Effect of hexamethylene bisacetamide on human gastric cancer cell line SGC-7901

After the human gastric cancer cells SGC-7901 were cultured with 5 mM hexamethylene bisacetamide (HMBA) for 120 hr, cell growth was inhibited. The doubling time increased from 48 hr in untreated cells to 99.6 hr in HMBA-treated cells. The maximal increase in growth was 2.4-fold as compared to 6.4-fold in the untreated control. 3H-thymidine incorporation was inhibited by HMBA and the colony formation rate was reduced. There was concomitant decrease in carcino-embryonic antigen and beta-2 microglobulin as determined by radioimmuno-assay. Lactic dehydrogenase (LDH) and its isoenzyme assay revealed a marked increase in H-type LDH but the total enzyme activity was reduced. These results indicate that HMBA inhibits proliferation of SGC-7901 cells in vitro.     

RNAi抑制ALK1对人胃腺癌SGC-7901细胞增殖的影响

背景与目的:人活化素受体样激酶-1(activin receptor-like kinase-1,ALK1)可促进内皮细胞增殖,与肿瘤内血管生成密切相关.本研究采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制ALK1表达,观察抑制效果以及抑制ALK1表达后对人胃癌细胞增殖的影响.方法:设计3条靶向ALK1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),克隆到真核表达质粒pGenesil-1,转染人胃癌细胞株SGC-7901.分别采用Real-time PCR和Western blot技术检测胃癌细胞ALK1 mRNA及其蛋白表达的变化,并检测细胞周期及生长曲线.结果:与阴性对照相比,第3条ALK1干扰RNA在mRNA及蛋白水平均可明显下调ALK1基因表达,并抑制SGC-7901细胞增殖.结论:RNAi技术导致的ALK1表达下调并抑制胃癌细胞增殖,ALK1可作为胃癌抗肿瘤治疗的理想靶点.     

二十二碳六烯酸增加人胃癌细胞SGC-7901对多柔比星的敏感性

目的:本研究旨在探讨二十二碳六烯酸[docosahexaenoic acid (DHA),22:6 ω-3]逆转由多柔比星( adriamycin,ADR)引起的胃癌SGC-7901细胞的耐药性.方法:体外常规培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以DHA、ADR单药和DHA+ADR联合作用于细胞24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;倒置光学显微镜下观察细胞的形态;FCM法检测细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜以及高效液相色谱法检测细胞中ADR的蓄积情况;RT-PCR及蛋白质印迹法检测细胞中多药耐药蛋白(multidrug resistanceprotein,MDR) P-糖蛋白p-170的表达情况.结果:DHA与ADR联合作用于胃癌SGC-7901细胞后,DHA能够增加ADR对细胞的生长抑制作用;细胞形态观察发现死细胞明显增多;细胞凋亡率显著增加;细胞中的ADR蓄积量约增加2.1倍;细胞中p-170 mRNA以及蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:DHA能够增加胃癌细胞SGC-7901对ADR的敏感性,放大ADR的肿瘤杀伤作用.     

腺病毒介导p21WAF1/CIP1基因转移及诱导胃癌细胞凋亡

目的：探讨p21^WAF1/CIP1基因（p21基因）过表达对人胃癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响，进一步了解p21基因对肿瘤细胞的治疗作用。方法：通过腺病毒介导外源性p21基因转移到有p53基因突变的人胃癌细胞系SGC－7901，对p21基因的表达、细胞生长的抑制与投机和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果：外源性p21基因在靶细胞高水平表达显著抑制了胃癌细胞的生长和集落形成，流式细胞仪检测显示G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad-p21对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。结论；p21基因可能参与肿瘤细胞凋亡的诱导，使p21基因在肿瘤的基因治疗，特别是在与其他凋亡诱导因子联合作用的方案中有更好的应用前景。     

氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞株杀伤作用的实验研究

目的探讨氧化苦参碱（OM）对于人胃癌SGC-7901细胞株的杀伤作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测OM对人胃癌SGC-7901细胞株的杀伤作用。结果证实OM在浓度〉2mg／mL时对人胃癌SGC-7901细胞株具有杀伤作用,而当浓度〈1mg／mL则无明显的细胞毒性作用。结论OM对人胃癌SGC-7901细胞株具有剂量依赖性杀伤作用。     

