉴定,将提取的gp96多肽复合物加入外周血来源的单个核细胞诱导培养DCs,采用流式细胞技术检测DCs的表型变化,用3H-TdR掺入法检测DCs诱导的混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR).结果从1 g湿重的胃癌组织中可提取gp6多肽复合物30～50μg,用gp96多肽复合物诱导培养的DCs其表面分子的表达明显增高,并具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力.结论从胃癌组织中可以提取出gp96多肽复合物,gp96多肽复合物可促进DCs分化成熟,使其具有更强的抗原提呈能力.     

系统性红斑狼疮患者树突状细胞对Th1/Th2细胞分化的影响

目的探讨系统性红斑狼狼疮（SLE）患者树突状细胞对Th1/Th2细胞亚群分化的影响。方法淋巴细胞分离液分离获得SLE患者外周血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD14细胞,联合应用rhGM- CSF、rhIL-4和rhTNF-α诱导分化树突状细胞成熟。在培养的第9天,流式细胞术检测表型,细胞增殖/毒性剂盒分析树突状细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。ELISA法检测培养上清液中IL-12和IL-10的表达。诱导的成熟树突状细胞与健康对照组淋巴细胞共培养5d后,佛波酯+离子霉素+莫能霉素刺激培养4h,进行T淋巴细胞表面抗原及胞质内细胞因子染色,流式细胞仪检测Th1、Th2的比例。结果 SLE患者诱导培养的树突状细胞其CD1a的表达降低（P＜0.05）,HLA- DR、CD80、CD86的表达均明显升高（P＜0.05）。活动组与非活动组的树突状细胞HLA- DR、CD80、CD86的表达有统计学差异（P＜0.05）。SLE患者诱导培养的树突状细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强（P＜0.05）。活动组与非活动组的树突状细胞刺激同种异体淋巴细胞也有所差异（P＜0.05）。SLE患者诱导培养的树突状细胞分泌IL-12的水平均明显降低（P＜0.05）;分泌IL-10的水平明显升高（P＜0.01）,活动组与非活动组的树突状细胞分泌IL-12和IL-10的水平差异无统计学意义（P＞0.05）。活动组的树突状细胞与对照组淋巴细胞共培养后Th1的比例明显降低（P＜0.01）,Th2的比例差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 SLE患者诱导的树突状细胞表型增加,刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力增强,分泌IL-12降低,IL-10升高。SLE患者树突状细胞功能的异常可能导致了Th1细胞分化不足,在SLE发生、发展过程中起重要作用。     

热休克蛋白gp96肽复合物免疫治疗小鼠骨肉瘤的研究

目的研究热休克蛋白gp96（HSPgp96）肽复合物体内外特异性抗肿瘤作用。方法采用^51Cr释放法测定经HSPgp96肽复合物修饰的树突状细胞（DC）对细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性的影响,同时在骨肉瘤动物模型上观察HSPgp96肽复合物与修饰后的DC对骨肉瘤的生长状况及体内免疫水平的影响。结果HSPgp96肽复合物修饰的DC可激活小鼠脾淋巴细胞,后者能对人成骨肉瘤细胞系MG-63细胞进行特异性杀伤;HSPgp96肽复合物及修饰后的DC使IL-10表达水平明显降低,IFN-γ水平明显上升（P〈0．01）,能有效抑制体内肿瘤的生长。结论HSPgp96肽复合物能很好地修饰体外诱导获取的DC,使DC具有很强的体内外抗肿瘤作用。     

子痫前期产妇外周血中树突状细胞、Th1Th2细胞含量检测

目的：研究子痫前期产妇外周血中Th1Th2细胞含量以及树突状细胞表型。方法：将在本院确诊的60例子痫前期产妇纳入观察组,将同期进行产检的60例正常妊娠产妇纳入对照组,采用流式细胞仪检测外周血中Th1细胞、Th2细胞的含量以及树突状细胞表型,采用real-time PCR的方法检测外周血中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）的mRNA含量,采用酶联免疫吸附法检测外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10的蛋白含量。结果：观察组的Th1细胞含量、Th1/Th2细胞比例以及Th1类细胞因子TNF-α、IFN-γ的含量均高于对照组,Th2细胞含量以及Th2类细胞因子IL-6、IL-10的含量低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;树突状细胞表型：外周血中CD83＋、CD80＋以及CD86＋阳性的树突状细胞比例均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：子痫前期产妇外周血中Th1细胞功能增强、Th2细胞功能减弱,且成熟树突状细胞的数目增多。     

