hTERT基因反义核酸对Hela宫颈癌细胞端粒酶活性的影响

研究人类端粒酶催化亚单位（hTERT)基因的反义寡核苷酸对宫颈癌细胞的影响。方法：采用TRAP－ELISA检测Hela细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：hTERT基因反义核酸能有效抑制Hela细胞端粒酶活性。结论：hTERT基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，为肿瘤治疗提供了一个有效的新途径。     

人端粒相关蛋白T-STAR的克隆及其与端粒酶催化亚单位hTERT的相互作用研究

目的克隆人端粒相关蛋白T-STAR并研究其与端粒酶催化亚单位hTERT在哺乳细胞内的相互作用。方法构建表达载体pGBKT7-hTERT,以pGBKT7-hTERT为诱饵,采用酵母双杂交技术进行cDNA文库筛选;构建pVP16-T-STAR和pMhTERT重组载体,脂质体法将其与报告质粒共转染入胃腺癌细胞株SGC-7901,以pM-53 pVP16-T、pM3-VP16为阳性对照,以pM53 pVP16-CP为阴性对照;以pM-hTERT pVP16、pM pVP16-T-STAR、pM pVP16为交叉阴性对照。ELISA法检测报告基因CAT的表达。结果成功构建真核表达载体pGBKT7-hTERT,将获得的阳性克隆测序,并进行同源性比较证实为是已收录的人cDNA序列T-STAR。pGBKT7-hTERT和pVP16-T-STAR共转染之后,报告基因CAT的表达(A值为0.258)显著高于阴性对照(A值为0.002~0.015)。结论T-STAR与hTERT在胃癌细胞内发生了相互作用,T-STAR可能是人端粒相关蛋白新成员,通过hTER参与端粒酶活性的调控。     

端粒酶催化亚基基因表达激活人胚肺成纤维细胞端粒酶活性

目的 :通过端粒酶催化亚基基因转入人胚肺成纤维细胞 ,激活人胚肺成纤维细胞端粒酶活性 ,探讨其在延缓细胞衰老中的作用。方法 :用PCI_hTRT质粒转染人胚肺成纤维细胞 ,G4 18筛选获得稳定表达端粒酶活性的人胚肺成纤维细胞 ,采用RT_PCR和TRAP法分别测定端粒酶催化亚基mRNA和端粒酶活性表达情况。结果 :获得了表达端粒酶活性的人胚肺成纤维细胞 ,其寿限长于正常人胚肺成纤维细胞。结论 :端粒酶催化亚基异位表达可以激活人胚肺成纤维细胞的端粒酶活性 ,并延长人胚肺成纤维细胞的寿命     

碱性成纤维细胞生长因子对表皮细胞中端粒酶反转录酶表达的影响

目的观察表皮细胞去分化过程中人端粒酶反转录酶(hTERT)的表达差异及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法采用bFGF诱导表皮细胞去分化形成表皮前体干细胞,免疫细胞化学染色法检测bFGF诱导培养后表皮细胞表型的改变,并用流式细胞法、免疫荧光染色及TRAP-银染法检测bFGF诱导培养后表皮细胞中hTERT的表达差异。以同等条件下未经bF-GF处理的人表皮细胞为对照组,同期分离培养的人在体表皮干细胞为阳性对照组。结果免疫细胞化学染色显示,bFGF诱导培养后表皮细胞中β1-integrin、CK19、CK14表达明显增强,而CK10表达明显降低。流式细胞仪检测显示,bFGF诱导后实验组、对照组及阳性对照组hTERT阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的98.41%、0.77%及99.76%。TRAP-银染法检测显示实验组hTERT表达活性明显上调,且与阳性对照组比较无显著差异。间接免疫荧光染色显示实验组去分化来源表皮干细胞和在体表皮干细胞中的hTERT分布存在着亚细胞位点差异。结论 bFGF可诱导表皮细胞去分化并重新获得表皮干细胞的表型,这一过程不但可引起hTERT的表达及活性改变,而且能从亚细胞水平上诱导其发生位点迁移。     

