表皮生长因子及其抗体对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响

在原代培养中添加大豆胰蛋白酶抑制剂，成功地建立了一株新的人胰腺癌细胞系ＰＣ一７。该细胞系经形态学和生物学研究证实为人胰腺癌细胞系。染色体核型分析和流式细胞ＤＮＡ含量分析表明ＰＣ一７细胞系为低二倍体。应用此细胞系建成的裸鼠移植瘤模型，观察表皮生长因子（ＥＧＦ）及其抗体（抗一ＥＧＦ）对裸鼠移植瘤生长的影响，发现ＥＧＦ组和抗一ＥＧＦ组分别是对照组肿瘤重量的１３８％和６７％。组织学和超微结构研究表明：ＥＧＦ组的核分裂明显多于对照组，而抗一ＥＧＦ组则少于对照组．结果表明ＥＧＦ促进ＰＣ一７裸鼠移植瘤的生长，而抗一ＥＧＦ抗体可部分地抑制ＰＣ一７移植瘤的生长。     

PLA801肺癌细胞系在裸鼠致瘤前后EGF－R表达水平的变化

ＰＬＡ８０１肺癌细胞系在裸鼠致瘤前后ＥＧＦ－Ｒ表达水平的变化刘志国，尤涵，任新玲，贾卫，苏丽，金伯泉（西安第四军医大学学员四大队西安西京医院呼吸内科西安免疫学教研室，西安７１００３２）表皮生长因子受体（ＥＧＦ－Ｒ）广泛表达于上皮源性恶性肿瘤，如乳腺癌...     

人肺癌细胞中生长因子的自泌循环和癌基因表达

用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ核酸杂交技术对４个人肺癌细胞系进行了表皮生长因子（ＥＧＦ）、转化生长因子α（ＴＧＦα）以及表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的基因表达研究，发现这些肺癌细胞系中均有ＥＧＦ和ＴＧＦ＿α的基因表达，３／４中亦有ＥＧＦＲ的基因表达。这些癌细胞系中自泌的生长因子作用于自身的ＥＧＦ受体形成的自泌循环，不断刺激其自身的增殖，这可能是癌细胞无休止生长的主要原因之一。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ核酸杂交结果还表明：在这４个肺癌细胞系中，无ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的细胞系中有大量的ＥＧＦ和ＴＧＦα的基因表达。用ＥＧＬ抗ＥＧＦ和抗ＥＧＦＲ抗体处理这些人肺癌细胞系，抗ＥＧＦ和抗ＥＧＦＲ抗体在一定程度上可抑制其增殖，这也说明这些癌细胞中生长因子自泌环路的存在。     

多抗F（ab＇）_2－ELISA测定人血清抗TG－Ab_2及意义

为了克服单抗测定甲状腺球蛋白独特型抗体（抗ＴＧ－Ａｂ＿２）的局限性，便于常规检测，我们建立了兔抗ＴＧ多克隆抗体的Ｆ（ａｂ＇）＿２－ＥＬＩＳＡ测定人血清中的抗ＴＧ－Ａｂ＿２．结果其抗ＴＧ－Ａｂ＿２阳性率：甲亢（Ｇｒａｖｅ＇３）为９．９％（７／７１），桥本氏甲状腺炎为４４．４％（４／９），甲状腺瘤为１６．７％（３／１８），ＳＬＥ为９．５％（４／４２），类风湿性关节炎为０％（０／３２），正常人为０％（０／３５）。     

一种N端缺失的rhGM-CSF(7～127)在大肠杆菌中的表达与调控

在ｈＧＭ－ＣＳＦ结构与功能研究的基础之上，通过应用ＰＣＲ介导的缺失与突变和基因重组等技术，构建了表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的三种原核表达载体ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＧＡ，ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＡＡ和ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ。在三种载体内，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）ｃＤＮＡ的５′端均缺失６个氨基酸，３′端则分别为天然终止密码ＴＧＡ，突变终止密码ＴＡＡ和ＴＧＡ加３′ＵＴＲ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明三种载体表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的水平分别为２１％，１８．８％和２５％。经过用ＰＣｇｅｎｅ软件和Ｚｕｌｃｅｒ算法分析ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）－３′ＵＴＲｍＲＮＡ的二级结构，表明３′ＵＴＲ在终止密码ＴＧＡ附近形成两个茎－环结构，它可能与ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ载体高表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）有关。表达产物ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）经弱阴离子ＤＥＡＥ交换层析纯化后，纯度达到９２％，比活性为８×１０７Ｕ／ｍｇ。     

