液质联用法测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量

目的 建立液质联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)定量分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的方法.方法 采用LC-MS法检测,ZORBAX Eclipse XDB-C8(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相组成:1‰甲酸水-甲醇(95:5),流速:0.8 mL/min;柱后分流检测,分流比2:1;柱温:25 ℃;ESI电离源:负离子检测模式;干燥气流速:10.0 L/min;雾化室压力:30 psig;干燥气温度:350 ℃.选择离子方式检测(SIM):S-烯丙基-L-半胱氨酸m/z 160和S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜m/z 176.结果 S-烯丙基-L-半胱氨酸在0.062 5～2 μg/mL浓度范围内线性关系良好,检测限0.01 μg/mL,日内RSD 4.11%、日间RSD 4.49%, 方法平均回收率为101.63%.结论 此方法简单、准确,适于分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量,并且测得该提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的平均含量为0.514 μg/mg.     

S-烯丙基-L-半胱氨酸对大鼠脓毒症相关心肌损伤的影响及其与铜死亡的关系

目的：评价S-烯丙基-L-半胱氨酸（SAC）对大鼠脓毒症相关心肌损伤的影响及其与铜死亡的关系。方法：成年雄性SD大鼠（体重210～240 g）60只,采用随机数表法将大鼠分为假手术组、脓毒症心肌病组、SAC+脓毒症心肌病组。盲肠结扎穿刺术构建脓毒症模型。于脓毒症模型构建前1 h按照210 mg/kg的剂量将SAC腹腔注射给药。模型及干预制备成功后采用心电监测和右颈总动脉插管有创动脉监测记录各组大鼠心率（HR）、平均动脉压（MAP）和左室收缩压（LVSP）。采集动脉血和心肌组织样本检测CK-MB同工酶、SOD、ROS和铜离子水平。酶联免疫吸附（ELISA）法检测心肌组织TNF-α、IL-6、NF-κB和FDX1水平。苏木精-伊红（HE）染色检测心肌组织病理变化。结果：与假手术组相比,脓毒症心肌病组大鼠HR、MAP和LVSP水平降低（P<0.05）,SOD水平降低（P<0.05）,CK-MB同工酶、ROS、铜离子、TNF-α、IL-6、NF-κB和FDX1水平升高（P<0.05）,脓毒症心肌病组大鼠心肌组织出现明显紊乱,心肌纤维肿胀或断裂,可见大量炎性细胞浸润。与脓毒症心...     

药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸的酶法合成

目的 利用在大肠杆菌中高效重组表达的O-乙酰丝氨酸(硫醇)裂解酶A(OASS-A)合成药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸,并对合成产物进行纯度及结构鉴定.方法 通过PCR扩增目的基因Cys K,并连接到pET-22b(+)载体上构建原核表达质粒,重组体转到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达,重组蛋白采用Ni2-树脂柱亲和层析纯化,利用SDS-PAGE鉴定表达纯化蛋白,通过HPLC对合成产物纯度进行检测,应用1H NMR技术对化合物进行结构鉴定.结果 成功构建了OASS-A原核表达载体,在IPTG诱导下获得了高效表达.重组酶高效合成非蛋白质氨基酸S-苯基-L-半胱氨酸.合成的化合物以晶体形式析出,采用HPLC和1HNMR技术对其结构进行了鉴定,合成产物的纯度为100％.结论 利用大肠杆菌中重组表达的OASS-A能够高效合成药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸.     

S-三苯甲基-L-半胱氨酸对慢性粒细胞白血病K562细胞有丝分裂阻滞和凋亡的影响

目的研究S-三苯甲基-L-半胱氨酸（STLC）对慢性粒细胞白血病K562细胞有丝分裂阻滞和凋亡的影响,探讨药物阻滞和凋亡机制及Eg5与bcr/abl信号通路联系。方法将K562细胞分成不加药对照组和不同剂量STLC加药组,药物作用一定时间后,用MTT法检测其对K562细胞的抑制效应,流式细胞术分析细胞周期和亚二倍体峰的变化,Annexin-v/PI双染检测药物处理前后细胞凋亡比率,共聚焦显微镜观察纺锤体与细胞核空间位置关系及凋亡诱导因子（AIF）位移情况,小分子抑制剂阻断结合RT-PCR研究Eg5与bcr/abl信号通路联系。结果STLC可显著抑制K562细胞生长;药物处理早期可阻滞细胞周期进程于G2/M期,且85.5%细胞纺锤体结构呈单星状排列,处理晚期可致细胞凋亡且不依赖于AIF的参与;K562细胞中Eg5表达由bcr/abl酪氨酸激酶所调节。结论STLC诱导K562细胞阻滞在G2/M期并致其凋亡,显示较强的抗有丝分裂和抗肿瘤效果。     

