高半胱氨酸对血管内皮细胞的损伤作用及中药抗损伤的实验研究

目的：观察高半胱氨酸（Hcy)对血管内皮细胞（EC）的损伤和益肾活血化痰中药抗Hcy损伤作用。方法：培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,分为对照组和损伤组,观察Hcy对EC的影响;另将细胞分为正常组,损伤组和中药组,观察对乳酸脱氢酸（LDH）的影响。结果：Hcy可改变培养的HUVEC的形态并抑制EC的生长,LDH的释放明显增加,中药组LDH的释放明显减少。结论：血清Hcy对血管内皮有毒性损伤作用。益肾活血化痰中药可抗损伤,保护细胞能量代谢。     

高半胱氨酸对血管内皮细胞的损伤作用及中药抗损伤的实验研究

目的观察高半胱氨酸(Hcy)对血管内皮细胞(EC)的损伤和益肾活血化痰中药抗H,y损伤作用.方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分为对照组和损伤组,观察Hcy对EC的影响;另将细胞分为正常组、损伤组和中药组,观察对乳酸脱氢酸(LDH)的影响.结果Hcy可改变培养的HUVEC的形态并抑制EC的生长,LDH的释放明显增加,中药组LDH的释放明显减少.结论血清Hcy对血管内皮有毒性损伤作用,益肾活血化痰中药可抗损伤、保护细胞能量代谢.     

金属硫蛋白对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤及脂质过氧化的影响

目的 观察金属硫蛋白（metallothionein，MT）拮抗同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）对血管内皮细胞损伤及脂质过氧化作用。方法培养人血管内皮细胞，台盼蓝排斥法计算细胞存活率，NADH氧化法测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出量，^109Cd血红素饱和法测细胞MT含量，硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛（MDA）含量，化学比色方法测超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。结果同型半胱氨酸降低血管内皮细胞存活率，增加细胞LDH漏出量，增加细胞MDA含量，降低细胞SOD、GSH-Px活力。外源性MT呈浓度依赖性地抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤及抗氧化酶活力降低；凝血酶诱导MT生成亦明显抑制Hcy引起的内皮细胞损伤和抗氧化酶损伤。结论Hey损伤血管内皮细胞，降低细胞抗氧化酶活力，外源性给予或内源性诱导MT生成均可拈抗Hcy的内皮细胞损伤及脂质过氧化作用。     

不同还原性疏基氨基酸对人脐静脉内皮细胞的损伤作用研究

目的 探讨三种还原性疏基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法 将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性疏基氨基酸24小时后，测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果 ①同型半胱氨酸（Hcy）不仅促进脂质过氧化，而且可诱导细胞凋亡并可致细胞坏死。②谷胱甘肽（GSH）呈还原性，对细胞有全面的保护作用。③Hcy的氧化性最强，GSH则呈现出完全的还原性，半胱氨酸（Cys)可能处于二者之间。结论 同型半胱氨酸可能是通过特异的抑制谷光甘肽过氧化物酶并减弱了细胞内的还原缓冲能力等机制，发挥与Cys和GSH不同的生物学效应，从而导致内皮细胞出现坏死的凋亡等损伤性的改变。     

同型半胱氨酸对C17.2小鼠神经干细胞的影响及作用机制

目的探讨同型半胱氨酸（Hcy）对C17.2小鼠神经干细胞（NSCs）的影响及可能的分子机制。方法培养C17.2小鼠NSCs,分为对照组、0.25mMHcy组、0.25mMHcy+5mMN-乙酰半胱氨酸（NAC）组;加入相应药物培养24h后,采用CCK-8法检测各组NSCs生长活力,流式细胞术和Caspase-3法检测Hcy对NSCs凋亡的影响,彗星实验检测Hcy对NSCsDNA的损伤程度,H2DCF-DA染色检测NSCs的氧自由基（ROS）水平。结果Hcy能诱导细胞ROS产生和DNA损伤,从而导致NSCs凋亡增加。相反,NAC可降低Hcy诱发的ROS产生,明显改善DNA损伤,提高细胞存活率。结论Hcy能诱导NSCsROS产生和DNA损伤,并导致NSCs凋亡;而减少Hcy引发的ROS产生可以明显改善DNA损伤并提高细胞存活率。     

