非小细胞肺癌耐药相关基因表达与细胞凋亡相关性及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌（Non－Small CellLung Cancer,NSCLC）多种耐药相关基因MRP、MDR1、c－erbB－2表达与细胞凋亡及相关基因bc1－2、c－myc的关系与意义。方法RT－PCR、免疫组化分析多种耐药、凋亡相关基因mRNA及蛋白表达,原位末端标记Terminaldeoxynucleotidyltransferase（TdT）－mediatedbiotind UT Pnickend－labeling,TUNEL检测凋亡细胞。结果63例NSCLCMRP、MDR1、c－erbB－2、bc1－2、c－mycmRNA阳性率分别为81．0％（51／63）、38．1％（24／63）、47．6％（30／63）、65．1％（41／63）、76．2％（48／63）,均高于相应的蛋白表达水平（分别为74．6％、34．9％、46．0％、61．9％、71．4％）,二者具高度相关性（相关系数r＝＋0．76以上,P＜0．02）,5例癌旁组织仅2例c－myc弱阳性,余皆阴性。c－myc、bc1－2与c－erbB－2呈正相关（r＝＋0．54,P＝0．001,r＝＋0．48,P＝0．023）,与MRP、MDR1无相关性。凋亡指数与bc1－2负相关（r＝－0．58,P＝0．017）,与MRP、MDR1、c－erbB－2、c－myc无相关性;腺癌及鳞癌化疗有效组凋亡指数均数（27．2±2．1,30．5±1．8）高于化疗无效组（9．4±1．3,12．6±2．4）（P＝0．001,P＝0．004）,bcl－2、MRP、c－erbB－2阳性率（31．8％,40．9％,22．9％）低于化疗无效组（77．4％,90．3％,67．5％）（P＝0．03,P＝0．01,P＝0．01）,但两组间MDR1、c－myc表达无显著差异（P＝0．06,P＝0．28）。三种以上耐药及凋亡相关基因共表达者中位生存期（8．6个月）明显短于3种以下共表达者（15．5个月）（P＝0．01）。结论NSCLC耐药不仅与多种耐药基因有关,亦涉及细胞凋亡及其相关基因表达,多种耐药及凋亡相关基因共表达与生存期有关。     

肺癌化疗多药耐药与逆转策略

恶性肿瘤化疗失败的主要原因是多药耐药的发生。研究表明,多药耐药的机制十分复杂,P-gp、TopoⅡ、GST-π、金属硫蛋白(metallothionein,MT)及p53基因突变等是肺癌产生多药耐药的物质基础。本文重点介绍非小细胞肺癌耐药因子及耐药逆转的对策,以指导临床化疗药物的筛选及治疗方案的优化,有助于提高肺癌患者的生存期和生存率。     

常规化疗药物连续刺激对人肺腺癌细胞株表达erbB-2，p53和MDR1的影响

目的:分析常规化疗药物连续刺激对肿瘤细胞株表达erbB-2,p53和MDR1的影响,为联合应用生物治疗提供实验基础.方法:人肺癌细胞株经ADM,VP-16,DDP单药及联合用药连续刺激,每种药物分2个剂量梯度.应用流式细胞术分别检测erbB-2,p53和MDR1的阳性细胞数及平均荧光强度,以此推算出不同药物在不同浓度下连续2～3次作用后细胞株以上各蛋白表达的细胞数、平均表达量、总表达量,同时设对照组.结果:随着培养时间的延长各项检测指标其阳性细胞的百分数、平均荧光强度及总荧光强度均呈下降趋势.高剂量各组erbB-2和MDR1以上各项指标基本上均随刺激次数的增加呈下降趋势,而低剂量各组的检测指标则有升有降;p53的表达无一定规律,但第三次刺激后药物组的表达均高于对照组.结论:化疗药物连续刺激后,特别是小剂量化疗后,erbB-2,p53和MDR1的表达可不同程度增高,提示临床上针对这些分子对病人实 施生物治疗时应考虑化疗药物的影响.     

