Notch细胞信号通路在神经干细胞增殖分化中的作用

<正>Notch是相邻细胞之间互相通讯的典型信号通路,其作用具有多样性,在调控细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期等方面都发挥了重要作用。神经干细胞(NSCs)的增殖分化受诸多因素影响,越来越多的证据表明Notch细胞信号通路在此过程中具有重要作用。本文主要就Notch信号通路及其对NSCs增殖分化的作用进行综述。1 Notch细胞信号通路的组成Notch细胞信号通路主要由Notch受体、配体(DSL)、CSL     

神经干细胞增殖分化基因调控的进展

文章从Notch基因，bHLH基因和同源盒基因等方面介绍了神经干细胞增殖分化基因调控的最新研究进展。     

开心散对SAMP8小鼠神经递质的影响

目的观察开心散对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8神经递质的影响。方法将40只SAMP8小鼠按随机数字表法分为模型组、开心散高剂量组、开心散低剂量组、艾地苯醌组,每组10只,选10只SAMR1小鼠为正常组。灌胃给药干预8 w后,取血浆及组织上清,采用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织及血浆5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)含量。结果与正常组比较,各组脑组织5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著降低(P<0.01),血浆5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,开心散高剂量组和低剂量组脑组织5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著升高(P<0.01),血浆5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著降低(P<0.01)。结论开心散可以通过改善快速老化痴呆模型小鼠单胺类神经递质的含量,调整神经递质的不平衡状态,进而改善阿尔茨海默病(AD)的行为和精神症状。     

神经干细胞的增殖与分化调控机制

神经干细胞(NSC)是具有高度自我更新能力并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的神经前体细胞。从胚胎和成年哺乳动物脑内均可分离出NSC。干细胞的增殖和分化受微环境和基因的双重调控,现已发现多种细胞因子和基因可调节NSC的增殖并决定其分化方向。对NSC增殖和分化机制认识的加深将会促进NSC的临床应用。     

刚地弓形虫感染对鼠胚胎神经干细胞的影响

目的探讨大鼠孕早期感染刚地弓形虫对鼠胚胎神经干细胞增殖、分化和迁移的影响。方法12只SD孕鼠随机分为对照组和感染组,每组6只。感染组孕鼠于妊娠第1天(E1天)腹腔注射弓形虫RH株速殖子1×105/只,对照组注射等体积生理盐水。于E5天尾静脉取血,吉氏染色查找虫体。分别于E9、E10和E11天处死孕鼠,每组每次2只,逆转录PCR(RT-PCR)检测羊水中弓形虫B1基因,确认胚胎鼠是否感染弓形虫。体外原代培养鼠胚胎神经干细胞,噻唑蓝(MTT)法检测2组细胞增殖水平。分化培养神经干细胞,免疫荧光法检测巢蛋白(nestin)、微管相关蛋白2(MAP2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算对照组和感染组分化为神经元和星形胶质细胞的百分率。取E9、E10和E11天的2组胚胎鼠神经组织作冰冻切片,免疫荧光法检测神经细胞黏附分子(NCAM)在胚胎不同发育时期神经组织中的表达情况。结果血涂片和RT-PCR结果证实,感染组孕鼠和胚胎鼠均感染弓形虫。体外培养神经干细胞,镜下见细胞形态符合神经干细胞特点,神经干细胞标志物nestin蛋白染色呈阳性。MTT结果显示,感染组细胞传代后增殖水平均低于对照组,其中传代后第3和第4天两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。MAP2和GFAP荧光染色结果显示,对照组和感染组神经元分化百分率分别为15.15%(55/363)和8.73%(31/355),两者间差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和感染组星形胶质细胞分化百分率分别为53.35%(199/374)和67.48%(249/369),两者间差异无统计学意义(P>0.05)。E9、E10和E11天2组胚胎神经组织均检测到NCAM蛋白表达,荧光随时间逐渐增强,对照组表达水平均显著高于感染组(P<0.01)。结论大鼠孕早期感染刚地弓形虫可抑制神经干细胞的增殖、分化和迁移。     

