Annexin B1:一种新的细胞凋亡检测用蛋白

目的：为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。方法：在大肠杆菌中表达Annexin B1蛋白，经离子交换层析后得纯品，异硫氰酸荧光黄（fluorescein isothiocyanate,FITC)标记Annexin B1；选用Jarkat细胞，羟基喜树碱诱导该细胞凋亡；以FITC标记的Annexin B1检测凋亡细胞。结果：FITC标记的Annexin B1与凋亡细胞膜表面磷脂酰丝氨酸（phos-phatidylserine,PS)结合，使凋亡细胞呈阳性着色，能有效检测细胞凋亡。结论：开发得到了一种新的细胞凋亡检测用蛋白Annextin B1，为推广高效快捷的凋亡检测技术提供国产试剂奠定了基础。     

机采血小板储存期内活化和凋亡的分析

目的 在血小板储存期内动态观察机采血小板活化和凋亡的变化,评估储存时间对血小板活化和凋亡的影响.方法 利用流式细胞技术对储存2天、3天和5天的机采血小板表面P-选择素(CD62P)的表达进行检测,Annexin V染色检测血小板的早期凋亡率[血小板膜磷脂酰丝氨酸(PS)的表达].结果 相对储存第2天的血小板,储存第4天和第5天的机采血小板表面CD62P的表达显著增强(P＜0.05),血小板早期凋亡率也显著增加(P＜0.05).结论 延长血小板的储存时间将加速血小板的活化和凋亡.     

流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较

目的:探索运用流式细胞仪来检测细胞凋亡的方法.方法:采用流式细胞仪对DNA含量、磷脂酰丝氨酸、线粒体膜电位、钙离子浓度的检测,分析细胞凋亡情况.结果:DNA含量测定存在一定误差;磷脂酰丝氨酸测定能准确反映细胞早晚期凋亡情况;线粒体膜电位、钙离子浓度测定能准确反映凋亡细胞的生理指标,如果结合形态学分析将更为客观.结论:通过比较实验方法,为将来采用流式细胞仪检测细胞凋亡提供更准确的实验方法.     

昆明山海棠碱诱导Jurkat淋巴瘤细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻及瘤细胞超微结构改变的研究

目的 检测昆明山海棠碱(THH碱)诱导Jurkat T淋巴瘤细胞的凋亡效应。方法 THH碱多剂量多时间点诱导Jurkat T淋巴瘤细胞细胞后，采用Annexin-V-Fluorescence标记膜外翻磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine，PS)的凋亡细胞，同时荧光素PI标记坏死细胞，流式细胞术检测分别检测其阳性细胞率。同时采用判断凋亡发生的“金标准”——形态学观察方法观察其超微结构的改变。结果 THH碱诱导后磷脂酰丝氨酸外翻的细胞显著增加，有明显的时间和剂量相关性，超微结构观察可见大量细胞明显发生细胞体积缩小、核固缩、胞浆浓缩、凋亡小体形成等凋亡典型的形态特征。结论 THH碱能非常显著地诱导Jurkat T淋巴瘤细胞发生凋亡。     

微粒与心血管疾病

微粒是血管内皮细胞、血细胞等不同类型的细胞活化及凋亡时释放的具有很多生物学活性的小囊泡,微粒表面表达磷脂酰丝氨酸(PS),可通过检测微粒表面的PS发现微粒的来源,细胞的活化及凋亡。很多心血管疾病与细胞的活化和凋亡相关,有相应微粒水平的升高,因此微粒的检测可能为临床心血管病的早期检测提供帮助,为心血管疾病的诊断治疗提供新的思路。     

三苯氧胺诱导血小板凋亡的研究

目的 探讨三苯氧胺(TAM)诱导血小板凋亡作用及其分子机制.方法 取健康志愿者静脉血,分离得到富含血小板血浆(PRP)和洗涤血小板,血小板与不同浓度TAM孵育后,流式细胞仪检测磷脂酰丝氨酸(PS)暴露、线粒体跨膜电位(ΔΨm)去极化、胞质Ca2+浓度;Western blot检测活化的caspase-3和gelsoli...     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导白血病Jurkat细胞凋亡

