活血化瘀注射液(HHI-Ⅰ)对TNF-α诱发大鼠肺微血管内皮细胞黏附分子mRNA表达的影响

[目的]从调节白细胞内皮细胞过度黏附角度研究活血化瘀中药的作用机制.[方法]体外培养肺微血管内皮细胞,RT-PCR方法观察活血化瘀注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱发的体外培养大鼠肺微血管内皮细胞E-选择素、P-选择素、细胞间黏附分子ICAM-1 mRNA表达的影响.[结果]肺微血管内皮细胞与含TNF-α培养基共同孵育后,可显著增加内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA表达,在培养基中加入活血化瘀注射液含药血清后,则内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA过度表达被明显抑制.[结论]抑制内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA过度表达是活血化瘀重要的作用机制之一.     

活血化瘀注射液-I号对细胞因子体外诱发大鼠肺微血管内皮细胞E-选择素、P-选择素及细胞间黏附分子-1表达的影响

近年研究证明血管内皮细胞表达的黏附分子在炎症性疾病的发病过程中对白细胞与血管壁内皮细胞黏附、经内皮迁移及向组织浸润起了关键作用。内皮细胞黏附分子过度表达在多发性损伤、脓毒血症及多脏器功能不全的发生发展中起重要作用。肺损害在急性重症胰腺炎(SAP)时极为常见，在多器官     

新清开灵注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤微血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的:观察培养的大鼠脑缺血再灌注损伤微血管内皮细胞体外黏附分子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的变化,探讨新清开灵注射液阻抑脑缺血炎症反应的作用途径。方法:采用分离脑微血管段并消化的方法体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法(Kreb液,95%N2 5%CO2)模拟缺血再灌注损伤,分别采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法半定量检测黏附分子ICAM-1、VCAM-1的蛋白mRNA表达和mRNA转录水平。结果:与正常组比较,模型组ICAM-1、VCAM-1的蛋白和mRNA表达均明显增高(P<0.05);与模型组比较,清开灵组显著降低其蛋白表达和VCAM-1 mRNA转录水平(P<0.05);新清开灵注射液对ICAM-1和VCAM-1的蛋白和mRNA表达都有明显的抑制作用(P<0.05)。结论:新清开灵注射液通过干预黏附分子表达而阻抑脑缺血损伤炎症反应。     

调节白细胞内皮细胞黏附的活血化瘀中药的多靶点筛选

白细胞在严重感染、创伤、胰腺炎等导致的全身性炎症反应综合征(SIRS)、多脏器功能衰竭(MOF)以及缺血再灌注(I/R)损伤(心肌梗死、脑卒中)中的作用越来越受到重视.     

活血注射液对人单核-血管内皮细胞黏附及黏附分子表达的影响

目的 观察活血注射液对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL )诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 的细胞间黏附分子-1(ICAM-1) 和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1)的表达及对人单核细胞黏附作用的影响。     

高糖对人脑微血管内皮细胞黏附分子表达的影响及在内毒形成中的作用

目的:观察高糖环境下人脑微血管内皮细胞(HBMEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的变化,探讨其在内毒形成中的作用。方法:以培养HBMEC作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入无水葡萄糖制备细胞损伤模型。采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测高糖环境下细胞的活性;采用免疫细胞化学染色方法检测黏附分子ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达。结果:高糖作用24、48、72h时,与正常对照组比较活性显著降低,ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达水平也均明显升高(P<0.01),并呈剂量、时间依赖性。结论:高糖对HBMEC有显著的损伤作用,黏附分子表达升高在糖尿病微血管病变早期可能起主要作用,其动态变化和毒性效应体现了内毒形成及作用过程。     