人端粒酶反转录酶基因转染对人胎儿表皮干细胞增殖的影响

目的 探讨外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染对人胎儿表皮干细胞增殖的影响.方法 采用脂质体转染法,将含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT和卒载体质粒pIRES2-EGFP分别导人体外培养的人胎儿表皮干细胞,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选.用RT-PCR和Western blot检测表皮十细胞hTERT mRNA及其蛋白的表达,端粒重复序列扩增法(TRAP)-ELISA检测其端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期.结果 非转染组和空载体质粒转染组表皮干细胞弱表达hTERT mRNA和蛋白,而质粒转染组表皮干细胞强表达hTERT mRNA和蛋白;与非转染组和窄载体质粒转染组比较,质粒转染组表皮干细胞端粒酶活性的表达量显著升高,G_0/G_1期细胞比例明显下降,而S、G_2/M期细胞比例升高,增殖指数增加.结论 外源性hTERT基因转染能有效增强体外培养的人表皮干细胞hTERT mRNA和蛋白的表达及端粒酶活性,细胞增殖能力明显增强.     

HP培养滤液诱导下抑制bcl-2基因表达对SGC7901细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨bcl-2表达与hTERT、端粒酶活性之间的调控关系,了解HP的致癌机制。方法:在HP培养滤液诱导前后,采用流式细胞仪检测bcl-2AODN抑制bcl-2基因之后人SGC7901细胞hTERT蛋白的表达。结果:对照组人SGC7901细胞24h、36h和48h表达hTERT蛋白的阳性细胞数和荧光指数显著低于经HP培养滤液诱导的SGC7901胃癌细胞组(P<0.05)。在HP滤液诱导下,抑制bcl-2基因的SGC7901胃癌细胞24h、36h和48h表达hTERT蛋白的阳性细胞数和荧光指数显著低于与SGC7901胃癌细胞(P<0.05),同时显著高于对照组(P<0.05)。结论:bcl-2基因正向调控hTERT蛋白表达,bcl-2表达上调可能是端粒酶活化的主要途径之一。端粒酶的激活不完全依赖于bcl-2途径,还存在其他的调控因素。HP感染不仅通过上调bcl-2的表达,还可以通过其他途径激活端粒酶,这可能是HP感染致癌的一条重要途径。     

亚砷酸钠对人胚胎肺成纤维细胞p53基因表达的诱导作用观察

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对体外培养的人胚胎肺成纤维细胞(HELF)p53基因表达的影响。方法以0、3、9、15μmol/L的NaAsO2处理体外培养的HELF24h,然后用Real-ti me PCR检测p53mRNA的表达,免疫组化SABC法检测p53蛋白水平。结果3、9、15μmol/L NaAsO2处理24h后,HELF中p53mRNA及蛋白表达均明显增高(P<0.05),且除9、15μmol/L组间p53mRNA表达无明显差异外,其余各组mRNA及蛋白表达水平均随NaAsO2剂量升高而增加(P<0.05)。直线相关分析显示,HELF中p53mRNA及蛋白表达均与NaAsO2剂量呈正相关(r=0.947,P<0.01;r=0.992,P<0.01)。结论NaAsO2可诱导HELF中p53mRNA和蛋白表达增加,并与剂量呈正相关。     

大蒜素对人胃腺癌SGC-7901细胞株端粒酶活性和细胞凋亡的影响

为观察大蒜素对胃腺癌SGC 790 1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。采用不同浓度的大蒜素处理SGC 790 1细胞后 ,用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的改变 ;用TRAP PCR ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果显示 ,大蒜素能够改变细胞周期的分布 ,增加G2 /M期细胞比例 ;呈剂量依赖性诱导其凋亡 ;大蒜素对端粒酶活性的抑制作用也有时间和剂量依赖性。提示大蒜素能够抑制端粒酶的活性 ,促进细胞凋亡     

