牛血清白蛋白的阳离子化及其在原位免疫复合物型肾炎模型制备中的应用

提高牛血清白蛋白（C-BSA）的等电点，能诱发原位免疫复合物型的肾炎，机制已有证实。C-BSA通过注射进入动物体内可以种植于肾小球的基底膜（GBM），并且与带阴性电荷的GBM发生沉积反应而诱发肾炎。本实验设计并优化了稳定阳离子化牛血清白蛋白的合成方法，并初步验证了应用该产物建立原位复合物型肾炎模型。     

实验性肾炎肾皮质TXA2—PGI2平衡失调与肾小球病理变化的关系

本文用阳离子化牛血清白蛋白制作大鼠原位性肾炎模型，观察血栓素Ａ２－前列环素平衡的变化及与肾小球病理变化的关系。将模型动物随机分成２组，分别腹腔内注射Ｄａｚｏｘｉｂｅｎ，蒸馏水，共注射２周。结果显示，大鼠免疫２周后，肾皮质ＴＸＢ２升高，６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α降低，尿蛋白量增加。４周后上述改变加重伴血小板聚焦强度增大。治疗组大鼠肾皮质ＴＸＢ２降低，６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＴ１α升高，ＴＸＢ２／６－Ｋｅｔｏ     

IgG对补体介导的免疫复合物溶解能力的影响及其在肾脏疾病治疗中的意义

本文观察不同浓度人IgG对补体介导的免疫复合物溶解能力(Complement-mediated immune complex solubilizig capacity,CMSC)的影响。对照组为人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)以及PBS,所用复合物为BSA-抗BSA。结果证实IgG及HSA浓度增高对正常血清的CMSC有抑制作用;BSA可促使免疫复合物(Immune complex,IC)解离,但浓度超过10g/L,BSA-抗BSA复合物的溶解率也随之下降。作者认为用大剂量免疫球蛋白治疗IC介导的肾脏疾病,尚需对其适应症和剂量作进一步研究。     

实验性肾炎肾皮质TXA_2－PGI_2平衡失调与肾小球病理变化的关系

本文用阳离子化牛血清白蛋白制作大鼠原位性肾炎模型，观察血栓素Ａ＿２前列环素平衡的变化及与肾小球病理变化的关系。将模型动物随机分成２组，分别腹腔内注射Ｄａｚｏｘｉｂｅｎ、蒸馏水，共注射２周。结果显示，大鼠免疫２周后，肾皮质ＴＸＢ＿２升高，６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿１α降低，尿蛋白量增加。４周后上述改变加重伴血小板聚集强度增大。治疗组大鼠肾皮质ＴＸＢ＿２降低，６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿１α升高，ＴＸＢ＿２／６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿１α比值降低，血小板聚集强度减弱，肾小球足突融合部分缓解，ＧＢＭ中电子致密物有溶解吸收迹象。统计处理提示，尿蛋白与ＴＸＢ＿２呈正相关（ｒ＝０．７８４４），与６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿１α呈负相关（ｒ＝－０．７１６３）。表明原位性肾炎大鼠肾皮质存在着ＴＸＡ＿２－ＰＧＩ＿２平衡失调，肾小球病理变化与ＴＸＡ＿２－ＰＧＩ＿２平衡失调有关。     

血清补体防止免疫复合物沉淀作用的研究

长期以来,人们偏重于补体与免疫复合物结合后的消极致病作用而忽视了补体也具有加速免疫复合物清除,防止复合物致密的主动作用。1980年,Schifferli发现并在同年的国际免疫学会议上报道了补体的一种新功能。即当存在新鲜血清补体时。牛血清白蛋白(BSA)和相应抗体所形成的免疫复合物不会发生沉淀,而破坏补体后(56℃,30分钟灭活或EDTA等处理血清)则免疫复合物发生沉淀。     

荧光素与牛血清白蛋白相互作用物的荧光光谱及测试应用

研究了荧光素与牛血清白蛋白（BSA）相互作用的荧光光谱及其最佳测试条件和影响因素。在pH2．2，荧光素-牛血清白蛋白复合物的荧光强度最大，其激发波长（Ex）为467nm，发射波长（Em）为515nm。在BSA1．8～500mg／L范围内，该复合物荧光强度与BSA浓度成线性关系，F：25．776C＋2．8082，r=0．9999。该法简单、快速、灵敏、稳定、成本低。     

