支气管哮喘BALB/c小鼠肺组织及肺T细胞中Notchl的表达

目的 研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及其T细胞中Notchl基因的表达,探讨其与支气管哮喘发病的关系.方法 卵清蛋白腹腔注射及雾化吸入建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型(n=10).于建模后24 h麻醉下放血处死动物,右肺组织分离T细胞并进行纯度鉴定,运用免疫组化染色观察左肺组织Notchl蛋白表达;半定量RT-PCR法检测左肺组织和右肺分离获得T细胞中Notchl mRNA的表达.以腹腔注射和雾化吸入生理盐水的BALB/c小鼠作为对照(n=10).结果 免疫组化染色发现,哮喘模型组小鼠肺组织Notchl阳性染色程度明显强于对照组.半定量RT-PCR分析显示,哮喘模型组和对照组小鼠Notchl mRNA表达在肺组织分别为0.83±0.60和0.33±0.31,在肺T细胞中分别为0.36±0.20和0.11±0.21;组间比较均有显著差异(P＜0.05).结论 Notchl在支气管哮喘发病环节中表现为促进作用,为研究支气管哮喘的发病机制提供了新途径.     

哮喘小鼠肺组织和肺T细胞β1,3-N-乙酰糖基转移酶的表达

目的研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及肺T细胞中三种β1,3-N-乙酰糖基转移酶（Fringe）RFNG、LFNG、MFNG的基因和蛋白表达的特点,探讨Fringe是否与哮喘发病有关。方法使用卵白蛋白腹腔注射后雾化吸入法制备BALB/c小鼠哮喘模型,并设置生理盐水对照组。经Perco1及尼龙毛法分离获取肺T细胞。采用半定量RT-PCR检测两组小鼠肺组织及肺T细胞中RFNG、LFNG、MFNGmRNA表达;Westernblot检测两组小鼠肺组织中RFNG、LFNG、MFNG蛋白表达。结果两组小鼠肺组织及肺T细胞中均存在三种Fringe表达。哮喘组肺组织及肺T细胞的RFNGmRNA表达较对照组增加（肺组织：0.92±0.35比0.51±0.13,P〈0.01;肺T细胞：0.33±0.06比0.18±0.07,P〈0.01）;LFNGmRNA表达较对照组减少（肺组织：0.77±0.32比1.61±0.31,P〈0.01;肺T细胞：0.49±0.19比0.71±0.03,P〈0.01）。MFNG在肺组织中的表达无明显差异（肺组织：1.44±0.29比1.70±0.44,P〉0.05）,但MFNG在肺T细胞中的表达明显减少（0.11±0.03比0.52±0.18,P〈0.01）。肺组织中三种Fringe蛋白表达与肺组织的mRNA结果相似。哮喘组的RFNG蛋白表达高于对照组（1.17±0.04比0.68±0.07,P〈0.05）,MFNG蛋白表达在两者之间没有明显的差异（8.10±0.60比9.12±0.07,P〉0.05）,而LFNG的蛋白表达则低于对照组（4.11±0.38比6.41±0.11,P〈0.05）。结论三种Fringe的异常表达可能与支气管哮喘的发病有关。     

树突状细胞与支气管哮喘发病机制的研究进展

树突状细胞(dendritic cell, DC)是免疫系统中重要的抗原提呈细胞(antigen-presenting cell, APC),作为免疫反应的始动者和调控者发挥作用.随着DC培养和分离技术的不断发展,研究人员发现DC在呈递抗原肽给T或B淋巴细胞过程中发挥着关键作用.如今,DC的功能越来越受到重视,它是非特异性免疫(innate immunity)与特异性免疫(adaptive immunity)的联系桥梁.支气管哮喘(bronchial asthma,简称哮喘)是一种气道慢性变态反应性疾病,DC在哮喘疾病中Th1/Th2失衡的形成机制中发挥着重要作用.     

