慢性丙型病毒性肝炎和疑似患者血清HCV标记检测分析

对122例慢性丙型肝炎和疑似患者,应用PCR法检测血清HCVRNA及用ELISA法进行抗-HCV检测,结果:单纯抗-HCV阳性61.5％、抗-HCV与HCVRNA同时阳性26.2％、HCVRVRNA阳性12.3％,前两种形式为慢性丙肝患者血清HCV标记的主要表现形式,结合检测有92.6％ALT水平异常升高,说明无论血清HCV标记为何种类型,肝组织都有炎症活动。PCR检测HCVRNA是目前确诊丙肝和疑似丙肝的理想方法。     

丙型肝炎病毒抗原(HCVAg)检测及临床应用

直接检测丙肝病人血清中丙肝病毒抗原(HCVAg)或包膜抗原是早期诊断丙肝的最有价值的指标之一。本文应用高纯度、高效价的丙肝多克隆抗体(抗HCV—IgC)经酶联夹心法直接检测丙肝病人血     

应用VIDAS免疫分析系统检测血清抗伯氏包柔螺旋体抗体

莱姆病(Lyme disease)是最近十年来才被认识的一种蜱媒传染性流行病.莱姆病的血清学诊断方法主要有间接荧光免疫法(IFA)酶免疫试验(EIA),免疫印迹法(WB).梅迪埃(Biomerieux)公司推出免疫诊断系统(vidas).能够自动定性和半定量地检查Lyme病的抗伯氏包柔螺旋体抗体(抗BB抗体).本法结合了酶和荧光免疫二种方法.碱性磷酸酶标记二抗的底物是4-methylumbelliferylphosphate.底物在碱性磷酸酶的催化下转变成4—methylumbelliferon,该产物在365nm光激发下可发出455nm的荧光,光强度被Vidas中的光扫描器测定出来.我们用Vidas检测了体检标本83份.阳性8份(9.6%);检测临床为结核病的标本20份,无一例阳性;临床诊断结节病或可疑结节病标本46份,阳性4份(8.7%);各种眼科疾病57份,阳性13份82.8%);口腔科疾病15份.阳性4份(26.7%);其他如皮肌炎、肝脾肿大发热待查、肺癌、肺部 阴影待查等标本17份,阳性2份(11.8%);检测了军科院微生物流行病研究所采自新疆、黑龙江可疑Lyme病的标本16份,阳性12份(75.0%).作者用vidas法和IFA法比较了165份标本,vidas检出阳性24份(14.5%),IFA法检出131份(79.4%),两法的一致性(符合率)为32.7%.     

HBsAg酶联免疫吸附试验试剂盒分析性能评价

目的 验证乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒的分析性能.方法 参照美国临床实验室标准化研究所(CLSI) EP5-A2文件、第四版《全国临床检验操作规程》及相关文献对HBsAg的ELISA检测试剂盒的精密度、符合率、检出限、敏感性和特异性等进行验证.结果 HBsAg的ELISA试剂盒测量重复性CV为4.85％,中间精密度CV为13.35％;阴、阳性符合率为100％;试剂盒的敏感性和特异性均为100％,其阳性预测值100％,阴性预测值100％;试剂盒的C50-20％检测阳性结果2.5％(1/40)、C50+20％浓度的阳性结果95％(38/40),即-20％～+20％浓度范围包含了C5-C95区间,检出限为0.12 IU/ml.结论 HBsAg的ELISA试剂盒检测结果可靠,能够满足临床需求.     

酶联免疫吸附试验联合PCR方法检测肺炎支原体感染的临床意义

目的研究血清酶联免疫吸附试验(ELISA)联合肺泡盥洗液PCR方法在肺炎支原体感染检测中的临床意义。方法对我院2008年8月—2010年8月期间住院的332例成人社区获得性肺炎病人分别采用血清ELISA方法和肺泡盥洗液PCR方法检测肺炎支原体(MP)。结果血清ELISA法和肺泡盥洗液PCR法检测肺炎支原体感染敏感性分别为82.45%、75.43%,特异性分别为95C.16%、96.49%。两种方法在检测肺炎支原体感染中敏感性及特异性的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 血清ELISA方法联合肺泡盥洗液PCR方法检测可提高诊断阳性率,对早期诊断支原体肺炎有重要临床意义。     

慢性丙型肝炎的血清HCV IgM抗体的长期随访研究

作者对慢性HCV感染的病人进行抗-HCV IgM和HCV RNA为期4.0—8.7年的跟踪测试,以研究抗-HCV IgM的变化与HCV复制和HCV引起肝病后果的关系。用第二代ELISA法(Ortho Diagnostic Systerns,Raritan,NJ)和重组免疫印迹法(RIBA-Ⅱ;Ortho)检测抗-HCV IgG,用套式PCR(Nested PCR)和     

