依达拉奉对脑出血大鼠细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的研究依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及核转录因子（NF—κ）表达的影响．探讨其抑制脑出血后细胞凋亡的可能机制。方法36只SD大鼠随机分为依达拉奉组、出血组和假手术组。用自体血尾状核注射法建立脑出血模型;检测丙二醛（MDA）水平,以TUNEL法及免疫组化法检测神经细胞凋亡数及NF-κB蛋白表达的变化。结果．出血组MDA水平、细胞凋亡数和NF—κB表达水平均明显高于假手术组;与出血组相比,依达拉奉组上述指标均明显下降。结论依达拉奉可抑制脑出血后血肿周围神经细胞凋亡,可能与其减轻氧化应激、减少血肿周围脑组织过度表达NF-κB有关。     

依达拉奉对大鼠脑血肿周围组织丙二醛热休克蛋白-70及Bcl-2基因表达影响的研究

目的研究依达拉奉对大鼠血肿周围组织丙二醛(MDA)含量、热休克蛋白-70(Hsp-70)及Bcl-2基因表达的影响,探讨依达拉奉的神经保护机制。方法2004年4~12月于大连医科大学附属二院神经内科将健康雄性SD大鼠120只,随机分为假手术组(n=20),ICH治疗组(n=50)和脑出血(ICH)对照组(n=50)。采用Fredrik等建立的自体股动脉取血并向大鼠尾壳核注射方法复制脑出血模型。各组按术后6 h、24 h、48 h、72 h及5 d分为5个亚组,经尾壳核行冠状切片,硫代巴比妥酸比色法测MDA含量,干湿重法测脑含水量,免疫组织化学法测血肿周围组织Bcl-2和Hsp-70表达。结果ICH治疗组各时间点血肿周围脑组织MDA含量及含水量均低于ICH对照组(P<0.05);Bcl-2阳性细胞表达及Hsp-70阳性细胞表达均高于ICH对照组(P<0.01)。结论依达拉奉能降低血肿周围组织MDA含量,上调Bcl-2和Hsp-70表达,增强神经细胞对缺血缺氧的耐受性。     

依达拉奉抑制血管性痴呆大鼠脑组织环氧化酶-2与NF-κB的表达

目的 观察依达拉奉对血管性痴呆(VD)大鼠行为学和脑组织环氧化酶-2(COX-2)、核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨依达拉奉对VD脑保护作用机制.方法 Wistar大鼠随机分为:正常组、假手术组、痴呆模型组(模型组)、依达拉奉治疗组(治疗组).水迷宫和穿梭箱实验检测行为学特征;免疫组织化学法和蛋白质免疫印迹法检测大鼠脑组织COX-2、NF-κB的表达,用图象分析仪测定光密度(OD)值.结果 治疗组大鼠的前后两次跳台实验的检测结果差异显著(P＜0.01),治疗组的行为学症状较模型组明显改善.NF-κBp65和COX-2阳性细胞百分率治疗组较正常组、假手术组明显增高(P＜0.01),较模型组明显降低(P＜0.01),NF-κBp65和COX-2 OD值,治疗组较正常组、假手术组明显降低(P＜0.01),较模型组明显增高(P＜0.01).结论 依达拉奉能明显改善VD大鼠的行为学症状、降低大鼠脑组织NF-κBp65和COX-2表达,依达拉奉能够通过抑制大鼠脑组织NF-κBp65和COX-2表达途径发挥其脑保护作用.     