PET肿瘤显像剂S-11C-甲基-L-半胱氨酸的制备与质量控制

目的 S-11C-甲基-L-半胱氨酸是一种肿瘤显像剂,是11C-MET类似物,我们自行研制合成了11C-MCYS,并对其质量控制.方法由医用回旋加速器生产11CO2,11CO2通过11CH3I全自动合成系统转化为11C-碘代甲烷(11CH3I).11CH3I与前体L-半胱氨酸的碱性溶液在Sep-Pak Plus C18小柱上发生烷基化反应,经Sep-Pak Plus C18小柱分离,得到11C-MCYS.并对新制剂进行质量控制.结果回旋加速器生产的11CO2传输到11CH3I全自动合成模块,11CO2经氢化锂铝还原转化为11CH3OH,再经氢碘酸(HI)碘代法生产出11CH3I,11CO2转化为11CH3I的时间约为8-10min,未校正放化产率约60%-70%.11C-MCYS放化合成时间约为2min,放化纯度大于98%,总合成时间约12min.主要质量控制指标达到正电子放射性药物质量要求.结论11C-MCYS的合成操作简便,产品化学纯度、放化纯度、pH值都符合注射剂的要求,符合进一步的动物探索性研究要求.     

液质联用法测定金樱子中熊果酸和齐墩果酸的含量

目的：建立金樱子中熊果酸和齐墩果酸含量测定方法。方法：采用液质联用（LC-MS/MS）法,色谱柱Diamonsil C18（2）（250 mm×2.1 mm,3μm）,流动相甲醇-甲酸水（87∶13）,流速0.25 ml.min-1。柱温30℃,质谱采用大气压电喷雾离子源,选择性离子流模式（负离子）。结果：熊果酸和齐墩果酸的平均样回收率分别为为98.1%和97.6%,RSD分别为2.7%和2.9%。结论：该方法快速简便,灵敏度高,重现性好。可用于金樱子的质量控制。     

25%抗坏血酸注射液中盐酸-L-半胱氨酸与焦亚硫酸钠浓度的测定

本文研究了在抗坏血酸浓溶液中有少量乙二胺四乙酸二钠、盐酸-L-半胱氨酸和焦亚硫酸钠同时存在时,后二者的测定方法。其中盐酸-L-半胱氨酸用改良的茚三酮比色法,焦亚硫酸钠用品红法。方法操作简便,不需特殊仪器,分析结果稳定。     

液-质联用法测定不同产地山楂叶中4种成分的含量

山楂叶为蔷薇科山楂属植物山里红Grataegus pinnati-fida Bge.var.major N.E.Br.或山楂Grataegus pinnati-fida Bge.的干燥叶,主要含有黄酮类和有机酸等成分,具有活血化瘀、理气通脉、化脂降浊之功效[1-2].近年来,采用HPLC-UV测定山楂叶中一个或多个黄酮类成分时有报道[3-4],所涉及到的定量指标只能针对牡荆素鼠李糖苷等紫外吸收较强、含量较高的成分,但测定表儿茶素这样紫外吸收较弱且含量较低的成分比较困难.由于MS具有高度的灵敏度,使用液质联用(LC-MS)技术较易测得一些微量成分和紫外吸收弱的化合物.为此,本研究采用HPLC-MS结合MRM模式,对不同产地山楂叶中4种成分(包括紫外吸收弱的表儿茶素)进行了含量测定,以期为山楂叶的质量控制研究提供实验依据.     

应用N-乙酰-L-半胱氨酸合成紫色-近红外荧光发射的量子点

应用生物活性分子N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)作为配体,采用加热回流和水热合成法制备具有紫色-近红外荧光发射、高质量的水溶性碲化镉量子点(CdTe QDs),并通过紫外可见、荧光分光光度计表征量子点的光学性质,透射电镜(TEM)和粉末X射线衍射(XRD)表征量子点结构。结果表明,以N-乙酰-L-半胱氨酸为配体可以合成出荧光量子产率为11%～62.4%、荧光发射峰在415～800 nm宽范围内可调的Zn_1-xCd_xSe和CdTe水溶性量子点。XRD结果表明量子点荧光发射峰与其粒径相关。这是首次应用单一配体——N-乙酰-L-半胱氨酸作为稳定剂,合成具有紫色近红外宽荧光发射的水溶性荧光量子点。用此方法制备的水溶性量子点具有较好的荧光量子产率、较窄的半峰宽以及较强的光稳定性。     