神经递质与神经干细胞的增殖和分化

神经干细胞的增殖和分化调控是目前神经干细胞研究的核心问题。神经递质不仅介导神经元之间和神经元与效应器之间的信息传递,而且作为细胞外微环境的一员,也参与了神经干细胞的增殖和分化。神经递质受体及其信号转导在神经干细胞增殖和分化中的作用还不完全清楚,有关神经递质及其受体在神经系统的药理作用可能随着神经干细胞研究的不断深入而重新得到审视和运用。     

益肾化浊方及拆方对SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响

目的 观察益肾化浊方及拆方对7月龄SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响.方法 将40只7月龄SAMP8小鼠随机分成SAMP8(P8)组、益肾化浊方(YSHZ)组,益肾(YS)组和化浊(HZ)组,每组10只,选择10只抗快速老化小鼠(SAMR1)作为对照(R1)组;益肾化浊方、益肾方与化浊方分别按照6.24、4.68、1....     

快速老化小鼠SAMP8脑内神经病理学变化的研究进展

快速老化小鼠(SAMP8)是由日本京都大学竹田俊男教授开发,以学习记忆功能呈增龄性加速衰退为主要特征,自从1986年Miyamoto等人首次报道了SAMP8小鼠的这一基本特征,之后成为了研究老化和学习记忆障碍的理想哺乳动物模型之一,为了阐明其中的神经生理学机制,人们进行了大量的研究.本文主要对SAMP8小鼠老化过程中神经病理学的研究进行了综述.     

舒芬太尼对大鼠胚胎神经干细胞增殖、凋亡及分化的影响

目的研究不同浓度舒芬太尼对大鼠胚胎神经干细胞增殖、凋亡和分化的影响。方法从孕14 d的Wistar大鼠中分离胚胎神经干细胞并培养,采用神经干细胞标记蛋白Nestin免疫荧光染色对胚胎神经干细胞进行鉴定;Brd U渗入法检测不同浓度舒芬太尼对胚胎神经干细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度舒芬太尼对胚胎干细胞凋亡的影响;Neu N/DAPI、GFAP/DAPI双染标记神经元细胞和星形胶质细胞以检测不同浓度苏芬太尼对胚胎干细胞分化的影响。结果从孕14 d的Wistar大鼠中分离得到大鼠胚胎神经干细胞,经过不同浓度的舒芬太尼处理后,发现低浓度(0.5 nmol/L)的舒芬太尼对胚胎神经干细胞的增殖、凋亡和分化没有明显影响,而随着剂量增大至中浓度(5 nmol/L)时可以引起细胞的凋亡和分化,增加至高浓度(50 nmol/L)时可以抑制胚胎神经干细胞的增殖。结论高剂量的舒芬太尼可能通过影响中枢神经系统发育过程中神经干细胞的增殖、凋亡和分化,进而影响神经系统发育。     

丁苯酞对快速老化小鼠SAMP8学习记忆的影响

目的 观察丁苯酞(NBP)对快速老化小鼠SAMP8学习记忆能力的影响.方法 选用4月龄SAMP8 40只,随机分为SAMP8空白组、NBP低、中及高剂量组;另选4月龄SAMR1 10只作正常对照组.各组分别灌药60 d后,以Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力的变化.结果 与SAMR1组比较,SAMP8小鼠在隐蔽平台实验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长,NBP组从第4天起逃避潜伏期比SAMP8组显著缩短(P＜0.05);探索实验中NBP组原平台象限的停留时间明显多于SAMP8组,且高剂量组与低剂量组也有显著性差异(P＜0.05);反向实验中NBP高剂量组第3天的逃避潜伏期比SAMP8组显著缩短(P＜0.05);可视平台实验结果各组无显著性差异.结论 NBP能改善SMAP8鼠的学习记忆能力.     

