维生素D_3联合尼古丁诱导的血管钙化亚慢性模型的建立

目的建立维生素D3(vitamin D3)联合尼古丁(nico-tine)诱导的大鼠血管钙化亚慢性动物模型。方法采用维生素D3(300 kIU.kg-1)肌注和尼古丁(25 mg.kg-1,5 ml.kg-1)灌胃制备大鼠血管钙化亚慢性模型,定期测定大鼠体重和尾动脉血压;在造模的第8周、第16周,分别测定大鼠心脏系数、血浆钙、磷含量、血管钙含量、血管碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和血管钙沉积等与血管钙化相关的指标,对胸主动脉进行Von Kossa染色。结果第3~8周,VDN(vitamin D3and nicotine)大鼠尾动脉压持续增加,与对照组相比差异均有显著性(P均<0.05)。第9周后,仍然维持在较高水平。与对照组相比,VDN组大鼠第8周心脏系数升高8.4%(P<0.01);血钙、血磷分别升高3.2%(P<0.01)和12.0%(P<0.05);血管组织钙含量升高27.0%(P<0.01);血管ALP活性与血管钙沉积分别高151.8%和68.8%(P均<0.01)。与对照组相比,第16周VDN组大鼠心脏系数升高7.7%(P<0.01),血钙升高3.2%(P<0.05),血磷降低1.4%;血管组织钙含量升高51.0%(P<0.01);血管ALP活性与血管钙沉积分别高87.2%(P<0.01),31.6%(P<0.05)。Von Kossa染色结果显示第8周和第16周VDN组大鼠胸主动脉中膜均有大量深色颗粒沉积。结论维生素D3和尼古丁诱导的16 wk大鼠血管钙化亚慢性模型可作为药物筛选和机制研究的疾病模型。     

高脂血症合并血管钙化大鼠实验模型的建立

目的建立高脂血症合并血管钙化大鼠实验模型。方法在灌胃38 d高脂乳剂的基础上连续3 d给予大剂量维生素D3注射液(1×106U.kg-1)灌服,继续高脂乳剂灌胃28 d处理大鼠,观察血脂、钙、磷以及胸主动脉的形态学变化。结果在高脂乳剂-大剂量维生素D3-高脂乳剂相继灌胃处理后,大鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)均明显升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)无明显变化,但HDL-c/TC显著降低(P<0.01);血钙明显上升(P<0.05),主动脉形成较典型的粥样硬化斑块。结论采用高脂乳剂-大剂量维生素D3-高脂乳剂相结合的方法可以成功建立高脂血症合并血管钙化大鼠模型。     

蛋白激酶G在大鼠钙化血管中的作用

目的探讨钙化血管中蛋白激酶G（PKG Iα蛋白）的作用。方法采用华法令和维生素D3建立大鼠主动脉钙化模型。4周龄SD雄性大鼠36只,随机分为对照组、钙化组和环孢霉素A组,每组12只。VonKossa染色及电镜观察血管形态改变,应用免疫组化法测定PKGIa蛋白及CaNB1蛋白,比色法测定碱性磷酸酶活性。结果钙化组PKG Iα蛋白表达明显减少（P〈0．01）。结论PKG Iα可能参与血管钙化的调节过程。     

佝偻病大鼠和小鼠模型

佝偻病大鼠和小鼠模型缪朝玉，朱铨英，唐惠兰，叶华，苏定冯（第二军医大学基础部药理学教研室，第一附属医院放射科，上海２００４３３）中国图书分类号Ｒ９７７．２２；Ｒ７２３．４４佝偻病是一种小儿常见病，我们用大鼠和小鼠制造佝偻病动物模型，观察了模型的多项指...     

硫代硫酸钠对尿毒症大鼠血管钙化的影响

目的:研究硫代硫酸钠对尿毒症大鼠血管钙化的影响。方法:用2%腺嘌呤每日250 mg·kg-1灌胃4周制备尿毒症大鼠模型。设正常对照组(NUC)、尿毒症大鼠组(UC)、尿毒症大鼠+硫代硫酸钠组(UC+STS),每组各12只大鼠。腺嘌呤灌胃4周后给予大鼠硫代硫酸钠每次0.4 g·kg-1腹腔注射,每周3次,持续6周,于第10周处死动物,取血测定血清SOD、MDA水平;用ELISA法测定各组大鼠血浆MGP、Fetuin-A水平。结果:与正常对照组比较,尿毒症大鼠血浆SOD活性降低、MDA水平升高,差异具有显著性(P<0.05);硫代硫酸钠治疗组大鼠血浆SOD活性降低和MDA水平升高受到一定程度的抑制,差异具有显著性(P<0.05)。尿毒症大鼠血浆MGP、Fetuin-A水平显著降低,硫代硫酸钠治疗组大鼠MGP、Fetuin-A水平升高,与尿毒症大鼠比较有显著性差异(P<0.05)。结论:硫代硫酸钠能够减轻尿毒症大鼠血管钙化的发生,硫代硫酸钠通过其抗氧化特性减轻氧化应激损伤,改善血管内皮功能可能是其预防钙化的机制之一,同时,硫代硫酸钠可以提高尿毒症大鼠血浆MGP、Fetuin-A水平,抑制血管钙化的发生。     