阴离子化高分子包覆非病毒载体提高有血清环境下RNA干扰效率的研究

大多数阳离子化高分子载体在血清环境中会大量吸附血清蛋白而导致转染效率低下,因而难以应用于临床。设计合成羧基化葡聚糖(Dex-COOH)和羧基化葡聚糖修饰富勒烯(C60-Dex-COOH)两种阴离子化高分子,并将其包覆在精胺化普鲁兰(Ps)与siRNA形成的复合物(PS/siRNA)外层,以减少复合物对血清蛋白的吸附。采用DLS/ELS检测阴离子包覆前后复合物的颗粒粒径及Zeta电位;用QCM-D验证阴离子包覆层的形成,并评价包覆层对牛血清白蛋白(BSA)吸附的影响;同时应用cck-8试剂、流式细胞术,检测包覆前后及不同包覆比例下复合物的细胞毒性、进入细胞的情况及对Hela-EGFP细胞的干扰效率。结果表明,Dex-COOH与C60-Dex-COOH能够在PS/siRNA外部形成稳定的负电性包覆层,有效阻止BSA的吸附,并在无血清的条件下显著降低复合物的细胞毒性;在有血清的环境中,表面包覆了阴离子化高分子的复合物可以不受血清蛋白的影响而被细胞大量摄取。对包覆了C60-Dex-COOH的PS/siRNA复合物转染组施加光照,可促使复合物从溶酶体中逃逸,将血清条件下PS/siRNA的干扰效率提高20%。该策略可有效提高阳离子化高分子载体介导的RNA干扰效率。     

甲基强的松龙对免疫复合物型肾炎大鼠细胞外基质的影响

目的：观察甲基强的松龙治疗免疫复合物型肾炎大鼠后肾小球细胞外基质成份的变化及其与PAI-1含量改变的关系及该药的效果。方法：以阳离子化小牛血清白蛋白（C-BSA）诱导的肾炎大鼠模型，以ELISA方法检测不同疗程组的大鼠肾组织中的FN、LN的含量，发色底物法检测肾组织中PAI-1含量变化，并以24小时尿蛋白定量评价甲基强的松龙的治疗作用。结果：模型组大鼠肾组织的FN、LN及PAI-1含量较正常组显著升高，且FN、LN与PAI-1的含量呈正相关关系，肾小球系膜基质轻、中度增生；经甲基强的松龙治疗1周及2周后，治疗组的FN、LN及PAI-1含量较模型组明显下降，肾小球系膜基质增生不同程度减轻，但未达到正常组水平；治疗后大鼠尿蛋白含量显著降低。结论：免疫复合物肾炎大鼠细胞外基质积聚与PAI-1含量升高密切相关，甲基强的松龙可能通过干扰PA／PAI-1系统而影响细胞外基质积聚并达到治疗作用。     

抗多胺(polyamine)单克隆抗体的制备及临床应用的研究——Ⅰ.抗精脒(Spermidine)单克隆抗体的制备

用碳二亚胺作为接合剂,致精脒-牛血清白蛋白缩合剂制成人工抗原(Spd-BSA),以此复合抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫脾细胞与Sp2/0-Ag-14(Sp2)细胞进行融合实验。经酶联免疫测定法(ELISA)和14-G-精脒放射免疫分析法筛选,获得5个分泌抗SpD单     

Heymann肾炎致病性抗原Gp330的提取及其致病性研究

目的：制备Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎精细致病性抗原Ｇｐ３３０并复制人类膜性肾小球肾炎的动物模型。方法：用超速离心和钙沉降方法获取ＳＤ大鼠刷状缘微绒毛。用ＬＣＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析方法分离纯化Ｈｅｙｍａｎｎ抗原。用多点免疫方法获得抗体并免疫ＳＤ大鼠复制Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎模型。结果：获取了Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎的精细抗原Ｇｐ３３０并成功地用其抗体免疫ＳＤ大鼠，使其肾小球基底膜有免疫复合物沉积并产生大量蛋白尿。结论：Ｇｐ３３０是一种复制人类膜性肾小球肾炎模型的新抗原。     

四环素人工抗原的合成与鉴定

目的:对牛血清白蛋白进行羧基化和四环素的衍生化,制备更高偶联比的四环素(TC)-牛血清白蛋白(BSA)偶联物并进行鉴定.方法:四环素通过两步衍生化后,形成一种活泼的重氮化中间产物,与羧基化的BSA上的表位羧基反应,合成TC-BSA偶联物.结果:HPLC-MASS图谱鉴定表明成功的制备了四环素衍生物,红外及紫外扫描图谱表明,偶联成功,计算得偶联比分别为7:1和11:1. 结论:BSA经过羧基化后的偶联效果明显好于未经羧基化的BSA,并成功制备了TC-BSA人工抗原.     

肾小球肾炎肾组织中HBV感染的标志

为了解肾组织中ＨＢＶＤＮＡ与ＨＢＶ抗原存在的关系，探讨肾组织中ＨＢＶ抗原的来源及其与病理变化的关系，我们检测２４６例肾炎肾组织中三种ＨＢＶ抗原。发现除肾小球沉积外，肾小管常有阳性表达。肾小管ＨＢｃＡｇ阳性率达２１．５４％，高于肾小球（１０．９８％）。有１８例肾组织经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测ＨＢＶＤＮＡ，１５例阳性者中１４例肾组织ＨＢＶ抗原同时阳性，１２例血清感染标志亦阳性。结果提示某些肾炎可能与肾组织感染ＨＢＶ相关，肾组织中出现的ＨＢＶ抗原抗体免疫复合物除来自血循环外，有肾源性──原位形成的可能。     