依达拉奉对朊粒蛋白106-126诱导分化后PC12细胞凋亡的保护作用

目的 从细胞凋亡改变程度观察自由基清除剂--依达拉奉对朊粒蛋白(PrP)106-126诱导的分化PC12细胞损伤的保护作用,从而寻找更有效的朊粒病治疗方法.方法 应用膜联蛋白V/碘化丙啶双标记法检测细胞凋亡.激光共聚焦、显微镜观察线粒体膜电位,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax表达,caspase-3/CPP32细胞凋亡检测试剂盒和Western印迹检测Caspase-3活性.不同剂量依达拉奉组和各对照组同一时间点采用t检验.不同组间比较采用单因素方差分析.结果 在空白对照组中,94.5%为正常细胞;经100μmol/L PrP106-126处理后.损伤细胞达82.1%,其中早期凋亡细胞比例占21.2%,晚期凋亡细胞和坏死细胞占60.9%;给予30及60μmol/L依达拉奉处理后,凋亡、坏死细胞分别下降至31.8%和15.2%.当分化后的PC12细胞经PrP106-126肽段处理72 h后,线粒体膜电位下降36.1%.而加依达拉奉则抑制线粒体膜电位下降,且效应呈剂量依赖性;15、30、45和60μmol/L依达拉奉作用下,线粒体膜电位分别为对照组的47.3%、73.3%、94.1%和97.3%.依达拉奉能增强Bcl-2的表达,但抑制Bax的表达.PrP106-126肽段感染分化后的PCI2细胞,Caspase-3活性增至空白对照组的(397.21±5.63)%,15、30和60 μmol/L依达拉奉处理后,Caspase-3活性分别降至(170.12±5.01)%、(120.67±6.02)%和(100.21±8.04)%;Western印迹也证实依达拉奉呈剂量依赖性地抑制Caspase-3活性.结论 依达拉奉对PrP106-126诱导的分化PC12细胞具有抗氧化损伤作用,其机制可能是减轻细胞凋亡.     

MCI-186减轻Aβ1-40诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化的研究

目的 探讨依达拉奉(MCI-186)对β样淀粉蛋白(Aβ1-40)引起的PC12细胞tau蛋白磷酸化的保护作用及其机制.方法 采用 Western 印迹等检测Ser396,Ser199/202,Tau-5及GSK-3β,GSK-3βSer9磷酸化水平,观察MCI-186对Aβ25-35致PC12细胞的损伤保护作用.结果 模型组 tau蛋白在Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平及总tau蛋白水平在Aβ1-40作用3 h后开始升高,同时GSK-3β的表达增多,磷酸化GSK-3βSer9的表达减少,MCI-186保护组tau蛋白在Ser396,Ser199/202位点的磷酸化水平和总tau蛋白水平均明显低于Aβ模型组(P＜0.05),GSK-3β的表达减少,磷酸化GSK-3βSer9的表达增多(P＜0.05).结论 在Aβ1-40诱导PC12细胞损伤过程中,出现了tau蛋白的过度磷酸化,可以使Ser396,Ser199/202位点及Tau-5蛋白升高.激活GSK-3β是产生tau蛋白过度磷酸化的主要途径.MCI-186可通过抑制GSK-3β的活性,从而减轻Aβ1-40诱导的tau蛋白过度磷酸化,而达到保护神经细胞的目的 .     

NF-κB、Bcl-2与酒精性肝病

酒精性肝病（ALD）是由于长期过度饮酒而引发的一系列肝脏损害疾病。现研究表明肝细胞的凋亡对该病的发生、发展起着十分重要的作用。其中核因子κB（NF-κB）、B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）与ALD关系密切。ALD患者肝细胞内活化的NF-κB,通过刺激大量炎性细胞因子释放,引发肝组织炎症、纤维化、坏死和凋亡,同时通过调控凋亡蛋白酶（Caspase）、Bcl-2、死亡受体等基因来干预肝细胞凋亡;被激活的Bcl-2,除本身具有抗凋亡功能外,还与NF-κB以复合物的形式发挥抗凋亡作用,同时与同家族促凋亡蛋白Bax以二聚体的形式依比例对肝细胞凋亡发挥抑制或促进作用。肝细胞凋亡和抗凋亡的动态失衡将成为酒精性肝病发病的重要途径之一。     

肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤后NF-κB P65表达的影响

目的探讨L-肌肽对H2O2诱导PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)凋亡的保护机制。方法在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,加入肌肽作用于细胞,采用MTT比色法检测肌肽对PC12细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测凋亡相关基因NF-κB P65 mRNA的表达变化;免疫组化SABC法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和NF-κB P65的表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20 mmol/L浓度时达最大值(P<0.05)。20 mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低NF-κB P65的mR-NA表达,降低NF-κB P65蛋白的表达,流式细胞仪检测显示肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡率。结论肌肽对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制NF-κB P65的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的。     

依达拉奉对AD模型大鼠行为学和脑部NOS1阳性神经元的影响

目的 观察依达拉奉注射液对老年性痴呆(AD)模型大鼠学习记忆功能和神经元性一氧化氮合酶(NOS1)阳性神经元的影响.方法 用腹腔注射(ip)D-半乳糖和灌胃注射(ig)AlCl3法建立AD模型,Morris水迷宫实验检测学习记忆能力,以免疫组化法观察大鼠脑部的NOS1变化.结果 依达拉奉能显著改善AD模型大鼠的学习记忆障碍(P＜0.05),并明显增强大脑皮质和海马NOS1活性及其神经元密度(P＜0.05),其作用呈现出一定的量效关系.结论 中枢NOS1活性与学习记忆成绩显著相关;依达拉奉注射液对AD模型的学习记忆障碍有明显的改善作用.     