特立帕肽对老年去卵巢大鼠血管钙化的影响

目的：观察特立帕肽对老年去卵巢大鼠血管钙化的影响,并探讨其发挥作用的分子机制。方法用30只10个月龄SD大鼠,随机分为3组院假手术组、去卵巢组及特立帕肽治疗组。特立帕肽治疗组给予20μg/kg特立帕肽皮下注射,隔天1次,持续12周。术前及给药期间收集大鼠血清,给药结束后观察子宫的组织学变化。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血中未羧化基质羧基谷氨酸蛋白(uc-MGP)的量及雌激素的变化;原子分光光度计测量血管总钙含量;Von Kossa染色观察动脉钙化;免疫组化法观察血管uc-MGP的表达;荧光实时定量PCR扩增MGP mRNA,观察其在胸主动脉的表达水平。结果血清中uc-MGP含量去卵巢组最高,特立帕肽治疗组其次,假手术组最低(P<0.05)。去卵巢组及特立帕肽治疗组雌激素水平明显下降(P<0.05)。去卵巢组血管总钙含量明显高于假手术组(P<0.01),特立帕肽治疗组明显低于去卵巢组(P<0.01)。血管未羧化MGP表达出现在血管钙化周围区域,钙化严重组表达较多。特立帕肽治疗组阳性较少表达。去卵巢组表达量最低,假手术组MGP mRNA表达量最高,特立帕肽治疗组表达量介于两者之间,差异有统计学意义(P<0.01)。结论特立帕肽对绝经后血管钙化有改善作用,可能是通过调节MGP的基因表达及活性发挥作用。     

高尿酸血症对血管钙化作用机制的实验性研究

目的观察高尿酸血症对大鼠血管钙化的影响。方法实验动物(大鼠28只)随机分正常组、高尿酸血症组、钙化组和钙化+高尿酸血症组,每组7只,钙化组采用维生素D3(300 000 U/kg,1次,肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中早、晚各灌胃1次)建立大鼠血管钙化模型,高尿酸组采用2%氧嗪酸钾饲料喂养诱导高尿酸血症模型,分别用苦味酸法和尿酸氧化酶过氧化物酶法检测大鼠血清尿酸和肌酐浓度,用Von Kossa染色检测血管钙化程度,用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和ALP活性,用硝酸还原酶法检测大鼠血浆NO含量。结果维生素D3和尼古丁能够诱导典型大鼠血管钙化模型,2%氧嗪酸钾饲料喂养可诱导高尿酸血症模型,Von Kossa染色示钙化组主动脉有大量黑色颗粒沉淀,并且血管钙含量、ALP活性明显高于正常组,钙化组+高尿酸血症组钙化最为明显;三组实验组大鼠血浆NO的表达较正常组明显下调。结论高尿酸血症促进大鼠血管钙化,可能与下调NO的表达和上调ALP活性有关。     

川芎嗪抑制大鼠血管钙化及其机制研究

目的探讨川芎嗪调节血管钙化的作用及可能机制。方法建立肌内注射维生素D3和口服尼古丁诱导大鼠血管钙化以及β-甘油磷酸盐诱导血管平滑肌细胞钙化模型,并给予川芎嗪干预。采用原子吸收分光光度法测定主动脉和细胞钙含量、45CaCl2摄入法和Von Kossa染色评价钙沉积、化学比色法测定碱性磷酸酶活性、逆转录聚合酶链反应测定骨桥蛋白mRNA的表达水平。结果钙化大鼠血管和血管平滑肌细胞碱性磷酸酶活性、钙含量和钙沉积明显增强,骨桥蛋白表达水平显著降低。川芎嗪40 mg.kg-1治疗大鼠、200 mg.L-1处理钙化血管平滑肌细胞,均可有效抑制血管钙化、明显上调骨桥蛋白mRNA的表达。结论川芎嗪可能部分通过上调血管组织局部的内源性钙化拮抗系统而产生抑制血管组织和血管平滑肌细胞钙化的作用。     

大鼠钙化血管中蛋白激酶G与钙调神经磷酸酶信号通路的交互调节作用

目的 探讨大鼠血管钙化过程中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路之间是否存在交互调节作用.方法 4周龄SD雄性大鼠36只,随机分为对照组、钙化组和环孢霉素A(cyclosporine A,CsA)组,采用华法林和维生素D3皮下注射方法建立主动脉钙化模型,原位杂交方法测定主动脉环三磷酸鸟苷依赖的蛋白激酶Ⅰ( PKG Ⅰα)及钙...     

