2-甲氧基雌二醇增强骨髓瘤细胞U266对硼替佐米敏感性的相关机制研究

本研究旨在探索2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米对人骨髓瘤细胞株U266的协同抑制增殖和诱导凋亡作用及其可能机制。2-ME2、硼替佐米单用以及二者联合分别处理U266细胞,用CCK8方法检测细胞增殖活力,caspase3/7活性法检测细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期的变化,荧光实时定量PCR检测P21、BAX、BCL-2等mRNA水平变化。结果表明:相比于2-ME2和硼替佐米单用,2-ME2联合硼替佐米处理U266细胞后,细胞增殖明显抑制(p<0.05),细胞凋亡增加(p<0.05),细胞周期阻滞于G1-S期;在mRNA水平,P21及BAX表达上调,BCL-2表达下调。结论:2-ME2联合硼替佐米能更有效地抑制U266细胞增殖和诱导凋亡,具有协同作用,其机制可能与其诱导P21及BAX表达上调有关。     

硼替佐米诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

本研究探讨硼替佐米对Burkitt淋巴瘤Raji细胞是否具有凋亡诱导作用及其机制。以硼替佐米处理Raji细胞,观察细胞增殖抑制作用的时间效应和剂量效应,在光学显微镜下观察药物作用前后细胞的形态变化,用流式细胞术检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）,用RT—PCR法检测药物孵育前后NF—κB和p53基因的表达水平。结果表明,在一定剂量和时间范围内硼替佐米能抑制Raji细胞生长;硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡并显示时间和剂量效应;在硼替佐米诱导Raji细胞凋亡过程中,NF-κB及p53基因的袁达水平下调。结论：硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡,NF—κB基因和p53基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞凋亡的调控。     

姜黄素联合硼替佐米对骨髓瘤H929细胞增殖抑制与凋亡诱导作用及其机理

本研究旨在探讨姜黄素(curcumin)联合硼替佐米(bortezomib)对人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞系H929细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其作用的相关机理。采用MTT法检测不同浓度的姜黄素和硼替佐米单用或联合应用对H929细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术(FCM)分析单用和联合用药时细胞的凋亡比率;采用RT-PCR法分析凋亡相关基因BCL-2、BAX及细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达变化;采用免疫荧光染色法测定不同处理组NF-κB P65蛋白的分布变化。结果表明:姜黄素和硼替佐米单用及联合应用时均可抑制H929细胞的生长,呈剂量依赖性,联合用药在一定浓度范围内有协同效应;联用组细胞凋亡的比例明显高于单用组及对照组;与单用组相比,联用组cyclin D1,BCL-2基因表达下降,BAX升高。核因子NF-κB P65在单用组的胞核内的表达减弱,联合应用组NF-κB P65蛋白分布于胞浆。结论 :姜黄素与硼替佐米均可抑制H929细胞的生长增殖、促进凋亡,联合应用有协同效应。抑制核因子NF-κB的转录及影响其调节凋亡相关基因可能是作用机制之一。     

CXCR4抑制剂AMD3100联合硼替佐米对人淋巴瘤细胞株Ramos增殖、凋亡的影响

目的探讨CXCR4抑制剂AMD3100、硼替佐米对人淋巴瘤细胞株Ramos协同诱导凋亡作用。方法 1检测淋巴瘤患者骨髓单个核细胞中CXCR4及核因子κB(NF-κB)表达水平;2AMD3100、硼替佐米单用以及联合用药分别处理Ramos细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖;利用流式细胞术检测细胞凋亡;Wester blot检测NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl、c-IAP1及Caspase-3表达水平。结果 1淋巴瘤患者骨髓单个核细胞中CXCR4、NF-κB表达增高;2AMD3100、硼替佐米作用Ramos细胞后,随着药物浓度的增加,对细胞增殖的抑制作用逐渐增强、凋亡增加,两药具有协同作用(P0.05);3AMD3100、硼替佐米单药组NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl及c-IAP1表达降低,Caspase-3表达升高,联合用药组作用增强。结论 AMD3100、硼替佐米对Ramos细胞的增殖抑制、凋亡促进具有协同作用,其作用机制可能是通过抑制NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl、c-IAP1及增强Caspase-3表达。     