多抗F（ab‘）2—ELISA测定人血清抗TG—Ab2及意义

为了克服单抗测定甲状腺球蛋白独特型抗体的局限性，便于常规检测，我们建立了兔抗ＴＧ多克隆抗体的Ｆ（ａｂ）２－ＥＬＩＳＡ测定人血清中的ＴＧ－Ａｂ２。结果其抗ＴＧ－Ａｂ２阳性率；甲亢为９．９％，桥本氏甲状腺炎为４４．４％，甲状腺瘤为１６．７％，ＳＬＥ为９．５％，类风湿性关节炎为０％，正常人为０％。     

抗人VEGF的单克隆抗体对乳腺癌生长及转移的影响

目的用具有中和活性的抗人血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）单抗进行抑瘤动物实验，探讨ＶＥＧＦ在肿瘤生长及转移中的作用。方法采用杂交瘤技术制备抗ＶＥＧＦ的单抗，经亲和层析纯化单抗，在ＩＶＴ２ＭＡ－８９１津白ＩＩ小鼠自发乳腺癌伴肺转移动物模型中进行实验研究。结果Ｄ７、Ｅ５、Ｇ１、Ｃ５、Ｄ１１及Ｈ５６株单抗都能显著地抑制肿瘤的肺转移，对肺转移灶数的抑制率分别为４４％，４５％，６２％，７０％，７２％和７４％。对肺转移灶大小的抑制率为７９％～１００％。其中Ｄ７、Ｃ５、Ｇ１、Ｄ１１４株单抗也能明显地抑制原发瘤的生长。其抑制率分别为４１％，４６％，５３％和８３％。结论ＶＥＧＦ单抗能阻断肿瘤血管的形成，显著地抑制原发瘤的生长和转移，在肿瘤的治疗中显示出潜在的应用价值。     

LN,DNA—P,SOD与EGF放免测定在中西医结合治疗鼠移植瘤中的 …

探讨ＬＮ、ＤＮＡ－Ｐ、ＳＯＤ与ＥＧＦ在用中西医结合治疗肿瘤时的含量变化的意义。有用４０只昆明小鼠，在右前肢腋部皮下种植瘤细胞形成实体瘤。随机分成４组，每组１０只，分别用当归、环磷酰胺、当归合并环磷胺和生理盐水（对照组）加以治疗。疗程结束后测量瘤体大小和抑制率并测定血和瘤组织中ＬＮ、ＤＮＡ－Ｐ、ＳＯＤ和ＥＧＦ含量。当归合并环磷酰胺治疗组，移植瘤体明显减小，肿瘤抑制率最大（达８８．７％）；血和瘤组织中     

人乳头状瘤病毒18型E6E7基因诱导人胚食管上皮永生化

目的为研究病毒和肿瘤的关系,用人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１８型Ｅ６Ｅ７基因感染胎儿食管上皮,建立一株新的人食管上皮永生化细胞株（ＳＨＥＥ）。方法ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７腺病毒伴随病毒（ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ））载体的构建;胚胎食管组织培养,ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ感染,继续培养传代。用光镜、电镜检查其形态;聚合酶链反应（ＰＣＲ）、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）检查该病毒片段;用软琼脂培养和裸鼠接种检查致瘤性。结果经过长时间的传代培养,ＳＨＥＥ的表型仍保留原代上皮细胞培养的特征,表现为单层生长和锚锭依赖性生长,在软琼脂培养不形成克隆,接种裸鼠未成瘤。ＳＨＥＥ细胞系电镜检查可见张力原纤维,免疫组织化学检查细胞角质蛋白阳性,证实为鳞状上皮来源。ＦＩＳＨ和ＰＣＲ检测显示有ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因。结论用ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因建立食管上皮永生化细胞株ＳＨＥＥ,支持ＨＰＶ１８可能和食管癌病因有关的观点,可进一步用以研究食管癌的病因和发病机制。     

内源性E2,EGFR,PCNA在大肠癌中作用及其相互关系

目的：明确内源性雌激素（Ｅ２）和相生长因（ＥＧＦＲ）在大肠癌中的作用及相互关系，方法；免疫组化检测４８例大肠癌内源性Ｅ２ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ的表达。结果：内源性Ｅ２阳性２９（６０．４％）例，其阳性细胞平均百分率为４１．１％，与肿瘤淋巴结转移呈负相关（Ｐ〈０．０５），ＥＧＦＲ过表达３２（６６．７％）例，ＰＣＮＡ增殖指数高，且两者均与肿瘤淋巴结转移呈正相关（Ｐ〈０．０５），内源性Ｅ２阳性细胞百分率与ＥＧ     