氦-氖激光对大鼠骨髓间充质干细胞生长及神经分化潜能的作用

目的观察氦-氖（He-Ne）激光治疗仪对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）生长和神经分化潜能的作用。方法采用全骨髓培养法获取Sprague-Dawley大鼠的原代BMSCs,取第3代培养的细胞,分为实验组（He-Ne激光治疗仪处理10 min）和对照组（空气暴露相同时间）。采用CCK8法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,锥虫蓝染色测定细胞活力,并采用细胞免疫荧光技术鉴定BMSCs的神经干细胞分化潜能。结果①细胞呈纤维状贴壁生长,表型鉴定结果为CD90、CD29表达阳性,CD45表达阴性,符合BMSCs的表型特点。②实验组和对照组的细胞增殖活性比较,差异无统计学意义,P〉0.05。③实验组细胞的早期凋亡率为（1.10±0.26）%,与对照组细胞的（1.43±0.06）%比较,差异无统计学意义,P〉0.05。实验组的细胞活力为（96.2±0.6）%,与对照组的（96.2±0.7）%比较,差异亦无统计学意义,P〉0.05。④实验组和对照组的BMSCs在神经干细胞培养液中培养后,均可呈现悬浮生长的神经球;免疫荧光染色显示,神经球中细胞的Nestin染色阳性。结论 He-Ne激光治疗仪对BMSCs的增殖和活力无明显影响,未引起细胞凋亡,未改变BMSCs向神经干细胞分化的潜能。     

葡萄糖对小鼠间充质干细胞增殖的影响

目的研究葡萄糖对骨髓间充质干细胞（MSC）的影响并探讨其机制。方法首先鉴定MSC纯度,然后设立不同的葡萄糖浓度梯度,用MTT法检测细胞的增殖、细胞周期和凋亡。结果鉴定MSC纯度〉90%。葡萄糖促进MSC增殖（P〈0.01）,高浓度葡萄糖明显增加细胞周期S期百分比（P〈0.001）和细胞凋亡率（P均〈0.01）。结论葡萄糖双向调节MSC的增殖功能,细胞周期S期阻滞和凋亡率的平衡关系也许可以解释这种双向调节作用。     

Decreased proliferation ability and differentiation potential of mesenchymal stem cells of osteoporosis rat

Objective:To explore decreased proliferation ability and differentiation potential of mesenchymal stem cells(MSCs) of osteoporosis rat.Methods:MSCs were obtained from osteoporosis rat,and proliferation potency and impaired osteogenic differentiation potential were determined.Results:The result showed a significant downregulation of MSCs pluripotency related gene(Oct4) and osteogenic genes(BSP,OCN) expression in OVX MSCs compared with Sham MSCs(P0.05).Conclusions:These data suggest that MSCs are aging in osteoporosis body,and autologous OVX MSCs transplantation is not appropriate to treat osteoporosis if necessary.There will be a possibility in establishing a new clinical application of MSCs autologous transplantation to treat osteoporosis,if OVX MSCs have stronger proliferation and differentiation.     