肺癌耐药机制研究进展

肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，严重危害着人们的健康，药物治疗是癌症患者包括手术治疗后患者的主要疗法或辅助疗法，但由于肿瘤基因的不稳定性、表达的异质性和肿瘤细胞的高突变率，耐药性一直是肿瘤治疗中的一个主要问题，肿瘤细胞普遍存在多药耐药现象。耐药性的产生与多种因素相关，包括：①多药耐药基因及P—gp表达增加；②多药耐药相关基因及多药耐药相关蛋白表达增加；③肺耐药相关基因及肺耐药相关蛋白表达     

鼻咽癌多药耐药相关蛋白表达与原发灶放疗敏感性关系的研究

目的:探讨多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)在鼻咽癌中的表达以及与原发灶放疗敏感性的关系。方法:回顾性分析我科1999年1月~2000年12月治疗的鼻咽癌共51例。采用免疫组化S-P法,检测鼻咽癌中MRP的表达,并评价其表达与鼻咽癌原发灶放疗敏感性的关系。结果:鼻咽癌中MRP的阳性表达率为68·63%(35/51),其表达在低T分期(T1-2)和高T分期(T3-4)间差异有显著性意义(P<0·05),MRP表达与原发灶放疗敏感性无关,差异无显著性意义(χ2=0·000,P>0·05)。结论:鼻咽癌中MRP呈高表达,其表达与原发灶放疗敏感性无关,不能作为鼻咽癌原发灶放疗敏感性的预测指标。     

FasL抗体对人白血病细胞株(K562/ADM)多柔比星耐药性的逆转作用

目的：探讨FasL抗体对K562／ADM细胞的多柔比星(阿霉素)耐药性的逆转作用及其可能机制。方法：以K562／ADM细胞为研究对象，设立了对照组、VER处理组、anti-FasL处理组及anti-FasL VER处理组，进行MTT、FCM、TUNEL、S-P免疫组化及RT-PCR检测。结果：anti-FasL或VER处理能增强K562／ADM细胞对ADM的敏感性，其ID50分为200ng／ml、6μg／ml；从细胞周期分析曲线可见上述各组细胞凋亡DNA含量呈逐渐上升趋势(分为7．42％、32．10％、49．29％、56．26％)，TUNEL染色结果亦然(原位凋亡率分为4．5％、36％、45％、58％)；anti-FasL可影响各组细胞FasL及bcl-2的表达，但不影响Pgp的表达。结论：采用anti-FasL．封闭肿瘤细胞FasL表达可逆转K562／ADM细胞的耐药性，并与VER处理有协同作用，它可能为一种新型的肿瘤耐药逆转疗法。     

含MDR基因的人乳腺癌MCF7／pZMR多药耐药细胞株的构建

目的：肿瘤细胞的多药抗药民生（ＭＤＲ）是化学失败的主要原因之定，Ｐ－糖蛋白高表达是ＭＤＲ的主要机制，逆转ＭＤＲ成为肿瘤治疗亟待的问题。目前用于研究抗经性和筛选逆转抗药性药物的模型较少，本实验拟构建多药抗药性细胞株。方法；采用基因工程技术，重组ＭＤＲ１基因ＣＤＮＡ于逆转录病毒载体ｐＺＩＲ－ＮｅｃＳＶ（Ｘ）的克隆位点，并用脂染胺介民的ＤＮＡ转移技术，将其转入包装细胞ＰＡ３１７中，收集含病毒子的培养上清     