甲基对氧磷人工抗原的合成及鉴定

目的 合成甲基对氧磷（M1600）人工抗原。方法 用醋酸-锌粉盐酸还原对氧磷，制备氨基甲基对氧磷，重氮化法使氨基甲基对氧磷与牛血清白蛋白（BSA）及中国鲎血蓝蛋白（TTH）偶合，合成人工抗原M1600-BSA、M1600TTH。结果M1600-BSA免疫新西兰兔10周后，双向琼脂扩散试验和间接ELISA检测，证明得到了高价且具有较好特异性的多抗血清，结论 成功地合成了甲基对氧磷人工抗原，为其免疫分析法的建立提供了条件。     

应用酶联免疫法检测组织工程骨牛血清白蛋白残余量的实验研究

目的 检测常规体外构建的组织工程骨中牛血清白蛋白残余量,并探讨减少其残留量的方法.方法 体外分离培养人骨髓基质干细胞,取第2代细胞(P2)接种于完全脱钙骨支架材料并成骨诱导培养2周,体外构建组织工程骨.成骨诱导液为含10％胎牛血清的条件培养液,并于检测前1天更换为无血清的条件培养液.待测组织工程骨先经1∶100 (v∶v)生理盐水浸洗3次,然后加入磷酸盐缓冲液(PBS),37℃振荡浸提24 h,获取浸提液.同法获取未接种细胞的单纯支架材料的浸提液作为对照组.采用酶联免疫法检测样品浸提液中牛血清白蛋白的残余量,比较两者牛血清白蛋白残余量的差异.结果 经生理盐水洗涤3次后,洗涤液中的牛血清白蛋白含量明显降低.酶联免疫法测定的组织工程骨与单纯支架材料的牛血清白蛋白残余量分别为(15.57±5.82)ng和(14.85±5.06)ng,单位重量的牛血清白蛋白残余量分别为(0.254±0.088)ng/mg和(0.306±0.079)ng/mg,两组相比均无显著性差异(P＞ 0.05,n=10).结论 酶联免疫法适用于组织工程骨中牛血清白蛋白残余量的检测.因为支架材料较细胞更易吸附牛血清白蛋白,现有条件下构建的组织工程骨牛血清白蛋白残余量仍然较高,需要继续探索降低其残余含量的新方法.     

抗原斑点试验:一种检测抗体的高度敏感试验

作者用重氮苯甲氧基甲基纸(diazob-enzyloxy methyl,DBM)和硝基纤维素纸吸附ng量的抗原,用来检查相应的抗体,其敏感性与RIA或ELISA接近。同一纸片上可吸附多种抗原用于检出不同抗体。作者试用了多种抗原,即卵清蛋白,伴清蛋白,牛血清白蛋白(BSA),鲸肌红蛋白,     

凝聚IgG及其在循环免疫复合物检测中的应用

自从Dixon等清楚地证明了在动物慢性或急性实验性血清病中,由于抗原过剩而形成的可溶性免疫复合物沉积于血管壁,确认可能与肾炎、关节炎等的发病有关以来,人们对免疫复合物病的研究给予了高度重视。迄今己经证明免疫复合物在类风湿性关节炎、混合冷球蛋白疾病、系统性红斑狼疮、     

Heymann肾炎发病机制的实验研究

Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎发病机制的实验研究王迎伟，张建民，王晓红Ｈｅｖｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）是大鼠免疫复合物（ＩＣ）性肾小球疾病。过去认为，ＨＮ属循环ＩＣ（ＣＩＣ）沉积所致。世近年研究表明，ＨＮ的发病与肾内ＩＣ原位形成有关。据此，我们进行了下列实验，现将结果...     

抗槲皮素抗体的研制

目的 通过人工抗原的构建,制备针对槲皮互泊特异性抗体。方法 采用混合酸酐法合成的槲皮素卵清蛋白结合物作为包被抗原,将槲皮素与载体蛋白牛血清白蛋白（ＢＳＡ）结合,制成人工抗原,用人工抗原免疫家兔,制备了针对桷皮素的特异性抗体,并用双向琼脂扩散试验和ＥＬＩＳＡ方法对抗体进行了鉴定。ＩＲ,ＵＶ,ＴＬＣ和熔点分析表明,中间体结合物为新的化合物。结果 理想的包被抗原浓度为４００ｎｇ／ｍｌ,相应抗血清工作浓度     

薄盖灵芝治疗家兔实验性膜性肾小球肾炎的实验研究

膜性肾小球肾炎是成人肾病综合征的常见原因,本病为原位免疫复合物性疾病,有自发缓解趋势,约有半数病人发生肾病综合征,10～15年后死亡或发展为终末期肾。现一般认为免疫抑制剂     

利用金葡菌A蛋白的一种循环免疫复合物新测定法

作者介绍了一种循环免疫复合物的新测定法:用聚乙二醇(6.000)将血清中的免疫复合物沉淀,并使其吸附于富含A蛋白的金葡菌(Cowan Ⅰ株)上,再用~(125)I标记的A蛋白与之结合。具体方法如下。金葡菌悬液:用PBA(pH7.2 PBS,含0.5％牛血清白蛋白,0.1％迭氮钠)将热毙并经甲醛处理的Cowan Ⅰ株配成1％(v/v)悬液。 A蛋白的标记:50μg(50μl)A蛋白加