约束参数Gabor滤波器及细胞分割

对活细胞进行精确计数，是体外抗病毒试验中测定药物抗病毒效果的重要手段。在进一步研究分析Gabor滤波器和所要分割的细胞图像特征的基础上，提出了带约束参数的Gabor滤波器，即根据Heisenberg测不准原理，用频域中高斯核的标准差来约束空域中高斯核的标准差；进而用标准差来约束Gabor滤波器中的中心频率的取值范围，达到提高效率和精度的目的。将带约束参数的Gabor滤波器用于细胞图像的增强，进而获得更高精度的分割和计数结果。对采集到的细胞图像进行大量实验，准确率达98．8％。     

长春花碱和细胞松驰素D对肝癌细胞粘弹性的影响

用微管吸吮技术测定了正常肝细胞和肝实质细胞癌细胞的粘弹性，以三参数标准线性固体模型拟实验结果，进一步研究了两种细胞骨架干扰剂处理后肝细胞和肝癌细胞粘弹性系数的变化。     

一种新的检测细胞凋亡的多参数流式细胞分析方法

建立了一种新的检测细胞凋亡的多参数流式细胞分析方法.HL60白血病细胞株经化疗药物足叶乙甙处理后,加AnnexinV (AV)-FITC/PI孵育双染,用多参数流式细胞术检测细胞凋亡.结果显示,凋亡细胞的百分比随诱导时间的延长而逐渐增多.表明AV-FITC/PT双染法既能对细胞膜表面特异蛋白染色,又同时检测细胞膜完整性.多参数流式细胞术是一种快速、简便又准确的检测细胞凋亡的方法.     

芹菜素诱导人胃癌细胞凋亡作用及机制研究

目的：研究芹菜素（apigenin, API）致人胃癌细胞凋亡作用及其机制。方法：培养人胃癌BGC823细胞株，加入不同浓度的API，孵育48 h。PI染色流式细胞术（FCM）分析测定凋亡率；罗丹明染色FCM分析测定细胞线粒体跨膜电位(Δψm)；Caspase-9分光光度法检测试剂盒测定caspase-9活性；Western印迹检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白的表达，包括bax，bcl-2，caspase-9和caspase-3。结果： API（20，40和80 μg/mL）作用48 h能呈浓度依赖性地诱导BGC823细胞凋亡。而且，API也能降低BGC823细胞的Δψm，增加caspase-9活性，促进细胞色素c（Cyt c）释放，上调bax，caspase-9和caspase-3蛋白的表达，同时下调bcl-2蛋白表达，且呈剂量依赖性。结论：API通过活化线粒体信号转导途径诱导人胃癌细胞凋亡。     

人外周血树突状细胞的分离与鉴定

应用细胞分层剂密度梯度离心辅以细胞贴壁和花环沉降法，分离和纯化人外周血树突状细胞，通过Ｅｔ花环形成细胞测定，荧光染色镜检和ＦＡＣＳ分析表明，分离的细胞纯度可达４０％￣６０％，残留的其他细胞多为ＮＫ细胞，单核细胞和Ｔ细胞，ＦＡＣＳ分析还显示：所分离的细胞表面ＭＨＣⅡ类抗原的阳性率达９７．３４％，扫描电镜观察可见独特的细胞形态，将此类细胞加入体外淋巴细胞增殖反应体系则呈现明显促进作用，提示：分离的细胞     

CD8+ T细胞对HIV-1合成表位的免疫主导应答研究

目的研究CD8^＋ T细胞对人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）表位的免疫主导应答。方法分别采用酶联免疫斑点技术（ELtSPOT）和羧乙基锗倍半氧化物（CFSE）标记流式分析技术，以覆盖HIV-1 Env、Pol、Gag、Vif、Nef、Tat区的701个重叠肽段组成的34个肽段库及其部分单肽段作为刺激表位，对一例感染HIV-1的长期不进展者（LTNP）的外周血单个核细胞（PBMC）中CD8^＋ T细胞的了γ-干扰素（IFN-γ）分泌细胞频率和细胞增殖率进行了测定研究。结果HIV-1 Gag区域肽段诱导产生的CD8^＋ T细胞的IFN-γ分泌细胞频率最高，Nef、Tat、Vif区域依次顺减，Env和Pol区域不能诱导产生显著性应答；在IFN-γ ELISPOT实验中，肽段和相应肽段库刺激产生的结果一致；CD8^＋ T细胞在单肽段刺激下，用ELISPOT技术测定的IFN-γ分泌细胞频率和CFSE标记流式分析技术测定的细胞增殖率显示出较好的相关性。结论CD8^＋ T细胞能特异性识别某些HIV-1抗原表位，诱导出免疫主导应答；当进行HIV-1特异性CD8^＋ T细胞反应增殖测定和免疫主导应答研究时，ELISPOT是值得称道的标准实验，同时，推荐一种新颖的CFSE标记流式分析技术。     

