氯沙坦抗鼠肝纤维化的实验研究

目的 探讨CCL4诱导的肝纤维化模型鼠肝组织Smad2/3,Smad7,TIMP-1,TGF-β1的表达及氯沙坦干预后对其表达的影响.方法 Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组、模型组、氯沙坦预防组和治疗组,采用CCL4皮下注射构建肝纤维化模型.行HE和VG染色,判断肝组织炎症和纤维化的程度.免疫组化方法检测各组Smad2,3 Smad7和TIMP-1,TGF-β1的表达.结果 氯沙坦预防组和治疗组的肝组织炎症和纤维化程度明显低于模型组;Smad2,3 TIMP-1 TGF-β1在氯沙坦预防组和治疗组的阳性表达均低于模型组(分别为Smad2,31.69±0.42,1.90±0.59,2.51±0.39; TIMP-11.09±0 28,1.32±0.23,2.60±0.35;TGF-β11.65±0.31,2.04±0.42,2.72±0.36),P＜0.05;Smad7在氯沙坦预防组和治疗组的阳性表达高于模型组(分别为2.50±0.35,2.21±0.59,0.47±0.26),P＜0.05.Smad2,3 Smad7 TIMP-1和TGF-β1在氯沙坦预防组和治疗组的表达差异无显著性,P＞0.05.结论 氯沙坦抗肝纤维化作用可能与抑制TGF-β1,TIMP-1,Smad2,3和促进Smad7的表达有关.     

TIMP-1siRNA对肝纤维化大鼠TIMP-1及胶原表达的影响

目的:探讨基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1）的siRNA经体内转染后对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TIMP-1及胶原表达的影响。方法:将32只雄性SD（Sprague Dawley）大鼠随机分为4组:正常组、模型组、TIMP-1 siRNA处理组和TIMP-1 siRNA阴性对照组。CCl4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,共12周。HE染色验证肝纤维化程度,免疫组织化学染色检测TIMP-1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;Western blot检测TIMP-1的蛋白表达,qRT-PCR法检测TIMP-1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达。结果:病理组织学显示相较模型组、阴性对照组,肝组织肝纤维化程度在TIMP-1 siRNA处理组中明显减轻。TIMP-1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量也明显减少（P=0.000）。结论:TIMP-1 siRNA能抑制或阻断TIMP-1表达,进而促进以Ⅰ、Ⅲ型胶原为主的细胞外基质的降解,肝纤维化程度得到改善,对CCl₄诱导的大鼠肝纤维化有一定的防治效果。     

TGF-β1/Smad3信号通路调控MMP-13/TIMP-1蛋白表达在糖尿病膀胱纤维化中的作用研究

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）/细胞信号转导分子3（Smad3）信号通路调控基质金属蛋白酶13（MMP-13）/基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）蛋白表达在糖尿病膀胱纤维化中的作用。方法将80只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为糖尿病组和正常对照组，每组40只；另取20只糖尿病大鼠按随机数字表法分为TGF-β1敲除组和Smad3敲除组，每组10只。采用链脲佐素65mg/kg一次性给药法建立糖尿病模型；采用Cas9genetargeting技术分别敲除TGF-β1或Smad3基因。采用HE或VG染色法观察糖尿病组与正常对照组大鼠膀胱组织病理学形态 Westernblot法检测并比较糖尿病组与正常对照组、糖尿病组与TGF-β1敲除组、糖尿病组与Smad3敲除组大鼠膀胱平滑肌组织中相关信号通路因子蛋白表达组与正常对照组、糖尿病组与TGF-β1敲除组、糖尿病组与Smad3敲除组大鼠膀胱平滑肌组织中相关信号通路因子蛋白表达显示，糖尿病组大鼠膀胱组织胶原纤维明显增多。糖尿病组大鼠膀胱平滑肌组织中TGF-β1、Smad3、MMP-13、TIMP-1蛋白表达水平均明显高于正常对照组，MMP-13、TIMP-1、colⅠ、colⅢ蛋白表达水平均明显高于TGF-β1敲除组、Smad3敲除组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论MMP-13、TIMP-1在糖尿病膀胱纤维化中呈高表达。TGF-β1/Smad3信号通路过调控MMP-13/TIMP-1蛋白表达参与糖尿病膀胱纤维化的发生、发展。     

TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞

目的：研究转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）激活小鼠肝星状细胞（mouse hepatic stellate cells,mHSC）的具体机制。方法：实验选用mHSC-T25细胞株为实验对象,随机分为激活组（mHSC-T25+10 ng/mL TGF-β1）、抑制组（mHSC-T25+1 μmol/L TGF-β-R1抑制剂）和对照组（mHSC-T25）。qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1、转化生长因子β受体1（transforming growth factorβreceptor1,TGF-β-R1）、Jagged1、血管内皮生长因子（vas－cular endothelial growth factor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）等的mRNA表达;细胞免疫荧光法检测α-SMA、Jagged1等蛋白的表达;Western blot检测TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3等蛋白的表达。结果：①TGF-β1刺激组中α-SMA、TGF-β1、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、HGF等mRNA表达量均较对照组明显增加而抑制组均明显下降。α-SMA：激活组（315.1±6.2）%,抑制组（34.3±4.5）% （F=3291.956,P=0.000）;TGF-β1：激活组（524.8±14.3）%,抑制组 （29.0±10.7）%（F=469.534,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组（235.5±15.2）%,抑制组（17.0±2.8）%（F=392.239,P=0.000）;Jagged1：激活组（548.7±16.6）%,抑制组（17.4±4.7）%（F=364.166,P=0.000）;VEGF：激活组（331.9±19.8）%,抑制组（19.5±3.7）%（F=278.407,P=0.000）;HGF：激活组（376.00±6.51）%,抑制组（16.2±2.7）%（F=640.340,P=0.000）。②激活组高表达α-SMA、Jagged1等蛋白,而对照组、抑制组表达明显较少。α-SMA：激活组0.880±0.016,对照组0.481±0.007,抑制组0.207±0.014 （F=2098.556,P=0.000）;Jagged1：激活组0.796±0.015,对照组0.474±0.021,抑制组0.167±0.005（F=1242.556,P=0.000）。③TGF-β1激活组中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达量均较对照组明显上调而抑制组均明显下调。TGF-β1：激活组1.180±0.138,对照组0.654±0.061,抑制组0.359±0.012（F=67.706,P=0.000）;α-SMA：激活组1.076±0.063,对照组0.689±0.022,抑制组0.374±0.011（F=239.186,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组1.192±0.142,对照组0.710±0.380,抑制组0.378±0.069 （F=57.235,P=0.000）;Jagged1：激活组1.582±0.247,对照组0.817±0.116,抑制组0.364±0.059（F=43.649,P=0.000）;Smad2/3：激活组2.057±0.114,对照组1.203±0.105,抑制组0.664±0.063（F=158.856,P=0.000）;p-Smad2/3：激活组2.088±0.120,对照组1.168±0.107,抑制组0.573±0.120 （F=136.369,P=0.000）。上述实验结果提示,激活组、抑制组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞并调控其相关生物学活性。     

高血糖对NASH大鼠肝纤维化形成的影响及机制探讨

[摘要] 目的 探讨高血糖在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝纤维化形成中的作用以及机制。方法 将60只SD大鼠随机数字法分成正常对照组、高血糖模型组、高血糖伴NASH组、氨基胍组和虎杖组,分别检测各组大鼠血糖值,病理学变化（HE染色）,纤维化程度,肝组织基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和晚期糖基化终产物（AGEs）含量的变化及各组大鼠α-平滑肌动蛋白（α-SMA）、结蛋白（desmin）的表达评分。结果 二用药组大鼠的血糖值（14.20±11.74/5.25 ± 0.92,mmol/L）较高血糖组（22.20±1.70,mmol/L）和NASH组（22.21±5.49, mmol/L）降低（均P＜0.05）;高血糖组和NASH组肝组织出现细胞变性和纤维化改变。与NASH组比较,虎杖组肝细胞结构形态较正常,只有较轻度水肿、脂肪变性等炎性改变,未见明显纤维化,α-SMA（4.92 ± 1.69）、Desmin（4.75±1.75）表达及TIMP-1（3473.76 ±372.06,pg/mL）、TGF-β1（125.26 ±28.60 ,ng/mL）、AGEs（75.86±22.36,ng/mL）含量也显著降低（均P＜0.01）。氨基胍组肝组织脂肪变性、水样变性、纤维化程度有所减轻,α-SMA表达增高（9.00 ± 2.04）（P＜0.05）,TIMP-1（3543.67±377.05,pg/mL）、AGEs（75.86 ± 22.35,ng/mL）含量降低（均P＜0.01）,同时 TGF-β1表达减低（145.31 ± 43.14,ng/mL）但无统计学差异（P＞0.05）。 结论 高血糖可促进NASH大鼠肝纤维化的形成,降低血糖和减少AGEs形成可减轻或抑制肝纤维化的发生;机制之一是激活肝星状细胞。虎杖较氨基胍改善NASH大鼠肝纤维化的作用更明显。     

