巨噬细胞氧化修饰极低密度脂蛋白及Cu2+修饰的极低密度脂蛋白对单核细胞与内皮细胞粘附的影响

极低密度脂蛋白(VLDL)与小鼠腹腔巨噬细胞温育24小时和48小时后,其硫代巴比妥酸反应物质值明显高于无细胞对照组,琼脂糖电泳速度也加快,两者一致。结果说明小鼠腹腔巨噬细胞可以氧化修饰极低密度脂蛋白。VLDL在体外用Cu²⁺修饰后。硫代巴比妥酸反应物质明显增加,琼脂糖凝股电泳速度加快。比较正常的VLDL(n—VLDL)及Cu²⁺氧化的VLDL(Ox—VLDL)对内皮细胞粘附单核细胞的影响时,发现在所用各种浓度下,Ox—VLDL单核细胞的粘附率比n—VLDL组大得多(p<0.0001),说明VLDL被氧化后明显增加单核细胞与内皮细胞的粘附。     

氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡

探讨氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的作用。应用低温超速离心法分离健康人血浆极低密度脂蛋白，用CuCl2氧化得到氧化型极低密度脂蛋白。琼脂糖凝胶电泳观察巨噬细胞凋亡DNA断裂“梯状”图谱；流式细胞仪和二苯胺法分别测定凋亡巨噬细胞百分率和：DNA片断百分率；光镜观察凋亡巨噬细胞形态变化。结果发现：①氧化型极低密度脂蛋白能诱导巨噬细胞发生凋亡及DNA断裂；②抗氧化剂二甲基硫脲能部分抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的：DNA断裂；③核转录因子核因子kB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐可完全抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的DNA断裂。提示氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡可能是动脉粥样硬化形成机制之一；氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的作用可能与自由基和激活核因子kB有关。     

氧化低密度和极低密度脂蛋白对单核细胞血小板源性生长因子B链表达的影响

在单核细胞的培养基中分别加入２５ｍｇ·Ｌ￣（－１）低密度脂蛋白（ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＬ）、氧化ＬＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄＬＤＬ，ＯＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ｖｅｒｙｌｏｗｄｅｎｓｉｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＶＬＤＬ）和氧化极低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄＶＬＤＬ，ＯＶＬＤＬ），培养２４ｈ后再用无血浆脂蛋白培养基收集条件培养基，并观察此条件培养基对￣３Ｈ－ＴｄＲ投入血管壁平滑肌细胞ＤＮＡ的影响。用抗血小板源性生长因子Ｂ链抗体（抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体）作疫组织化学染色。结果表明，单核细胞能表达ＰＤＧＦＢ，ＯＬＤＬ和ＯＶＬＤＬ能明显地促进单核细胞ＰＤＧＦ－Ｂ的表达，其条件培养基亦能促进￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入平滑肌细胞ＤＮＡ内。上述结果提示，ＯＬＤＬ和ＯＶＬＤＬ通过加强单核细胞分泌ＰＤＧＦ－Ｂ并促进平滑肌细胞增殖而在动脉粥样硬化的发病过程中起作用。     

天然和氧化型极低密度脂蛋白对巨噬细胞胞内游离钙浓度的影响

为了更好地阐明极低密度脂蛋白，尤其是氧化型极低密度脂蛋白在动脉粥样硬化发病过程中的作用机制，本文利用双波长显微分光光度计，检测了天然和氧化型极低密度脂蛋白对巨噬细胞内游离钙浓度（Ｃａ＾２＋）的影响，结果表明，极低密度脂天蛋和氧化型极低密度脂蛋均能刺激巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ升高，极低密度脂蛋白可增加巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的５７％，而氧化型极低密度脂蛋白则增加巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的１１５％。这     