几种影响小鼠气管上皮基底干细胞体外增殖及分化潜能因素的研究

目的 探讨多种细胞组分、细胞因子、信号转导分子等在气管上皮基底干细胞(airway basal stem cells,ABSCs)体外增殖和分化过程中的调控作用.方法 采用细胞外基质替代物Matrigel三维体外培养体系,辅以免疫组化分析,观察了几种常见的对干细胞增殖分化发挥重要作用的因素对ABSCs体外集落形成数量、集落大小及分化潜能的影响.结果 成纤维细胞较内皮细胞能显著提高ABSCs集落增殖和分化潜能.成纤维细胞生长因子(FGFs)能增加ABSCs体外集落形成数量与直径,并诱导其向分泌性细胞分化.同时给予FGFs及其受体阻滞剂处理,FGFs诱导的集落增殖效应消失.LIF、ALK5-I或ROCK-I处理后,ABSCs形成的集落数量和直径也显著增加,并诱导其向纤毛上皮细胞或分泌性细胞分化.结论 小鼠ABSCs不依赖成纤维细胞,但共培养能增强其增殖和分化能力;内皮细胞对ABSCs增殖和分化能力促进作用有限;FGFs促进ABSCs的增殖和分化,其效应能被其受体阻滞剂消除;LIF、ALK5-I或ROCK-I亦促进ABSCs的增殖和分化.研究结果将为小鼠ABSCs的生物学特性及其影响因素的深入研究奠定基础,为未来ABSCs修复性治疗相关疾病和损伤提供了实验学依据.     

Effects of dihydrotestosterone on synaptic plasticity of hippocampus in male SAMP8 mice

The senescence-accelerated-prone mouse 8 (SAMP8) has been proposed as a suitable, naturally derived animal model for investigating the fundamental mechanisms of Alzheimer's disease (AD). In addition, the serum testosterone levels decrease quickly in the natural growth process of this model. This study investigated the effect of androgen deficiency on the synaptic plasticity of hippocampus in male SAMP8 mice after castration and dihydrotestosterone (DHT) administration. We observed the dendritic spines and synapses using Golgi staining and transmission electron microscope. Androgen deficiency after castration significantly reduced the number of apical dendritic thorns, and the abnormal ultrastructure of excitatory synapses was more obvious. Androgen replacement therapy reversed this change. To explore the protective mechanisms and neurological basis of DHT, we researched the changes of expression of GluN1 subunit-containing N-methyl-d-aspartate receptors (NMDARs) and synaptophysin (SYN), which are closely related to synaptic plasticity. Comparisons were made among results observed with immunohistochemistry techniques, Western blots analysis and RT-PCR analysis. The GluN1 and SYN regulation at the protein and mRNA levels probably be related to the DHT-induced morphological synaptic plasticity. This study will be helpful for understanding the function of androgen, and it provides a valuable theoretical basis about the protective and therapeutic targets of androgen in AD.     

移植入阿尔茨海默病大鼠海马内神经干细胞的存活、迁移和分化

目的 观察新生大鼠海马齿状回的神经干细胞(NSCs)移植到阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内的存活、迁移和分化.方法 将HoechsT_33258标记的NSCs植入AD模型大鼠海马,移植2、4和6 w后,行Y迷宫检测大鼠的学习记忆能力,结合HoechsT_33258标记和荧光免疫组化技术,分析NSCs在AD大鼠海马中的存活、迁移和分化.结果 移植的NSCs在宿主脑内能够存活至少6 w,沿海马回向两侧迁移,NSCs移植2 w后,免疫荧光检测无明显神经丝蛋白-200(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸(Glu)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性反应,而移植后4、6 w,则可见免疫阳性反应细胞.Y迷宫测试结果显示移植NSCs 2、4、6 w后大鼠学习、记忆能力明显得到恢复,与AD模型组比较有统计学意义(P<0.05),与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 自新生大鼠海马齿状回分离培养的NSCs在AD模型大鼠海马内能够存活、迁移并分化为胆碱能、谷氨酸能神经元及神经胶质细胞.     