支气管哮喘发病过程中的胰岛素机制

很久以前人们就发现糖尿病患者的哮喘发病率很低，但至今其确切机制并不明了。近年来，由于免疫病理学的进展，体外实验证实辅助性T细胞1（Th1）和辅助性T细胞2（Th2）的表达可以互相拮抗，因此，目前认为1型糖尿病是一种Th1优势型自身免疫性疾病，而哮喘则是Th2优势型免疫性疾病，因此推测以Th1优势表达的糖尿病可以抑制以Th2表达为主的哮喘的发病。     

调节性T细胞与支气管哮喘

在过去的20年里，Th1／Th2偏移学说一直是哮喘发病最重要的免疫学机制，也是“卫生学说”的主要理论基础。但近年来发现，Th1／Th2偏移学说并不能完全解释哮喘的发病。实际上，机体接触外界变应原后，最初的免疫学事件是由抗原提呈细胞捕获抗原，提呈给T细胞。而机体接触抗原后免疫反应的“命运”，即产生防御性的免疫反应来清除抗原，还是对无害抗原产生免疫耐受，     

抗白介素-9抗体对BALB/c哮喘小鼠T细胞功能的影响

目的通过比较不同干预措施对小鼠哮喘模型的影响情况,研究其对免疫系统中CD^4＋T辅助细胞2型（Th2细胞）活性的影响,旨在了解外源性抗白介素（IL）-9抗体（Anti-IL-9 Ab）在哮喘中的潜在治疗价值.方法30只BALB/c小鼠随机均分为阳性对照组、Anti-IL-9 Ab组和地塞米松（Dex）组,建立小鼠哮喘模型,采取不同干预措施.比较各组血清、脾和骨髓细胞培养上清液细胞因子的含量.结果Anti-IL-9 Ab组小鼠血清中TH2细胞因子较阳性对照组明显降低（P＜0.01）,Dex组小鼠血清和脾细胞培养上清液中Th2、Th1细胞因子均较阳性对照组明显降低（P＜0.01）,两组骨髓细胞培养上清液细胞因子的含量较阳性对照组均无明显变化.结论Anti-IL-9 Ab和Dex均能明显减轻哮喘小鼠的肺部炎症,在气道建立起新的Th1/Th2平衡.与Dex相比,应用Anti-IL-9 Ab建立的新平衡不会造成因细胞免疫功能受抑引起的一系列不良反应.     

调节性T细胞在支气管哮喘治疗中的动态变化分析

目的分析调节性T细胞在支气管哮喘患者治疗中动态变化情况,为支气管哮喘的诊治提供参考。方法选取2012年4月至2013年3月佛山市顺德区伦教医院收治的29例支气管哮喘患者作为研究对象,对症治疗6个月,并检测治疗前后CD4+CD25+调节性T细胞、抗体、补体水平变化情况。结果治疗前CD4+CD25+调节性T细胞水平为(11.54±0.32)%,治疗后下降至(4.32±0.56)%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后Ig G、Ig M、Ig A及CH50水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);C3及C4水平无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论调节性T细胞水平随患者病情程度而发生动态变化,可作为病情评价的有效指标。     

树突状细胞在支气管哮喘发病机制中的作用研究

树突状细胞（dendritic cell,DC）是目前已知功能最强的专职抗原呈递细胞,是非特异免疫和特异性免疫的联系桥梁,在支气管哮喘（bronchial asthma）的发病机制中起着重要的作用。本文通过总结近几年的研究成果,综述DC在抗原侵入、趋化因子、细胞因子等多种刺激下影响T细胞分化,在Ⅱ型哮喘Th1/Th2失衡的形成中发挥着重要作用。为哮喘的治疗提供新的方向和思路。     

Small interfering RNA-mediated knockdown of Notchl in lung T cells of asthmatic mice affects T cell differentiation

Background The immunologic response to allergens mediated by T lymphocytes is an incipient key element in the pathogenesis of asthma,and Th1/Th2 balance is regarded as the core of asthma pathogenesis.Notch is a single-pass transmembrane receptor protein that regulates differentiation,proliferation and apoptosis in a broad range of cells.It is considered that the Notch signal pathway works in every stage of T cell development and differentiation.Whether the pathway of asthma pathogenesis is related to Notch1 remains unknown.This study is aimed to investigate whether the pathway of asthma pathogenesis is related to Notch1 by examining the effect of knockdown of the Notch1 gene by small interfering RNA on T cell differentiation.Methods An OVA-induced asthma mouse model was established.The expression of Notch1 in the tissue and T cells of the lung from asthmatic mice was detected by RT-PCR and Western blotting.The expression of Notch1 and cytokine interleukin(IL)-4 and interferon(IFN)-γ in activated lung T cells was detected by RT-PCR and enzyme-linked immunosorbent assay after blocking Notch1 by small interfering RNA.Results The mRNA and protein expression of Notch1 increased significantly both in the lung tissue and lung T cells of asthmatic mice(both P＜0.05).IL-4 decreased and IFN-γ increased significantly in active lung T cells after Notch1 was blocked by Notch1-specific small interfering RNA(IL-4:(2.51±0.51)pg/ml vs 0.64±0.27)pg/ml protein;IFN-γ:(21.72±4.24)pg/ml vs(39.79±4.09)pg/ml protein,P＜0.05).Conclusion This study demonstrated that the Notch1 signal might play a role in the pathogenesis of asthma by its involvement in Th1/Th2 differentiation.     