单核细胞及中性粒细胞与内皮细胞粘附的区别

为探讨单核细胞及中性粒细胞与肿瘤坏死因子－２诱导的内皮细胞粘附的区别,采用髓过氧化酶法测定白细胞与内皮细胞的粘附和抗粘附分子单克隆抗体对其粘附的影响,用酶联免疫法测定内皮细胞粘附分子的表达。结果表明,肿瘤坏死因子－α呈浓度依赖性地增加内皮细胞与中性粒细胞或单核细胞的粘附,并可诱导内皮细胞上粘附分子的表达增加。     

极低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白E基因表达的影响

为研究载脂蛋白Ｅ含量不同的极低密度脂蛋白对巨噬细胞载脂蛋白Ｅ表达的影响，以肝素－琼脂糖凝胶亲和层析法将正常人极低密度脂蛋白分离为富含载脂蛋白Ｅ和贫含载脂蛋白Ｅ的二种不同亚组分，并分别以不同浓度与小鼠腹腔巨噬细胞共培养。     

普伐他汀对氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人外周血单核细胞 …

目的：探讨普伐他汀对氧化修饰低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）诱导的人外周血单核细胞（ＰＢＭｓ）增殖、粘附和分泌功能的影响及其除调脂外的抗动脉粥样硬化（ＡＳ）作用。方法在体外分离培养人ＰＢＭｓ,经ｏｘＬＤＬ诱导后,观察不同浓度普伐他汀对其增殖,粘附分子ＣＤ１１ｂ水平及对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的粘附和分泌ＴＮＦ－α、ＩＬ－８的影响。结果普伐他汀呈浓度依赖方式抑制ｏｘＬＤＬ诱导的ＰＢＭｓ增殖、粘附和分     

氧化型低密度脂蛋白介导单核细胞与血管内皮细胞粘附的单细胞定量研究

利用细胞微管吸吮技术对单核细胞与血管内皮细胞间的粘附力行单细胞定量测量，以两种细胞间的临界分离应力Ｓｃ来表示细胞的粘附性。观察氧化型低密度脂蛋白对单核细胞与培养人脐静脉内皮细胞粘附的影响。结果显示：氧化型低密度脂蛋白可使内皮细胞对正常单核细胞的粘附性明显增大，其发生较缓慢，４ｈ达峰值并维持至２４ｈ以后。经氧化型低密度脂蛋白处理的内皮细胞对中性粒细胞的粘附性无明显提高。单核细胞和中性粒细胞经氧化型低密度脂蛋白处理后，对内皮细胞的粘附性均有迅速提高，１ｈ达峰值，２４ｈ内逐渐减弱。实验结果提示氧化型低密度脂蛋白可选择性地提高单核细胞与内皮细胞相互粘附性，这种选择性的促粘附作用进一步证明它在动脉粥样硬化发生、发展中起重要作用。     

软脂酸、油酸和极低密度脂蛋白对巨噬细胞内毒素敏感性的影响

目的观察软脂酸、油酸和极低密度脂蛋白（VLDL）对巨噬细胞内毒素敏感性的影响。方法以小鼠巨噬细胞株RAW264．7为研究对象,分别以4种不同浓度软脂酸、油酸和VLDL干预后,用100ng／ml内毒素刺激细胞株,放射免疫法测定不同时点上清液TNFa水平;免疫细胞法观察0．125mmo/L软脂酸和油酸,7．5mmol／L VLDL对该细胞NFκB活性的影响。结果软脂酸、油酸和VLDL干预24h可使100ng／ml内毒素刺激后RAW264．7细胞生成的TNFα水平不同程度的增高,并且与3种脂质的浓度呈一定依赖性。软脂酸、油酸和VLDL干预24h还可使基础状态下RAW264．7细胞核NFκB阳性率显著增加。结论软脂酸、油酸、VLDL均能不同程度地增强巨噬细胞内毒素敏感性,此现象可能与这些脂质可诱导巨噬细胞NFκB活化有关。     