罗格列酮抑制HL-6O细胞增殖和诱导分化作用

目的:研究罗格列酮对人急性髓性白血病细胞(HL-60)增殖和诱导分化的作用。方法:用不同浓度的罗格列酮处理HL-60细胞24~72h,MTT观察细胞的增殖抑制作用,瑞特-姬姆萨染色法及硝基蓝四氮(NBT)还原比色法测定细胞分化,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率,免疫组化检测PPAR-γ表达。结果:不同浓度罗格列酮处理细胞后,HL-60细胞增殖明显受抑,抑制率最高达77%,抑制作用呈现时间、剂量和效应依赖性;细胞周期分析,罗格列酮能诱导HL-60细胞G1期阻滞;同时罗格列酮能促进HL-60细胞分化。免疫组化发现,HL-60细胞表达PPAR-γ,罗格列酮作用HL-60细胞后,发生核转位现象。结论:罗格列酮能抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞分化和细胞周期G1期阻滞,其作用机制可能与激活PPAR-γ有关。     

毒胡萝卜素对ReNcell CX人神经干细胞存活、增殖和凋亡的影响

目的观察毒胡萝卜素对ReNcell CX人神经干细胞存活、增殖和凋亡的影响。方法将ReNcell CX人神经干细胞分为两组,实验组分别加入10、20、50、100 nM毒胡萝卜素,干预6 h;对照组不加任何药物。采用分光光度计法测量两组乳酸脱氢酶(LDH)水平,免疫荧光显微镜下观测细胞增殖情况及Caspase-3水平。结果实验组LDH、Caspase-3水平明显高于对照组,细胞增殖率明显低于对照组,且均呈剂量依赖性,P<0.05或<0.01。结论毒胡萝卜素抑制神经干细胞存活和增殖;其机制可能为激活Caspase-3释放,促进神经干细胞凋亡。     

细胞因子对骨髓间充质干细胞增殖及其向心肌细胞分化的影响

目的探讨干细胞因子（SCF）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）预处理对骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖分化的作用。方法将sD大鼠随机分成对照组、SCF组、G—CSF组和SCF＋G—CSF联合处理组。流式细胞仪检测第4代MsCs细胞周期。用DAPI（25mg／m1）标记的P4MSCs与心肌细胞共培养。在共培养的第1天至第5天用免疫荧光技术分别检测心肌特异性肌节肌球蛋白重链（MHC）、肌钙蛋白T（TnT）的表达，统计向心肌样细胞分化的MSCs百分率。结果（1）SCF和G—CSF联合应用能明显诱导MSCs进入S期，单因子SCF组和G-CSF组与对照组相比，也明显的促进MSCs由G0／G1期进入S期（P〈0．01）。（2）MSCs与心肌细胞共培养后，SCF和G—CSF联合组MSCs表达心肌特异性蛋白MHC及TnT的阳性百分率均显著增高，单细胞因子组MSCs的心肌特异性蛋白MHC及TnT的阳性表达亦较对照组高。结论SCF和G—CSF对MSCs具有促增殖、促分化的作用。     

改良型生物硅胶膜对大鼠神经干细胞增殖与分化的影响

目的观察改良型生物硅胶膜对神经干细胞（NSCs）增殖与分化的影响,为选择NSCs培养载体提供依据。方法选取孕16d胎鼠的大脑皮质作为细胞来源,建立胚胎NSCs的体外培养体系并随机分为观察组和对照组,其中观察组接种于改良型生物硅胶膜上、对照组接种于普通培养皿中。普通倒置显微镜及电镜下观察细胞生长发育形态学变化,免疫荧光染色技术对NSCs及诱导分化细胞进行鉴定,四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测细胞增殖情况。结果培养2d后,显微镜下两组均可见神经细胞球生成,贴壁良好,细胞球边缘有突起呈辐射状向外发出,神经球NSCs特异标志物神经巢蛋白均呈阳性;培养7d后,观察组和对照组贴壁分化的神经元烯醇化酶阳性细胞率分别为25．14％±1．98％、24．67％±2．05％,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率分别为59．48％±2．07％．60．87％±1．08％,组间比较,P均〉0．05;两组生长曲线亦无显著差异（P〉0．05）。结论改良型生物硅胶膜对NSCs的生长、增殖及诱导分化无明显影响,但能促进细胞之间突起的增长,可作为培养载体用于研究力学因素对NSCs增殖、诱导分化的影响。