匹多莫德对重症胸部创伤大鼠Th1/Th2细胞平衡的影响

目的 观察重症胸部创伤大鼠Th1/Th2细胞平衡的变化,评价匹多莫德对重症胸部创伤大鼠Th1/h2细胞平衡的影响.方法 20只雄性SD大鼠随机平均分配到单纯创伤组(A组)和创伤+匹多莫德组(B组).大鼠均经胸部撞击致伤建立重症胸部创伤模型,B组大鼠每日予匹多莫德100 mg/kg腹腔注射,A组大鼠予等体积生理盐水腹腔沣射.分别于受伤前及受伤后第1、3、5、7天采取全血各1.0 ml,分离外周血单个核细胞(PBMC),体外培养72h,收集上清液冻存,ELISA法集中检测IFN-γ、IL-4浓度.结果 两组大鼠PBMC培养上清液中IFN-γ浓度在受伤后均迅速升高,随即回落,B组明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-4浓度在受伤后均持续升高,两组间差异无统计学意义(P>0.05);IFN-γ浓度上升倍数/IH-4浓度上升倍数比值在受伤后均升高,随后逐步降低至1.0以下,B组高于A组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠在重症创伤后早期,Th1细胞功能迅速增强,随后逐步受到抑制,Th2细胞功能则持续增强,发生Th1细胞向Th2细胞的漂移.匹多莫德提高了重症刨伤大鼠IFN-γ的合成分泌,减轻了Th1细胞功能抑制的程度,有助于维持Th1/Th2细胞平衡.     

Th1/Th2、Th17/Treg细胞的平衡与临床

T细胞是一个非常复杂的高度异质性群体,其中Th细胞是根据功能分类的一个T细胞群。Th细胞包括多种功能亚群[1],许多研究证实这些亚群不是分化定型细胞,具有一定的可塑性(plastici-ty)[2-3],它们通过分泌的细胞因子相互影响、相互制约、形成网络维持动态平衡,一旦失衡就可能发生     

胃癌Hsp70-肽复合物致敏树突状细胞抗肿瘤作用的研究

目的探讨胃癌Hsp70-肽复合物致敏树突状细胞(DC)抗肿瘤作用。方法采用GM-CSF,IL-4刺激,培养胃癌患者外周血单个核细胞,增殖产生大量DC,用离子交换层析法从临床胃癌组织中提取Hsp70肽复合物,并行westernbolt鉴定,Hsp70-肽复合物修饰DC,通过细胞因子检测试剂盒对修饰DC上清液进行检测,用DC激活混合T淋巴细胞,观察其对胃癌细胞的杀伤作用。用未被Hsp70-肽复合物修饰DC作对照。结果Hsp70-肽复合物DC分泌IL-12、TNF-α、IL-1β含量分别为(305.02±20.70)pg/ml、(480.61±32.52)pg/ml和(519.60±39.12)pg/ml,而未被Hsp70修饰DC分泌IL-12、TNF-α、IL-1β的含量分别为(3.81±0.84)pg/ml、(3.50±0.21)pg/ml、(50.11±2.86)pg/ml,两者比较,有显著性差异(P<0.01)。Hsp70修饰DC激活的T淋巴细胞后对胃癌细胞的杀伤率为(93.54±8.26)%明显高于对照组的(6.20±0.38)%(P<0.01)。结论胃癌Hsp70-肽复合物致敏DC并激活T淋巴细胞后对胃癌细胞具有很强的杀伤作用。     

Th1/Th2细胞平衡与中医药免疫调节

<正>人体的免疫系统是机体防止病原体感染、清除肿瘤细胞和维持自身身体健康的重要防御系统,而T辅助淋巴细胞(Th)则是执行这一防御功能的中心环节。Th细胞是机体重要的免疫调节细胞,可分为Th1、Th2、Th0三种,分别产生不同的细胞因子调节细胞和体液免疫。Th1和Th2细胞功能的正     