两种方法检测乙肝HBsAg效果对比

目的 :考察胶体金联免疫吸附与酶联免疫吸附试验的灵敏度与特异性。方法 :用乙肝表面抗原胶体金联免疫吸附试剂 (GCISA)和酶联免疫试剂 (ELISA)检测各种肝炎病人血清 90 9份 ,正常人血清 173份及乙肝表面抗原质控标准品。结果 :GCISA和ELISA分别检出 773和 770份阳性样品 ,总符合率为97 0 %。检测乙肝表面抗原质控标准品 ,GCISA的灵敏度为 1ng/ml,ELISA为 1～ 2ng/ml,且两种方法都只与HBsAg有特异反应 ,与乙肝病毒核心抗原、e抗原无交叉反应。结论 :GCISA检测血清中的HBsAg特异性强 ,灵敏度与ELISA一致 ,在检测单份样品时较ELISA简单快速 ,观察结果直观 ,不需仪器设备。     

酶联免疫法与金标法检测抗-HIV的比较

目的 观察ELISA(间接法、双抗原夹心法)快速诊断金标法(胶体金免疫分析技术)在检测抗-HIV中试剂质量比较,并分析其原因。方法 用2001年卫生部免疫检验室间质评HIV质控血清10份,其中6份为阳性血清(经Weet-Blot确诊),用两厂家生产的ELISA间接法、双抗原夹心法、金标法做比较。结果 两厂家生产的ELISA间接法一份阳性标本不能检出,但两厂家生产的ELISA双抗原夹心法和金标法阳性检出率为100％。结论 试剂的质量对保证大量的献血员、高危人群的HIV筛查工作至关重要。     

HCV核心抗原测定与HCV抗体测定的比较分析

目的探讨HCV核心抗原检测与HCV抗体检测在测定献血号HCV感染上的差异。方法将3600名部队献血员的血清标本分别用两种ELISA试剂盒进行HCV核心抗原及HCV抗体检测，任一方法结果阳性者用荧光定量PCR进行确诊。结果用HCV核心抗原检测方法检出的阳性标本数与用HCV RNA检测方法确诊阳性标本数相符。结论以HCV核心抗原检测代替HCV抗体检测是提高献血员HCV检出率的较为理想的方法。     

血清幽门螺杆菌尿素酶B的免疫放射分析法

目的 建立和评价一种检测血清幽门螺杆菌(HP)尿素酶B(ureB)抗原的免疫放射分析(IRMA)法.方法 以50例行胃镜检查的慢性胃病患者为研究对象,其中胃十二指肠球部溃疡36例,慢性胃炎9例,胃癌5例.利用基因体外重组技术制备ureB,用杂交瘤技术制备抗ureB单克隆抗体,建立检测HP ureB的IRMA法.以IRMA法检测50例患者血清ureB抗原,并与快速尿素酶试验(RUT)、聚合酶链反应(PCR)及测血清抗体(直接ELISA)法比较,所有检测法均以所取胃黏膜活组织的HP培养作为"金标准".结果 检测HP ureB血清抗原的IRMA法灵敏度为94.6%,特异性为76.9%,阳性预测值为92.1%,阴性预测值为83.3%;RUT法灵敏度为94.6%,特异性为23.1%;PCR法灵敏度为66.8%,特异性为84.6%;测血清抗体法灵敏度为86.5%,特异性为38.5%.IRMA法联合测血清抗体法与"金标准"法差别无统计学意义(χ2=1.165,P＞0.05),而与RUT、PCR法差别具有统计学意义(χ2=5.333和9.436,P均＜0.05).结论 IRMA法检测HP ureB抗原是诊断HP感染的一种灵敏、特异的新方法,在胃部疾病及其他有关疾病的病因与发病机制研究中具有重要意义.     

双抗体夹心ELISA检测生殖支原体抗原方法的初步建立及临床应用

目的 :建立检测生殖支原体 (Mycoplasmagenitalium ,Mg)抗原的双抗夹心ELISA方法 ,探讨其临床应用的可行性。方法 :采用不同株Mg单抗用ELISA双抗夹心法检测Mg抗原 ,摸索该方法检测Mg抗原的最佳实验条件。对Mg标准株及 10 8份临床标本进行平行测定 ,观察双抗夹心ELISA方法的敏感性和特异性及该方法与PCR检测方法的符合率。结果 :包被单抗量为 2 0 μg ml,酶标记单抗 1∶2 0 0稀释时 ,P N值最大 ;检测Mg抗原敏感度达 2 μg ml;10 8份临床标本PCR检测阳性率 8.2 6 % (10 10 8) ;双抗夹心ELISA法检测阳性率 7.4 1% (8 10 8) ,两者符合率达 89.71%。结论 :建立的双抗夹心ELISA法检测Mg抗原具有快速、敏感、经济、简便易行等优点     