NF-κB与细胞凋亡

NF-kB家族及其介导的细胞信号转导通路在细胞凋亡中的作用是国内外研究的热点.研究发现,NF-kB信号转导途径可以通过多种途径抑制细胞凋亡,与IAPs家族、Bcl-2家族、TRAF家族、JNK、FLIP、A20、Gadd45β、MnSOD等有很大关系,但其具体机制尚未完全清楚.通过抑制NF-kB信号转导途径的激活,促进细胞凋亡,可能成为治疗免疫、炎症、肿瘤等疾病的新途径.此外,近年的研究证明NF-kB尚具有促细胞凋亡的作用,并发现NF-kB亚单位的种类及数量在细胞凋亡中起着决定性的作用,为疾病的治疗提供了新的策略.本文就NF-kB与细胞凋亡关系的研究进展作一综述.     

依达拉奉对阿霉素诱导的心肌细胞毒性的影响及其机制

目的 观察依达拉奉对蒽环类抗癌药阿霉素诱导的乳鼠心肌细胞毒性的影响及其机制.方法 用不同浓度的阿霉素处理乳鼠心肌细胞,建立蒽环类抗癌药心脏毒性的体外模型.依达拉奉在阿霉素处理心肌细胞前1 h加入培养液中作为预处理.应用CCK-8比色法检测细胞存活率;谷胱甘肽试剂盒检测细胞内还原型谷胱甘肽的水平;双氯荧光素染色/荧光显微镜照相检测细胞内活性氧的含量;Western blot法检测胞浆中细胞色素C和Cleaved Caspase-3的表达.结果 阿霉素在1~8 mg/L浓度范围内处理乳鼠心肌细胞24 h,可剂量依赖性地降低细胞存活率.在2 mg/L 阿霉素处理心肌细胞前1 h,应用不同浓度的依达拉奉预处理可明显地抑制阿霉素诱导的心肌细胞毒性损伤,使细胞存活率显著升高.20 μmol/L依达拉奉预处理1 h可抑制2 mg/L 阿霉素引起的氧化应激反应,使胞内还原型谷胱甘肽水平升高,活性氧含量降低.在阿霉素损伤心肌细胞前,给予依达拉奉预处理也可降低胞浆中Cytochrome C含量及Cleaved Caspase-3表达.结论 依达拉奉可显著减弱阿霉素诱导的心肌细胞毒性,此保护作用可能与抗氧化及抑制凋亡相关蛋白的表达有关.     

依达拉奉对实验性高脂血症小鼠的影响

目的观察依达拉奉对高脂血症小鼠血脂的调节作用。方法18-22g雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、高脂血症模型对照组、依达拉奉3mg／kg和6mg／kg组及辛伐他汀组。给药10d后眼眶取血，测定血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量，计算动脉粥样硬化指数（AI）及肝脏系数。结果与模型对照组比较，依达拉奉3mg／kg和6mg／kg组中血清HDL-C含量升高44．2％和81．4％（P均〈0．05）；AI降低33．8％和50．0％（P均〈0．05）；肝脏系数下降12.3％和13．8％（P均〈0．05）。结论依达拉奉具有调节血脂的作用。     