人乳头瘤病毒16型E6E7 ORF转化作用的研究

构建了含人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）－Ｅ６Ｅ７ＯＲＦｓ（ｎｔ８３－８５５）片段和ＨＰＶ１６长控制区（ＬＣＲ）加Ｅ６Ｅ７ＯＲＦｓ片段（ｎｔ７００７－７９０４／０－８７９）的逆转录病毒载体ｐＨ２１和ｐＨ１８质粒，利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ分别将它们导入病毒包装细胞ｐＡ３１７中，经过筛选获得Ｇ４１８抗性的病毒包装细胞，产生的重组病毒Ｈ２１和Ｈ１８感染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞都具有恶性细胞的形态学特征，并能在裸鼠体内形成肿瘤。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果证明，上述两基因片段都整合到细胞基因组中。本实验结果说明ＨＰＶ１６－Ｅ６Ｅ７基因片段是ＨＰＶ１６转化ＮＩＨ３Ｔ３细胞的关键早期区，其自身ＬＣＲ区在该转化过程中没有显示出重要作用。     

转化生长因子-α、表皮生长因子受体与胃癌发生的关系及其与增殖细胞核抗原的相关性分析

目的研究在胃癌发生的不同阶段转化生长因子－α（ＴＧＦ－α）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的表达情况及与增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的关系。方法应用免疫组化ＬＳＡＢ法。结果（１）ＴＧＦ－α在癌周正常粘膜、肠化生组织中的表达明显高于非癌正常粘膜及肠化生（Ｐ＜０．０１）。（２）ＥＧＦＲ在肠化生、不典型增生粘膜表达较正常、癌组织明显升高（Ｐ＜０．０１）。（３）ＴＧＦ－α、ＥＧＦＲ共同表达常伴不典型增生。（４）ＴＧＦ－α、ＥＧＦＲ表达与ＰＣＮＡ表达有明显的相关性。（５）ＴＧＦ－α、ＥＧＦＲ、ＰＣＮＡ表达与肿瘤外侵、淋巴结转移无关。结论ＥＧＦＲ／ＴＧＦ－α是胃癌前病变的一项有意义的标志，结合ＰＣ－ＮＡ监测高危人群可能有助于发现早期胃癌。     

LN、DNA-P、SOD与EGF放免测定在中西医结合治疗鼠移植瘤中的价值

探讨ＬＮ、ＤＮＡ－ Ｐ、ＳＯＤ与ＥＧＦ在用中西医结合治疗肿瘤时的含量变化的意义。采用４０ 只昆明小鼠, 在右前肢腋部皮下种植瘤细胞形成实体瘤。随机分成４ 组, 每组１０ 只, 分别用当归、环磷酰胺、当归合并环磷胺和生理盐水（ 对照组） 加以治疗。疗程结束后测量瘤体大小和抑制率并测定血和瘤组织中ＬＮ、ＤＮＡ－ Ｐ、ＳＯＤ和ＥＧＦ含量。当归合并环磷酰胺治疗组, 移植瘤体明显减小, 肿瘤抑制率最大（ 达８８ ．７ ％ ） ;血和瘤组织中ＬＮ、ＤＮＡ－ Ｐ显著降低,ＳＯＤ、ＥＧＦ 显著增高。以上变化比单用当归或环磷酰胺或生理盐水治疗组的效果更加明显。当归是一种有效的具有协同抗癌作用的中药;肿瘤标志物ＬＮ、ＤＮＡ－ Ｐ、ＳＯＤ和ＥＧＦ可以反映肿瘤治疗效果。     

胰腺癌相关抗原PCA_2－Ag的酶联免疫分析

应用建立的单克隆抗体ＰＣＡ_２的ＥＬＩＳＡ结合抑制法对５０名正常人，３１例经手术病理证实的胰腺癌，１７例急性胰腺炎和８例慢性胰腺炎进行检测。结果表明，单抗ＰＣＡ_２所对应的抗原（ＰＣＡ_２－Ａｇ）在胰腺癌患者血清中的平均含量显著高于正常对照组（Ｐ＜０．００１）。ＰＣＡ_２－Ａｇ诊断胰腺癌的灵敏度为７７．４％，特异性为９５．７％。ＰＣＡ_２－Ａｇ与ＣＡ１９－９、ＣＥＡ联合检测可提高胰腺癌的正确诊断率。ＰＣＡ_２－Ａｇ的检测对胰腺癌具有一定的诊断价值。     

p53、c-erbB-2、PCNA和EGFR在膀胱癌中过表达及其意义

目的：研究癌基因和抑癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌中异常表达与病理分级、临床分期、复发和预后的关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检查１１７例膀胱移行细胞癌组织中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ的表达水平。结果：１１７例膀胱移行细胞癌中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ阳性表达率分别为４７．０％、２９．９％、５３．８％和４８．７％。ｐ５３和ＰＣＮＡ阳性表达产物定位于肿瘤细胞核内，ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达产物定位于细胞膜上，ＥＧＦＲ阳性表达产物定位于细胞膜或细胞浆内。结果表明ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达与膀胱癌的分级、分期、复发及术后生存率等之间有统计学意义。结论：ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达有助于评估膀胱癌预后，多基因异常表达作为预后评价指标更有意义。     