胃黏膜端粒酶活化与细胞凋亡的关系

目的研究胃癌及胃癌前病变组织端粒酶催化亚单位的表达,探讨端粒酶活性与细胞凋亡的关系,以揭示端粒酶活化和细胞凋亡在胃癌发生中的作用。方法选择64例慢性胃炎及胃癌患者,其中慢性胃炎伴萎缩者16例,伴肠上皮化生者15例,伴中、重度异型增生者14例,胃癌19例。采用SP法检测hTERT蛋白表达,采用TUNEL染色法原位检测细胞凋亡。结果萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生和胃癌组织hTERT蛋白表达率分别为25.0%、46.7%、64.4%和78.9%,呈递增趋势,两两比较均有显著性差异(P<0.05)。萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生和胃癌组织细胞凋亡指数(%)分别为11.54±2.28、17.05±2.88、7.41±1.32和5.03±2.23,呈递减趋势,两两比较均有显著性差异(P<0.05)。hTERT蛋白阳性患者细胞凋亡指数为8.45%±5.30%,显著低于hTERT蛋白阴性患者(11.86%±4.24%,P<0.05)。结论胃癌前病变至胃癌的演化过程中,端粒酶激活并诱导细胞凋亡异常,二者同时存在,破坏了胃黏膜上皮的稳定性,这可能是胃黏膜细胞癌变的机制之一。     

Hp培养滤液诱导下抑制hTERT基因对SGC27901细胞bcl-2蛋白表达的影响

目的：探讨bcl-2表达与端粒酶活性二者之间的调控关系，了解Hp的致癌机制。方法：在Hp培养滤液诱导前后，采用流式细胞仪检测抑制hTERT基因之后SGC7901胃癌细胞bcl-2蛋白的表达。结果：对照组SGC7901胃癌细胞24h、36h和48h表达bcl-2蛋白的阳性细胞率和荧光指数显著低于经Hp培养滤液诱导的SGC7901胃癌细胞组（P〈0．05）。在Hp滤液诱导下，抑制hTERT基因的SGC791胃癌细胞24h、36h和48h表达bcl-2蛋白的阳性细胞率和荧光指数与SGC7901胃癌细胞无显著差异（P〉0．05）。结论：Hp感染可以促进bcl-2蛋白表达，这可能是Hp感染致胃癌的重要机制之一。端粒酶活化不参与调控bcl-2蛋白表达。     

膀胱癌中端粒酶 RNA的原位表达与肿瘤预后

观察人端粒酶mRNA(hTR）在各级膀胱移行细胞癌（TCC）中的表达,分析其与肿瘤分级及预后的关系。作者回顾性分析了67例膀胱移行细胞癌及对照组的正常膀胱上皮、膀胱良性病变各10例,对石蜡标本用地高辛标记的端粒酶反转录酶基因(hTRET)寡核苷酸作为RNA探针,原位检测端粒酶mRNA在膀胱移行细胞癌细胞中的表达。结果显示,标本的端粒酶mRNA表达强度与膀胱TCC分级、预后显著相关（P＜0．01）。提示hTR可能成为判断膀胱TCC的独立预后指标。     

端粒酶在肾上腺皮质肿瘤中的表达及其临床意义

为了解端粒酶在肾上腺皮质肿瘤中的表达及其临床意义 ,采用PCR为基础的端粒重复序列扩增法对 8例肾上腺皮质癌、2 0例肾上腺皮脂腺瘤、2 4例瘤旁组织以及 4例正常肾上腺组织进行了检测。结果显示 ,8例肾上腺皮质癌组织中端粒酶表达阳性 7例 ;瘤旁组织端粒酶表达阳性 1例 ;2 0例肾上腺皮脂腺瘤及所有正常肾上腺组织端粒酶表达均阴性。研究表明 ,肿瘤中端粒酶活性表达反映了肿瘤细胞的恶性行为 ;端粒酶活性检测可望成为肾上腺皮质肿瘤良恶性诊断的一种有用方法     

胃癌、结肠癌中端粒酶活性的检测及临床意义

目的:检测胃癌、结肠癌及其相应正常组织中端粒酶活性,探讨其在胃癌、结肠癌发生中的作川以及与临床病理特征之间的关系。方法:采用PCR-TRAP法检测92例胃癌、结肠癌和61例正常组织的端粒酶活性,并州端粒酶活性与临床病理特征关系进行分析。结果:胃癌和结肠癌中端粒酶活性阳性率为84.9％,而正常组织为9.83％,胃癌和结肠癌组织端粒酶活性显著高于正常组织,P<0.01;胃癌、结肠癌组织中端粒酶活性在不同分化程度及淋巴转移之间未发现显著差异,P>0.05。结论:端粒酶在胃癌、结肠癌的发生中起重要作用;端粒酶在胃癌、结肠癌组织中高表达,而在正常胃肠组织低表达的特性,使其有望成为一种较为理想的胃肠道肿瘤诊断的标志物。     

