靶向细胞色素P450酶系：抗肿瘤药物发展的新思路

细胞色素P450（CYP）代表了一大类可催化大量内源性和外源性底物代谢的亚铁血红素酶系。肿瘤治疗中靶向CYP酶系的第一个成功应用是治疗乳腺癌的高效CYP19抑制剂（芳香酶）的开发。芳香酶抑制剂为雌激素依赖型肿瘤的激素去势疗法开辟了新纪元。本文首次全面分析了在药物开发中通过抑制或利用CYP酶系治疗肿瘤的策略。     

探针药物法评价丁苯酞对大鼠体内CYP2C19酶活性的影响

目的研究丁苯酞对大鼠体内细胞色素P450酶2C19（cytochrome P450 enzyme 2C19,CYP2C19）活性的影响。方法Wistar大鼠随机分为4组,每组8只。对照组灌胃给予植物油;实验组分为低、中、高3个剂量组,分别灌胃给予丁苯酞40、80、160rag／kg（以植物油溶解）。对照组和实验组均连续灌胃5d,于第6天尾静脉注射探针药物奥美拉唑（4mg／kg）后由眼底静脉丛取血,血浆样品经二氯甲烷提取,以卡马西平为内标,采用高效液相色谱法测定奥美拉唑血药浓度。以DAS2．1．1药物动力学程序拟合药动学参数。结果对照组与实验组比较,奥美拉唑药动学参数AUC（0-t）、AUC（0-∞）、t1／2、CLz、Vz差异无统计学意义（P〉0．05）。结论丁苯酞对大鼠体内CYP2C19酶活性无影响。     

人体CYP450孤儿酶功能特性的研究进展

近年来,人体中一些所谓的\     

细胞色素P450介导的补骨脂酚代谢减毒

目的:分析补骨脂酚代谢的细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表型,并在体外研究人肝微粒体(hu-man liver microsomes,HLM)对补骨脂酚代谢减毒的机制。方法:用HLM与化学抑制剂合用法以及人源重组CYP酶法分析代谢补骨脂酚的CYP酶亚型。用HPLC-MS法分析CYP亚型酶特异底物的代谢产物生成量,研究CYP酶广谱抑制剂1-氨基苯并三唑(1-aminobenzotriazole,ABT)对HLM中CYP亚型酶活性的抑制作用。用HPLC法分析补骨脂酚在HLM孵育液中的浓度,研究ABT对其代谢的影响。应用MTT法检测人肾近曲小管上皮细胞(human kid-ney-2,HK-2)的存活率来评价补骨脂酚对HK-2的毒性作用以及HLM中CYP酶和ABT对其毒性的影响。结果:HLM中的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4参与了补骨脂酚的代谢,其中以CYP2C19的代谢转化率最高;2.5 mmol/L ABT能明显抑制0.5 g/L HLM中上述4种CYP同工酶活性,抑制率达到90%以上;2.5 mmol/L ABT对补骨脂酚在HLM的代谢抑制率为83.24%±2.13%。在HK-2细胞存活率实验中,ABT能显著降低HLM对30～90μmol/L补骨脂酚的代谢减毒作用(P0.05)。结论:HLM减低补骨脂酚HK-2细胞毒性的作用与HLM中CYP酶将补骨脂酚代谢转化为无毒或毒性较小的代谢产物有关,应用CYP酶广谱抑制剂能逆转HLM对补骨脂酚的代谢解毒作用。     

CYP2E1在乙醇性肝病发病机制中的作用

<正>乙醇滥用一直是全球范围内重要的公共健康问题。长期大量饮酒可引发乙醇性肝病(ALD),包括乙醇性脂肪肝、乙醇性肝炎、乙醇性肝硬化。重度饮酒者中80%以上有一定程度的脂肪肝,其中10%～35%可发展为乙醇性肝炎,10%～20%可发展为肝硬化。从以往情况来看,欧美等国的发病率远远高于我国。在英、美等国,8%～14%的人群乙醇依赖或乙醇中毒,1/3的嗜酒者发展成为ALD。近年来,随着国内乙醇生产和消费量的迅速上升,我国ALD的发     