DNA序列测定法与实时荧光PCR法检测YMDD突变结果的比较

目的比较DNA序列测定法与实时荧光法检测YMDD突变的结果,并对除YMDD突变之外的耐药相关基因突变及其意义进行讨论。方法收集89例慢性乙肝患者的92份血清样本,均用实时荧光PCR法做YMDD突变检测。采用巢式PCR法扩增HBV反转录酶(RT)基因,对PCR产物进行DNA双向测序,采用NTI软件比对结果,并对RT基因上其他11个已知耐药相关突变位点进行分析。结果在37份YMDD突变阴性的样本中,DNA测序法检测结果为33份M204M(未突变)、1份M204I、3份M204V;4份YMDD突变阳性样本均为突变/未突变序列共存;另检出7份样本存在ADV耐药相关突变,占18.9%(7/37)。在55份YMDD突变阳性样本中,DNA测序法检测到52份,阳性结果符合率为94.5%(52/55);另检出5例存在ADV或ETV耐药相关突变,占9.1%(5/55)。结论DNA序列测定法检测HBVRT基因耐药相关突变敏感性高,重复性好,与实时荧光PCR方法的检测结果有较高的符合率,可同时检出YMDD突变以外的各种耐药相关突变,有助于临床全面了解患者对核苷(酸)类似物的耐药情况,合理地制订抗HBV治疗方案。     

合格库血与肝炎病毒的传播

目的　探讨合格库血在传播肝炎病毒方面所起的作用。方法　采用ELISA方法及PCR技术对合格库血进行了HBsAg ,抗 HBs ,HBeAg ,抗 HBe ,抗 HBc,抗 HCV ,HBV DNA ,HCV RNA的回顾性检测。 结果　 116 2袋合格库血中HBsAg ,抗 HBs,HBeAg ,抗 HBe ,抗 HBc ,抗 HCV ,HBV DNA ,HCV RNA检出率分别为 :0 .17% (2 / 116 2 ) ,2 7.4(318/116 2 ) ,0 .9% (10 / 116 2 ) ,5 .6 % (6 5 / 116 2 ) ,2 4.3(2 82 / 116 2 ) ,0 .17(2 / 116 2 ) ,15 .0 % (174/ 116 2 ) ,1.5 % (17/ 116 2 ) ,其中在 5 6 3份HBsAg ,抗 HCV全部阴性者中HBV DNA ,HCV RNA检出率分别为 :8.9% (5 0 /5 6 3) ,2 .8% (16 /5 6 3)。 结论　仅以HBsAg ,抗 HCV阴性作为排除HBV ,HCV的感染是欠妥的 ,应增加抗 HBs ,HBeAg ,抗 HBe ,抗 HBc的检测 ,同时采用PCR技术来筛出ELISA全部阴性 ,HBV DNA ,HCV RNA仍阳性的携带者 ,减少输血后肝炎的发生。     

应用酶联免疫吸附试验检测血清中抗巨细胞病毒IgM

本文应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测了单项丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高患者血清115份,病毒性肝炎患者血清56份,正常人血清170份,血清中抗-CMV-IgM阳性率分别为37.4%、19.6%和8.2%.对单项ALT升高而临床诊断不明的病人有必要进行抗-CMV-IgM检测;对于病毒性肝炎患者,CMV 感染在特定情况下可加重病情,故检测病人血清抗-CMV-IgM有一定临床意义;由于献血员中存在着CMV较高带毒率,在免疫缺陷病人、器官移植者及婴儿等特殊易感人群输血时,应加强对献血者CMV检测和筛选.     

乳胶层析法检测乙型肝炎病毒标志物的结果分析及应用

目的：讨论乳胶层析法与酶联免疫吸附法（ELISA）检测乙型肝炎病毒标志物的符合率。方法：分别用乳胶层析法和酶联免疫吸附法检测125例血清中乙型肝炎病毒标志物,将两种方法检测结果做以分析、比较。结果：125例血清标本中乙型肝炎病毒标志物的符合率为：HBsAg符合率98.4%;HBsAb符合率96%;HBeAg符合率100%;HBeAb符合率96%;HBcAb符合率97.6%,两种方法检测结果无显著差异。结论：乳胶层析法简便快速,但存在一定的假阳性或假阴性,不能完全替代酶联免疫吸附法进行乙型肝炎病毒标志物的检测,适用于标本初筛查及流行病学调查。     

乙型肝炎病毒前S_2蛋白活力与病毒复制的关系

本文通过用ELISA法检测了122例各型乙型肝炎病人血清中的Pre-s_2蛋白:研究其与HBV复制的各种标志的关系,并讨论了其临床意义。 前s_2蛋白(Pre-s_z蛋白)测定以单克隆抗Pre-s_2抗体为主要试剂,采用夹心法原理,检测患者血清中Pre-s_2蛋白,具体操作方法按试剂盒说明书进行,S/N比值≥2.1及血清滴度>1∶10为阳性;HBV标志(HB_sAg,抗-HB_s、HB_eAg、抗-HB_e、抗-HB_c)均采用ELISA法     