酪蛋白激酶CK2抑制剂TBB增加硼替佐米诱导的结肠癌细胞系HT29细胞凋亡

目的探讨酪蛋白激酶CK2抑制剂TBB对硼替佐米诱导的结肠癌细胞凋亡的影响。方法选用人结肠癌细胞系HT29细胞,MTT法检测单独使用硼替佐米和联合四溴苯三唑(TBB,CK2抑制剂)对HT29细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测单独使用硼替佐米和联合TBB对HT29细胞凋亡的影响,Western blot方法检测硼替佐米和联合TBB处理的HT29细胞Cleaved Caspase-3的表达情况。结果 MTT结果显示硼替佐米能抑制HT29细胞增殖并呈现剂量依赖性,硼替佐米与TBB联合使用更能抑制增殖。单独使用硼替佐米能诱导细胞凋亡,两者联合的细胞凋亡效应更加明显。硼替佐米能促使Cleaved Caspase-3表达上调,两者联合使用会进一步增加Cleaved Caspase-3的表达。结论硼替佐米能诱导HT29细胞凋亡,而CK2促进了硼替佐米诱导的细胞凋亡。     

硼替佐米对淋巴瘤细胞增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响

目的:研究硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞的增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响。方法:用MTT(噻唑蓝)实验观察不同浓度硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞增殖的作用;利用细胞形态学检查、流式细胞仪检测细胞凋亡;用RT-PCR的方法检测硼替佐米处理淋巴瘤细胞株前后SHP-2基因的mRNA表达水平。结果:硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖性。在5-100 nmol/L硼替佐米处理后,Jurkat细胞株和Raji细胞株中SHP-2 mRNA的表达水平上调。结论:硼替佐米明显抑制Jurkat细胞株和Raji细胞株增殖,诱导其凋亡,上调细胞株SHP-2 mRNA的表达水平,表明SHP-2基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞和Jurkat细胞凋亡的调控。     

白术内酯Ⅰ能诱导U266细胞凋亡和增强硼替佐米的作用

目的:探讨白术内酯Ⅰ对U266细胞增殖和凋亡的作用及其对硼替佐米抗多发性骨髓瘤的作用。方法:分别将不同浓度的白术内酯Ⅰ、硼替佐米以及硼替佐米+白术内酯Ⅰ作用于U266细胞,并应用CCK-8法检测细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,应用RT-PCR及Western blot分别检测目标基因Caspase-3、Caspase-9、BCL-2、BAX、JAK2、STAT3及IL-6的mRNA及相应蛋白的表达。结果:白术内酯Ⅰ能呈浓度依赖性抑制U266细胞的增殖(r=-0.98)和促进细胞凋亡(r=0.99),调控线粒体介导的凋亡途径;联合用药能显著增强对细胞增殖的抑制作用(P0.01);同时,单药组及联合用药组均能显著降低IL-6、JAK2、STAT3及BCL-2 mRNA及蛋白表达水平(P0.01)。结论:白术内酯Ⅰ能显著抑制U266细胞增殖,促进其凋亡,并能与硼替佐米产生协同作用,此作用与线粒体凋亡途径有关,可能与调节JAK2/STAT3通路上的IL-6、JAK2、STAT3等基因表达有关。     

硼替佐米对K562/DNR细胞株MAPK信号途径的影响

本研究旨在检测硼替佐米对柔红霉素（daunorubicin,DNR）诱导的K562耐药细胞株K562/DNRMAPK信号途径中ERK、JNK及P38的影响,探讨硼替佐米逆转白血病细胞耐药的分子机制。应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）进行耐药细胞株和硼替佐米细胞毒性的判定。选用4μg/L硼替佐米作为实验用药,以100μg/mlDNR单用或联合应用硼替佐米作用于K562/DNR细胞株12、24和36小时,应用Western blot检测不同时间点各组ERK、JNK、p38及P-gp的表达水平,同时应用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果表明,与DNR组相比,在总ERK1/2、p38及JNK无明显变化的情况下,硼替佐米联合DNR可抑制P-ERK、P-P38的表达,增加P-JNK的表达（p〈0.05）,同时减少P-gp表达,其作用随作用时间延长而增强,同时加用硼替佐米可增加细胞凋亡率。结论：硼替佐米可通过MAPK信号通路逆转白血病细胞耐药性,增加细胞凋亡率,该作用呈时间依赖性。     