骨髓基质细胞保护药物诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的机制研究

目的研究原代正常骨髓基质细胞对多发性骨髓瘤细胞的保护作用及其内在机制。方法脂质体介导Notch1特异性小干扰RNA转染多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞与骨髓基质细胞共培养,采用细胞形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Notch1及NF-κB p65蛋白表达变化。结果多发性骨髓瘤细胞与基质细胞共培养增加了Notch1活化形式(N1-ICD)蛋白的表达;共培养组与悬浮培养组药物诱导的细胞凋亡率分别为(15.30±2.21)%、(32.88±3.27)%;小干扰RNA有效的下调Notch1蛋白的表达;干扰共培养组与控制共培养组细胞的凋亡率分别为(41.47±4.01)%和(24.89±3.68)%;下调Notch1后NF-κB p65蛋白表达没有改变。结论骨髓基质细胞保护药物诱导的多发性骨髓瘤细胞的凋亡,该保护作用通过激活Notch1通路实现。下调Notch1共培养恢复药物诱导的凋亡作用不是通过NF-κB通路,可能存在其他机制。     

支气管哮喘BALB/c小鼠血小板P-选择素表达的变化

目的观察支气管哮喘小鼠的血小板表面抗原P-选择素表达的变化。方法随机将雌性BALB/c小鼠20只分为：正常对照组、哮喘模型组;用流式细胞仪测定血小板膜上P-选择素的阳性率。结果正常对照组和哮喘组P-选择素表达的阳性率分别为（1．23±1.02）%、（4.52±1.45）%,哮喘模型组P-选择素较正常对照组增高,差异有统计学意义（P<0.01）;凝血酶诱导P-选择素数值正常对照组和哮喘模型组分别为（45.12±4.03）%、（44.68±5.34）%,差异无统计学意义（P>0.05）;正常对照组和哮喘组肺泡灌洗液中性粒细胞分别为（6.64±1.86）%、（25.60±2.66）%,差异有统计学意义（P<0.01）。结论支气管哮喘小鼠中存在血小板的活化,活化后的血小板可能参与哮喘的炎症反应。     

大鼠间充质干细胞对BALB/c小鼠体外淋巴细胞实验的影响

目的 研究大鼠间充质干细胞(MSC)对BALB/c小鼠淋巴细胞增殖和CD4+CD25+调节性T细胞亚群的变化。方法 分离、扩增SD大鼠MSCs,流式细胞术检测表面标志以鉴定。取第5代MSC与分离的小鼠淋巴细胞在刀豆蛋白(ConA)刺激下共培养5天 ,流式细胞仪测定细胞增殖,CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化。结果 当淋巴细胞: MSCs在1:10及1:50时均可抑制ConA刺激下可抑制小鼠淋巴细胞增殖,淋巴细胞: MSCs在1:10 时CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例明显升高。结论 大鼠MSC具有异种基因免疫抑制作用     

BALB/c小鼠乳鼠心肌细胞的原代培养

目的：建立分离、纯化和培养BALB/c小鼠乳鼠心肌细胞的方法。方法：取出生1～3天以内的BALB/c小鼠乳鼠心肌组织,用0.125%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型胶原酶消化,将心肌细胞收集到含15%胎牛血清的DMEM培养基中,用差速贴壁分离法和5-溴脱氧尿苷相结合分离、纯化心肌细胞。采用α-actin抗体进行免疫组化染色鉴定心肌细胞,用台盼蓝染色检查心肌细胞成活率。结果：24小时后可见部分单个心肌细胞搏动,48小时后可见心肌细胞相互连接同步搏动;免疫组化染色后可见培养的细胞是心肌细胞,心肌细胞成活率达95%。结论：本研究应用的方法可获得状态好、高成活率的BALB/c小鼠心肌细胞,是一种可靠的心肌细胞培养方法。     