大蒜中总黄酮的提取及其含量测定

目的为充分利用大蒜资源,避免浪费,探讨大蒜总黄酮的提取、鉴别及其含量测定方法。方法采用纯物理的工艺流程过程和分光光度法从大蒜中提取黄酮类物质并进行含量测定。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.59%。回收率为99.4%,其纯度和产率均较高。结论采用全物理过程,无任何化学污染,是提取大蒜黄酮类物质的有效途径。     

液相色谱-质谱技术测定大鼠血浆中L-NNA浓度

目的建立检测大鼠血浆中L-NNA浓度的液相色谱-质谱联用方法。方法采用Phenomenex Kromosil C18分析柱(4.6mm×250mm,5.0μm),以甲醇∶水溶液(10∶90)为流动相,电喷雾电离源,选择性离子监测质荷比(m/z)分别为:149.3(L-NNA)、218.2(D-苯甘氨酰胺),以D-苯甘氨酰胺为内标物,测定大鼠血浆中L-NNA的浓度。结果 L-NNA浓度在0.10～6.44mg/L范围内线性关系良好;最低检测限为24μg/L,最低定量限为80μg/L;血浆中L-NNA的回收率在85%以上,日内和日间的相对偏差(RSD)均10%。结论本方法快速、准确、灵敏,可用于大鼠血浆中L-NNA浓度的测定。     

液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法定量测定污水中10种毒品

建立一种基于液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法（LLE-UPLC-MS/MS）同时测定污水中10种毒品的氘代内标定量分析方法。污水样品经二氯甲烷-乙酸乙酯（1∶1）液液萃取浓缩,采用C₁₈色谱柱,流动相为0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸铵水溶液和乙腈,线性梯度洗脱分离,ESI正离子化多反应监测进行定量分析。10种待测物在各自的标准曲线范围内线性关系良好（r≥0.995 7）,定量限为1 ng/L（除苯丙胺为2.5 ng/L）,相对回收率范围为96.36% ~ 106.43%,日内与日间精密度均小于4.70%。该方法准确可靠、重复性好,适用于污水中10种毒品的定量检测,对影响固相萃取富集的复杂基质污水同样适用,为实时监测药品滥用提供了新的分析手段。     

LC-MS/MS测定白及止血海绵中白及葡甘聚糖的含量

目的 建立LC-MS/MS方法测定白及止血海绵中白及葡甘聚糖含量。方法 采用Waters X BridgeTM Amide(2.1mm×100mm,3.5μm);流动相为乙腈∶5mmol/L醋酸铵(内含0.1%甲酸水溶液)=60∶40;流速为0.3mL/min;柱温35℃;进样量10μL。结果 D-甘露糖线性范围为50.0~5 000.0ng/mL(r=0.999 5),方法学考察表明日内和日间精密度、最低检测限和定量限均符合相关标准,加样回收率为98.4%(n=5),RSD=1.03%。结论 本法操作简单,选择性好,灵敏度高,适用于白及止血海绵中的白及葡甘聚糖的定量分析。     

LC-MS/MS method for determination of megestrol in human plasma and its application in bioequivalence study

A rapid and highly selective liquid chromatography-tandem mass spectrometric （LC-MS/MS） method for the determination of megestrol in human plasma was described using medry- sone as internal standard （IS）. Blood samples were collected from 20 healthy volunteers after oral ad- ministration of 160 mg megestrol acetate dispersible tablets. The analytes were extracted by liq- uid-liquid extraction procedure and separated on a hanbon lichrospher column with the mobile phase of methanol and water containing 0.1% formic acid and 20 mmol/L ammonium acetate （5：1, v/v）. Positive ion electrospray ionization with multiple reaction-monitoring mode （MRM） was employed by monitor- ing the transitions m/z 385.5-325.4 and m/z 387.5-327.4 for megestrol and medrysone, respectively. Under the isocratic separation conditions, the chromatographic rim time was approximately 2.54 min for megestrol and 2.59 min for medrysone. The calibration curve range was from 0.5 to 200.0 ng/mL. The inter-batch and intra-batch precision and accuracy were less than 5.2% relative standard deviation （RSD） and 6.4% relative error （RE）. The proposed method was successfully applied in the bioequivalence study of megestrol acetate dispersible tablets.     