Apelin-13通过AMPK通路抑制同型半胱氨酸诱导的内皮细胞损伤

目的 观察Apelin-13对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法采用10 mmol/L Hcy处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24 h,诱导内皮细胞的损伤。采用不同浓度(0.1 μmol/L、1.0 μmol/L和10.0 μmol/L)的Apelin-13预处理1 h,再加入含Hcy的培养基中继续孵育24 h,观察细胞的损伤情况。采用MTT法测定细胞活力,比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性。采用Western Blot检测HUVECs中磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达。结果与对照组比较,Hcy组细胞的存活率显著降低,细胞培养液中LDH活力显著性升高(均P＜0.05)。与Hcy组组比较,Apelin-13(1.0和10.0 μmol/L)预处理组细胞的存活率均显著升高,细胞培养液中LDH活力显著性降低(均P＜0.05)。Hcy组HUVECs细胞中p-AMPK蛋白的表达与对照组比较没有显著性差异(均P＞0.05)。与Hcy组比较,Apelin-13(1.0和10.0 μmol/L)预处理组HUVECs细胞中p-AMPK蛋白的表达显著性下调(均P<0.05)。AMPK抑制剂Compound C部分取消了Apelin-13的内皮细胞保护作用。结论Apelin-13抑制了同型半胱氨酸诱导的内皮细胞损伤,其机制与可能与上调AMPK的磷酸化有关。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞株ECV-304生长的抑制作用

目的: 观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞生长的影响,探讨高同型半胱氨酸血症(HHCY)致动脉粥样硬化(As)的机制。方法: 将不同浓度Hcy与ECV-304细胞体外共培养不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞生长抑制率,3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成。结果: 显微镜见对照组细胞呈单层鹅卵石样紧密排列,而实验组随Hcy浓度的升高及作用时间的延长,细胞排列杂乱,聚集成团。低浓度Hcy对细胞生长的抑制作用不明显,5.0、10.0 mmol/L Hcy对细胞生长呈现抑制作用,且两组浓度作用72 h的生长抑制率高于作用48 h (P< 0.01)。5.0、10.0 mmol/L Hcy作用48 h、72 h,3H-TdR掺入抑制率高于相应对照组和低浓度组,且作用72 h的掺入抑制率显著高于48 h (P<0.01)。结论: Hcy对VEC具有直接损伤作用,可以时间及剂量依赖方式抑制ECV-304细胞的生长及DNA的合成。     

高同型半胱氨酸通过Notch1/Hes1信号通路促进HT22细胞自噬和凋亡

目的 探讨高同型半胱氨酸（HHcy）引起神经细胞损伤的相关机制。方法 采用HT22细胞,分为空白对照组（简称0组）,高同型半胱氨酸组（Hcy 100μmol/L,简称100组）,高同型半胱氨酸维生素B干预组（Hcy 100μmol/L+叶酸+维生素B12,简称100+fv组）,空白对照+叶酸+维生素B12组（简称0+fv组）。通过透射电镜和流式细胞术观察自噬及凋亡;Western blotting、Real-time PCR检测Hes1、Hes5、Notch1、Jagged1、Bcl-2、Bax、P62、LC3II/LC3I表达。结果 培养48 h后,高同型半胱氨酸组（100组）中死亡细胞明显增加（P<0.05）。流式细胞检测结果显示,高同型半胱氨酸组凋亡细胞比例均高于0组、100+fv组和0+fv组（P<0.05）。透射电镜观察显示,在高同型半胱氨酸组,线粒体肿胀、空泡化,自噬体增加。Western blot显示,在高同型半胱氨酸组,Bax/Bcl-2比值明显高于对照组和100+fv组（P<0.05）;P62相对值明显低于对照组（P<0.05）;LC3II/L...     

细胞流式术检测同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 应用流式细胞术检测同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管平滑肌细胞凋亡,进一步探索同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制.方法 采用组织贴块法培养人血管平滑肌细胞,FITC荧光标记PI/Annexin V染色后,流式细胞术检测Hcy诱导的平滑肌细胞凋亡率.结果 在Hcy不同浓度下(100、200、500、1 000 μmol/L)培养24 h后平滑肌细胞的凋亡率分别是2.64%±0.14%、8.36%±2.47%、12.97%±4.86%、24.15%±5.46%,对照组在0 μmol/L的Hcy培养液中细胞的凋亡率为2.58%±0.32%;用终浓度(1 000 μmol/L)的Hcy培养液分别培养0、6、12、24、48 h后平滑肌细胞的凋亡率分别是2.29%±0.52%、8.45%±2.42%、13.45%±4.42%、24.15%±5.46%、32.75%±4.72%.Hcy诱导人血管平滑肌细胞凋亡成时间及浓度依赖性增加.结论 同型半胱氨酸可诱导平滑肌细胞过度凋亡,促进平滑肌细胞过度凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化及斑块不稳定性的机制之一.     