内源性高甘油三酯血症患者体内存在氧化型低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白

为探讨内源性高甘油三酯血症患者体内密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生氧化修饰，对２５例内源性高甘油三酯血症患者与２５例年龄性别相匹配的下沉人的血糖、血脂、载脂蛋白及脂过氧化物进行了分析，并对其血浆低密度脂蛋白、极代旨蛋白及高密度脂蛋白的电泳移率、２３４ｎｍ光吸收和硫代巴比妥酸反应物质含量的改变     

内源性高甘油三酯血症患者体内存在氧化型低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白

为探讨内源性高甘油三酯血症患者体内低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生氧化修饰，对25例内源性高甘油三酯血症患者与25例年龄性别相匹配的正常人的血糖、血脂、载脂蛋白及脂过氧化物进行了分析，并对其血浆低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白的电泳迁移率、234nm光吸收和硫代巴比妥酸反应物质含量的改变进行了测定。结果表明，内源性高甘油三酯血症患者血浆甘油三酯、脂过氧化物和载脂蛋白B100、CⅢ、CⅢ及E显著升高（P＜0．01），高密度脂蛋白和载脂蛋白AⅠ显著降低（P＜0．01），低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白电泳迁移率均较正常人相应脂蛋白的迁移率增加，234nm光吸收及硫代巴比妥酸反应物质含量均显著增加（P＜0．01）。说明内源性高甘油三酯血症患者不仅血浆低密度脂蛋白、而且极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白均发生了氧化修饰。     

氧化型和正常极低密度脂蛋白对猪主动脉平滑肌细胞脂类堆积的不同影响

为了观察氧化型及正常极低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞内脂类堆积的不同影响，探索平滑肌细胞摄取氧化型极低密度脂蛋白的受体途径，用２００ｍｇ／Ｌ的氧化型及正常极低密度脂蛋白与猪主动脉平滑肌细胞温有４８ｈ后，细胞内甘油三脂含量分别为对照组的３．２倍和１０．６倍（Ｐ〈０．０１），且两个实验组之间相比，差异也有显著性意义（Ｐ〈０．０１），细胞内总胆固醇明显升高（Ｐ〈０．０５），但是两个实验组之间无显著差异（Ｐ     

氧化型和正常极低密度脂蛋白对猪主动脉平滑肌细胞脂类堆积的不同影响

为了观察氧化型及正常极低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞内脂类堆积的不同影响，探索平滑肌细胞摄取氧化型极低密度脂蛋白的受体途径，用200mg/L的氧化型及正常极低密度脂蛋白与猪主动脉平滑肌细胞温育48h后，细胞内甘油三酯含量分别为对照组的3．2倍和10．6倍（P〈0．01），且两个实验组之间相比，差异也有显著性意义（P＜0．01）；细胞内总胆固醇明显升高（P＜0．05）．但是两个实验组之间无显著差异（P＞0．05）。荧光素异硫氰酸酯标记的氧化型极低密度脂蛋白结合试验表明；平滑队细胞可通过低亲和力受体途径可饱和性地摄取完整的氧化型极低密度脂蛋白（Kd＝48．82mg／L，Bmax＝2067μg／g）。与正常极低密度脂蛋白相比（Kd＝37．17mg／L，Bmax＝2596μg／g），Kd值升高，Bmax值减小。竞争抑制实验表明，氧化型极低密度脂蛋白、正常极低密度脂蛋白及正常低密度脂蛋白均对荧光素异硫氰酸酯标记的氧化型极低密度脂蛋白的结合摄取表现出明显的竞争作用（50％），而乙酰化低密度脂蛋白仅能抑制10％。提示氧化型极低密度脂蛋白通过低密度脂蛋白受体和／或极低密度脂蛋白受体途径进入平滑肌细胞。     

金雀异黄素对低密度脂蛋白氧化修饰及氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞c-myc mRNA表达的抑制作用