转染bcl-2反义寡核苷酸增强5-FU诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡

目的　探讨转染bcl 2反义寡核苷酸 (ASODN)能否增强 5 氟脲嘧腚 (5 -FU)诱导胃癌细胞株SGC790 1的细胞凋亡。方法　通过脂质体转染bcl 2ASODN和对照序列 ,凋亡率由流式细胞仪检测。酶联免疫法 (ELISA)用于检测细胞内源性bcl 2蛋白的表达 ,以证实反义序列的特异性。结果　和对照ODN相比 ,转染bcl 2ASODN显著增强 5 FU诱导的细胞凋亡率 (P<0 .0 1)。ELISA法显示SGC790 1的内源性bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。结论　bcl 2ASODN能增强 5 FU诱导胃癌细胞的凋亡率 ,这将为胃癌治疗提供有用的实验室依据。     

氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

背景与目的：氧化苦参碱（oxymatrine,OM）是中药苦参的主要有效成分,具有抗纤维化、抗病毒等作用,对放疗和化疗后白细胞减少亦有一定提升作用,研究显示氧化苦参碱能一定程度杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞的侵袭,并可作为辅助抗癌药物用于临床。本研究旨在通过观察氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖和血管内皮生长因（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,探讨氧化苦参碱抗肿瘤的作用机制。方法：体外培养人胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法观察不同浓度和作用时间下氧化苦参碱对SGC-7901细胞的抑制情况;采用免疫组织化学法检测肿瘤细胞内VEGF蛋白的表达;RT-PCR法检测氧化苦参碱作用下SGC-7901细胞中VEGF mRNA的转录情况。结果：低质量浓度氧化苦参碱（0.5 mg/mL）对SGC-7901细胞增殖抑制作用不明显（P〉0.05）,但当其质量浓度达到1 mg/mL以上时,则能显著抑制细胞的增殖,抑制效应随着时间和浓度的增加呈逐渐增强,同时伴有癌细胞内VEGF mRNA转录和蛋白表达的降低（P〈0.05）。 结论：氧化苦参碱在体外能显著抑制SGC-7901细胞增殖,并能抑制VEGF基因的转录和表达,提示氧化苦参碱有抑制肿瘤血管生成的潜在作用。     

HDAC5对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

  目的   探讨HDAC5在胃癌细胞中的表达及其对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。  方法   通过Western blot检测HDAC5和Twist1在胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞中的表达。使用MTT及流式细胞术分别检测HDAC5和Twist1对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。  结果   HDAC5和Twist1在胃癌细胞株中的表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞（P < 0.05）。沉默HDAC5的表达可使胃癌SGC-7901细胞中Twist1表达降低,并抑制其增殖、促进凋亡;而过表达HDAC5作用相反（P < 0.05）。此外,沉默Twist1可抑制SGC-7901细胞的增殖、促进其凋亡（P < 0.05）。  结论   HDAC5可能通过上调Twist1的表达水平促进胃癌细胞的增殖、抑制凋亡,从而促进胃癌的发生发展。      

Survivin ASODN对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响

目的:观察Survivin基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对胃癌细胞增殖的影响。方法:靶向Survivin ASODN经脂质体介导转染胃癌细胞系SGC-7901,倒置显微镜和电镜观察转染后细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况;半定量RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达;免疫组化检测Survivin蛋白的变化情况;FCM检测细胞周期的变化。结果:转染ASODN后,细胞出现了形态学变化;MTT实验检测发现细胞株SGC-7901增殖受到显著抑制,抑制率达(69．2±0．76)％;RT-PCR检测发现Survivin基因mRNA水平表达显著下降,免疫组化试验发现蛋白表达也出现类似的结果;流式细胞仪检测发现G1期细胞比例增高,由对照组的66％和62．5％增至90．7％。结论:Survivin ASODN可以显著抑制Survivin的表达,抑制胃癌细胞增殖。     

放射诱导胃癌细胞的凋亡及其相关基因的研究

目的观察放射诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的作用，并进一步研究bcl-2基因及家族、bax基因、p53基因在此过程中的作用。方法用不同剂量的9 MeV β线照射SGC-7901细胞，观察细胞在受照后的不同时间生长情况。电子透射电镜下观察细胞形态变化。琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带变化。流式细胞仪检测受照前后细胞周期及凋亡率的变化。免疫细胞化学法检测受照前后bcl-2、bax、p53基因的表达水平。结果单次剂量照射后，SGC-7901细胞凋亡率与时间、剂量有相关性。在放射诱导SGC-7901细胞凋亡的过程中，bcl-2基因表达水平下降，bax基因表达水平升高，而p53基因表达水平无变化。结论放射能够诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡，凋亡率在72h达高峰。bcl-2及bax基因参与了放射诱导凋亡的调控。细胞凋亡主要是通过p53基因非依赖途径。     

Overexpression of the orotate phosphoribosyl-transferase gene enhances the effect of 5-fluorouracil on gastric cancer cell lines