不同还原性巯基氨基酸对人脐静脉内皮细胞的损伤作用研究

目的　探讨三种还原性巯基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法　将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性巯基氨基酸 2 4小时后 ,测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果　 1同型半胱氨酸 (Hcy)不仅促进脂质过氧化 ,而且可诱导细胞凋亡并可致细胞坏死。 2谷胱甘肽(GSH)呈还原性 ,对细胞有全面的保护作用。 3Hcy的氧化性最强 ,GSH则呈现出完全的还原性 ,半胱氨酸 (Cys)可能处于二者之间。结论　同型半胱氨酸可能是通过特异的抑制谷光甘肽过氧化物酶并减弱了细胞内的还原缓冲能力等机制 ,发挥与 Cys和 GSH不同的生物学效应 ,从而导致内皮细胞出现坏死和凋亡等损伤性的改变。     

甘氨酸在细胞ATP耗竭性损伤中的保护作用

目的：观察甘氨酸(Gly)对ATP耗竭的犬近曲小管上皮细胞(MDCK细胞)的保护作用,探讨其对复能时细胞损伤、增殖及代谢情况的影响。方法：通过正置显微镜观察、四甲基噻唑蓝(MTT)实验、3H-TdR掺入实验、乳酸脱氢酶(LDH)释放、台盼蓝活细胞计数．观察ATP耗竭时加入Gly对MDCK细胞的保护作用．及其后细胞复能时对细胞损伤、增殖及代谢情况的影响。结果：ATP耗竭2h后,Gly处理组细胞台盼蓝染色率较耗竭组降低约50％,LDH释放率明显减少,而3H—TdR掺入量为耗竭组细胞的3倍以上。复能不同时相,光镜下Gly处理组细胞损伤程度明显减轻,台盼蓝染色率及LDH释放率均显著低于耗竭组,而MTT D值和3H-TdR掺入量明显高于耗竭组。结论：甘氨酸对ATP耗竭的MDCK细胞具有保护作用,可增加复能后细胞存活的机会．防止细胞膜通透性增加．提高受损细胞的增殖活性和代谢潜能。     

金属硫蛋白、同型半胱氨酸对血管内皮细胞的作用

目的:观察金属硫蛋白(metallothionein MT)对同型半胱氨酸(homocysteine Hcy)损伤血管内皮细胞的保护作用及机制。方法:培养血管内皮细胞,培养液中分别加入Hcy及Hcy+MT孵育血管内皮细胞,自动生化分析仪测培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,硫代巴比妥酸法测细胞丙二醛(MDA)含量,化学比色方法测超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:与对照组相比,Hcy组细胞LDH及蛋白漏出增加,细胞MDA含量明显升高(P<0.01);外源性给予MT(10-9mol/L,5×10-9mol/L,10-8mol/L)呈浓度依赖性地抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤,与Hcy组比,LDH漏出分别降低16.3%(P<0.05)、23.5%(P<0.01)和37.2%(P<0.01)。MDA含量分别减少15.8%(P<0.05)、21.1%(P<0.01)和36.8%(P<0.01)。结论:MT拮抗Hcy对血管内皮细胞的脂质过氧化损伤。     

p38MAPK信号通路抑制剂对NMDA诱导的体外培养的皮层神经元损伤的保护作用及机制

目的 观察MK801及SB203580对N-甲基-D-天（门）冬氨酸（NMDA）诱导的皮层神经元损伤的影响, 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK)信号通路在神经元损伤中的作用和机制。方法 培养7d的新生SD大鼠皮层神经元随机分为对照组、NMDA损伤组、MK801干预组、SB203580干预组、联合干预组（SB203580+MK801）。MTT比色实验评价细胞生存力,乳酸脱氢酶(LDH)释放率测定细胞损伤程度,吖啶橙/溴化乙锭 (AO/EB) 双重荧光染色观察细胞凋亡形态和数目,Western blotting检测大鼠皮层神经元各组p38MAPK、BCL-2和BAX表达情况。结果 与对照组比较,NMDA损伤组神经细胞存活力降低、培养上清液中LDH含量增加、凋亡细胞增多、p38MAPK和BAX表达增加(P均＜0.01),BCL-2表达降低(P＜0.05);与NMDA损伤组比较,各个干预组细胞生存力提高、LDH释放率降低、凋亡减少、p38MAPK及BAX的表达减少、BCL-2表达增多(P均＜0.01)。结论 MK801,SB203580对NMDA诱导的皮质神经元损伤具有保护作用,p38MAPK通路可能参与介导MK801的保护作用,其共同机制是通过抑制p38MAPK信号通路介导的凋亡相关蛋白实现的。     

