高血压病血瘀证患者血清对HUVEC-C形态、活性的影响

目的:观察高血压病血瘀证患者血清对HUVEC-C形态、活性的影响。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株HUVEC-C分别用空白对照组、高血压病血瘀证组、高血压病非血瘀证组血清干预损伤,倒置显微镜下观察其形态学变化,MTT法检测其活性。结果:血瘀组与其它组比较,形态明显变化,细胞活性显著降低。结论:高血压病血瘀证患者血清可以损伤血管内皮细胞,血管内皮细胞损伤是高血压病血瘀证的显著特征和病理实质之一。     

模拟手法压力刺激对颈性眩晕血瘀证患者血清损伤后内皮细胞的影响

目的观察模拟手法压力刺激对颈性眩晕血瘀证患者血清损伤的人脐静脉内皮细胞的影响及机制。方法将培养的颈性眩晕血瘀证患者血清损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)分为血瘀证组(DMEM+10%患者血清+0 mm Hg)、低压组(DMEM+10%患者血清+90 mm Hg)和高压组(DMEM+10%患者血清+180 mm Hg),健康对照组(DMEM培养液细胞+10%健康人血清+0 mm Hg),于相应压力干预实验后,倒置显微镜下观察其形态学变化,MTT法检测其活性,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)浓度,放射免疫分析技术测定内皮素(ET)。结果经过低压力刺激干预后细胞形态有一定变化,细胞活性有所提高,增加NO释放、抑制细胞ET释放,而高压力刺激则无显著影响。结论颈性眩晕血瘀证患者血清可以损伤血管内皮细胞,适当的压力刺激能增强细胞的活性和维持细胞的形态结构,压力刺激调节血管内皮细胞血管舒缩活性物质ET、NO合成释放,这可能是手法发挥活血化瘀功效的细胞生物学机制之一。     

高血压病血瘀证患者血清对血管内皮细胞TLR4mRNA表达的影响

目的:观察高血压病血瘀证患者血清对TLR-NF-κB信号转导通路关键因子TLR4的影响,探讨高血压病血瘀证的病理实质。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-C)分别用10%的健康组、高血压病血瘀证组、高血压病非血瘀证组血清干预24h,实时荧光定量(PCR)法检测TLR4 mRNA表达。结果:血清作用24h后,高血压病血瘀证组TLR4 mRNA的表达较高血压病非血瘀证组、健康组增高(P<0.01)。结论:TLR-NF-κB信号途径介导的炎症反应和免疫紊乱可能是高血压血瘀证的病理实质。     

高血压病血瘀证患者血清对人脐静脉内皮细胞活性和形态的影响

目的:研究高血压病血瘀证患者血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞活性和形态学的影响,从而为从分子水平探讨保护VEC的作用机制奠定基础。方法:通过高血压病患者血清损伤正常培养的人脐静脉内皮细胞(CRL-1730),分别观察12 h、24 h、36 h各组血清对人脐静脉内皮细胞(CRL-1730)形态学的影响,并通过CCK-8法检测人脐静脉内皮细胞活性,流式细胞术检测人脐静脉内皮细胞CD31的阳性表达率。结果:实验各组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001);血瘀证组与非血瘀证组比较,差异有统计学意义(P<0.001),血瘀证组与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CD31的阳性率为85.12%。结论:人脐静脉内皮细胞在受到受试者血清中营养物质促进生长的同时,还受到血清中致伤因素的影响,高血压病血瘀证患者血清中的致伤因素与非血瘀证组和正常组比较,可能更多或更强。     

高血压病血瘀证患者血清对血管内皮细胞活性的影响

目的:观察高血压病血瘀证患者血清对血管内皮细胞活性的影响。方法:用高血压病血瘀证患者、非血瘀证患者及健康人血清作用于人脐静脉内皮细胞株CRL-1730,每组又分为5%,10%,15%,20%4个血清组,MTT法检测CRL-1730活性。结果:血清作用6h后,血瘀组、非血瘀组与健康组比较,细胞活性较低,20%,15%和5%浓度时差异显著(P0.01);血清作用24h后,血瘀组、非血瘀组与健康组比较,细胞活性较低,15%,10%和5%浓度时差异显著(P0.05或P0.01);血清作用48h后,血瘀组、非血瘀组与健康组比较,细胞活性较低,15%和5%浓度时差异显著(P0.05或P0.01);各浓度血清作用6,24,48h后,血瘀组与非血瘀组比较,均无统计学差异,但血瘀组细胞活性较非血瘀组有降低的趋势。结论:高血压病患者血清可以降低CRL-1730的细胞活性,对细胞的代谢与增殖有抑制作用。其中,血瘀证患者血清对细胞活性的抑制有更明显的趋势。     

