供血浆者人巨细胞病毒中和抗体的流行病学调查

目的了解我国山东、安徽及黑龙江省部分地区供血浆者人巨细胞病毒中和抗体效价的流行病学状况,为人巨细胞病毒特异性免疫球蛋白的研制提供科学依据。方法采用微量细胞病变中和试验方法,检测794份供血浆者血浆人巨细胞病毒中和抗体效价水平。结果 794份健康人血浆巨细胞病毒中和抗体效价主要分布在1∶8~1∶64,约71.7%供血浆者HCMV中和抗体效价高于1∶8;其中效价≥1∶181占0.38%,效价≥1∶45约占15%。结论通过筛选高中和效价血浆制备人巨细胞病毒特异性免疫球蛋白切实可行。     

获得高效价甲型H1N1流感病毒抗体原料血浆初探

目的探讨从免疫供血浆者获得高效价甲型H1N1流感病毒抗体血浆,为制备人甲型H1N1流感免疫球蛋白和重症患者临床使用提供依据。方法用批签法核准的市场供应甲型H1N1流感疫苗对1947名供血浆者按规定免疫后第2、4、6周收集血浆并采用血凝抑制试验进行检测。结果经检测供血浆者抗体效价≥10以上达到99.2%,其中≥320—10240达到48.4%。结论供血浆者经一次甲型H1N1流感疫苗免疫后收集高效价甲流抗体血浆用于制备特异性免疫球蛋白或供重症患者临床使用是可行的。     

人巨细胞病毒中和抗体快速微量检测方法的建立及应用

目的建立具有较好试验重复性的人巨细胞病毒中和抗体快速微量检测方法。方法建立快速微量中和试验方法,用于健康人血浆及IVIG中的CMV中和抗体效价检测。结果用该方法检测336份健康人血浆,其中CMV中和抗体效价≥1∶128的比例为28.1%;检测27批"蓉生静丙"和9批国内其它厂家IVIG的CMV中和抗体效价,其CMV中和抗体效价的GMTs分别为1∶498和1∶485。结论建立了快速、简便、检测通量高、重复性较好的快速微量中和试验方法,为CMV-IVIG的研制提供了可供选择的血浆筛选方法。     

获得高效价人破伤风抗体原料血浆免疫方法的探讨

目的探讨从免疫供血浆者获得高效价人破伤风抗体(抗TT)的免疫程序和免疫剂量,收集符合制备人破伤风免疫球蛋白标准的原料血浆。方法对适龄健康供血浆者按抗TT效价进行分组,对抗TT阴性供血浆者(抗TT<10mIU/ml)采用同一剂量吸附破伤风疫苗不同免疫程序进行免疫;对抗TT阳性供血浆者(抗TT≥10mIU/ml)采用不同剂量吸附破伤风疫苗和不同免疫程序进行免疫。采用ELISA定量检测其抗TT效价水平。抗TT效价≥8IU/ml的原料血浆可用于制备人破伤风免疫球蛋白[1]。结果抗TT阴性供血浆者组别相同剂量疫苗不同免疫程序产生高效价抗TT的比率差异无显著意义;抗TT阳性供血浆者组内免疫间隔短的组产生高效价人抗TT的比率明显高于免疫间隔长的组别;40IU剂量组抗TT持续>8IU/ml的比率高于20IU剂量组。结论采用40IU吸附破伤风疫苗,0、4周免疫抗TT阳性供血浆者可获得高效价抗TT原料血浆。     

高效价抗巨细胞病毒免疫球蛋白的制备与临床应用

巨细胞病毒(CMV)感染相当广泛。新生儿中,大约有1%先天性(即通过胎盘)感染了 CMV。人群中可查出抗体的比例,随着年龄的增长而增加,在成人中高达50—80%。在正常情况下,尽管 CMV 感染不会引起疾病,但在某些情况下,潜伏性 CMV可被激活,引起一些临床综合征,严重者甚至危及生命,尤其常见于器官移植如肾移植、骨髓移植等。因此,近年来利用蛋白分离技术与免疫学相结合,制备出了高效价抗 CMV免疫球蛋白(CMVIG)并应用于临床。现综述如下。     

特异性高效价腺病毒中和抗体血浆抗体滴度消长性研究

目的:明确经筛选出的特异性高效价腺病毒中和抗体血浆的保存效果,观察特异性高效价腺病毒中和抗体血浆冰冻保存前后抗体滴度的变化,进一步指导优化特异性腺病毒高效价中和抗体血浆的临床使用.方法:在健康献血者中运用分泌型碱性磷酸酶报告腺病毒微量中和检测法筛选出的特异性高效价腺病毒中和抗体血浆,经过常规-20℃保存1年后,再次运用...     