肝细胞生长因子对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的：研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧、缺糖诱导的星形胶质细胞（As）损伤及凋亡的影响。方法：以缺氧、缺糖来诱导原代培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞损伤。用不同终浓度（20～100ng/mL）的HGF处理星形胶质细胞,以乳酸脱氢酶（LDH）漏出率作为细胞损伤指标,四甲基偶氮唑盐（MTT）还原试验检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡细胞,透射电镜观察细胞超微结构。结果：缺氧缺糖引起LDH漏出率增高,细胞活力下降,细胞凋亡率增高。HGF处理后,LDH漏出率降低,细胞活力增高,同时细胞凋亡率降低（P＜0.05）,最大效应剂量为60ng/mL。结论： HGF对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤具有保护作用,能减少星形胶质细胞凋亡,并呈一定的剂量依赖关系。     

同型半胱氨酸影响Caco-2细胞线粒体功能的实验研究

目的 观察同型半胱氨酸(Hcy)对Caco-2细胞线粒体功能的影响.方法 在Caco-2细胞中加入不同浓度(0、10、25、50、100、500、1 000 μmol/L) Hcy作用不同时间(3、6、12、24 h),采用MTT法及检测乳酸脱氢酶活性,观察Hcy对Caco-2细胞生长活力的影响,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、三磷酸腺苷酶(ATPase)水平及线粒体肿胀度观察Hcy对Caco-2细胞线粒体功能的影响.结果 随着Hcy作用时间延长及作用浓度的增加,Caco-2细胞的生长活力受到明显抑制,MDA、SOD、GSH-Px水平较对照组明显增加,SDH、ATPase水平下降,线粒体肿胀度下降幅度较正常对照组降低.结论 Hcy具有损伤Caco-2细胞线粒体功能的作用,可能与Hcy氧化损伤有关.     

同型半胱氨酸对小鼠成神经瘤细胞毒性作用研究

Objective: To explore the neurotoxicity of homocysteine on mouse neuroblastoma cells (N2a) and its effect on pERK1/2 protein level. Methods: Cultured N2a cells were divided into four groups according to the concentrations of homocysteine: control group (0 μmol/L), low-Hcy (30 μmol/L), moderate-Hcy (300 μmol/L), high-Hcy (1 000 μmol/L) groups. After 72 h Hcy treatment, the toxicity of N2a cells was detected by LDH (lacate dehydrogenase) assay kit, cell proliferation ability was detected by MTT methods, and the protein expression of pERK1/2 was detected by western blot. Results: The LDH activity in Hcy-treated groups was increased compared with control group (P<0.05). The cells proliferation ability was decreased after Hcy treatment, and OD values were reduced compared with control group (P<0.05). The protein expression of pERK1/2 decreased after Hcy treatment, and significant differences among the moderate, high Hcy dose groups and control group were found (P<0.05). Conclusion: The toxic effect of Hcy on N2a cells may be caused by reduced ERK1/2 protein phosphorylation expression. It suggests that a low serum Hcy level may have a protective effect on neural cells.     

1,5-二咖啡酰奎宁酸在肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺血再灌注损伤中的作用

目的研究1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA)对缺血再灌注诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤是否有保护作用。方法用缺糖缺氧4 h/复氧24 h处理PC12细胞作为PC12细胞缺血再灌注的体外模型,实验分为4组:空白对照组、1,5-diCQA(50μmol/L)对照组、缺血再灌注组、1,5-diCQA(50μmol/L)+缺血再灌注组。应用酶标仪测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量,荧光显微镜观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)含量、线粒体膜电位水平。结果 PC12细胞经缺血再灌注损伤后,与空白对照组比较,细胞LDH释放量及ROS含量显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著下降(P<0.05);1,5-diCQA+缺血再灌注组与缺血再灌注组比较,细胞LDH释放量及ROS含量明显降低(P<0.05),线粒体膜电位显著升高(P<0.05);1,5-diCQA对照组与空白对照组比较,以上3项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 1,5-diCQA通过减轻氧化应激、保护线粒体功能,减轻缺血再灌注诱导的PC12细胞损伤。