丹参酮ⅡA对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的影响

目的:观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的影响。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株CRL-1730按血瘀组、非血瘀组、健康组、对照组、药物(TanⅡA10μg/mL)组分组,通过扫描电镜、透射电镜观察各组内皮细胞的形态结构。结果:(1)血瘀组:与非血瘀组、健康组、对照组比较,扫描电镜观察发现,细胞收缩分离成放射星状体;透射电镜观察发现,饮液泡数量增多。粗面内质网数目减少并有扩张,核糖体部分丢失。线粒体细小,嵴不清或消失。细胞内平滑内质网明显扩张呈空泡状,细胞表面仅有细长的微绒毛,核未见特殊改变。(2)药物组:与血瘀组比较,扫描电镜观察发现,部分细胞之间有间隙,但仍有突起互相连接,透射电镜观察发现,多数细胞表面有细长的微绒毛,粗面内质网数目较少但不扩张,其上附着的核糖体不丢失,部分细胞的平滑内质网扩张成大小不等的小池,线粒体双层膜及内嵴结构清晰,在细胞群体内较易找到核分裂相,核未见特殊改变。结论:高血压病血瘀证患者血清严重损伤体外培养的血管内皮细胞,TanⅡA对高血压病血瘀证患者血清引起的血管内皮细胞形态结构损伤具有一定的保护作用。     

丹参酮ⅡA对高血压病血瘀证患者血清致伤ECV-304细胞活性的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对高血压病血瘀证患者血清致伤ECV-304活性的影响。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株ECV-304按空白对照组、血瘀证组、TanⅡA40、20、10、5μg/mL组分组,MTT法检测ECV-304活性。结果:24h和48h血瘀组与空白对照组比较,细胞活性显著降低(P<0.01);24h和48h TanⅡA 10μg/mL组与血瘀组比较,细胞活性显著增强(P<0.05,或P<0.01)。结论:高血压病血瘀证患者血清可以损伤内皮细胞,丹参酮ⅡA对内皮细胞具有保护作用。     

高血压病气虚血瘀证患者血清诱导体外培养的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的研究

目的观察高血压病气虚血瘀证患者血清诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的情况,并观察其形态学改变。方法用高血压病气虚血瘀证患者血清作用于体外培养的人脐静脉血管内皮细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变,并观察补阳还五汤的保护作用。结果流式细胞仪检测结果:与健康对照组相比,高血压病气虚血瘀证组的早期与晚期凋亡率之和显著增加(P0.01),而补阳还五汤组凋亡率之和较高血压病气虚血瘀证组显著下降(23.67±1.95)%,并且与健康对照组相比无显著差异(P0.05);荧光显微镜检测结果:模型组可见较多凋亡细胞,细胞核呈现深染、致密的颗粒状荧光。药物组较模型组减轻,对照组细胞核荧光均匀、弥散。透射电镜检测结果:高血压病气虚血瘀证组:内皮细胞表面有少量细长的微绒毛,多数内皮细胞胞质内所含的饮液泡(亦称吞饮泡)较正常组为多,大小差别悬殊。此外,尚有少许高电子密度的圆形颗粒(嗜锇)分散在饮液泡之间,体积较饮液泡小。粗面内质网数目较少,并有扩张,核糖体部分丢失。平滑内质网明显扩张呈空泡状。同时细胞线粒体肿胀或空泡变,管网状结构碎裂,嵴消失。细胞核收缩变圆。补阳还五汤组逐渐减轻,对照组未见明显异常。结论高血压病气虚血瘀证存在血管内皮细胞凋亡,补阳还五汤具有保护作用。     

丹参对高血压病血瘀证血清诱导内皮功能障碍的影响

目的:探索丹参对高血压病血瘀证患者血清诱导的内皮功能障碍及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性的影响,并进一步探讨丹参保护内皮功能障碍的潜在作用机制。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,利用高血压病血瘀证患者血清诱导内皮功能障碍,用不同浓度的丹参(50、100μg/mL)处理24 h后,采用试剂盒检测一氧化氮(NO)及内皮素(ET-1)的含量。采用Western Blot检测磷酸化及总的一氧化氮合酶(eNOS)、细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、磷酸化及总的AMPK的表达。采用荧光定量PCR技术检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。结果:丹参能剂量依赖性的增加NO的含量、降低ET-1的含量、增加eNOS的磷酸化水平,降低内皮细胞黏附分子ICAM-1、VCAM-1的表达,减少单核细胞黏附率,降低炎性细胞因子TNF-α、IL-1β水平,升高AMPK磷酸化水平,与模型组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:丹参能够改善高血压病血瘀证患者血清诱导的内皮功能障碍,其机制可能与激活AMPK有关。     