灯盏细辛总咖啡酸酯对TNF-α诱导脑微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:研究灯盏细辛中总咖啡酸酯(total Caffeoyl quinic acid ester,Caf)对离体培养的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMEC)细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)基因与蛋白表达的影响,初步探讨Caf抗脑缺血炎症损伤的机制。方法:采用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)建立离体培养的大鼠BMEC炎症损伤模型,选用25μg/mL Caf处理内皮细胞,利用Real time RT-PCR方法检测实验各组ICAM-1mRNA表达,流式细胞仪测定实验各组ICAM-1蛋白荧光强度。结果:Caf可以下调TNF-α诱导的内皮细胞ICAM-1mRNA高表达,并抑制TNF-α诱导的内皮细胞膜ICAM-1蛋白高表达。结论:Caf可以降低由TNF-α诱导的内皮细胞过度表达ICAM-1,可能是其发挥抗脑缺血炎症损伤的部分机制。     

苦碟子注射液对人脑微血管内皮细胞高糖损伤后核因子-κB及黏附分子表达的影响

目的:观察苦碟子注射液对高糖损伤后人脑微血管内皮细胞(HBMEC)核因子-κB(NF-κB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达的影响,探讨中风病毒损脑络病机假说的现代生物学内涵。方法:以培养HBMEC作为靶细胞,用无水葡萄糖制备细胞损伤模型。采用MTT法检细胞的活性;采用免疫细胞化学法和图像定量分析系统观察NF-κB、ICAM-1与VCAM-1蛋白表达的变化。结果:高糖作用24、72h,与同一时间正常对照组比较,高糖组可明显增加NF-κB蛋白在人脑脏微血管内皮细胞的表达(P<0.01)。苦碟子注射液能降低NF-κB、ICAM-1与VCAM-1蛋白的表达,其中10、5、2.5%浓度组保护作用显著(P<0.01)。结论:NF-κB的激活可能为高糖损伤内皮细胞的始动因素之一,其动态变化及与黏附分子相关的毒性效应体现了内毒形成及作用过程。苦碟子注射液能够减少核转录因子与黏附分子的表达,对人脑微血管细胞具有保护作用,为依据毒损脑络病机假说所提治法在临床应用提供了生物学佐证。     

生化汤对血瘀证大鼠血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的:研究生化汤对血瘀证血管内皮细胞黏附分子表达的影响。方法:采用免疫组织化学和RT-PCR二种方法观察生化汤不同剂量(高、中、低)对血瘀证(大鼠)血管细胞黏附分子(VCAM-1)、血管内皮细胞胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血小板-内皮细胞黏附分子(PECAM-1)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。结果:模型组VCAM-1、ICAM-1、PECAM-1、iNOS高表达,生化汤能减少造模动物VCAM-1、ICAM-1、PECAM-1、iNOS的表达,而且随着药物剂量的减少,各分子表达呈递增趋势,具有量效关系。结论:生化汤能降低血瘀证大鼠血管内皮细胞黏附分子表达,且量效关系明显。     

过氧化氢对人血管内皮细胞表面黏附分子的影响

目的观察过氧化氢(H2O2)对人血管内皮细胞表面黏附分子(ICAM-1)表达的影响。方法采用人源血管内皮细胞株,用低、中、高浓度H2O2刺激内皮细胞24 h,TRIZOL法提取细胞总RNA,采用半定量RT-PCR技术测定各组细胞中ICAM-1的表达,用紫外线凝胶成像分析系统对电泳图像进行吸光度扫描,以待测终产物与内参照吸光度的比值表示其相对含量。结果不同浓度H2O2刺激血管内皮细胞,其ICAM-1表达较正常组明显提高,且中浓度诱导在一定范围内可能已经达到了最高值。结论H2O2能引起ICAM-1的表达增强,从而推测H2O2可能通过刺激ICAM-1的表达而引起动脉粥样硬化。     

黄芪多糖对缺氧再复氧后人心脏微血管内皮细胞ICAM-1 VCAM-1表达的影响

目的:观察黄芪多糖对缺氧再复氧损伤的人心脏微血管内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白表达的影响。方法:以体外缺氧缺糖模拟体内缺血,复氧复糖模拟再灌注复制缺血再灌注损伤模型;采用免疫细胞化学法和图象定量分析系统观察ICAM-1、VCAM-1蛋白表达的变化。结果:人心脏微血管内皮细胞复苏48~72h后呈铺路石样生长,在15个细胞倍增周期内,其形态、生物、生理学特性稳定。与正常对照组比较,缺氧再复氧可明显增加ICAM-1、VCAM-1蛋白在人心脏微血管内皮细胞的表达(P<0.01)。黄芪多糖能降低两者的表达,其中100μg/mL抑制ICAM-1表达的作用显著(P<0.05),100、50μg/mL减少VCAM-1表达的作用明显(P<0.01)。结论:黄芪多糖通过减少缺血再灌注损伤的人心脏微血管内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的表达,抑制白细胞的浸润,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。     