三氧化二砷增强硼替佐米、地塞米松对多发性骨髓瘤细胞的作用

目的 通过观察硼替佐米单用及与三氧化二砷(As_2O_3)、地塞米松(DXM)联合应用对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3细胞增殖及凋亡的影响,探讨As_2O_3能否增强硼替佐米、DXM的抗MM作用.方法 采用MTT法检测硼替佐米单用及与As_2O_3、DXM联合应用对KM3细胞增殖的抑制作用,计算其IC_(50)值.采用细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段观察硼替佐米对KM3细胞凋亡的影响,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测硼替佐米联合As_2O_3、DXM后KM3细胞凋亡率的变化.结果 硼替佐米、As_2O_3及DXM对KM3细胞增殖抑制呈时间和浓度依赖性IC_(50)值分别为0.27、3.10、8.01 μmol/L;硼替佐米联合As_2O_3及DXM对KM3细胞的增殖抑制作用强于硼替佐米联合As_2_O3或DXM[(34.51±0.51)%对(25.39±0.90)%;(34.51±0.51)%对(23.80±0.78)%].0.25μmol/L硼替佐米与KM3细胞共孵育48 h后,KM3细胞出现典型的凋亡形态学改变,DNA电泳呈现梯形条带,Annexin V阳性细胞比例增高;硼替佐米联合As_2O_3、DXM组的KM3细胞凋亡率明显高于硼替佐米联合DXM组.结论 在体外,硼替佐米能够抑制KM3细胞增殖,诱导其凋亡.硼替佐米联合As_2O_3及DXM对KM3细胞增殖抑制作用显著增强;As_2O_3可增强硼替佐米、DXM对KM3细胞的诱导凋亡作用.     

雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过MTT法检测不同浓度的雷公藤内酯和硼替佐米单用及联用对H929细胞的增殖抑制作用;采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明:雷公藤内酯醇(10-100 ng/ml)和硼替佐米(10-100 nmol/L)单用和联用均可抑制H929细胞增殖,呈浓度依赖性,雷公藤内酯醇和硼替佐米联用组的细胞凋亡率明显高于单用硼替佐米组。经非抑制浓度的雷公藤内酯醇(10 ng/ml)联合硼替佐米(40 nmol/L)处理H929细胞24 h后的凋亡率明显高于单用硼替佐米组(P<0.05)。结论:雷公藤内酯醇能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。     

丙戊酸钠联合三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡及其机制研究

本研究旨在探索丙戊酸钠联合三氧化二砷对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡的影响及其相关机制.利用CCK-8法检测不同浓度的丙戊酸钠、三氧化二砷单药和两药联合应用对RPMI 8226细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.半定量RT-PCR和Western blot分别检测各组BCL-2、BAX、caspase-8及caspase-9的mRNA和蛋白表达水平的变化.结果表明：丙戊酸钠及三氧化二砷均可抑制RPMI 8226细胞增殖,两者联合应用有协同作用（Q值大于1.15）.联合用药组RPMI 8226细胞凋亡率较单药组明显增加（P＜0.05）.与丙戊酸钠或三氧化二砷单药组相比,联合用药组RPMI 8226细胞BCL-2 mRNA及蛋白表达水平下降,BAX、caspase-8及caspase-9mRNA及蛋白表达水平上调.结论：丙戊酸钠和三氧化二砷有协同抑制RPMI 8226细胞增殖和诱导凋亡的作用,这可能与BCL-2表达下调,BAX、caspase-8及caspase-9表达上调有关.     