OBJECTIVE: Orotate phosphoribosyl-transferase (OPRT) is the initial enzyme of the 5-fluorouracil (5-FU) metabolic pathway, converting 5-FU into 5-fluorouridinemonophosphate, which is the most important mechanism of 5-FU activation. We therefore investigated whether overexpression of the OPRT gene enhances sensitivity to 5-FU. METHODS: An expression vector of the OPRT gene (pTARGET-OPRT) was transfected into two gastric cancer cell lines, TMK-1 and MKN-45, with low baseline expression levels of OPRT. The sensitivity to and anti-tumor activity of 5-FU were then investigated in vitro and in vivo in these two transfected clones (TMK-OPRT and MKN-OPRT). RESULTS: Although cell growth was unaltered compared to parent cells, overexpression of the OPRT gene was confirmed by Western blotting in both the TMK-OPRT and MKN-OPRT cells. OPRT enzyme activity increased 38-fold in TMK-OPRT cells and 8.0 fold in MKN-OPRT cells compared to their parent cells. Interestingly, although the sensitivity to Adriamycin, cis-platinum, mitomycin C and paclitaxel was unaltered in the transfected clones, the sensitivity to 5-FU was increased 14.2- and 6.0-fold in TMK-OPRT and MKN-OPRT cells, respectively, compared to their parent cells. Moreover, enhanced sensitivity was also confirmed in the in vivo study. CONCLUSION: The results indicate that overexpression of the OPRT gene plays an important role in the antiproliferative effect of 5-FU and might therefore be a predictive factor of response to 5-FU in gastric cancer patients.     

转染FRZB基因对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响

背景与目的:FRZB(frizzled motif associated with bone development)是sFRP(secreted frizzled related protein)家族的成员,在胚胎发育过程中起重要作用。有文献报道FRZB的表达能抑制基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9表达而与前列腺癌的侵袭能力相关。本研究拟探讨FRZB基因对人胃癌SGC-7901细胞成瘤性和侵袭能力的影响,及其可能的机制。方法:构建FRZB真核表达载体并转染SGC-7901细胞,经G418筛选获得稳定表达克隆。用MTT法检测并绘制细胞增殖曲线,软琼脂培养和裸鼠皮下注射的体外和体内实验检测细胞成瘤性变化。用细胞免疫化学检测转染FRZB后细胞中MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达变化,体外侵袭和粘附实验检测细胞侵袭能力变化。结果:筛选稳定表达细胞株经定量PCR检测,FRZB表达显著提高。体内外实验证实,转染FRZB的细胞(SGC-7901/FRZB)生长抑制率约为60%,克隆形成能力和成瘤性减弱。免疫细胞化学显示MMP-2、MMP-7、MMP-9在细胞浆内的阳性表达降低或接近阴性,对细胞外基质成分(CollagenI、IV、Vitronectin、Fibronectin、Laminin)粘附能力均增高,比空载体转染对照组(SGC-7901/vector)增加12.8%、19.8%、59.8%、26.7%、15.2%,差异具有显著性(P<0.05),而空载体转染对照组与亲本细胞间差异无统计学意义(P>0.05)。SGC-7901、SGC-7901/vector和SGC-7901/FRZB细胞侵袭能力分别是每高倍视野55.90±5.68、54.80±6.97、6.60±2.63,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:FRZB高表达在体内体外均可抑制SGC-7901细胞的增殖、成瘤性和侵袭能力,具有肿瘤抑制基因的功能。FRZB抑制肿瘤细胞的生长和抑制MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达为抑癌功能相关机制之一。     

去甲斑蝥素对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其机制探讨

目的:探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD) 对人胃癌SGC-7901细胞系增殖的影响及其机制.方法:实验分NCTD 组和对照组,分别应用MTT、流式细胞术、光学显微镜和电子显微镜检测 NCTD 对体外培养的胃癌SGC-7901细胞的杀伤抑制率、细胞周期、凋亡和细胞形态学改变.结果: NCTD对SGC-7901 细胞增殖有抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量- 时间依赖关系.在实验组,流式细胞仪示SGC-7901 细胞的G2 M 期细胞明显增多,S 期细胞减少,凋亡率上升;光镜和电子显微镜下出现细胞固缩,胞膜突出,核碎裂和凋亡小体.结论: NCTD 能抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长;其机制可能与其抑制SGC-7901 细胞增殖、干扰增殖周期、抑制DNA 合成代谢、诱导细胞凋亡有关.     