依达拉奉对大鼠癫痫持续状态神经元细胞凋亡的影响

目的:研究自由基清除剂依达拉奉对大鼠癫痫持续状态(SE)后神经元细胞凋亡的影响.方法:采用氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态模型,实验Wistar大鼠随机分为实验组(72只)和对照组(C组,6只),实验组分为模型组(M组)、依达拉奉单药治疗组(ED组)、联合地西泮治疗组(ED+DI),每组按照时间点分为4个亚组(12h、24h、72h、7d).免疫组化法检测大鼠脑组织的Bcl-2蛋白表达,及TUNEL法检测细胞凋亡的情况.结果:Bcl-2蛋白表达与对照组相比,M组12h达高峰,24h开始减少,7d减至基础水平(P<0.05).而依达拉奉单药和联合地西泮治疗组与之比较,变化趋势相同但Bcl-2表达增多(P<0.05);M组TUNEL染色阳性细胞极多,12h开始上升,48h达高峰,之后有下降趋势(P<0.01).ED组TUNEL染色阳性细胞数值变化趋势相同但低于M组(P<0.01),高于ED+DI组;ED+DI组与C相比仍有统计学意义(P＜0.05).结论:依达拉奉对氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态所致脑损伤具有保护作用,其机制可能通过清除自由基上调Bcl-2蛋白表达及减少神经元细胞凋亡,联合地西沣治疗效果更显著.     

依达拉奉对Aβ25-35诱导分化PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响

目的 探讨依达拉奉(MCI-186)对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响.方法 实验对象分为3组:MCI-186保护组(MCI-186 20 μmol/L,Aβ25-35 30 μmol/L)、Aβ25-35干预组(Aβ25-35 30 μmol/L)和正常对照组.采用MTT法测定细胞生存率;RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA表达变化,Western印迹法检测NF-κB p65蛋白表达的变化.结果 Aβ25-35能增加NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,促进细胞凋亡;MCI-186能抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,抑制细胞凋亡.结论 MCI-186具有神经细胞保护作用,可能的机制与其抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白表达有关.     

Aβ25-35海马注射对大鼠神经细胞中NF-κB活性的影响

阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是以智能衰退和行为紊乱为特征的神经系统退行性疾病,是引起痴呆的主要疾病之一。β-淀粉样蛋白(β-amy-loid,Aβ)是AD主要病理特征老年斑(senileplaque,SP)的核心成分,目前认为Aβ神经毒性作用是各种原因引起AD的共同通路,是AD形成和发展     

NF-κB和糖尿病β细胞凋亡

核因子κB(NF-κB)通过促进细胞因子、活性氧簇和Fas相关基因的表达介导的β细胞凋亡,可以诱发1型糖尿病。阻断依赖NF-κB的信号通路,对抗β细胞凋亡,能为糖尿病(特别是1型糖尿病)的防治提供新的手段。     

依达拉奉对大鼠心肌再灌注抗凋亡作用的机制

目的：观察大鼠心肌缺血再灌注时依达拉奉抗凋亡作用的机制。方法：采用体外结扎大鼠左前降支制备大鼠心肌缺血再灌注模型。将Wistar大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组、依达拉奉组（再灌注即刻经尾静脉注射依达拉奉3mg／kg）。分别用TUNEL染色法及免疫组化法检测心肌细胞凋亡、心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：（1）凋亡检测结果示,对照组无细胞凋亡,依达拉奉组较缺血再灌注组凋亡细胞数明品减少[（13．11±1．58）比（24．33±1．38）,P〈0．01];（2）免疫组化结果示,依达拉奉组与缺血再灌注组Bcl-2、Bax蛋白表达均明显高于对照组（P〈0．01）;依达拉奉组较缺血再灌注组Bcl-2蛋白表达明显升高[（0．2300±0．0218）比（0．0924±0．0152）],而Bax蛋白表达明显降低[（0．0249±0．0042）比（O．1312±0．0173）],P均〈0．01;缺血再灌注组Bcl-2／Bax比值较对照组明显降低[（0．6906±0．0035）比（1．1632±0．0212）],依达拉奉组Bcl-2／Bax比值（7．4752±0．5573）较缺血再灌注组和对照组明显升高（P〈0．01）。结论：依达拉奉能够减少心肌细胞凋亡,心肌细胞凋亡的减轻与下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达以及Bcl-2／Bax比值有关。     

依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的探讨依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分为:假手术组、缺血再灌注模型组(模型组)、依达拉奉治疗组(依达拉奉组)。采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察不同组大鼠的神经功能症状评分。分别于缺血后2 h进行再灌注。依达拉奉组于缺血再灌注后1 h及1.5 h在腹腔内注射依达拉奉注射液(按照3 mg/kg)2次,在缺血再灌注后6、12、48 h处死大鼠。TUNEL法原位检测凋亡细胞,免疫组化法检测脑组织Caspase-3表达的阳性细胞数。结果模型组在再灌注48 h梗死体积最大,12 h凋亡细胞数最多。缺血再灌注后6 h在大脑额叶和海马即可见到Caspase-3蛋白表达的阳性细胞,12 h组最高。依达拉奉组各时间点脑梗死体积、Caspase-3表达水平较模型组明显降低(P<0.01)。结论依达拉奉对缺血再灌注大鼠皮层脑细胞具有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3表达,从而抑制皮层细胞凋亡有关。     