国内三种βhCG试剂盒测定结果的比较分析

国内三种βｈＣＧ试剂盒测定结果的比较分析孙海翔，杨怀恭，顾惠心，孙龙安用不同试剂盘进行妊娠及滋养叶细胞疾病诊断和监测时，ｈＣＧ测定值差别甚大，常令临床医生困惑不解。我们用国内常用的三种β－ｈＣＧ放免试剂盒同时对早孕妇女的血清进行β－ｈＣＧ浓度测定，以...     

体外实时监测细胞行为的新方法-压电细胞芯片(PCC)

压电细胞芯片（Piezoelectric cell-based chip，PCC）是以压电生物芯片检测技术为基础，结合体外细胞培养技术，将生活细胞作为研究对象或敏感元件，构建出的一种能实时动态监测细胞行为的多参数检测体系。该技术通过检测细胞生长过程中的△f、△Z、△D等多种参数，反映细胞生长代谢的基本功能信息。文中介绍了PCC的原理、操作方法、结果与讨论等，并对其发展方向和应用进行了展望。     

染色体作为癌患者诊断和判断预后指标的研究

应用ＴＣ１９９培养基培养外周血淋巴细胞，获取中期分裂的染色体，观察和分析了７６例癌患者和４０例正常人外周血染色体畸变的情况，对４４例患者进行了化疗前后染色体观测。结果表明，癌患者畸变细胞数、染色体畸变率及代表畸变率的三个参数：畸变细胞率、细胞断裂率、染色体断裂率均明显高于对照组，随着治疗后病情的变化，染色体的畸变与临床病情程度有明显的平行关系。作者认为，测定外周血淋巴细胞染色体情况，可作为癌患者诊断和判断预后的指标。     

以皮下反射光观测微循环方法及实用仪器

本文介绍了一种新的光学容积脉波自动测定分析方法及实用仪器。在对光学容积描记图以皮下反射光测定采集、保存、复现和分析方法上，运用微机控制整套操作，自动分析图形得出二十余项生理参数。应用该方法进行了临床观察，并同时以甲皱微循环观测作对比观察，发现该方法基本能反映微循环状态，其主要测量参数与甲皱微循环总积分密切相关。对部分患者同时测定心功能状态的观察还表明，随心功能异常程度的增加。光学容积描记图主要参数趋于劣化。可见以皮下反射光方法观测微循环状态，为临床提供了一种简便易行、准确可靠的检测手段。     

胃癌NK细胞浸润与预后的关系

目的：探讨NK细胞浸润与胃癌患者预后的关系。方法：应用免疫组化S－P法对159例有详细随访资料的胃癌组织进行CD57染色分析，通过NK细胞计数，将NK细胞浸润程度分为3组：NK细胞少量浸润组（NK细胞浸润＜50个）；NK细胞中量浸润组（NK细胞数在50－150个）和NK细胞多量浸润组（NK细胞数＞150个），使用Cox风险模型进行多因素分析。结果：随着TNM分期的进展胃癌患者5年生存率明显降低（P＜0．05）。NK细胞多量浸润者5年生存率高于NK细胞少量浸润者和中量浸润者（P＜0．05），同时对TNM分期后发现TNMⅢ-Ⅳ期的胃癌患者中，NK细胞多量浸润得的5年生存率高于NK细胞少量浸润者和中量浸润者。多因素Cox风险模型分析发现影响胃癌患者总体生存率的因素有：TNM分期，NK细胞浸润数量，肿瘤分化程度和肿瘤大小。结论：胃癌患者肿瘤细胞间NK细胞多量浸润与较好的预后有关，并且肿瘤细胞间NK细胞浸润烽量可作为判定胃癌预后的一个指标，特别是TNMⅢ-Ⅳ期的胃癌患者。     