化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化时Smad7和TGF-β表达的影响

目的：探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法:将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组，采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5mg/kg)建立肺间质纤维化模型，对照组注入生理盐水（0.25ml/只），从造模后的第2天起中药组给予化瘀理肺方药物灌胃（13410mg/kg）；对照组、模型组给予生理盐水灌胃（2ml/只）；激素组给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射（25mg/kg），于给药后的第14、28天分别处死，称取肺重计算肺系数；取肺组织行苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化情况；免疫组化法测定肺组织中TGF-β、Smad7蛋白的表达情况。结果:进入结果分析的大鼠44只：①大鼠纤维化程度比较：模型组肺泡炎和肺纤维化程度较重，且胶原纤维沉积较多；中药组可见炎性细胞较少，肺泡结构基本正常，肺泡炎与肺纤维化较轻；激素组肺泡炎及纤维化减轻不明显。②TGF-β、Smad7蛋白表达量比较：中药组TGF-β蛋白表达明显低于模型组和激素组；Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组。结论:化瘀理肺方可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度，可能通过促进Smad7蛋白的表达从而反馈抑制TGF-β蛋白的表达发挥作用。     

绞股蓝总皂苷对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的：观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：将Wistar雄性大鼠设为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷组、秋水仙碱组,除正常组外采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。造模第7周开始予相应的药物干预,每日给药剂量为股蓝总皂苷200 mg/kg、秋水仙碱0.1 mg/kg,共3周。观察大鼠一般情况变化,肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,肝组织病理及胶原沉积;检测肝组织肝星状细胞（HSC）活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达,肝组织TGF-β1/Smad信号通路指标TGF-β1、TGF-β1受体1（TβR-Ⅰ）、TGF-β1受体2（TβR-Ⅱ）、Smad2/p-Smad2、Smad3/p-Smad3蛋白表达。结果：模型组大鼠一般状态较差,肝组织Hyp含量较正常组显著增高,肝小叶被破坏,肝细胞脂肪变性伴炎性细胞浸润,并有大量纤维结缔组织增生;大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均显著升高,而Smad3蛋白表达与正常组比较无差异。绞股蓝总皂苷组及秋水仙碱组大鼠肝组织Hyp含量显著降低,肝组织病理改善;绞股蓝总皂苷组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及Smad3蛋白表达无显著变化;秋水仙碱组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、p-Smad2及Smad3蛋白表达无显著变化。结论：绞股蓝总皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有显著的干预作用,其作用机制可能与抑制HSC活化、TGF-β1分泌及其信号通路中p-Smad2、p-Smad3表达有关。     

沉默FMOD对H322细胞的增殖和迁移的影响及其作用机制探讨

  目的  研究纤调蛋白(fibromodulin,FMOD)对非小细胞肺癌H322细胞增殖、黏附和迁移的影响,并探讨其作用机制。  方法  H322细胞随机分为对照组、小干扰RNA(siRNA) 沉默FMOD（FMOD siRNA）组和对照siRNA（Con siRNA）组。FMOD siRNA和Con siRNA转染H322细胞,CCK-8法检测各组细胞的细胞活性,荧光素双醋酸酯（FDA）荧光染色检测细胞的黏附能力,Transwell法检测细胞的迁移能力;Real time-PCR法检测Con siRNA组和FMOD siRNA组细胞中Cyclin D1、细胞间黏附分子-1（ICAM-1)、钙黏附蛋白-E（E-cadherin）、FMOD、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad2、Smad3、Smad4及Smad7的mRNA表达,蛋白印迹法检测细胞中Cyclin D1、ICAM-1、E-cadherin、FMOD、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4及Smad7的蛋白表达。  结果  与Con siRNA组相比,FMOD siRNA组细胞的细胞活性降低,细胞黏附及迁移能力减弱,差异均有统计学意义（P<0.01）,对照组和Con siRNA组差异无统计学意义。Real time-PCR和蛋白印迹法检测结果显示:与Con siRNA组相比,FMOD siRNA组细胞Cyclin D1、ICAM-1、TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4的mRNA和蛋白表达水平降低,E-cadherin及Smad7的mRNA和蛋白表达水平升高。  结论  沉默FMOD基因,可抑制H322细胞的增殖、黏附和迁移,其作用可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路实现。     