NRF4转染对横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子表达的影响

为观察MRF4转染对人横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子MyoD表达的影响,利用脂质体法将MRF4转染人横纹肌肉瘤RD细胞,原位杂交检测MRF4、MyoD mRNA的表达,观察细胞形态、生长速度变化,并采用免疫细胞化学方法检测横纹肌肌球蛋白重链及肌动蛋白α-actin表达。结果显示,转染后RD细胞形态向高分化方向变化,生长受抑;MRF4、MyoD表达明显增加;细胞肌球蛋白重链和肌动蛋白α-actin表达显著增强。提示MRF具有促进RD细胞分化的作用,并可激活另一生肌调节因子MyoD的表达。     

MRF4转染对横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子表达的影响

为观察MRF4转染对人横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子MyoD表达的影响,利用脂质体法将MRF4转染人横纹肌肉瘤RD细胞,原位杂交检测MRF4,MyoDmRNA的表达,观察细胞形态,生长速度变化,并采用免疫细胞化学方法检测横纹肌肌球蛋白重链及肌动蛋白α-actin表达。结果显示,转染后RD细胞形态向高分化方向变化,生长受抑：MRF4、Myod表达明显增加;细胞肌球蛋白重链和肌动蛋白α-actin表达显著增强。提示MRF4具有促进RD细胞分化的作用,并可激活另一生肌调节因子MyoD的表达。     

台阶运动对人胃电的影响

对40名女大学生采用EGG-1A型胃电图仪从体表描记胃电图,观察台阶运动后胃电图振幅和频率的变化。结果提示:台阶运动后胃电图的振幅明显降低;运动负荷增加时,振幅降低愈甚,且与心率的增加呈负相关。运动后胃电图频率亦略有减慢(P<0.01),但不随运动负荷增加而进一步改变。     

FGF10及其受体对胎儿皮肤附件形成的诱导作用

探讨成纤维细胞生长因子10(FGF10)及其受体(Bek)在胎儿皮肤附件(SA)形成中的表达特征及其生物学意义。采用病理学技术和免疫组化方法检测FGF10、Bek、细胞角蛋白-19((CK19)、Bcl-2和细胞增殖核抗原(PCNA)在130块分别来自26例不同胎龄(8～31周)胎儿5个不同部位(头、下颌、耳垂、肩和胸骨柄)的皮肤组织中的表达水平。结果显示,除胎龄(E)8周胎儿缺乏FGF10和Bek蛋白表达外,所有蛋白在E11周以后的皮肤内都有阳性表达。在E11周,表皮下成团分布的间质细胞过表达FGF10、PCNA和Bcl-2,表皮细胞和周皮细胞则所有蛋白均呈强阳性表达;在E13周时表皮细胞局灶性增殖形成SA胚芽,并逐渐向真皮内生长、分化和迁移。提示问质细胞旁分泌的FGF10与上皮细胞膜Bek特异性结合,是诱导胚胎SA上皮细胞生长及其形态发生的重要信号。     

CD44V6的表达对大肠癌细胞缝隙连接细胞间通讯的影响

应用原位分子杂交，免疫组化，免疫荧光定量分析的方法研究ＣＤ４４Ｖ６在人大肠癌细胞中的表达，应用激光漂白后荧光恢复技术研究ＣＤ４４Ｖ６对大肠癌细胞的缝隙连接细胞间通讯的影响。     

重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠基质分解素-1基因表达的影响

为了解重组人肝再生增强因子（hALR）对肝纤维化大鼠基质分解素－1（MMP3）基因表达的影响,建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型,模型完成后予不同剂量hALR治疗,在不同的时间点留取大鼠肝组织标本,提取总RNA,用逆转录定量聚合酶链反应（RT－PCR）测定MMP3的基因表达。结果在两种模型中hALR治疗组大鼠肝组织MMP3的基因表达水平在治疗过程中的不同阶段均明显高于模型组;高剂量hALR组大鼠肝组织基质分解素－1的基因表达水平均明显高于低剂量组,提示hALR可增强肝纤维化大鼠MMP3的基因表达。