杭白芍九种主要成分的高效液相色谱定量分析及提取工艺研究

目的: 建立同时测定杭白芍9种主要成分没食子酸、羟基芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、五没食子酰葡萄糖、苯甲酸、苯甲酰芍药苷和丹皮酚的高效液相色谱法（HPLC）,优化杭白芍的提取工艺。方法: HPLC检测采用0.1%磷酸水溶液-乙腈为流动相线性梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,柱温为30℃,检测波长为230 nm。采用超声提取法,甲醇和乙醇为提取溶剂,选用L₉（3⁴）表分别设计三因素三水平的正交试验,考察溶剂浓度、液料比和提取时间对杭白芍9种主要成分总含量的影响。结果: 所建立的HPLC法具有较高的专属性、灵敏度和准确性,可用于同时定量分析杭白芍9种主要成分;确定了杭白芍9种主要成分的最佳提取工艺,即采用70%乙醇为提取溶剂,液料比为200 mL/g,超声提取时间为30 min。结论: 建立了同时测定杭白芍9种主要成分的HPLC法及其最佳工艺条件。     

LC-MS法测定人血浆中氨氯地平浓度及其生物等效性评价

目的建立液相-质谱联用（LC-MS）法测定人血浆中氨氯地平浓度，并进行两种制剂的生物等效性评价。方法采用随机双交叉试验设计，18名健康受试者口服受试制剂和参比制剂5mg，用LC-MS法测定人血浆中氨氯地平浓度。结果受试制剂和参比制剂的主要药动学参数：AUC0→t分别为（104．01±26．03）和（101．91±24．67）ng·h·ml^-1；AUC0→∞分别为（113．96±30．66）和（110．29±27．67）ng·h·ml^-1；Cmax分别为（2．44±0．40）和（2．43±0．38）ng·ml^-1；tmax分别为（7．28±2．92）和（7．50±3．04）h；t1／2分别为（33．33±6．30）和（30．93±4．18）h。受试制剂的相对生物利用度为（103．34±6．69）％。两种制剂主要动力学参数经统计学检验无显著性差异（P〉0．05）。结论该方法简单、快捷、准确，氨氯地平片的受试制剂和参比制剂具有生物等效性。     

黑大蒜和鲜大蒜提取物对小鼠细胞免疫功能影响的比较

目的比较黑大蒜提取物和鲜大蒜提取物对细胞免疫功能影响。方法分别连续5 d给予小鼠腹腔注射黑大蒜提取物溶液与鲜大蒜提取物溶液。从第6天开始处死小鼠,分离培养脾细胞,生物学方法检测自然杀伤(NK)细胞杀伤活性,Griess法检测脾细胞培养上清一氧化氮(NO)的分泌水平,ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-17和IL-4的水平。结果黑大蒜提取物较鲜大蒜提取物有更强的NK细胞杀伤活性和促NO、IL-2、IFN-γ、IL-17、TNF-α分泌的刺激作用。二者对IL-4的分泌水平无影响。结论黑大蒜提取物较鲜大蒜提取物有更强的Th1/Th17型细胞免疫应答的诱导作用。     

高效液相色谱-质谱法测定人血浆中甘草次酸浓度及人体药代动力学研究

目的建立人血浆中甘草次酸的高效液相色谱-质谱(LC-MS)测定法,并用于健康志愿者的药代动力学研究。方法20例健康志愿者一次口服甘草酸二铵胶囊150mg,采集肘静脉血并分离血浆,血样经乙酸乙酯提取后,以熊果酸为内标,进行LC-MS分析。色谱柱：Venusil XBP-C18柱(5μm, ID4.6×150mm),流动相：甲醇(5mmol/L乙酸铵)-水(85∶15,V/V),梯度洗脱;流速：0.8mL/min,柱温25℃,进样10μL。甘草次酸和内标熊果酸的检测离子和裂解电压分别为m/z 469.5、m/z 455.6和200V、100V。根据不同时间甘草次酸血浓度计算其药代动力学参数。结果在0.5～200ng/mL范围内,甘草次酸与内标的峰面积比值与浓度线性关系良好,相关系数为0.9974,定量限为0.5ng/mL,提取回收率为76.0%～80.0%,日内、日间RSD均小于12%。甘草次酸口服给药Cmax为(95.57±43.06)ng/mL,Tmax为(10.95±1.32)h。结论高效液相色谱-质谱测定法灵敏、准确、简便,适用于血浆甘草次酸的浓度测定及其人体药代动力学研究。