顺铂通过ROS促进乙型肝炎病毒复制的实验研究

目的：探索顺铂（cisplatin）促进乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）复制的分子机制。方法：采用不同浓度的顺铂处理稳定表达HBV的HepAD38细胞,台盼蓝染色检测细胞活力,筛选出顺铂最适浓度,分别采用Real-time PCR和Southern blot检测HBV DNA水平,Western blot检测HBsAg和HBcAg蛋白表达。在顺铂诱导组加或者不加氧化应激抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）,采用CellROX Orange Reagent染料在激光共聚焦显微镜下检测细胞内ROS水平,并且检测HBV DNA 水平、HBsAg及HBcAg的蛋白水平。结果：台盼蓝染色筛选出顺铂的最适浓度为6 μmol/L。Real-time PCR实验结果显示,PBS组,0.5、2.0、6.0 μmol/L顺铂处理后HBV DNA 拷贝数/细胞分别为515.152±18.924、1 215.758±49.001（P=0.000）、1 678.182±117.223（P=0.000）、2 110.606±143.640（P=0.000）;Southern blot结果与Real-time PCR结果一致,顺铂以剂量依赖方式增加HBV DNA水平。Western blot结果表明,与PBS组相比,6.0 μmol/L顺铂组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为3.102±0.099（P=0.000）、4.001±0.200（P=0.000）;顺铂可以促进HBV复制和病毒蛋白的表达。进一步采用NAC与顺铂联合处理HepAD38细胞,Real-time PCR实验结果表明,顺铂组、顺铂+NAC组HBV DNA 拷贝数/细胞分别为2 180.444±82.573（P=0.000）、1 041.778±50.918（P=0.000）,2组差异具有统计学意义。Western blot实验结果表明,顺铂组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为3.139±0.061（P=0.000）、3.812±0.109（P=0.000）,顺铂+NAC组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为2.101±0.088（P=0.000）、1.613±0.073（P=0.000）,2组之间HBsAg、HBcAg蛋白差异均具有统计学意义。结论：顺铂通过增强细胞内ROS水平,促进HBV复制,而NAC可以部分抑制顺铂刺激的HBV复制作用。     

补肺活血胶囊对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑的干预作用及机制研究

目的 基于TGF-β1/Smads信号通路及蛋白酶与抗蛋白酶系统,探讨补肺活血胶囊对慢阻肺模型大鼠气道重塑的作用机制。方法 将40只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、补肺活血组和茶碱组。采用香烟烟雾暴露复合气道内滴注LPS的方法建立慢阻肺动物模型;实验自第21d起,补肺活血组予补肺活血胶囊（0.42g/kg）灌胃,茶碱组予茶碱缓释片（0.02g/kg）灌胃,连续40d。实验第61天取大鼠肺组织制作病理切片,HE染色观察大鼠肺组织病理学改变,Masson染色观察气道胶原沉积情况,免疫组化染色观察肺组织TGF-β1、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达,Western Bolt法检测TGF-β1、Smad2/3、Smad4、Smad7、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达。结果 与正常对照组相比,模型组大鼠气道上皮增厚,炎症细胞浸润,细胞外基质沉积,基底膜增厚,肺泡结构破坏,肺泡融合,肺泡间隔增厚,胶原纤维沉积明显;肺组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达升高,Smad7表达降低。与模型组相比,补肺活血组与茶碱组炎症细胞浸润减轻,胶原纤维沉积显著减少;肺组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达降低,Smad7表达升高。与茶碱组相比,补肺活血组各指标均未见显著差异（P＞0.05）。结论 补肺活血胶囊可以通过调节TGF-β1/Smads信号通路、蛋白酶与抗蛋白酶平衡干预慢阻肺模型大鼠气道重塑。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。