多药耐药相关蛋白反义RNA对耐阿霉素人小细胞肺癌细胞株GLC4/ADR耐药性的调节

目的 构建表达多药耐药相关蛋白（MRP）反义RNA的真核表达载体,转染耐药细胞株,初步探讨其影响多药耐药（MDR）的作用机理。方法 以MRPcDNA为模板,应用PCR扩增MRPmRNA5′端（含起始子密码）及MRP mNRA3′端（含终止子密码）片段,通过定向克隆方法,构建表达MRP反义RNA的两个重组载体。通过Lipofectamine将其导入小细胞肺癌（SCLC）耐阿霉素（ADR）的细胞株GLC4／ADR中,经G418筛选,得到分别含pcDNA3空载（MO）、MRP mRNA5′端为靶区的反义RNA（Ma),MRPmRNA3′端为靶区的反义RNA（Mb)的3个细胞克隆。检测细胞内ADR的蓄积改变以及荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结果 经RT－PCR检测,外源片段可获稳定表达。Ma细胞及Mb细胞中,MRP表达分别抑制约14．0％和83．0％,且胞内ADR蓄积量均有一定程度的增加;对ADR的耐药倍数与对照细胞MO相比,分别下降9．5％和28．4％。虽然,MRP反义RNA对细胞的生长、细胞周期及ADR诱导的早期凋亡均无明显影响,但可提高荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结论 MRP反义RNA能抑制MRP蛋白的表达,并使转染细胞内ADR浓度增加,从而逆转MRP介导的MDR。对于配合化疗,提高MRP高表达患者的疗效,具有潜在的应用意义。     

MDR1基因稳定表达的人肝癌多药耐药细胞株的建立

目的 建立多药耐药基因(MDR1)稳定表达的人肝癌Bel-7402耐药细胞株，为应用RNA干扰技术逆转肿瘤多药耐药基因的表达提供实验模型。方法 应用阿霉素(ADM)长期培养筛选建立Bel-7402耐药细胞株，应用MTT法、流式细胞仪(FCM)及逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)对该细胞株相关特性(耐药范围、致死剂量、p-糖蛋白功能及其表达阳性率、MDR1基因检测)进行比较研究。结果 经MTT法检测，耐药细胞株耐药性明显增高，FCM检查发现从敏感细胞到耐药细胞，其阿霉素潴留功能由77．7％降至25．1％，P-糖蛋白(P—gp)阳性率由1．4％升高至54．0％，RT-PCR检查显示该细胞中MDR1 mRNA呈高表达。结论 成功建立了稳定表达MDR1基因的人肝癌Bel-7402耐药细胞株，该细胞中P—gp呈高表达，稳定性好。     

BCRP基因在非小细胞肺癌组织和非癌肺组织中的表达及意义

目的：F是一步研究从人类乳腺癌细胞株（MCF-7/AdrVp)中克隆出对蒽环类抗癌药耐药的BCRP基因在非癌肺组织及非小细胞肺癌组织中的表达。方法：从术后即刻获得的正常肺组织和有省略的非小细胞肺癌组织新鲜标本中及时提取细胞总RNA,通过RT-PCR及PCR法获得并扩增BCRP基因的cDNA产物,再经凝胶电泳分离BCRP基因cDNA带,然后再通过转膜技术把这些BCRP基因cDNA产物转移到杂交膜上,用Southern blot杂交技术检测BCRP基因的表达程度。结果：细胞总RNA分别从8个只有肺癌组织标本和12对同时获取的肺癌组织及非癌肺组织标本中成功提取,然后用变性凝胶电泳鉴定提取RNA的质量,其中4例标本因术中缺血时间太长,或有坏死炎症或术前放化疗等原因,所提RNA有降解而放弃进一步的检测,通过RT-PCR及PCR方法从16例可用标本中获得并扩增BCRP基因的cDNA产物,再通过转膜及Southern blot杂交技术,最终发现BCRP基因在正常肺组织中均有不同程度的表达（10/10）,而在非小细胞肺癌组织标本中只有一半病人的标本有不同程度的表达（8/16）。结论：BCRP基因可能是一个在非癌肺组织中常规表达的基因,而在部分病人的肺癌组织中可能此基因有缺失或被抑制。因此,在部分非小细胞肺癌患者中如用蒽环类抗癌药（如阿霉素,柔红霉素等）化疗时,可能会诱导BCRP基因的过度表达而产生对此类药物的耐药现象。     