和厚朴酚联合吉西他滨协同抑制 Burkitt 淋巴瘤细胞增殖和促凋亡作用简

本研究旨在探讨和厚朴酚（Honokiol,HNK）与吉西他滨（Gemcitabine,GEM）联合应用对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖和凋亡的影响.应用CCK-8法检测HNK和GEM单用及联合应用对Raji细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测两种药物诱导Raji细胞凋亡情况及细胞周期的变化;以Western blot法检测BCL-2抗凋亡蛋白水平的变化.结果表明,HNK与GEM联合后,细胞生长抑制明显高于HNK和GEM单药组（P＜0.01）,具有时间和浓度依赖性;细胞凋亡比例均较各单药组增多,差异具有统计学意义（P＜0.01）,两药联合后大部分细胞被阻滞在G0/G1期,S期细胞减少;细胞内抗凋亡蛋白BCL-2水平在联合组比在各单药组表达量下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）.结论：HNK联合GEM具有协同抑制Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖并诱导其凋亡的作用,协同机制可能与两药联合后更多细胞发生G0/G1期阻滞,并抑制抗凋亡蛋白BCL-2的活化有关.     

三氧化二砷联合硼替佐米诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞株凋亡及相关机制的研究

目的本研究旨在探讨三氧化二砷与硼替佐米联合应用对多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)细胞株RPMI8226细胞凋亡的影响及其相关机制。方法 CCK-8法检测三氧化二砷与硼替佐米联合应用对RPMI8226细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测两种药物诱导RPMI8226细胞凋亡情况及各药物组处理前后的细胞表面死亡受体4(death receptor 4,DR4)和死亡受体5(death receptor 5,DR5)表达的变化;Western blot检测各药物组Bcl-2、caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP蛋白表达水平的变化。结果三氧化二砷与硼替佐米联合组对RPMI8226细胞生长抑制明显高于三氧化二砷单药组,细胞凋亡率均较三氧化二砷单药组明显增多,细胞表面DR4和DR5表达明显增高。与三氧化二砷或硼替佐咪单药组相比较,联合用药组RPMI8226细胞Bcl-2表达下调明显,而caspase-3,caspase-8和caspase-9表达上调明显。结论硼替佐米可以增加RPMI8226细胞对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性,这可能与Bcl-2的表达下调及caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP蛋白的表达上调有关。     

三氧化二砷联合姜黄素对KG1a细胞的协同杀伤作用

本研究旨在探讨三氧化二砷联合姜黄素对KG1a细胞的增殖与凋亡的影响及可能的机制.采用MTT法检测细胞存活率;甲基纤维素集落形成实验检测细胞成集落能力;流式细胞术检测细胞表面分子、细胞凋亡率及细胞周期变化;瑞氏姬姆沙染色法观察细胞形态;Westerrn blot检测细胞BCL-2、BAX、PARP蛋白表达.结果表明：KG1a细胞表型为CD34＋ CD38-,HL-60细胞表型为CD34＋ CD38＋;前者成集落能力比后者强.姜黄素及三氧化二砷单用对KG1a细胞增值抑制作用均具有剂量依赖性.联合用药与单药对比,前者细胞存活率、克隆形成集落数更低,而细胞凋亡率更高.联合用药能够降低细胞的BCL-2、PARP两种蛋白表达、增加BAX蛋白表达.结论：KG1a细胞是比HL-60细胞更早期的白血病干/祖细胞.三氧化二砷联合姜黄素能更有效抑制KG1a细胞增殖及诱导其凋亡,其机制可能与BCL-2、PARP蛋白表达下调、BAX蛋白表达上调有关.     

一定浓度下三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株增殖的影响

背景：近年来有将三氧化二砷试用于T细胞肿瘤的有效报道,但未见其治疗机制的相关研究。目的：检测三氧化二砷对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的抑制增殖、诱导凋亡及细胞周期的影响。方法：分别采用MTT、PI单标记流式细胞术和TUNEL法检测2,5,10μmol/L的三氧化二砷干预24,48,72h,对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响,及其凋亡相关基因bcl-2及血管内皮细胞生长因子基因表达的变化。结果与结论：在一定的浓度范围内,三氧化二砷对Hut-78细胞存在增殖抑制作用,其增殖抑制作用在一定程度上可能与下调血管内皮细胞生长因子基因的表达有关,同时还存在一定的细胞毒作用;三氧化二砷可诱导Hut-78细胞发生凋亡,凋亡机制主要发生在G2～M期,其凋亡作用可能与下调bcl-2基因表达有关。三氧化二砷对Hut-78细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用呈时间剂量依赖性。     