微囊藻毒素LR对小鼠的急性毒性研究

目的 了解微囊藻毒素对小鼠的急性损伤作用.方法 以BALB/C小鼠为材料,腹腔注射μg./kg·b.w.和43μg/kg·b.w.剂量的微囊藻毒素LR,测定脏器系数和一系列生化指标.结果 肾脏指数与肝脏指数明显增加,表明两种器官都受到损伤;血清中天冬氨酸转氨和丙氨酸转氨酶活力上升,尿素含量下降预示着肝脏损伤,尿酸含量上升则预示肾脏损伤的发生.结论 肾脏也可能是易受微囊藻毒素损伤的器官.     

BALB／c mice model of cytomegalovirus-induced myocarditis

INTRODUCTION Cytomegalovirus(CMV)isawidelydistributedher pesvirus,whichhadlatentinfectionafterprimary infection.Mosthumancytomegalovirus(HCMV)infec tionsaresubclinicalbutitcancausesubstantialmorbidity andmortalityfollowinginfectionorreactivation,espe ciallyforimmunosuppressedorimmunocompromisedin dividuals[1].Thecardiovasculardiseasemyocarditiswas associatedwithvariousviralpathogens.Althoughen terovirusinfectionswasrecognizedasaleadingcauseof myocarditis,therecentstudyshowedthatcy tome…     

黄褐毛忍冬总皂苷对卵清蛋白致敏小鼠脾脏T细胞功能亚群的影响

目的:观察黄褐毛忍冬总皂苷(Ful)对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠脾脏T细胞功能亚群的影响,以探讨FUl的抗过敏机制.方法:建立雌性BALB/c小鼠食物过敏模型,取小鼠24只,均分为3组,即过敏反应组(Se),药物干预组(FUl)和生理盐水对照组(NS).Ful组小鼠自第20日起每日皮下注射Ful 200 mg/kg,共22 d.ELISA法检测各组小鼠血清中OVA特异性IgE;流式细胞术检测脾脏CD4 细胞中CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞比例;EHSA法检测脾脏单个核细胞培养上清中IL4,IFN-γ,IL-10水平.结果:小鼠经Ful干预后,与Se组比较,IFN-γ/IL-4升高,OVA特异性IgE水平降低,脾脏CD4 CD25 Foxp3 T细胞占CD4 细胞的比例增高.结论:黄褐毛忍冬总皂苷可诱导OVA致敏小鼠脾脏中CD4 CD25 Foxp3 T细胞,纠正其体内Th1/Th2失衡状态,对缓解IgE介导的食物过敏有利.     

新型冠状病毒疫苗免疫BALB/c小鼠后的T细胞表位鉴定

目的 鉴定携带新型冠状病毒S、N和M基因的疫苗在BALB/c小鼠上的T细胞表位。方法 用携带新型冠状病毒S、N和M基因的DNA疫苗和痘病毒载体疫苗免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,末次免疫1个月内取小鼠脾细胞,用ELISPOT法检测其对新型冠状病毒特异性多肽的T细胞免疫反应,筛选出具有阳性反应的多肽片段,并对其表位进行预测分析。结果 S、N、M基因分别鉴定出12、2、17条阳性多肽。S基因中多肽S49、S50、S100、S101、S102、S103阳性反应率为100%,且免疫刺激指数最高;覆盖M蛋白全长的41条多肽中有7条能刺激50%以上的小鼠产生阳性反应。预测分析结果显示,S、N、M基因分别有10、1、16个MHC-1 H-2限制性表位,主要位于S基因的RBD区、N基因RBD区以及M基因的跨膜区。这些表位在SARS-CoV-2及其变异株、SARS-CoV中高度保守。结论 新型冠状病毒DNA疫苗和痘病毒载体疫苗诱导了针对多个基因、多个表位的特异性T细胞应答,未来通用型疫苗设计应包含能诱导细胞免疫的多个抗原,特别是包含保守表位的结构抗原。