去甲斑蝥素对人类胃癌SGC-7901细胞凋亡相关基因表达的影响

 目的 探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人类胃癌SGC-7901细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 实验分对照组、5-Fu组、NCTD 组和5-Fu+NCTD 组，分别应用MTT、流式细胞术、免疫组化SABC法检测NCTD 对体外培养胃癌SGC-7901细胞的杀伤抑制率、凋亡率和survivin、bcl-2、caspase-3的表达。结果　NCTD对人类胃癌SGC-7901 细胞生长有抑制作用，呈剂量- 时间效应关系；凋亡率由（8.30±1.49）%上升到（20.56±1.32）%；survivin基因表达由（86.57±4.39）%下降到（26.11±2.27）%；bcl-2基因表达由（85.35±3.25）%下降到（30.26±1.83）%；caspase-3基因表达由（54.49±3.07）%上升到（92.78±2.47）%；与5-Fu联合应用上述作用更明显。结论 NCTD能抑制人类胃癌SGC-7901细胞的生长；与5-Fu具有协同作用，其机制可能与其诱导细胞凋亡，影响凋亡相关基因表达有关。     

人胃癌SGC-7901细胞胞浆胞核性激素受体测定

 作者采用葡聚糖包被活性碳饱和分析法(DCC法)分别测定了培养的人胃低分化腺癌SGC-7901细胞的胞浆及胞核KCL抽提液中的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和雄激素受体(AR)的含量。 结果证明胃癌SGC-7901细胞的胞浆及胞核抽提液中ER含量为30.2和35.7fmol/mg蛋白，而PR的含量为20.3和22.7fmol/ng蛋白, 但AR均为阴性(<10fmol/mg蛋白), 这说明SGC-7901细胞为ER及PR阳性细胞, 其ER和PR在胞浆、胞核中均有分布。 提示胃癌可能为性激素依赖性肿瘤, 有内分泌治疗的可能。     

稳定转染Bcl-2 shRNA对胃癌细胞SGC-7901化疗敏感性的影响

目的:探讨稳定转染靶向Bcl-2基因的短发夹RNA(shRNA)对胃癌细胞株SGC-7901化疗敏感性的影响.方法:筛选出稳定转染Bcl-2 shRNA质粒的胃癌SGC-7901细胞株,将其与不同浓度的氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂(DDP)作用,未转染的细胞作为对照.RT-PCR法检测稳定转染前后SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达水平,MTT法检测5-FU或DDP的IC50,流式细胞仪分析细胞的凋亡率.结果:稳定转染shRNA的胃癌SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达明显下降;shRNA联合5-FU的IC50为(14.36±1.63)mg/L,对照组为(35.62±1.95)mg/L,t=2.57,P＜0.05;shRNA联合DDP的半数抑制浓度(IC50)为(2.53±0.46)mg/L,对照组为(6.89±0.52)mg/L,t=2.52,P＜0.05;流式细胞术检测显示,shRNA联合化疗明显提高SGC-7901细胞的凋亡率,t=2.60,P＜0.05.结论:稳定转染Bcl-2 shRNA的胃癌SGC-7901细胞株,其Bcl-2 mRNA的表达能够在较长时间内受到抑制,并提高对化疗药物5-FU及DDP的敏感性.     

蝙蝠葛酚性碱对胃癌细胞SGC-7901增殖作用的实验研究

目的测定蝙蝠葛酚性碱对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法 通过MTT法和台盼兰法,观察蝙蝠葛酚性碱在不同浓度,不同时间条件下,对胃癌细胞SGC-7901增殖作用的影响。结果 蝙蝠葛酚性碱能明显抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖关系,随浓度增大和作用时间延长其抑制率呈上升趋势。结论 蝙蝠葛酚性碱对胃癌可能具有一定治疗作用。     

塞来昔布对胃癌细胞生长抑制及诱导凋亡的实验研究

目的：研究塞来昔布对胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及诱导凋亡的作用。方法：12．5～100μM的塞来昔布处理胃癌细胞株SGC-7901 24小时后，用MTT法测定塞来昔布对胃癌细胞的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及MDRl表达水平。结果：12．5～100μM的塞来昔布对胃癌细胞均有抑制作用，首先表现为S期阻滞，继而出现细胞凋亡，且呈剂量依赖性。胃癌细胞MDRl表达水平在12．5μM药物浓度作用时MDRl表达上调，25～100μM药物浓度作用时MDRl表达水平明显下调，且随药物浓度的增高，MDRl表达水平逐渐下降。结论：塞来昔布通过诱导细胞凋亡对胃癌细胞具有明显抑制作用，同时塞来昔布具有下调胃癌细胞MDRl表达，逆转多药耐药性的作用，但在药物浓度较低时，则为上调MDRl表达。