霍奇金病单个H／R—S细胞TCR—γ基因重排的研究

目的 从单个细胞水平检测Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞是否存在Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）－γ链基因重排,以研究其是否来源于分化早期的Ｔ淋巴细胞。方法 用显微操作仪从冷冻的新鲜活检组织切片中挑取ＣＤ３０阳性的Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞,提取其ＤＮＡ并行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。ＴＣＲ－γ基因重排的ＰＣＲ采用半巢式扩增法,首轮用与ＴＣＲ－γ基因Ｖγ和Ｊγ区（包括Ｎ区）互补的引物对加入β－珠蛋白引物行混合扩增,对其中β－珠蛋白扩增阳性的Ｐ     

克隆性基因重排分析在淋巴结增殖性疾病鉴别诊断中的应用研究

采用体外基因扩增多聚酶链反应（ＰＣＲ），研究了３６例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）及１９例淋巴结反应性增生（ＲＨ）患者的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体γ（ＴＣＲγ）基因重排。结果３６例ＮＨＬ中，３４例出现克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排（９４．４％），其中９１％的Ｂ－ＮＨＬ出现ＩｇＨ基因重排，９５％的Ｔ－ＮＨＬ出现ＴＣＲγ基因重排。１９例ＲＨ患者，１４例上述基因保持胚系状态，５例检测到克隆性ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排。此５例随后的临床表现及治疗反应，均支持恶性淋巴瘤的诊断。表明抗原受体基因重排是淋巴瘤分子水平可靠的克隆性标记，有助于在基因水平确定肿瘤细胞的来源及其分化阶段，尤其在良、恶性淋巴结增殖性疾病的鉴别诊断方面，具有重要的临床应用价值。     

应用T细胞受体家族特异性引物的PCR方法对T细胞性淋巴瘤的研究

应用ＰＣＲ方法对１２例血管免疫母细胞性淋巴结病样Ｔ细胞性淋巴瘤（ＡＩＬＤ一ＴＣＬ）进行Ｔ细胞受体γ链（ＴＣＲ＿γ）基因重排分析，结果显示：１２例均有单克隆型的ＴＣＲγ基因重排；而正常人周围血淋巴细胞及非典型性淋巴增生性病变则为多克隆型重排。实验证实ＡＩＬＤ一ＴＣＬ为来自Ｔ细胞的单克隆性肿瘤性疾病。用家族特异性ＴＣＲγ引物对石蜡包埋组织行ＤＮＡ扩增是检测Ｔ细胞性的克隆性增生的敏感、方便、快速的方法，优于传统的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交方法，有一定的实用意义。     

应用T细胞受体家族特异性引物的PCR方法对T细胞…

应用ＰＣＲ方法对１２例血管免疫母细胞淋巴结病样Ｔ细胞淋巴瘤（ＡＩＬＤ－ＴＣＬ）进行Ｔ细胞受体γ链（ＴＣＲγ）基因重排分析，结果显示：１２例均有单克隆型的ＴＣＲγ基因重排；而正常人周围血淋巴细胞及非典型性淋巴增生性病变则为多克隆型重排。实验证实ＡＩＬＤ－ＴＣＬ为来自Ｔ细胞的单克隆性肿瘤性疾病。用家族特异性ＴＣＲγ引物对石蜡包埋组织行ＤＮＡ扩增是检测Ｔ细胞性的克隆性增生的敏感，方便，快速的方法，优于传     

原发性脑内淋巴瘤临床病理、免疫组化、基因重排分析

目的：研究脑内原发性恶性淋巴瘤临床病理、免疫且化及免疫性基因重排特征。方法：对６例脑原发性恶性淋巴瘤作了临床病理形态观察和免疫组化分析（Ｓ－Ｐ法）,并用ＰＣＲ技术单轮及半巢式扩增法进行了ＩｇＨ及ＴＣＲ－β基因重排检测。结果：６例皆为非霍奇金Ｂ细胞淋巴瘤。瘤细胞大部分是中心或中心母细胞型,常伴浆样分化,往往围绕血管排列。ＰＣＲ克隆性基因重排,ＩｇＨ单轮法（２／６例）阳性,半巢式（６／６例）阳性,ＴＣ     

用PCR分析30例急性淋巴细胞白血病的克隆演化

为了解急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排情况，应用ＰＣＲ技术对３０例急性淋巴细胞白血病初诊时及其中１０例复发后进行研究分析。结果表明：１５例Ｂ－ＡＬＬ中１３例具有ＩｇＨ基因重排，其中３例存在２条重排带，８例合并ＴＣＲγ基因重排；８例Ｔ－ＡＬＬ中６例具有ＴＣＲγ基因重排；３例Ｔ．Ｂ－ＡＬＬ具有ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因双重排；４例Ｎｕｌ－ＡＬＬ中２例具有ＴＣＲγ基因重排。１０例复发后，７例具有相应的ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排，２例丢失ＩｇＨ基因重排，１例获得ＴＣＲγ基因重排。以上事实表明在ＡＬＬ病程中存在白血病细胞克隆演化     