黄连素对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血脑区细胞黏附分子表达的影响

目的:观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血脑区细胞间黏附分子-1(ICAM-1)以及P-选择素(P-selectin)的表达和黄连素对两者的影响。方法:将36只大鼠随机分为3组:假手术组,模型组,给药组。给药组分别于栓塞前15 min和栓塞后2 h,再灌注时ip给黄连素30 mg.kg-1;模型组和假手术组ip等量生理盐水。采用大脑中动脉线栓法制作大脑局灶缺血再灌注模型。再灌注24 h后取脑,应用免疫组化方法检测ICAM-1和P-selectin的表达。结果:黄连素能够显著降低缺血再灌注引起的脑梗死体积以及脑组织ICAM-1,P-selectin的表达增高(P<0.05)。其中梗死体积从25%降至17%;ICAM-1阳性细胞百分率从平均65%降至35%;P-selectin从平均60%降至30%。结论:黄连素能够通过脑缺血再灌注炎性反应的免疫调节机制保护脑缺血再灌注引起的损害。     

活血化瘀注射液I号对大鼠高血压性血-脑屏障破坏的保护作用

[目的]探讨活血化瘀注射液I号(HHI-I)对大鼠高血压性血-脑屏障破坏的保护作用。[方法]将大鼠随机分为6组,10只/组:空白对照组(不作任何处理),高血压模型组(股静脉内注射苯肾上腺素后不治疗),低、中、高剂量给药组(静脉内注射1.5%、3.0%、6.0%浓度的HHI-I,2mL/kg,和治疗对照组(以生理盐水代替HHI-I)。各组动物按设计分组处理,60min后股静脉内注射伊文思蓝,再5min后给予苯肾上腺素,30min后处死动物取脑组织标本,测定伊文思蓝(EB)含量。[结果]模型组血-脑通透性明显增加,与正常组比较P<0.05;生理盐水未使增高的通透性降低,而3个剂量的HHI-I均能使通透性明显降低,P均<0.05。[结论]HHI-I对大鼠高血压性血-脑通透性破坏有明显保护作用。     

黄芪多糖促进中性粒细胞与血管内皮细胞黏附及相关黏附分子表达

目的 观察黄芪多糖对中性粒细胞与血管内皮细胞黏附作用及相关黏附分子表达的影响,以探讨黄芪托毒生肌作用与其对伤口愈合中炎症反应作用的关系。方法 以黄芪多糖或黄芪多糖加白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF)处理人中性粒细胞(PMN)或人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,用蛋白染料染色法研究黄芪多糖对PMN与HUVEC黏附的作用,用Cell—ELISA、APAAP法研究黄芪多糖对细胞表面黏附分子表达的影响。结果 黄芪多糖作用于HUVEC能明显促进其与PMN的黏附,而作用于PMN未见其作用增强。黄芪多糖与IL-1共同处理HUVEC,能促进IL-1诱导的PMN与HUVEC的黏附增强,且能增加由IL-1、TNF诱导的HUVEC表达黏附分子ICAM-1的表达;黄芪多糖处理PMN后对黏附分子CD18的表达无作用。结论 黄芪多糖可通过促进内皮细胞表面ICAM-1的表达而促进中性粒细胞与内皮细胞的黏附,促进伤口愈合中的炎症反应,这可能是黄芪托毒生肌作用的生物学基础之一。     