Metformin alleviates vascular calcification induced by vitamin D3 plus nicotine in rats via the AMPK pathway

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尿毒症患者血清钙化相关蛋白与血管钙化的关系研究

目的探讨尿毒症患者血清钙化相关蛋白与血管钙化的关系。方法选取尿毒症患者60例作为尿毒症组,选取严重外伤后截肢患者20例为对照组,采用von Kossa染色法观察桡动脉钙化情况;采用免疫组织化学法观察核心结合因子1(Cbfα1)、骨钙素(OC)及Toll样受体4(TLR4)的表达情况;对2组患者的组织学改变、血生化指标、血管钙化发生情况进行统计分析。结果对照组健康桡动脉无钙化;尿毒症组患者无钙化31例(52%),有钙化29例(48%),其中重度钙化11例,轻中度钙化18例,分别占总数的18%、30%;钙化血管均有Cbfα1、OC、TLR4的表达。尿毒症组患者的血磷、C反应蛋白、血清甲状旁腺激素、动脉内膜中层厚度水平均显著高于对照组(P<0.05),血管直径/桡动脉管壁显著高于对照组(P<0.05),但2组患者的血钙水平之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论尿毒症患者桡动脉血管钙化率高,钙化血管均有Cbfα1、OC、TLR4表达,且与血管钙化严重程度呈正相关,值得临床充分重视。     

脑通复方制剂对血管性痴呆模型大鼠海马神经元细胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的:探讨观察脑通复方制剂对拟血管性痴呆(VaD)模型大鼠海马神经元中分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导系统细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)及其磷酸化(p-ERK1/2)表达的影响。方法:采用改良Pulsinelli四血管阻断法复制大鼠血管性痴呆模型,脑通复方制剂治疗后观察学习记忆能力,Western-blotting法测定海马神经元总ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达。结果:脑通复方制剂可缩短实验大鼠逃避潜伏期,增加跨越平台次数;假手术组、VaD模型组、脑通复方制剂组及多哌齐特(安立申)组的ERK1/2蛋白水平分别为(1.20±0.19)、(1.11±0.14)、(1.18±0.13)、(1.25±0.14),任意两组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);假手术组、VaD模型组、脑通复方制剂组及多哌齐特(安立申)组p-ERK1/2蛋白水平分别为(0.75±0.07)、(0.38±0.08)、(0.58±0.10)、(0.65±0.08),模型组与假手术组相比p-ERK1/2蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.01);脑通复方制剂组和多哌齐特(安立申)组p-ERK1/2蛋白表达较模型组升...     

New concept of vascular calcification and metabolism

Vascular calcification is recently considered as one of the major complications and an independent risk factor of cardiovascular diseases. Although vascular calcification was commonly regarded as a passive process of mineral adsorption or precipitation, it tends to be an active process associated with the expression of growth factors, matrix proteins, and other bone-related proteins. There are 2 main types of vascular calcification. Intimal calcification is found in atherosclerotic plaques and is associated with the vascular events such as myocardial infarction. Medial calcification is usually associated with age and chronic kidney disease patients, which leads to increased vascular stiffness and reduced vascular compliance. Interestingly, our vascular calcification model using ApoE deficient mice showed intima calcification at sites of atherosclerotic plaques under high fat diet with ovariectomy. Thus, lipid metabolism is one of the therapeutic targets to prevent intima calcification of aorta. Previously we reported that ezetimibe significantly prevented atherosclerosis through lipid-lowering effects in ApoE-deficient mice. Based on these findings, we speculate that ezetimibe might prevent aortic intima calcification, which may give us the benefits to decrease vascular events.     

Quercetin attenuates vascular calcification by inhibiting oxidative stress and mitochondrial fission

Vascular calcification is a strong independent predictor of increased cardiovascular morbidity and mortality and has a high prevalence among patients with chronic kidney disease. The present study investigated the effects of quercetin on vascular calcification caused by oxidative stress and abnormal mitochondrial dynamics both in vitro and in vivo. Calcifying vascular smooth muscle cells (VSMCs) treated with inorganic phosphate (Pi) exhibited mitochondrial dysfunction, as demonstrated by decreased mitochondrial potential and ATP production. Disruption of mitochondrial structural integrity was also observed in a rat model of adenine-induced aortic calcification. Increased production of reactive oxygen species, enhanced expression and phosphorylation of Drp1, and excessive mitochondrial fragmentation were also observed in Pi-treated VSMCs. These effects were accompanied by mitochondria-dependent apoptotic events, including release of cytochrome c from the mitochondria into the cytosol and subsequent activation of caspase-3. Quercetin was shown to block Pi-induced apoptosis and calcification of VSMCs by inhibiting oxidative stress and decreasing mitochondrial fission by inhibiting the expression and phosphorylation of Drp1. Quercetin also significantly ameliorated adenine-induced aortic calcification in rats. In summary, our findings suggest that quercetin attenuates calcification by reducing apoptosis of VSMCs by blocking oxidative stress and inhibiting mitochondrial fission.