抗铜绿假单胞菌IgY的制备优化及抑菌效果

目的探讨高效价、高纯度且生物活性好的抗铜绿假单胞菌(PA)的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备工艺。方法采用超声破碎、共振裂解、研磨破碎等方法裂解PA,筛选出最佳裂解抗原,然后将裂解抗原或经甲醛灭活的全菌抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡;采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的IgY抗体效价变化;通过硫酸铵盐析,超滤法纯化抗体,并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法(SDS-PAGE)和二喹啉甲酸(BCA)法测定抗体纯度和浓度,平板法评价IgY对PA的抑菌效果,并以蒸馏水作为对照;扫描电镜法检测细菌形态变化。结果超声破碎法裂解的PA抗原浓度最高且蛋白条带最为完整;0.5mL的1×109CFU/mL灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高,可高达1∶25 600;硫酸铵沉淀,超滤纯化后的抗体纯度可达94%,浓度为27.02mg/mL;IgY体外抑菌试验表明,2.7mg的抗体能明显抑制PA生长,与蒸馏水对照组相比,IgY试验组菌落数减少了9/10,并且明显抑制了细菌绿色色素的产生;扫描电镜观察IgY试验组菌体较长、较大且皱缩。结论采用灭活全菌免疫母鸡,经水稀释、硫酸铵沉淀、超滤纯化的制备方法可得到高纯度和高效价的抗PA IgY,所制抗体具有特异性和显著抑菌活性。     

一种检测人破伤风免疫血浆特异性抗体的快速准确方法

目的筛选出快速准确、经济实用的定量检测破伤风免疫血浆中特异性抗体效价的检测方法。方法分别用MTNT法、Rubin双扩法、ELISA法检测10个样品的抗体效价,分析比较3种方法的优缺点,筛选出实用的方法。结果1~10号样品MTNT法抗体检测效价分别为16.45、8.00、6.45、3.05、8.05、20.90、8.10、12.00、5.05、3.15I U/ml;2、5、7号样品符合国家的最低效价要求,作为工作参比品;ELISA法结果比MTNT法结果平均高8.7%,具有可比性;ELISA试剂盒精密性平均为4.69%,质量较为稳定。结论ELISA法的结果与MTNT法呈正相关关系,优于Rubin双扩法,适用于筛选高效价的人破伤风免疫血浆。     

a-N-乙酰半乳糖胺酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定

目的制备a-N-乙酰半乳糖胺酶(NAGA)的高效价高特异性的兔多克隆抗体。方法利用pET22b-NA-GA/BL21(DE3)工程菌株表达NAGA,经Ni2+Sepharose 6 FF亲合层析,Phenyl Sepharose 6 FF疏水层析两步纯化,得到纯度95%的NAGA作为抗原免疫新西兰白兔,获得NAGA的兔抗血清,并经HiTrap rProtein A柱纯化获得高效价高特异性的抗体;用间接ELISA法检测抗体效价,用Western blotting评价抗体特异性。结果制备得到的NAGA兔多克隆抗体血清效价为1×106,经过rProtein A柱纯化后抗体蛋白纯度95%,效价为1×105;Western blotting显示:该NAGA兔多克隆抗体只与NAGA发生特异性反应。结论获得了NAGA的高效价高特异性的兔多克隆抗体。     

GCIP-27多克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备GCIP-27多克隆抗体，为GCIP-27的作用机制研究以及进一步的GCIP特异性免疫药物的研发提供重要的实验材料。方法：以含GCIP-27的融合蛋白凝胶为抗原免疫兔子，ELISA和Western blot分别检测多克隆抗体的效价和特异性。结果：3只动物中1只产生了高效价的抗血清，另2只产生的效价较低。GCIP-27多克隆抗体效价为1：10240，能与GCIP-27特异性结合。结论：用含GCIP-27的融合蛋白凝胶免疫兔子可有效地诱导免疫动物产生GCIP-27特异性抗体，为GCIP-27深入研究奠定了基础。