刺五加对大鼠及人肝微粒体酶CYP450的作用观察

以１０ｇ／１００ｇ体重的刺五加给予大鼠灌胃５天，检测大鼠肝微粒体酶活力。结果表明，给药组肝微粒体酶ＣＹＰＩＡ１活性受抑；正常人组服用高于临床剂量的刺五加１周，利用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）以咖啡因为代谢探针间接反映人肝微粒体酶ＣＹＰＩＡ２活性。结果表明，正常人组该酶活性在用药后受抑；ＣＹＰＩＡ１、ＣＹＰＩＡ２能够催化多种前致癌物在机体内的活化，根据刺五加对这些酶的抑制，说明该药在一定程度上能防御肿瘤的发生     

来氟米特对急性化学性肝损伤小鼠肝Cyt.P450酶含量及CYP2E1 mRNA表达的影响

目的观察来氟米特(Lef)作用前后急性化学性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)、细胞色素b5(Cyt.b5)含量及P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平的变化,进一步研究其治疗机制。方法采用CCl4诱导小鼠急性化学性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量以及肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)和细胞色素b5(Cyt.b5)含量,RT-PCR法检测小鼠肝脏细胞色素P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平,并作肝组织切片病理观察。结果Lef明显降低CCl4急性肝损伤小鼠血清ALT、AST水平;降低肝匀浆MDA含量;提高GSH含量并提高肝微粒体Cyt.P450、Cyt.b5含量;抑制CYP2E1 mRNA表达;减轻肝脏病理损伤。结论Lef治疗CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤,可能与其诱导肝微粒体Cyt.P450表达,抑制CYP2E1 mRNA转录及抗脂质过氧化有关。     

细胞色素P450氧化还原酶在发育中的作用

细胞色素P450氧化还原酶(POR)是一种电子供体,参与许多发育相关的内源性物质的代谢,从而影响机体的生长发育。本文就POR在发育相关内源性物质代谢中的作用以及POR缺陷导致的发育不良等方面进行综述。     

延胡索乙素对映体对小鼠CYP450酶诱导和抑制作用研究

目的:考察延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)对映体对小鼠肝脏主要CYP450酶的体外抑制及体内诱导作用,从而预测其在临床上可能发生的代谢性药物相互作用,为临床合理用药提供科学依据。方法:以探针底物法,考察左旋延胡索乙素[(-)-tetrahydropalmatine,(-)-THP]和右旋延胡索乙素[(+)-tetrahydropalmatine,(+)-THP]体外对小鼠肝微粒体主要Ⅰ相代谢酶CYP1A2、CYP2C、CYP2D22、CYP2E1、CYP3A11活性的影响;采用微粒体体外孵育鸡尾酒法(cocktail法),考察小鼠经高、低剂量(-)-THP和(+)-THP(240 mg/kg和60 mg/kg)连续灌胃7 d后,其肝微粒体中主要I相代谢酶活性的变化,以评价(-)-THP和(+)-THP对小鼠肝微粒体主要CYP450酶是否具诱导作用。结果:(-)-THP和(+)-THP体外对小鼠肝微粒体主要的CYP 450 I相代谢酶的抑制作用均不强,(+)-THP对CYP2C抑制的IC50为43.89μmol/L,两者对本研究考察的其它CYP亚型的IC50均大于100μmol/L;...     

B19微小病毒70-mer寡核苷酸探针的设计

目的　设计B19微小病毒诊断基因芯片的寡核苷酸探针。方法　以微小病毒B19为例 ,利用BLAST软件对其序列进行比对并获得特异序列 ;利用软件Oligo 6设计特异性高、Tm值接近、长度均一的寡核苷酸探针。 结果　获得 12条 70 mer寡核苷酸探针 ,用于芯片打印及病毒检测。结论　利用BLAST系统和生物学软件Oligo 6可简便而有效地设计诊断芯片探针     

Polymorphisms of GSTM1 and CYP1A1 genes and their genetic susceptibility to prostate cancer in Chinese men

Background Variation in prostate cancer incidence between different racial groups has been well documented, for which genetic polymorphisms are hypothesized to be an explanation. We evaluated the association between polymorphisms in the cytochrome P-450 CYP1A1 （CYP1A1） and glutathione S-transferase M1 （GSTM1） genes and genetic susceptibility to prostate cancer in Chinese men.
Methods TWO hundred and eight prostate cancer patients and 230 age matched controls were enrolled in this study. All DNA samples from peripheral blood lymphocytes were genotyped for common genetic polymorphisms of the CYP1A1 and GSTM1 genes using the oligonucleotide microarray （DNA chip） technique and the polymorphism results confirmed by sequencing. The different polymorphisms in prostate cancer patients were also analyzed according to age at diagnosis, prostate specific antigen level, cancer stage and grade （Gleason score）.
Results The prevalence of the GSTM1 （0/0） genotype was significantly higher in prostate cancer patients （58.2%） than in controls （41.7%, P〈0.05）. Further analysis demonstrated that the prostate cancer patients with a GSTM1 （0/0） genotype were younger than those with the GSTM1 （＋/＋） genotype （P=-0.024）. No significant differences in the frequency distributions of CYP1A1 polymorphisms were observed between prostate cancer patients and controls.
Conclusion GSTM1 （0/0）-gene polymorphism may be linked to prostate cancer risk and early age of Onset in Chinese.     