补阳还五汤、天麻钩藤饮与高血压病气虚血瘀证、 肝阳上亢证关联性研究

目的:探讨补阳还五汤、天麻钩藤饮与高血压病气虚血瘀证、肝阳上亢证之间的关联性,以此来验证"方证相关"的客观存在。方法:制作高血压病气虚血瘀证和高血压病肝阳上亢证细胞模型,用补阳还五汤和天麻钩藤饮含药血清干预细胞模型,观察内皮细胞活性改变及内皮细胞蛋白C受体(EPCR)、血管内假性血友病因子(vWF)、血栓调节蛋白(TM)3种血管内皮细胞损伤标志物的表达。结果:气虚血瘀加补阳还五组与气虚血瘀加空白血清组比较,肝阳上亢加天麻钩藤组与肝阳上亢加空白血清组比较,细胞活性较高,vWF,TM,EPCR含量较低,差异显著(P<0.01);气虚血瘀加天麻钩藤组、肝阳上亢加补阳还五组与气虚血瘀加补阳还五组比较,细胞活性较低,vWF,TM,EPCR含量较高,差异显著(P<0.01或P<0.05);气虚血瘀加天麻钩藤组、肝阳上亢加补阳还五组与肝阳上亢加天麻钩藤组比较,细胞活性较低,vWF,TM,EPCR含量较高,差异显著(P<0.01)。结论:补阳还五汤、天麻钩藤饮与高血压病气虚血瘀证和肝阳上亢证具有显著的关联性。     

六味地黄方含药血清对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：观察六味地黄方大鼠含药血清对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的保护作用。方法：以MTT法观察人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的活力和流式细胞仪测定内皮细胞凋亡率,并通过测定胞内丙二醛（MDA）含量及细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）含量与超氧化物歧化酶（SOD）活力,探讨六味地黄方对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。结果：六味地黄方含药血清能促进ox LDL损伤的血管内皮细胞增殖、抑制ox LDL造成的内皮细胞凋亡、降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论：六味地黄方对氧化低密度脂蛋白损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。     

糖痹康对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察糖痹康大鼠含药血清对高糖造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法:以CCK-8法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响;根据实验结果选择葡萄糖浓度为5.55mmol/L组为正常组,葡萄糖浓度为25mmol/L组做为模型组。然后制备正常组,弥可保组,糖痹康组的大鼠含药血清,将含药血清作用于高糖损伤的人脐静脉内皮细胞,分为正常组、高糖模型组、高糖弥可保组、高糖糖痹康低、中、高剂量组,并通过测定培养液中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活力,探讨糖痹康对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果:与高糖模型组比较,糖痹康含药血清能减少细胞MDA、LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论:糖痹康对高糖损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用,间接的起到对周围神经的保护作用。     

黄芪多糖对B16-F10荷瘤鼠髓样抑制细胞免疫活性的影响

目的:观察黄芪多糖对B16-F10荷瘤鼠髓样抑制细胞免疫活性的影响,探讨黄芪多糖在抗肿瘤免疫机制方面所发挥的作用。方法:建立B16-F10荷瘤鼠模型,通过计算抑瘤率观察黄芪多糖的体内抗肿瘤活性;通过流式细胞术检测脾脏中Gr-1+CD11b+髓样抑制细胞比例;采用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-10、VEGF水平。结果:与模型组相比,黄芪多糖治疗可以明显抑制荷瘤鼠黑色素瘤的生长,且可以降低荷瘤鼠脾脏Gr-1+CD11b+髓样抑制细胞比例,抑制外周血VEGF、IL-10的分泌,有显著性差异。结论:适当浓度的黄芪多糖可能通过降低髓样抑制细胞的比例,抑制VEGF、IL-10的分泌和肿瘤的生长。     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞ICAM-1的影响研究

目的：探讨溶栓颗粒对TNF-α损伤血管内皮细胞ICAM-1表达的影响。方法：用TNF-α（40ng/mL）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达。结果：TNF-α可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降,皱缩、变形,分裂相细胞明显增加。受损细胞的ICAM-1表达明显增多。含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少ICAM-1表达,减少细胞有丝分裂。结论：溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞ICAM-1表达,或许可以减缓动脉粥样硬化形成;溶栓颗粒减少血管内皮细胞分裂增殖,对稳定动脉粥样斑块稳定性或许有积极作用。     