PCR技术检测IgH和TCRγ基因重排及其在淋巴瘤诊断中的初步应用

应用半重叠ＰＣＲ扩增ＩｇＨ、混合引物ＰＣＲ增ＴＣＲγ基因重排片段，并初步用于淋巴瘤的诊断，发现７７％的Ｂ细胞性非何杰金淋巴瘤出现ＩｇＨ基因重排的单克隆条带，９１％的Ｔ细胞性非何杰金淋巴瘤出现ＴＣＲγ基因重排条带。提示ＰＲＣ对鉴定淋巴细胞增生的克隆性和细胞源性具有重要价值。与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交相比，ＰＣＲ具有简便，快速等特点，更具有临床实用性。     

多重PCR检测急性非淋巴细胞白血病IgH及TCRVγI—Jγ基因重排

目的：为进一步了解急性非淋巴细胞白血病病人基因重排情况。方法：应用多重ＰＣＲ技术检测４１例ＡＮＬＬ病人ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排。结果：２６．８％（１１／４１）ＡＮＬＬ病人存在ＩｇＨ或／和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排,３例病人同时存在ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排;基因重排阳性ＡＮＬＬ治疗缓解率低于重排阴性ＡＮＬＬ病人。     

多重引物聚合酶链反应扩增丙型肝炎病毒基因及基 …

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）、Ｃ及ＮＳ４基因区的３对引物分别及同时扩增，检测８０例抗－ＨＣＶ阳性患者的血清ＨＣＶ ＲＮＡ，并进行了ＨＣＶ基因分型研究。各不同引物所介导的ＰＣＲ检出ＨＣＶ ＲＮＡ的结果为：５’－ＮＣＲ基因区６０％（４８／８０），Ｃ基因区３７％（３０／８０），ＮＳ４基因区３０％（２４／８０）。以上３对引物同时扩增仅４２％（３４／     

简并引物在扩增GBV-C/HGV NS3高度变异区的应用

目的试图比较简并引物扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ３变异较大的区域的作用。方法设计了简并引物和减温（ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ）ＰＣＲ扩增程序以对目的基因进行扩增，并对阳性ＰＣＲ产物进行克隆及测序。结果该方法能够检测基因变异约达２１％的区域。结论提示该法是一项有效的了解基因家系的技术。     

半巢式 PCR 联合 Southern 杂交检测白血病免疫球蛋白重链(IgH)基因重排

应用ＰＣＲ方法检测免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排可进行白血病微小残留病（ＭＲＤ）研究，应用半巢式ＰＣＲ法检测白血病患者ＩｇＨＣＤＲ－Ⅲ片段，７３．５％（２５／３４）急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ，简称急淋），７５％（３／４）慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ，简称慢淋），１５．２％（５／３３）急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ，简称急非淋）和０％（０／１９）慢性粒细胞白血病（简称慢粒）存在ＩｇＨ基因重排，所有阳性病例都通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交加以证实，结果显示①半巢式ＰＣＲ较一次ＰＣＲ不仅灵敏度提高，而且在一定程度上能降低假阴性率。②ＩｇＨ重排并不只局限于Ｂ淋巴细胞白血病，还可出现于部分急非淋病例，其机理有待于进一步探讨。     

多重PCR方法检测多发性骨髓瘤患者重排基因的研究

目的　探讨分子生物学方法在多发性骨髓瘤诊断中的意义。方法　采用多重 Ｐ Ｃ Ｒ 联合 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交方法检测２９ 例多发性骨髓瘤患者骨髓及外周血标本 Ｉｇ Ｈ Ｃ Ｄ ＲⅢ及 Ｔ Ｃ Ｒ ＶγⅠ Ｊγ重排基因。结果　８９ ．７ ％ （２６／２９） 和６５ ．５ ％ （１９／２９） 的患者骨髓标本存在 Ｉｇ Ｈ 及 Ｔ Ｃ Ｒ ＶγⅠ Ｊγ重排基因,而在外周血标本,仅５５ ．２ ％ （ １６／２９） 和３７ ．９ ％ （１１／２９） 存在 Ｉｇ Ｈ 及 Ｔ Ｃ Ｒ 重排基因。联合检测 Ｉｇ Ｈ Ｃ Ｄ ＲⅢ和 Ｔ Ｃ Ｒ ＶγⅠ Ｊγ重排基因,９３ ．１ ％ （２７／２９） 骨髓标本及５８ ．６ ％ （１７／２９） 外周血标本存在 Ｉｇ Ｈ 或／ 和 Ｔ Ｃ Ｒ 重排基因,外周血标本Ⅱ期和Ⅲ期患者重排基因阳性率（７１ ．４ ％ ） ,显著高于Ⅰ期患者（２５ ％ ）（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。结论　 Ｐ Ｃ Ｒ 技术检测多发性骨髓瘤患者重排基因对诊断是有帮助的, 尤其是骨髓标本。多重 Ｐ Ｃ Ｒ 方法可在一个 Ｐ Ｃ Ｒ 循环中同时扩增两个重排基因,更简便、经济,更适宜临床实际应用。     