雌激素治疗对绝经妇女Th1/Th2平衡的影响

目的：探讨雌激素治疗对绝经妇女辅助性T细胞1（Th1）/辅助性T细胞2（Th2）平衡的影响。方法将研究对象分为生育年龄组、绝经组、雌激素治疗组共3组,每组各10例,分离、培养所有研究对象外周血T淋巴细胞,ELISA法测培养液上清液IL-4、IFN-γ质量浓度,并计算IFN-γ/IL-4比值。结果绝经组IFN-γ水平明显高于生育年龄组、IL-4水平显著低于生育年龄组、IFN-γ/IL-4比值显著高于生育年龄组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）;雌激素治疗组IL-4水平显著低于生育年龄组、IFN-γ/IL-4比值显著高于生育年龄组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;雌激素治疗组IFN-γ水平明显低于绝经组、IL-4水平显著高于绝经组、IFN-γ/IL-4比值显著低于绝经组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）。结论绝经后发生Th1/Th2平衡变化,出现向Th1漂移现象,而雌激素治疗能改善Th1/Th2平衡的偏移。     

Th1／Th2细胞平衡与中医药免疫调节

人体的免疫系统是机体防止病原体感染、清除肿瘤细胞和维持自身身体健康的重要防御系统，而T辅助淋巴细胞（Th）则是执行这一防御功能的中心环节。Th细胞是机体重要的免疫调节细胞，可分为Th1、Th2、Th0三种，分别产生不同的细胞因子调节细胞和体液免疫。Th1和啦细胞功能的正常和相互间保持平衡，是维持正常免疫功能和身体健康的基础。Th1／Th2细胞功能的异常或失衡，是引起多种免疫性疾病的根源。     

Effect of dendritic cell modified by gp96-peptide complex on antitumor effect in H22 cell

Objective： To investigate the antitumor effect of dendritic cell （DC） modified by gp96-peptide complexes both in vitro and in vivo. Methods：Gp96-peptide complexes were acquired from H22 liver cancer cells in mice. DC were cultured from bone marrow cells and modified by gp96-peptide complexes. Spleen lymphocytes of mice were activated by modified DC and the cytotoxicity were detected by ^51Cr release method. Modified DC, gp96-peptide complexes and inactivated H22 cells were injected into mice bearing H22 liver cancer cells to observe the levels of IL-10, IFN-y in serum and the alteration of proportions of CD8^＋-IFNy^＋ and CD8^＋-IL-10^＋ cells, CD4^＋-IFNy^＋ and CD4^＋-IL-10^＋ cells. Results： DC modified by gp96-peptide complexes can activate spleen lymphocyte and the latter can specifically kill H22 cells but not Ehrilich ascites carcinoma cells. Modified DC can improve the host＇s antitumor immune response and the proportions of Thl cells, inhibiting tumor growth. Conclusion： Gp96-peptide complexes can activate DC effectively, making DC a good vaccine.     

Potent antitumor effect elicited by gp96-peptide complexes pulsed by dendritic cell on mice of H22 liver cancer

Objective： To improve DC-based tumor vaccination, we studied whether dendritic ceils （DCs） which cocultured with H22 liver cancer cells-derived heat shock protein （HSP） glycoprotein 96 （gp96） affect the T cell-activating potential in vitro and the induction of tumor immunity in vivo. Methods： Maturation of murine bone marrow-derived DC was induced by GM-CSF plus IL-4, which mimiced the immunostimulatory effect of DC. Cocultured DC and gp96-peptide complexes were used to vaccine H22 liver cancer cells of mice. Using murine models we compared the immunogenecity of DC modified by gp96-peptides complexes derived from murine liver cancer cells alone or inactive tumor cells. To verify the specificity of the vaccine, in vitro assays were executed. Serum cytokine levels were quantified to explore the supposed pathway of DC modified by gp96 peptide complexes and its effect on antitumor immune response. Results： DC modified by gp96-peptide complexes can activate spleen lymphocyte and the latter can specifically kill H22 cells but not Ehrilich ascites carcinoma cells. Modified DC can induce potent tumor-antigenspecific immune response, augment the proliferation of Thl cells, and inhibit tumor growth. Conclusion： In this study, we have developed a novel DC-mediated tumor vaccine by combing the gp96 antigenic peptides complexes and inducing immune response against specific tumor cells, gp96 can be identified as a potent DC activator.     