为探讨大豆异黄酮（金雀异黄素和大豆甙元）在防止低密度脂蛋白氧化方面的作用以及对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞原癌基因c-myc表达的影响，采用Cu^2 介导的低密度脂蛋白体外氧化方法，通过测定硫代巴比妥酸反应物质生成和琼脂糖电泳迁移率的变化来观察大豆异黄酮对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用；采用Northern blot杂交技术，分析氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞c-myc原癌基因mRNA表达的作用以及金雀异黄素对此表达的影响。结果发现，金雀异黄素能够浓度依赖性减少硫代巴比妥酸反应物质生成，降低低密度脂蛋白的相对电泳迁移率（P＜0．05）；氧化型低密度脂蛋白（200mg/L)刺激人脐静脉内皮细胞c-myc mRNA在1－2h内表达增高，表达量为对照水平的3倍，4h回到对照水平以下；金雀异黄素（100μmol/L）能有效抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的c-myc mRNA表达增高。以上结果提示，金雀异黄素不仅能防止低密度脂蛋白发生氧化，而且能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞c-myc mRNA表过增高。     

抗极低密度脂蛋白受体多克隆抗体的制备及鉴定

为制备抗极低密度脂蛋白受体的多克隆抗体，以极低密度脂蛋白受体配体结合域上特定片段的合成肽免疫新西兰家兔，收集免疫前后动物的血清，通过酶联免疫吸附法及免疫印迹法对血清中抗体进行分析和鉴定。结果发现，已获得高效价的抗极低密度脂蛋白受体血清，可利用免疫印迹法检测人、鼠组织和细胞中的天然极低密度脂蛋白受体及其亚型的蛋白。此结果提示，抗极低密度脂蛋白受体多克隆抗体的制备为从蛋白水平研究极低密度脂蛋白受体提供了有效的工具。     

白藜三醇对人低密度脂蛋白氧化修饰的影响

为探讨白藜三醇的抗脂质氧化作用及其可能机制，采用Ｃｕ＾２＋和２，２’－盐酸脒基丙烷两种不同的氧化体系诱导下沉人低密度脂蛋白的氧化反应，应用硫代巴比妥酸法测定低密度脂蛋白氧化过程中硫代巴比妥酸反应物质和氧化型低密度脂蛋白的相对电泳迁移率的变化。结果发现５０μｍｏｌ／Ｌ白藜三醇可使Ｃｕ＾２＋介导的低密度脂蛋白氧化反应明显减弱，其硫代巴比妥酸反应物质和相对电泳迁移率分别下降７０．５％和４２．３％（Ｐ〈０     

内源性高甘油三酯血症患者血浆极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白对血凝及纤维蛋白溶解的影响

研究内源性高甘油三酯血症患者血浆极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生了氧化修饰及其对凝血及纤维蛋白溶解活性的影响。对 2 1例内源性高甘油三酯血症患者与 2 1例年龄性别相近的正常人的血脂、脂质过氧化物进行了分析。用一次性密度梯度超速离心法分离血浆极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白。测定这 3种脂蛋白的 2 34nm吸光度、相对电泳迁移率和硫代巴比妥酸反应物质含量。分别将这 3种脂蛋白加入由正常人新鲜混合血浆构成的反应系统中 ,按试剂盒分别测定凝血酶原时间、活化部分凝血酶原时间、组织型纤溶酶原激活物活性及纤溶酶原激活物抑制剂 1活性。内源性高甘油三酯血症患者血浆甘油三酯含量平均升高 2 .73倍 ,高密度脂蛋白胆固醇下降 1.71倍 ,同时硫代巴比妥酸反应物质含量升高 1.2 2倍 ;内源性高甘油三酯血症组极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白的 2 34nm吸光度、相对电泳迁移率和硫代巴比妥酸反应物质含量均较对照组显著增加 (P <0 .0 1) ,表明内源性高甘油三酯血症患者血浆极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白均发生了氧化修饰 ,生成了氧化极低密度脂蛋白、氧化低密度脂蛋白及氧化高密度脂蛋白。凝血酶原时间及活化部分凝血酶原时间在分别加入内