黄芩苷对高糖培养条件下内皮细胞粘附分子水平的影响

目的：研究黄芩苷对高糖条件下人脐静脉血管内皮细胞株（CRL1730）细胞粘附分子水平的影响。方法：CRL1730细胞常规培养传代,在不同糖浓度培养基（5.5mmol/L、30mmol/L）、黄芩苷（50mg/L、100mg/L、200mg/L）条件下培养48h。酶联免疫吸附法测sICAM-1、sVCAM-1。结果：黄芩苷能抑制高糖导致的内皮细胞粘附分子增高。结论：黄芩苷对高糖状态下CRL1730细胞sICAM-1、sVCAM-1的增高具有抑制作用,其原因可能与其抑制炎症反应等因素有关。     

元安颗粒对慢性心力衰竭大鼠心肌组织黏附分子表达的影响

目的探讨元安颗粒对慢性心力衰竭（CHF）大鼠心肌组织黏附分子表达的影响,研究其可能的作用机制。方法采用结扎WKY大鼠冠状动脉前降支法造成心肌梗死后形成CHF大鼠模型。观察心肌细胞病理变化。用ELISA法检测血清中心肌组织黏附分子表达情况。结果给药4周后,各组治疗前后比较,元安颗粒高、中、低剂量组与卡托普利组均能够降低血清中心肌组织黏附分子表达,差异有统计学意义,其中元安颗粒高剂量组疗效显著。结论元安颗粒是治疗CHF的有效方药。     

大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定

目的:探索纯度较高、相对经济简便的大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法。方法:取1～10 d SD大鼠脑皮质经胰蛋白酶消化后,通过不同孔径的筛网过滤,再用胶原酶2次消化获得的微血管内皮细胞进行培养,采用相差显微镜形态学观察及Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定。结果:1～2 d细胞呈区域性单层贴壁生长,7～9 d呈典型的铺路卵石样征象,Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达阳性,可见细胞的胞浆及核周呈棕黄色,胞核呈阴性,阳性细胞占绝大部分。结论:采用2次消化、2次过滤技术可以成功分离培养出较理想的大鼠脑微血管内皮细胞。     

通心络干预的脑微血管内皮细胞条件液对大鼠脑皮层神经元的影响

目的：观察通心络干预的脑微血管内皮细胞条件培养液对大鼠脑皮层神经元氧化应激反应的影响,探讨通心络在脑微血管内皮细胞缺血损伤状态下保护神经元的机制。方法：首先制备4种大鼠脑微血管内皮细胞（BMEC）条件培养液：①正常BMEC条件液（N-CM）;②正常BMEC加通心络药物血清条件液（NT-CM）;③拟缺血损伤BMEC条件液（I-CM）;④损伤BMEC加通心络药物血清条件液（IT-CM）。将它们分别作用于正常和糖氧剥夺损伤（拟缺血）的大鼠皮层神经元后,测定神经元活性、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果：①I-CM可使正常神经元的活性和SOD活力下降,MDA含量增加;与I-CM相比,IT-CM可提高神经元活性和SOD活力,降低MDA的含量。②与正常神经元比较,拟缺血神经元活性和SOD活力明显下降,MDA含量增加;I-CM进一步使拟缺血损伤神经元的活力下降;NT-CM和IT-CM在一定程度上可阻抑损伤神经元活性和SOD活力的下降,并降低MDA含量。结论：大鼠脑微血管内皮细胞损伤后可能造成其旁分泌功能紊乱,进一步导致神经元的损伤。通心络可能通过调节内皮细胞的旁分泌功能保护神经元,该保护作用与减少神经元的氧化应激有关。     

心脑通抑制内皮细胞和血小板表达粘附分子

目的：探讨心脑通过培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和血小板表达粘附分子的影响。方法：用流式细胞仪检测肿瘤坏死因子（TNF－α）诱导人脐静脉内皮细胞ICAM－I和凝血酶诱导人血小板P－选择素的表达。结果：HUVEC经过TNF－α处理后,ICAM－I表达明显增加,在TNF－α处理前,用心脑通（0．25－2g/L)处理HUVEC,则心脑通可剂量依赖性地抑制TNF－α的作用。相同剂量的心脑通处理人血小板后,也可抑制凝血酶诱导的人血小板表达P－选择素。结论：心脑通可抑制内皮细胞和血小板表达粘附分子。