三氧化二砷诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡与细胞周期阻滞

本研究探讨研究三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤Raji细胞株凋亡诱导的作用特点及其机制。用MTT比色法观察不同浓度As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应，电子显微镜观察不同浓度As2O3作用不同时间后细胞的凋亡形态，DNA-ladder琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带，流式细胞术检测Raji细胞凋亡、细胞周期分布。结果表明：1—8μmol／LAs2O3能明显抑制Raji细胞的活力，并存在一定的量效、时效关系。2—8μmol／L浓度的As2O3可以诱导Raji细胞周期阻滞及凋亡，而1μmol／LAs2O3不诱导细胞凋亡，只是通过细胞周期阻滞作用抑制细胞增殖。结论一定浓度三氧化二砷可以抑制Raji细胞的增殖，阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡。细胞周期阻滞伴随细胞凋亡而发生。     

三氧化二砷联合硼替佐米对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制的实验研究

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）单独或联合硼替佐米（Bor）对髓系白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度的As2O3、Bor处理细胞24、48h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测单用As2O3、Bor及二者联用的细胞凋亡率及细胞周期的变化;免疫组织化学法分析各组核转录因子（NF-κB）的表达水平。结果表明,As2O3（0．1-0．8μmol／L）和Bor（5-50nmol／L）均能抑制K562细胞的增殖,且与作用时间和药物浓度有关,时间越长,浓度越大,抑制越明显（P〈0．05）;Bor和As2O3作用48h的IC50值分别为20nmol／L和0．6μmol／L。As2O3（0．5μmol／L）或Bor（10nmol／L）分别单独处理细胞24h,K562细胞凋亡增加,联合用药组的细胞凋亡率高于单药组（P〈0．01）。As2O3或Bor处理K562细胞6h时细胞周期分布显示：As2O3组细胞阻滞于G0／G1期,Bor组细胞阻滞于G2／M期。As2O3或Bor分别单独处理细胞24h,NF-κB表达阳性率及积分较对照组明显降低（P〈0．05）,联合用药组的NF-κB表达阳性率及积分较As2O3及Bor单用组均明显降低（P〈0．01）。结论：As2O3及Bor单药均可以直接抑制K562细胞增殖,促进凋亡,两药小剂量联合作用后,细胞增殖抑制及促凋亡作用较单药明显增强。细胞周期阻滞点的不同及NF-κB表达的下降可能是As2O3和Bor联用后协同作用的机制之一。     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

雄黄诱导人弥漫性大B淋巴瘤SU-DHL-4细胞凋亡及其机制的初步研究

本研究旨在探讨雄黄（Realgar,AS4S4）诱导人弥漫性大B淋巴瘤su-DHL-4细胞凋亡及其可能的机制。采用MTT法观测雄黄对SU—DHL-4细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞术检测药物对SU-DHL-4细胞周期的影响及其诱导凋亡情况,利用琼脂糖凝胶电泳方法观察凋亡细胞的DNA降解情况,通过透射电子显微镜技术观察药物作用前后细胞超微结构的变化,采用Westernblot方法检测药物诱导SU—DHL4细胞48h后Caspase-3、Bcl-2以及Bax蛋白表达情况。结果表明：20、40、80μmol／L的雄黄均可抑制su—DHL-4细胞增殖,抑制率呈时间-剂量依赖性（r=0．982;P〈0．05）;AnnexinV／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率显示雄黄作用SU—DHL-4细胞48h后,随着药物浓度的增加,早期凋亡细胞所占比率增高（P〈0．05）;PI单染流式细胞术检测细胞周期发现,雄黄作用SU—DHL4细胞48h后处于细胞周期S期的细胞显著减少（P〈0．05）;透射电子显微镜下观察雄黄作用SU-DHL-4细胞48h后各浓度组细胞,均呈典型凋亡的改变,偶见坏死细胞;琼脂糖凝胶电泳结果显示,各浓度实验组雄黄干预SU—DHL-4细胞48h后,细胞核DNA降解呈梯状;Westemblot结果显示,雄黄作用SU-DHL-4细胞48h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax和Caspase-3蛋白表达增加。结论：雄黄可以诱导人弥漫性大B淋巴瘤细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、上调Caspase-3和Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白而诱导细胞凋亡。