基因表达谱芯片技术筛选β干扰素基因转染细胞的反式调节基因

目的:筛选能被β干扰素反式调节的靶基因,研究β干扰素的生物学功能及其机制。方法:设计并合成β干扰素(IFNβ)特异性引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的IFNβ编码基因片段克隆到TA载体中,进行测序鉴定后构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-IFN-β。以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,转染HepG2细胞,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA。应用基因表达谱芯片技术对差异表达的mRNA进行检测和分析。结果:HepG2细胞经转染IFN-β之后,有70条差异基因表达,其中40条基因表达增强,30条基因表达降低。这些差异表达基因与细胞的增生、分化和细胞的信号转导密切相关。结论:应用基因表达谱芯片技术筛选到IFN-β的反式调节基因,为进一步探索IFN-β可能的调节机制及其生物学功能提供了新的依据。     

基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种方法的建立

目的：利用基因芯片技术,建立一种能快速、准确鉴定分枝杆菌菌种的方法,并验证其临床应用价值。方法根据23种分枝杆菌基因序列设计特异性探针并制作基因芯片,通过PCR‐反向点杂交鉴定23种分枝杆菌标准菌株、9种非分枝杆菌和103株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用基因芯片技术检测23种分枝杆菌标准菌株和9种非分枝杆菌菌株,特异性为100％。103株临床分离株经鉴定87株为结核杆菌复合群（MTC）;16株为非结核分枝杆菌（NTM）,其中脓肿分枝杆菌5株、胞内分枝杆菌3株、鸟分枝杆菌3株、偶发分枝杆菌2株,以及堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、戈登分枝杆菌各1株。103株临床分离株鉴定结果与测序法完全一致,该方法最低检出限为103copy／mL。结论采用基因芯片技术能快速鉴定分枝杆菌菌种,并区分MTC和NTM,具有简便快速及准确性、特异性、灵敏度高的优点。     

子宫腺肌病患者UAE治疗前后子宫内膜中ER、P450arom表达的变化

目的:研究子宫腺肌病子宫动脉栓塞术(UAE)治疗前后子宫内膜中ER、P450arom表达的变化。方法:采用免疫组化法测定33例子宫腺肌病患者治疗前、后30d及90d内膜中ER、P450arom表达的变化及阳性人数的变化,与30例正常对照组患者比较。结果:30例子宫腺肌病组中有78.8%患者内膜中P450arom高表达,表达强度为18.6±3.45,明显高于正常对照组(P<0.01);100%患者ER表达,表达强度为16.1±2.67,明显高于对照组的4.51±0.98(P<0.01);UAE治疗后内膜中ER表达由治疗前的16.1±2.67降低到治疗后的6.23±0.98,ER阳性人数百分比由治疗前的100%降低到治疗后的39.4%;P450arom表达由治疗前的18.6±3.45降低至治疗后的5.3±1.66,阳性人数百分比由78.8%降低至39.4%,各组比较差异有显著性意义(P<0.01)。治疗后1个月ER、P450arom表达开始逐渐下降,治疗后3个月降低最明显。结论:高表达的ER、P450arom在子宫腺肌病发生、发展中发挥重要的作用;UAE主要通过减少子宫腺肌病病灶血供和抑制内膜中ER、P450arom表达发挥其治疗效果;ER、P450arom可作为子宫腺肌病疗效判断和预后的指标之一。     

导流杂交基因芯片技术在人乳头瘤病毒基因分型的应用

目的 探讨对人乳头瘤病毒(HPV)感染进行准确快速基因诊断和分型的方法.方法 采用导流杂交基因芯片技术和实时荧光PCR对75例疑似HPV感染的标本进行基因诊断和分型.结果 基因芯片阳性28例,其中单一感染21例,多重感染7例;实时荧光PCR阳性25例.二者在阳性结果中有很好的一致性.结论 导流杂交基因芯片技术适合临床筛查HPV感染及对HPV进行基因分型.