化疗对非小细胞肺癌患者淋巴细胞亚群的影响

目的探讨NSCLC患者在化疗前后淋巴细胞及亚群含量的变化及临床意义。方法采用流式细胞仪技术,分别对治疗组和对照组外周血淋巴细胞及亚群进行检测计数。结果40例NSCLC患者CD3 T淋巴细胞、CD4 T淋巴细胞、NK细胞的数量以及CD4/CD8比值均明显低于健康人群,其中CD8 T淋巴细胞的比例明显高于健康人群,具有显著性差异(P<0.05)。有淋巴细胞转移组CD3、CD4、CD4/CD8及NK细胞数量较无淋巴细胞转移组明显下降,CD8显著升高,有显著性差异(P<0.05)。化疗2个周期后,外周血CD3、CD4、NK细胞含量以及CD4/CD8比值化疗后较化疗前降低,差异均有显著性(P<0.05);化疗前后CD8均值变化不大(P>0.05)。结论NSCLC患者机体的免疫状态与病情发展、临床分期密切相关,化疗可明显抑制NSCLC患者机体的免疫功能。     

胃癌多药耐药细胞株的建立及其生物学特征

胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免疫病理研究胆囊癌的CEA免…     

人肺癌在化疗后糖复合物表达的研究

目的：探讨人肺癌在化疗后细胞膜表面糖复合物的变化规律。为进一步判定肺癌化疗疗效提供新的理论依据。方法：选用60例人肺癌标本分成术前化疗组和术前未做化疗组，用免疫组化，检测桑橙凝集素（MPA）、花生凝集素（PNA）、蓖麻凝集素（RCA）和麦胚凝集素（WCA）与化疗组和非化疗组人肺癌细胞的亲和性。结果：在肺癌术前未行新辅助化疗（对照组）与行新辅助化疗（实验组）中，其癌细胞都保持着与MPA较弱的亲和性，两组之间无显著性差异（P〉0．05）。凝集素PNA、RCA、WGA与癌细胞的亲和性在实验组和对照组有显著性差异（P〈0．01）。在肺癌术前行新辅助化疗后．凝集素PNA、RCA、WGA与癌细胞的亲和性较对照组明显减弱。同时也说明，癌细胞表面的糖基Galβ1，3GalNAc，Galβ和GalNAc，NeuNAc（β1，4Glc—NAc）1.2和βNeuNAc在化疗后明显减少或丧失。结论：人肺癌在化疗后细胞膜表面糖复合物的变化规律，有助于肺癌化疗疗效的判定。     

The Expression Levels of KAI1 Gene and Its Mechanism in Human Lung Cancer Cell Lines

Background and Objective Lung cancer is one of the most malignant cancers which is hazarding the people’s health and life in the world. In the past half century, the incidence and mortality of     

非小细胞肺癌DNA含量和细胞凋亡的相关性研究

目的：探讨非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ＤＮＡ含量和细胞凋亡的关系。方法应用流式细胞技术检测３５例ＮＳＣＬＣ和５例正常肺组织的ＤＮＡ含量,凋亡率,计算ＤＮＡ指数、增殖指数。结果：ＮＳＣＬＣ的ＤＮＡ异倍体再现率为７１．４３％,ＤＮＡ指数、增殖指数显著高于正常肺组织,异倍体尤其明显;ＮＳＣＬＣ的弊端喜讯发率显著低于正常肺组织,并与ＤＮＡ指数负相关。结论：ＤＮＡ含量增加、增殖活性增强和凋亡减少在ＮＳＣＬＣ具     