应用通用引物聚合酶链反应技术检测结肠癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）通用引物介导的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例结肠癌石蜡包埋病理组织切片中ＨＰＶＤＮＡ，其中１０例呈阳性扩增（阳性率为６６．７％）。１２例正常结肠组织经上述ＰＣＲ检测均呈阴性反应。阳性扩增产物经核酸斑点杂交进行ＨＰＶ型别分析，ＨＰＶ１６型占４例（４０．０％），１８型１例（１０．０％），１６／１８型５例（５０．０％），未检出其他ＨＰＶ型别。表明ＨＰＶ可能对结肠癌的发生具有病原相关性。     

半巢式PCR联合Southern杂交检测白血病免疫球蛋白重链（IgH）基…

应用ＰＣＲ方法检测免疫球蛋白重链基因重排进行白血病微小残留病研究，应用半巢式ＰＣＲ法检测白血病患者ＩｇＨＣＤＲ－Ⅲ片段，７３．５％（２５／３４）急性淋巴细胞白血产现，７５％（３／４）慢性淋巴细胞白血病，１５．２％（５／３３）急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ，简称急非淋）和０％（０／１９）慢性粒细胞白血病（简称慢粒）丰Ｉdisplay status     

聚合酶链反应在小儿支原体肺炎诊断中的应用价值

为探讨ＰＣＲ在小儿支原体肺炎诊断中的实际应用价值，对４７例临床疑诊支原体肺炎的病儿做了咽拭子ＰＣＲ－ＭＰ测定，同时做了血冷凝集试验（ＣＡＴ）。结果：ＰＣＲ－ＭＰ阳性２１例，真阳性１５例，假阴性１例，敏感度为９３．８％。假阳性６例，占检测标本的１２．８％，占检测报告阳性总数的２８．６％，ＣＡＴ阳性１２例。确诊支原体肺炎１６例，其中１５例经ＰＣＲ早期确诊。结论：ＰＣＲ－ＭＰ测定有利于支原体肺炎的早期诊     

PCR与单克隆抗体ELISA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测。ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳ     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR DδX基因重排的特点

目的：分析正常人外周血和胸腺细胞中 ＴＣＲ ＤδＸ基因重排分布特点。方法：利用半巢式 ＰＣＲ扩增 １０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）、４例分选的外周血 ＣＤ３＋Ｔ细胞和 ７例正常人胸腺细胞 ＤＮＡ的 ＴＣＲ ＤδＸ基因与ＪδＸ、Ｄδ３和　Ｊａ重排的情况，从不同含量 ＤＮＡ的 ＰＣＲ分析，了解其重排分布频率。结果：ＴＣＲ ＤδＸ分别与 ＪδＸ、Ｄδ３和　Ｊａ的重排均可见于多数外周血Ｔ细胞和胸腺细胞中，对不同含量的ＤＮＡ的ＰＣＲ分析显示ＴＣＲ ＤδＸ重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。结论：ＴＣＲ ＤδＸ－　Ｊａ的重排最常见于成熟和未成熟Ｔ细胞中，而ＴＣＲ　ＤδＸ－Ｄδ３则在未成熟Ｔ细胞中多见。     

中线恶性网织细胞增生症细胞来源的探讨

结合光镜和临床病理资料，对３２例高度可疑中线恶性网织细胞增生症（ＭＭＲ）重点进行免疫表型及基因重排检测的回顾性研究，结果表明：病变内异形淋巴样细胞（ＡＬＣ）ＵＣＨＬ－１表达阳性者２４例（７５％），Ｌ２６表达者ｌ例。刮片组织ＰＣＲ法基因重排检测：ＴＣＲβ基因重排检测阳性者１７例，其中ＵＣＨＬ－ｌ阳性表达者１２例，阴性者５例，ＩｇＨ基因重排检测只１例有Ｌ２６表达者为阳性，其余均为阴性。本结果从基因水平证明ＭＭＲ本质上大多数为结外Ｔ细胞性淋巴瘤，但也可来源于Ｂ淋巴细胞。免疫表型和基因重排检测有互补性。ＭＭＲ由于其细胞成分复杂和病理形态多样，应注意与炎性肉芽组织和未分化癌鉴别。在文内还讨论了常规石蜡切片的刮取组织进行基因重排的意义。     

用PCR检测难分类急性白血病基因重排

用ＰＣＲ检测难分类急性白血病基因重排王鲁群张明珙①宋素芹①马晓星迟翠芳（济南军区总医院，济南２５００３１）采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２例形态学和免疫学均难以分类急性白血病（ＵＡＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排，旨...     

PCR与单克隆抗体ELESA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶性反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测．ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｈｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性．ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳＡ检测的被感性为１５ｎｇ／ｍｌ．应用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ检测了９６份结核临床标本．ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＰＣＲ的检出率虽高于细菌培养的阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片、细菌培养和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．００１）．ＥＬＩＳＡ的假阳性率高于ＰＣＲ的假阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．研究表明，ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ均是特异、敏感、快速的诊断结核病的方法．但在使用中又各自有其特点．