目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-5-hydroxy-7-methoxychrysin,BrMC)诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用。方法:体外培养Jurkat细胞。FITC标记annexinⅤ/PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率。ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片。二氯荧光素二乙酯(2'7'-dichlorofluoresein diacetate,DCFH-DA)荧光探针FCM检测细胞活性氧。结果:BrMC以剂量依赖方式诱导annexinⅤ阳性细胞和组蛋白/DNA碎片增加(P<0.05)。BrMC促进细胞活性氧生成,10 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)预孵育能有效阻断Jurkat细胞活性氧生成,并减弱其诱导细胞凋亡效应。结论:BrMC具有诱导Jurkat细胞凋亡作用,其作用与促进细胞活性氧生成有关。     

过氧化氢诱导人唾液腺导管细胞凋亡的体外研究

目的 探讨氧化剂对SV-40转染的人类唾液腺导管细胞(NS-SV-DC) 的诱导凋亡作用及其可能机制.方法 应用流式细胞仪检测磷脂酰丝氨酸的外露,蛋白印迹检测半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)的表达及细胞色素C从线粒体内的释放.结果 NS-SV-DC经0.4 mmol/L 过氧化氢(H 2O2)孵育后, 磷脂酰丝氨酸由细胞膜内释放到膜外,细胞色素C在细胞浆中显著增加;caspase-3和PARP被剪切.结论 H2O2可在0.2 ～ 0.8 mmol/L浓度范围内诱导唾液腺导管细胞的凋亡,其凋亡的发生机制与线粒体介导的信号转导路径相关.     

溶血性巴氏杆菌白细胞毒素诱导靶细胞死亡的分子和生物化学机理

溶血性巴氏杆菌白细胞毒素（LKT）是能杀死牛免疫细胞的穿孔毒素族（RTX）中的一种物质。有些研究提示这类毒素可诱使靶细胞凋亡。本课题是以LKT处理BL3细胞。再用可评价凋亡细胞各种状况的分子生物学技术和流式细胞仪评价BL3细胞，从形态、光散射谱型和对Hoechst33258的选择性着色等方面证明，中毒细胞与正在凋亡的细胞相一致。经末端脱氧核苷酸转移酶（Tdt）介导的dUTP－FITC缺口末端标记法（TUNEL）分析基因组DNA，表明当多聚ADP－Ribose多聚酶（PARP）裂解时，见有核小体间DNA断裂，还见有DNA修复酶失活的迹象。经LKT处理过的细胞与annexin－V－FITC结合，显示磷脂酰丝氨酸基团从胞膜内移位于膜外。LKT对细胞的作用与其剂量相关。经与抗LKT单克隆抗体共温后，其作用被抑制．细胞经抗β2整合素抗体预温处理可抑制LKT诱发细胞凋亡。导向结合试验表明，靶细胞的去污剂溶解物能抑制LKT与β2整合素异二聚体的结合。本文结果显示，LKT在相对低剂量时可诱致靶细胞发生凋亡。而且，作者还首次发现，LKT与β2整合素结合是诱发细胞凋亡的启动步骤。本文为了解牛巴氏杆菌病的发病机理提供新的见解，有益于该病防治策略的制订。     

细胞凋亡和继发性坏死的Annexin法定量检测

目的　探讨分析凋亡与坏死淋巴瘤 (Raji)细胞的定量方法。方法　以 1.0 μm ol/ L 地塞米松(DEX)诱导 Raji细胞凋亡 ,用异硫氰酸荧光素标记的连接素 V(Annexin V)和碘化丙锭 (PI)分别与凋亡细胞膜上的磷脂酰丝氨酸和继发性坏死细胞内降解的 DNA结合 ,并以流式细胞术分析和分选标记细胞 ,用电镜和 DNA凝胶电泳对分选细胞及其 DNA进行鉴定。结果　 Annexin+细胞数随 DEX孵育时间的延长而增加 (r=0 .97) ;Annexin+/ PI- 与 Annexin+/ PI+细胞经电镜和 DNA梯形带确证具有凋亡与坏死细胞的特征 ;Annexin法可准确测定 10 5～ 10 6细胞中的标记细胞。结论　 Annexin法可快速、准确地定量混合细胞内的凋亡与坏死细胞数