晚期非小细胞肺癌患者XPG基因及MDR1基因单核苷酸多态性与铂类化疗疗效的相关性

目的探讨DNA修复基因XPG以及多药耐药基因MDR1的单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌患者对铂类为主的化疗方案敏感性的关系。方法经病理确诊的晚期NSCLC患者101例,采用DDP为主的化疗方案,化疗2～3个周期后进行临床疗效评价。以PCR-RLFP方法进行XPG、MDR-1的基因型分析,比较不同基因型对化疗敏感性的影响。结果携带MDR1-3435等位基因C/C的患者的化疗有效率为57.8%,显著高于至少携带1个T等位基因的26.8%（OR=0.272,95%CI=0.117～0.635,P（0.05））;携带MDR1-2677至少1个T等位基因的患者的化疗有效率12.8%要显著低于其他基因型患者的58.1%（OR=17.999,95%CI=4.938～65.599,P（0.01）;而XPG各基因型与化疗敏感性的关系没有显著性的差异。结论MDR1基因多态性与NSCLC患者对铂类药物的化疗敏感性相关,基因XPG的多态性是否与铂类药物化疗的敏感性是否具有相关性尚需进一步的研究。     

去甲长春碱联合化疗晚期非小细胞肺癌36例

〔目的）观察去甲长春碱联合化疗对晚期非小细胞肺癌的疗效和耐受住。〔方法〕从1995年10月至1997年10月，36例晚期非小细胞肺癌患者接受以去甲长春减为主的联合化疗，化疗方案为NP、NEP和MNP方案。（结果）总有效率为472％，其中CR3例，PR14例。女性、PSI级、初治者、腺癌、Ⅲ期、MNP方案和NVB剂量40mg／次有效率较高，其中Ⅲ期患者疗效高于Ⅳ期，有显著性差异（P＜0．05），其余无统计学差异（P＞0．05）。中位缓解或6．3个月，中位生存期9个月。主要毒性为白细胞减少，Ⅲ～Ⅳ度减少占33．3％（病例数）和19．1％（周期效）。血红蛋白减少发生率为38．9／（病例数）和23.6％（周期数），血小板减少为22．2％（病例数）和14．5％（周期数）。恶心、呕吐发生率为55．5％，脱发38，9％，静腺炎25．0％，便秘16．7％。〔结论）去甲长春碱联合化方治疗非小细胞肺癌有效，且毒性可耐受。MNP方案值得进一步研究。     

DNA修复酶XRCC1基因多态与非小细胞肺癌对GP方案化疗的敏感性

目的 研究DNA修复酶XRCC1基因Codon 194和Codon 399多态与非小细胞肺癌（NSCLC）患者对吉西他滨/顺铂（GP）方案化疗敏感性的关系.方法 收集经病理学确诊的NSCLC 57例,所有病例化疗前抽静脉血,提取白细胞DNA,用PCR-RFLP技术检测XRCC1 194和399基因型.所有患者均经PDD/GEM化疗方案治疗.结果 ①NSCLC患者中,XRCC1 194 Arg/Arg、 Arg/Trp 、Trp/Trp基因型者分别为30例（52.6%）、23例（40.4%）和4例（7.0%）;XRCC1 399 Arg/Arg、 Arg/Gln、Gln/Gln基因型者分别为31例（54.4%）、23例（40.3%）和3例（5.3%）.经化疗后,19例患者有效,总有效率33.3%.②XRCC1 194 Trp/Trp、Tp/Arg和Arg/Arg基因型者的化疗有效率分别为50.0%、52.2%和16.7%.携带Trp等位基因者的化疗有效率（51.9%）显著高于Arg/Arg基因型者（χ^2=6.41,P=0.0113）;XRCC1 399 Arg/Arg、Arg/Gln和Gln/Gln基因型者的化疗有效率分别为35.5%、34.8%和0,各组间的差异无显著性.XRCC1 194与XRCC1 399多态之间在化疗敏感性方面存在明显的交互作用,同时携带194 Arg/Arg和399 Arg/Arg基因型者的化疗有效率仅为7.7%（1/13）,而同时携带XRCC1 194 Trp等位基因和399 Arg/Arg基因型者的化疗有效率为58.8%（10/17）,2组之间差异显著（Fisher＇s双侧检验：P=0.0067）.结论 DNA修复酶基因XRCC1多态与NSCLC对GP方案化疗的敏感性有关,患者的基因型检测有可能作为预测NSCLC 对GP方案化疗敏感性的指标.