双标记免疫荧光法对胃粘膜抗体产生细胞的对比研究

常规的免疫荧光技术多采用异硫氰酸荧光素(简称FITC)标记抗体,但它只能测定一种抗原。要测定两种以上抗原必须连续切片。有时抗原较小,连续切片无法准确定位。 本文介绍FITC和若丹明B(简称RB)分别标记两种抗体同时测定胃粘膜中不同抗体产生细胞,并与单独FITC荧光染色加以比较;讨论RB荧光抗体标记和染色时应注意的问题;同时简述产生两种抗体的细胞。 材料和方法 一、组织标本准备:19块基本正常胃粘膜(胃     

活化蛋白C对脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响研究

目的：观察不同剂量活化蛋白C(APC)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）凋亡的作用。方法:将培养成功的HUVECs通过LPS（1 mg/L）孵育诱导细胞凋亡模型，并给予APC（10 μg/L）或APC（50 μg/L）建立药物治疗组，同时设立正常对照细胞组和单独LPS（1 mg/L）诱导细胞凋亡组。应用电镜观察细胞超微结构；DNA ladder与TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡情况；Annexin-Ⅴ/PI双标记行流式细胞仪测定定量观察细胞凋亡率。同时采用MTT法测定细胞存活率和Western blotting测定增殖细胞核抗原（PCNA），以观察细胞的增殖变化。结果:通过细胞形态，DNA ladder和TUNEL荧光染色发现单独LPS诱导组的细胞可见明显的凋亡现象，而通过APC治疗组的细胞凋亡改变明显减轻和细胞凋亡率下降，同时细胞存活率和PCNA表达率增高，尤其在50 μg/L时，与单独LPS诱导组细胞比较差异显著（P<0.05）。结论:APC拮抗LPS诱导的血管内皮细胞凋亡并促进细胞的增殖，发挥保护细胞的作用。     

流式细胞仪进行干细胞绝对计数的方法

干细胞移植对于白血病等多种疾病的治疗具有重要意义，而准确的干细胞绝对计数对于干细胞移植的成败又十分重要。流式细胞仪结合荧光单抗技术为干细胞绝对计数提供了一种快速、定量、重复性好的方法。本文介绍利用流式细胞仪进行干细胞绝对计数的原理、方法及意义。 　　1　流式细胞仪简介 　　流式细胞仪是对悬浮状态的细胞逐个计数并记录其有关参数的细胞分析仪器，因其测量速度快，在很短时间内可以分析大量细胞，并能测出多个参数，在临床上有广泛的应用。流式细胞仪能测量细胞的五个参数：前向角散射光(FSC)、侧向角散射光(SSC)、绿色荧光(FL-1)、黄色荧光(FL-2)和红色荧光(FL-3)。FSC和SSC是细胞对激发光的散射信号，分别反映了细胞的大小和细胞的粒度：细胞越大，胞内颗粒越多，则FSC和SSC越强。例如在外周血中，根据细胞大小及胞内所含颗粒性物质的多少，可区分出淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。粒细胞有较大的核或较多的颗粒，细胞直径也比淋巴细胞大，因而其FSC和SSC均比淋巴细胞强。     

沉默驱动蛋白KIF11影响caspase-1介导的细胞死亡方式

目的：探讨驱动蛋白家族成员11(KIF11)通过影响胱天蛋白酶1(caspase-1)介导的细胞死亡方式调控肿瘤发展的机制。方法：采用生物信息学分析KIF11在不同肿瘤中的表达及其与caspase-1和消皮素D(GSDMD)的相关性，以及对肿瘤患者生存预后的影响；构建受体相互作用蛋白激酶2(RIPK2)/GFP和caspase-1质粒，以及共转染的野生型、KIF11低表达和KIF11过表达的人肾透明细胞癌786-O细胞系，探讨KIF11在caspase-1介导细胞死亡中的作用；活细胞成像观察细胞形态变化；免疫组化测定肾癌和癌旁组织中KIF11的表达；Western blot测定细胞焦亡通路相关蛋白水平。结果：生物信息学分析结果显示，KIF11在大多数恶性肿瘤中高表达；免疫组化发现，KIF11在肾癌中的表达高于正常组织。同时，KIF11与肾透明细胞癌中caspase-1和GSDMD表达呈正相关。活细胞成像显示，野生型和KIF11过表达的细胞大量起泡，随后释放凋亡小体（绳珠状细胞凋亡结构）。相比之下，KIF11低表达的细胞变圆和肿胀，呈现细胞焦亡的典型特征，体积明显比野生型和KIF11过表...     