黄芪多糖诱导脐血单个核细胞向树突状细胞分化的免疫机制研究

目的:探讨黄芪多糖诱导脐血来源的单个核细胞分化为树突状细胞的免疫学机制。方法:采集新鲜脐血,Ficoll淋巴细胞分离液梯度离心法获得单个核细胞,对照组以含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基进行培养,实验组加APS(100mg.L-1)进行诱导;两组细胞隔天半量换液,实验组补充半量的APS;酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养至第4、6、8、10天培养液上清中GM-CSF、TNF-α、IL-10的浓度。结果:实验组GM-CSF、TNF-α的浓度在第4、6、8、10天均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);负调控因子IL-10的浓度,实验组亦高于对照组(P<0.05);将TNF-α与IL-10相对应的每个标本的四个复孔值进行两两相比(TNF-α/IL-10),其比值以R表示,实验组与对照组之间差异性,且实验组R值均高于对照组,第6、8、10天差异具有显著性(P<0.01)。结论:黄芪多糖促使单个核细胞分泌GM-CSF、TNF-α诱导单个核细胞向树突状细胞分化、成熟;黄芪多糖诱导单个核细胞分泌IL-10,抑制其向树突状细胞分化成熟,但TNF-α与IL-10的比值R较高,且呈动态变化规律,抑制IL-10对树突状细胞的影响。     

中老年原发性高血压病和2型糖尿病血瘀证与非血瘀证患者血清瘦素水平的比较

目的:研究中老年人群中原发性高血压和2型糖尿病血瘀证与非血瘀证患者血清瘦素(Leptin)水平的变化及意义。方法:采用放射免疫法测定201例高血压病与166例2型糖尿病患者的Leptin水平,比较血瘀证与非血瘀证患者血清Leptin水平的变化,并观察其与性别、年龄、体重指数(BMI)、脂肪百分比(％Fat)、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG、内皮素(ET)、血浆胰岛素(INS)等指标的关系。结果:血瘀证与非血瘀证患者年龄、％Fat、HDL-C、ET 4项指标差异有非常显著性意义(P<0.01,P<0.05);多元线性相关结果显示瘦素与ET呈负相关,与BMI、％Fat呈正相关;在逐步回归分析中HDL-C、ET最后进入方程。结论:血瘀证与非血瘀证患者的血清Leptin水平变化不大;ET是与血清Leptin水平变化的主要相关因素。     

人参多糖和当归多糖诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究

目的：研究和论证人参和当归促进血细胞生成及“补气生血”的现代生物学机理。方法：采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术，研究经人参多糖（GPS）和当归多糖（APS）诱导的人脐静脉内皮细胞株（Ecv304)上清液（HEcCM)中造血生长因子的活性及粒单系集落刺激因子（GM－CSF）、IL－3和IL－6在内皮细胞的表达。结果：GPS和APS体外诱导制备的HFcCM能显著促进粒单系造血祖细胞（CFU－GM）和多向性造血祖细胞（CFU－Mix)的增殖；同时，GPS和APS能不同程度地促进内皮细胞GM－CSF、IL－3和IL－6蛋白表达。结论：GPS和APS能上调造血微环境中的内皮细胞分泌造血生长因子来调节血细胞的生成。     

黄芪含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响

目的：观察养心汤方中单味中药黄芪不同浓度含药血清对H：O：诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VEC）氧化损伤模型细胞增殖的影响及对损伤HUVEC的保护作用,以进一步研究养心汤对冠心痛不稳定型心绞痛的确切作用机制。方法：以浓度为1．03g·mL^-1的黄芪药液灌胃大鼠1周,于末次给药后取血离心制备含药血清。将HUVEC与不同剂量浓度（2％、4％、6％）单味黄芪含药血清、基础培养液、空白血清培养液一起培养,共分5组,培养24h后加入H2O2作用2h,通过MTT法及形态学方法观察不同浓度黄芪含药血清对H2O2损伤HUVEC生长活性变化。结果：黄芪含药血清2％、4％、6％各组细胞OD值均较H2O2模型对照组明显升高,与H2O2模型组相比较均有统计学意义（P〈0．01）,且2％、4％、6％组间比差异有统计学意义（P〈0．05）。形态学方面,黄芪含药血清可使细胞体积变小,间隙变大,但彼此之间存在联系,脱落细胞较少;皱缩的程度明显改善。结论：黄芪含药血清可以促进H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的增殖,增强HUVEC抗氧化损伤能力,逆转和改善内皮功能障碍,具有一定剂量依赖关系。