特应性皮炎Th1／Th2／Th17平衡的研究

目的：探讨特应性皮炎（AD ）外周血清T h1／T h2／T h17平衡的变化规律及相关细胞因子的变化规律,以进一步探讨AD发病的免疫机制。方法采用流式荧光技术测定47例AD患者（AD组）和40例健康自愿者（对照组）外周血清中的γ‐干扰素（IFN‐γ）、白细胞介素（IL ）‐4、IL‐17、IL‐21、IL‐23水平并进行统计分析,从而分析T h1／T h2／T h17／T reg平衡在AD中变化规律。结果在AD患者血清中,IL‐4水平较对照组升高（ P＜0．05）,IL‐17、IL‐23的水平显著高于对照组（ P＜0．05）;IFN‐γ／IL‐4和IFN‐γ／IL‐17较对照组明显降低（P＜0．01）;IL‐17与AD严重程度（SCORAD）评分呈正相关（P＜0．05）。结论在 AD病程中T h1／T h2、T h1／T h17降低,T h1／T h2／T h17平衡的漂移可能是AD发病的重要机制。     

人外周血树突状细胞诱导Th1/Th2细胞分化的研究

目的 :研究人外周血树突状细胞 (DC)与Th0细胞在不同比例条件下 ,诱导Th0向Th1/Th2分化的关系。方法 :健康人外周血单个核细胞经传统的方法诱导得到DC ,将DC与自体的Th0细胞以 1∶4和 1∶30 0的比例混合培养 4天 ,收集Th细胞 ,经CD3和CD2 8抗体扩增 4 8h ,ELISA法测上清中IFN γ和IL 4的浓度。　结果 :从外周血中诱导出DC高表达CD83(73.4 % )、CD86 (90 .3% )、HLA DR(6 8.5 % )和CD4 0 (73.7% ) ,DC与Th0以 1∶4混合 ,产生的IFN γ与 1∶30 0混合组比有显著差异〔(34± 4 .3) μg/Lvs(3.5± 1.2 ) μg/L〕 ,产生的IL 4亦有显著差异〔(2 5 ± 4 .3)ng/Lvs (35 0± 12 0 )ng/L〕。　 结论 :人外周血DC与Th0高比例混合时 ,诱导Th0向Th1分化 ;低比例混合时 ,诱导Th0向Th2分化。显示人外周血DC在调控T淋巴细胞免疫应答类型上具有可塑性 ,为临床移植物抗宿主病 (GVHD)免疫干预治疗奠定基础。     

Th1/Th2/Th17细胞在实验性过敏性结膜炎中的作用研究

目的  探讨Th1/Th2/Th17细胞在实验性过敏性结膜炎发病中的可能作用。方法  40只Brown Norway大鼠随机分为3组：空白组、对照组和实验组。应用鸡卵清蛋白（OVA）复制大鼠过敏性结膜炎模型。取3组大鼠眼球及上下眼睑进行病理学分析,计数穹隆部结膜嗜酸性粒细胞浸润数。ELISA法测定大鼠血清IgE、IgG1、IgG2a和脾细胞培养上清液IL-17、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ含量。流式细胞仪测定大鼠外周血和脾脏Th17细胞。结果  实验组大鼠穹隆部眼结膜嗜酸性粒细胞浸润数较空白组和对照组升高（P <0.01）。实验组大鼠血清IgE、IgG1较空白组和对照组升高（P <0.01）,血清IgG2a较空白组和对照组降低（P <0.01）。实验组大鼠血清脾细胞培养上清液IL-17、IL-4、IL-6、IL-10水平较空白组和对照组升高（P <0.01）,IFN-γ水平较空白组和对照组降低（P <0.01）。实验组大鼠外周血和脾脏Th17细胞均高于空白组和对照组（P <0.01）。结论  Th1/Th2/Th17细胞平衡失衡是大鼠实验性过敏性结膜炎发病的主要原因。恢复Th1/Th2/Th17失衡可能成为过敏性结膜炎治疗的一条新途径。

     