老年患者梅毒螺旋体抗体阳性临床分析

 目的 探讨老年患者梅毒螺旋体( Treponema pallidum,TP)抗体阳性的临床价值.方法 对98例老年人采用酶联免疫吸附试验( ELISA)筛查梅毒抗体阳性标本,分别进行梅毒螺旋体血球凝集试验(treponema pallidum hemagglutination assay,TPHA)检测和快速血浆反应素诊断试验(rapid plasma regaining,RPR)检测,对实验结果 进行统计分析.结果 98例TP- ELISA阳性标本,用TPHA法检测阳性48例,阳性符合率48.98％.RPR法检测阳性44例,该44例仅16例用TPHA确证阳性.结论 老年人梅毒血清学试验阳性,只提示其体内有抗类脂抗体或抗TP抗体存在,不能作为感染梅毒螺旋体的绝对依据.     

3TP法与ELISA法检测梅毒螺旋体抗体价值的比较

目的对3TP法与ELISA方法在梅毒螺旋体抗体检测能力及其在临床应用中的价值进行比较。方法应用3TP法与ELISA方法分别对85份确诊病例与体检正常TPHA方法确证为梅毒特异性抗体阴性的人员血清180份进行同时检测,检测结果进行χ2统计分析。结果总计265份标本检测3TP法阳性符合率100%,假阳性2例,灵敏度为100%,特异度98.9%;ELISA方法阳性符合率98.8%,假阴性1例,假阳性2例,灵敏度为98.8%,特异度为98.9%。两种方法间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3TP法与ELISA方法均具有高灵敏度、高特异度的特点,二者之间无统计学差异(P>0.05),3TP法可以替代现行的梅毒血清学筛检的ELISA方法;3TP法适用于自动生化分析仪,具有简便、快速的优势,可实现对血清梅毒抗体的定量检测,便于疗效和预后观察。     

三种血清学方法检测牦牛布鲁氏菌病的比较

采集牦牛血清237份,用虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）、间接酶联免疫吸附试验（iELISA）进行布鲁氏茵病抗体检测。结果表明,RBPT和SAT与iELISA检测法阳性符合率分别为64．3％和57．1％,但iELISA与SAT和RBPT检测法总符合率达95％以上。本结果表明iELISA试剂盒检测法快速、简便,敏感性和特异性高于RBPT和SAT法。     

病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片的研制与临床应用性研究

目的 制备病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片,并进行系列优化及临床应用性研究.方法 对于基因组较小的HBV、HDV病毒,采用Primer Premier 5.0软件针对其保守区域设计特异引物,普通PCR技术制备探针;利用限制性显示PCR(RD-PCR)技术制备基因组较大且复杂的HCV芯片探针.为了便于摸索实验条件和更好地进行探针优化,先后制备3种芯片,包括HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片及HBV、HDV、HCV联合诊断芯片.结果 杂交结果显示HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片的诊断效果较为满意.从以上2种芯片中选取探针制备HBV、HDV、HCV联合诊断芯片,并对该芯片的检测质量进行初步评估:①检测线性:病毒质粒拷贝数在104～1011copies/ml之间时,芯片检测法显示了较好的线性(r分别为0.990 2、0.992 1、0.981 9,P＜0.01);②特异性:检测黄热病病毒(YFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、登革热病毒(DV)等其他病毒样品结果均为阴性,说明该芯片特异性较好;③重复性:检测HBV、HDV、HCV的批内精密度变异系数(Cv)值为7.1%、7.2%、6.6%,批间精密度Cv值为7.9%、8.2%、7.6%;④准确性:将HBV、HDV PCR片段(共14条)、HCV限制性片段(24条)和部分临床阳性血清(PCR产物)全部进行序列测定,在GenBank中进行Blast比较,结果表明克隆基因均属于相应基因,与理论一致.为了适应临床诊断的要求,对实验条件进行优化,包括减少杂交时间、取消预杂交、将杂交温度提高到52℃等措施.在实验室对芯片进行初步评估后,对临床血清标本进行小规模批量检测实验: 用芯片法和实时定量PCR法检测HBV阳性血清(98例)、HCV阳性血清(42例)和阴性血清(130例),对两种方法进行对比,结果显示芯片法检测与实时定量PCR法有良好的相关性(HBV、HCV的r值分别为0.985 4和0.958 2),检测HBV、HCV、HDV的敏感性和特异性分别为85.7%、76.2%、80.0%和96.7%、95.0%、100%.结论 本研究研制的联合诊断芯片敏感性、特异性均较佳,临床应用前景较好.