显微激光散射技术对不同氧合状态下地贫红细胞的研究

报道应用显微准弹性激光散射（ＭＱＬＳ）技术与显微生物医学图像分析技术对不同氧合情况下的单知态正常人和较重症地中海贫血患者红细胞的研究。在实验中,对正常人及较重症（地中海贫血患者红细胞人血红蛋白聚集体的平均流体力学半径、红细胞膜的搏动频率等动脉特性参数,以及对应的细胞的截面积、规化形状因子、长征、短径等图像分析数据同时进行了测定。发现正常人红细胞在氧合与去氧情况下,各种参数都没有显著左异,全在低氧分     

利用激光细胞仪分析单个活细胞的生物学特性

利用激光细胞仪分析单个活细胞的生物学特性流式细胞仪对悬浮细胞进行分析和测量具有统计学意义，但无法得到细胞的形态学以及多种动力学功能参数，尤其不能满足细胞的解剖定位研究。而要阐明完成细胞特殊功能时的各种细胞组成的作用以及多种组份分子相互作用机理，就要求...     

141例白血病三色流式细胞术免疫分型研究

白血病是常见的恶性肿瘤之一，其分型80年代以前主要是依靠形态学，自单克隆抗体与流式细胞术联合应用以来，使诊断白血病的准确率提高到90％以上，从而为临床合理治疗、判断预后提供了重要的科学依据。为了克服流式细胞术单参数免疫标记测定易将正常细胞包括在内从而影响结果分析的不足，我们采用以CD45和侧向角散射（side scatter，SSC）双参数散点图设门，应用三色流式细胞术对141例白血病患者进行免疫分型研究，现将结果报道如下。     

小鼠IL-1β在H22细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响

目的：重组表达小鼠IL-1β全长基因，转染H22肝癌细胞，分析对NK细胞杀伤活性的影响。方法：构建小鼠IL-1β重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β，利用jetPEI转染H22肝癌细胞，RT—PCR和激光扫描共聚焦显微镜分析IL-1β重组载体的表达，MTT方法分析转染前后，野生型小鼠脾脏NK细胞对H22细胞杀伤活性的变化。结果：RT—PCR扩增出小鼠IL-1β，长度约843bp。纯化的PCR产物与pIRES2-EGFP同时经Xho I和EcoR I双酶切，在T4连接酶作用下连接，转化大肠杆菌，提取质粒经PCR、限制性酶谱分析（XhoI＋EcoRI）和DNA序列测定后，确认获得重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β。将该质粒转染至H22小鼠肝癌细胞中，RT—PCR和荧光观察证实，H22细胞能表达高水平IL-1β重组表达载体，与转染空载体的对照组细胞相比，IL-1β转基因后H22细胞对NK92细胞杀伤抵抗性明显增强，同时野生型小鼠脾脏NK细胞对pIRES2-EGFP-mIL-1β转基因细胞的杀伤活性明显下降，效靶比40：1时下降了约10％。结论：IL-1β能够明显增强H22肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性，可能是肝癌细胞借以逃逸天然免疫应答的重要机制。     

生长因子对培养的肺泡Ⅱ型细胞分泌功能及形态的影响

目的：探讨表皮生长因子（ＥＧＦ）、转化生长因子α和β１（ＴＧＦα，ＴＧＦβ１） 对肺泡Ⅱ型细胞（ＡＴⅡ） 磷脂分泌功能及细胞形态（ 肥大） 的影响。方法：原代培养的成年大鼠ＡＴⅡ中，加入生长因子作用４８ ｈ，应用化学测定法测定培养介质中总磷脂含量，采用图像分析技术测量细胞体积参数。结果：ＥＧＦ、ＴＧＦα均可使总磷脂含量增加，而ＴＧＦβ１ 则使总磷脂含量降低；随ＥＧＦ、ＴＧＦα浓度增加，ＡＴⅡ平均直径（ＤＱ） 、体积（ＶＱ） 和表面积（ＳＱ） 均逐渐增大，ＴＧＦβ１ 对细胞体积变化无明显影响；ＴＧＦα和ＴＧＦβ１ 同时加入培养体系中，总磷脂含量及细胞体积均无明显改变。结论：ＥＧＦ、ＴＧＦα能促进ＡＴⅡ磷脂分泌和细胞肥大；ＴＧＦβ１ 对ＴＧＦα的作用有抑制效应。