孟鲁司特对哮喘患儿外周血Th1／Th2细胞功能平衡的调节作用机制的研究

目的：探讨孟鲁司特的临床疗效及其对哮喘患儿外周血Th1／Th2细胞功能平衡的调节作用机制。方法：将2008年12月～2010年12月我院收治的支气管哮喘患儿78例随机分为治疗组和对照组,每组各39例。两组均给予吸氧、平喘、抗炎、抗感染等基础治疗,其中,治疗组在上述治疗的基础上给予孟鲁司特片4mg／d,口服,1次／d,连用3个月。观察比较两组治疗前和治疗3个月后IL-4、IFN-γ含量及IFN-γ/IL-4比值的变化,对两组的总有效率进行比较,并观察两组咳嗽、喘息及哮鸣音消失时间。结果：治疗组IFN-γ[（76．16_±7．42）ng／L]较对照组[（74．53±7．S6）ng／L]明显升高（t=2．42,P〈0．05）;治疗组IL-4[（41．45±6．61）ng／L]较对照组[（46．57±7．42）ng／L]明显降低（t=2．68,P〈0．05）;治疗组IFN-γ／IL-4值（1．83±0．42）较对照组（1．56±0．37）明显上升（t=2．13,P〈0．05）;治疗组的总有效率为92．31％,与对照组相比（74．36％）,差异有高度统计学意义（χ2=12．537,P〈0．01）;治疗组的咳嗽、喘息、哮鸣音消失时间[（2．68±1．15）、（5．19±1．25）、（4．17±1．75）d]均明显短于对照组[（4．43±1．27）、（6．70±1．63）、（6．25±1．64）d1,差异有高度统计学意义（t=2．35、2．14、2．41,P〈0．01）。结论：孟鲁司特治疗小儿支气管哮喘疗效好,可以明显改善患儿的临床症状与体征,且安全性好,可能与其对支气管哮喘患儿Th1／Th2细胞功能平衡紊乱的调节作用有关。     

慢性乙型肝炎Th1/Th2失衡分析

目的:探讨慢性乙型肝炎发病过程中Th1/Th2细胞平衡失调的原因. 方法:用CD3和CD28 mAb, LPS分别体外刺激慢性HBV感染者和健康对照者的PBMC,ELISA法检测培养上清液中IL-10, IL-12及IFN-γ的水平. 结果:用mAb诱导刺激PBMC后,慢性HBV感染组IFN-γ和IL-10水平与健康对照组无差异;LPS诱导刺激后,慢性HBV感染组IL-12水平显著低于健康对照组(34±8 vs 77±9, P<0.05),且HBV阳性者IL-10分泌水平显著高于阴性者(975±101 vs 895±97, P<0.05). 结论:慢性HBV感染时Th1/Th2失衡并非T细胞本身缺陷所致,APC功能缺陷可能为Th1/Th2失衡的原因. APC功能缺陷可能与HBV侵犯APC有关.     

多西环素对EAE大鼠Th1／Th2细胞平衡及相关细胞因子的影响

目的：探讨多西环素对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠模型 Th1／Th2细胞平衡的影响。方法将40只雌性 Wistar 大鼠分为 EAE 对照组及低、中、高剂量多西环素组,每组10只。观察大鼠发病情况及发病高峰期外周血单个核细胞（PBMC）分泌白细胞介素（IL）-4、干扰素-γ（IFN-γ）水平,测定高峰期脑组织 IL-1β、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平及脑脊液和血清清蛋白水平,计算脑脊液与血清清蛋白比值（QA 值）。结果各剂量多西环素组大鼠临床症状较 EAE 对照组均减轻。各剂量多西环素组大鼠发病高峰期外周血单个核细胞（PBMC）分泌 IFN-γ水平和 IFN-γ／IL-4比值均较 EAE 对照组降低,分泌 IL-4水平均较 EAE 对照组升高（P ＜0．01）;高剂量多西环素组 IL-4水平较中剂量多西环素组增高差异无统计学意义（P ＞0．05）,其余各剂量多西环素组间差异有统计学意义（P ＜0．01）。各剂量多西环素组大鼠发病高峰期脑组织 IL-1β、TNF-α水平及 QA 值较EAE 对照组降低,IL-10水平较 EAE 对照组升高（P ＜0．05）。随多西环素剂量增加,各剂量多西环素组 IL-1β、TNF-α水平及 QA值越低,IL-10水平越高,且各组间差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论多西环素可明显减轻 EAE 大鼠临床症状,其机制可能与多西环素降低大鼠 Th1细胞因子水平,升高 Th2细胞因子水平,纠正 Th1／Th2细胞平衡,从而保护血脑屏障有关。