迷迭香酸通过核转录因子-κB信号通路对抗谷氨酸诱导PC12细胞损伤

目的观察迷迭香酸(RA)对抗谷氨酸诱导的PC12细胞损伤发挥神经保护作用,探讨其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法将培养细胞分为对照组、损伤组(16 mmol/L谷氨酸)、RA1组(30μmol/L RA+16 mmol/L谷氨酸)、RA2组(60μmol/L RA+16 mmol/L谷氨酸)。采用MTT法检测细胞活力;Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态的改变,碘化丙啶染色流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达水平的变化。结果不同浓度谷氨酸(0、4、8、12、16、20 mmol/L)作用PC12细胞24 h后,细胞存活率呈剂量依赖性下降。与损伤组比较,RA1组和RA2组细胞存活率明显升高(P<0.05)。16 mmol/L谷氨酸作用PC12细胞1 h后,细胞质中IκBα蛋白和NF-κB p65蛋白表达明显减少,p-IκBα蛋白表达明显增加,NF-κB p65蛋白在细胞核中表达明显增加,2 h达到高峰;给予30、60μmol/L RA预处理1 h后,能抑制NF-κB p65蛋白活化进入细胞核。结论 RA通过抑制NF-κB信号通路的活化,对谷氨酸诱导损伤的PC12细胞有保护作用。     

miR-107激活NF-κB对Aβ1～42诱导的阿尔茨海默病细胞凋亡的调节作用

目的 探究miR-107调节核因子(NF)-κB对β淀粉样蛋白(Aβ)_1～42诱导的阿尔茨海默病(AD)细胞凋亡的调节作用。方法 选取Aβ_1～42诱导的AD细胞,经培养后分为AD组、下调miR-107组及上调miR-107组,检测各组miR-107及NF-κB基因表达,对各组细胞增殖、凋亡能力进行检测,Western印迹法检测(IκBα)、B细胞瘤淋巴(Bcl)-2及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,以免疫组化法检测Aβ、星形胶质瘤U373细胞淀粉样前体蛋白(APP)相对表达量。结果 与AD组相比,下调miR-107组miR-107表达明显更低,NF-κB mRNA表达明显更高(P<0.05);与AD组、下调miR-107组相比,上调miR-107组miR-107表达明显更高,NF-κB mRNA表达明显更低(P<0.05)。与AD组相比,下调miR-107组IκBα、Bcl-2表达均明显更低,Bax表达明显更高(P<0.05);与AD组、下调miR-107组相比,上调miR-107组IκBα、Bcl-2表达均明显更高,B...     

依达拉奉对急性肺损伤大鼠肺组织凋亡的影响

目的探讨依达拉奉治疗急性肺损伤(ALI)大鼠的作用及其机制。方法将48只清洁级Wistar成年大鼠随机分为对照组、ALI组和依达拉奉(EDA)组,之后给予EDA治疗。治疗后第7天留取肺脏组织,行苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态,Western印迹和免疫组织化学法检测肺组织Bcl-2和Bax表达。结果 HE染色显示ALI组肺组织表现肺结构部分破坏,肺泡部分肺泡壁塌陷且水肿严重,部分肺泡腔扩大,大量炎性细胞浸润,肺泡隔显著增厚,明显的局部出血;与ALI组相比,EDA组肺组织结构破坏较轻,水肿也明显减轻,仅有少量炎性细胞浸润。Western印迹结果显示,与ALI组相比,EDA组抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平明显增高,促凋亡蛋白Bax表达水平显著降低,酶切-caspase3蛋白表达明显下调(均P<0.01)。免疫组化结果表明,与ALI组相比,核浆中的Bcl-2表达水平明显增高,Bax表达水平明显降低(均P<0.01)。结论 EDA在ALI大鼠肺组织中上调Bcl-2和下调Bax蛋白水平来降低细胞凋亡,同时其可能通过减少Caspase3依赖途径的凋亡来保护肺组织。