含胸苷激酶的不同细胞对丙氧鸟苷敏感性的差别及死亡途径初探

目的 探讨含单纯疮疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因细胞对丙氧鸟苷（ＧＣＶ）敏感度不均一的原因以及在ＧＣＶ作用下细胞被杀伤的途径－坏死或凋亡。方法 将表达ＨＳＶ－ＴＫ基因的重组逆转录病毒载体,分别直接导入生长速度不同的３个系统系,胰腺癌细胞系（ＰＣ－２,ＰＣ－７）和猪肾小管上皮细胞系（ＬＩＣ－ＰＫ１）,计算机染肖后细胞倍增时间,ＭＴＴ法检测５０％细胞生长受抑制时的ＧＣＶ浓度（ＩＣ５０值）;     

单抗TIGTC-Ⅲ片段F(ab′)_2的制备及其放射免疫显像研究

目的：将抗人原发性肝癌（ＰＬＣ）单抗ＴＩＧＴＣⅢ,用胃蛋白酶法消化成Ｆ（ａｂ′）２片段,标记１３１Ｉ后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究。方法：采用胃蛋白酶消化法,进行裸鼠体内核素显像。结果：消化产率为３１７％±２４％,经细胞结合实验证明Ｆ（ａｂ′）２具有良好的免疫活性,抗体片段进入裸鼠体内后,与完整抗体比,进入肿瘤的速度快,生物学分布特异性高,定位指数上升,血清本底下降迅速,生物半衰期明显缩短。结论：Ｆ（ａｂ′）２与全抗体比较可使成像时间提前,定位清晰     

Egr-1启动子基因调控FLT3配基基因表达的实验研究

目的 探索辐诱导基因调控序列启动造血生长因子基因表达及观察其对造血恢复的作用。方法 本实验将逞有Ｅｇｒ－１调控序列启动的ＦＬＴ３配基（ＦＬ）和ＥＧＦＰ双以子基因表达载体（Ｅｇｒ－ＥＦ）转染骨髓基质细胞系ＨＦＣＬ（称ＨＦＣＬ／ＥＦ）,用ＲＴ－ＰＣＲ鉴定细胞内目的基因的ｍＲＮＡ表达,采用ＦＡＣＳ观察ＥＧＦＰ绿色荧光表达的阳悸细胞;用ＥＬＩＳＡ方法检测ＨＦＣＬ／ＥＦ细胞培养上清ＦＬ的含量;观察ＨＦＣＬ／     

GSTM1基因内三核苷酸重复序列长度多态与肝癌遗传易感性…

为探讨谷胱甘肽－Ｓ－转移酶Ｍ１基因５＇端非编码区ＣＧＧ三核苷酸重复序列长度多态与肝癌遗传易感性的关系，采用ＰＣＲ－ＰＡＵＧＥ－ＤＮＡ银染方法，对６５例肝癌患者和１０６例健康对照的研究表明，病例组和对照组ＣＧＧ拷贝数小于６者，分别占４９．２３％和７．５５％，两组差异显著（Ｐ〈０．０００１）。ＯＲ值为１１．８８，ＥＦ值为０．４５０９。提示ＣＧＧ拷贝数小于６者，患肝癌的危险性增加１０．８８倍，由ＣＧＧ拷     

人胰腺癌裸鼠移植瘤浸润和转移方式的研究

为了探讨胰头癌浸润及转移规律，我们用自建的三株人胰头癌裸鼠移植瘤，接咱在鼠背部、腹腔及抓垫皮下。结果表明：三株移植瘤背部接种均以局部浸润为主，可经淋巴疲乏转移至局部淋巴结（ＰＣＴ－３转移率为３３％；ＰＣＴ－４为４０％；ＰＣＴ－５为３３％），无远处淋巴结和（或）脏器转移；腹腔接种及抓垫接种与背部皮下接种结果相似。肿瘤的生长速度和浸润及转移的能力与肿瘤分化程度有一定关系。