露蜂房纯化蛋白对人早幼粒白血病HL-60细胞的生长抑制作用

目的研究中药露蜂房纯化蛋白（nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ）对人早幼粒白血病HL-60细胞的生长抑制作用。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于HL-60细胞,经光镜、电镜、荧光显微镜观察形态学变化,TdT缺口末端标记（TUNEL）技术检测NVP-Ⅱ对HL-60细胞增殖、凋亡的影响。结果①光镜下观察到,与生理盐水对照组比较,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞数量减少,胞质内颗粒增多。②透射电镜下发现,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞核染色质靠核膜边集,呈块状或半月形;有的细胞核固缩、断裂为质膜包绕的碎块,有凋亡小体出现。③荧光显微镜下观察到,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞核染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解呈碎块状,边缘光滑清晰,呈现典型的凋亡形态特征。④TUNEL检测见阳性细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水处理组比较,凋亡细胞明显增多（P〈0.05）。结论NVP-Ⅱ可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡。     

露蜂房纯化蛋白对白血病细胞抑制作用的研究

目的 研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ) 对白血病细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法 采用NVP-Ⅱ在体外作用于人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60及急性髓系白血病患者(AML)骨髓单个核细胞(BMMNC),MTT比色法检测NVP-Ⅱ对白血病细胞增殖的影响,透射电镜观察细胞超微变化,并用Hochest33258荧光染色法和TdT缺口末端标记(TUNEL)技术分析细胞凋亡.结果 0.019 19 mg/L、0.191 9 mg/L NVP-Ⅱ组能明显抑制白血病细胞的生长,使白血病细胞在透射电镜和荧光显微镜下呈现典型的凋亡形态特征,而且TUNEL检测见凋亡细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水对照组比较,阳性细胞明显增多(P＜0.05).结论 NVP-Ⅱ体外对白血病细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导其凋亡.     

中药露蜂房蛋白对红白血病小鼠脾组织中Bcl-2／Bax蛋白表达

目的研究露蜂房蛋白（NVP）在体内对红白血病细胞Bcl-2／Bax蛋白表达的影响。方法制备红白血病小鼠模型，SP免疫组织化学检测实验各组脾组织中红白血病细胞Bcl-2／Bax表达，图像分析技术对Bcl-2／Bax免疫反应阳性细胞用SAS8．0统计软件处理分析。结果露蜂房蛋白处理组与生理盐水组比较，Bcl-2阳性表达细胞明显减少（P〈0．01），Bax蛋白表达明显增高（P〈0．01）。结论Bcl-2蛋白Bax蛋白与露蜂房蛋白对红白血病细胞在体内的作用密切相关。     

榄香烯体外诱导急性白血病细胞凋亡的研究

目的 探讨榄香烯诱导白血病细胞凋亡的作用及其机制。方法 采用MTT法、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞术（FCM）、DNA电泳方法观察榄香烯对HL．60白血病细胞株的促凋亡作用，并进行细胞周期分析和采用RT-PCR、FCM检测bcl-2基因表达的变化。结果 榄香烯在体外诱导HL-60细胞凋亡，呈细胞凋亡典型的形态和生化特征，可见凋亡小体和梯形条带，并具有时间剂量依赖性，凋亡率最高达51．8％，在凋亡过程中细胞阻滞于S期，并检测到bcl-2基因表达下调。结论 榄香烯具有诱导细胞凋亡的作用，其机制可能与bcl-2基因表达下调有关。     

露蜂房蛋白对红白血病小鼠脾和骨髓的超微结构的影响

目的观察露蜂房蛋白对红白血病小鼠的脾和骨髓的影响。方法用EL9611细胞株制备红白血病小鼠模型，常规制备超薄切片，透射电镜下观察红白血病小鼠脾和骨髓的超微结构。结果红白血病小鼠脾和骨髓红白血病细胞染色质边集，滑面内质网扩张，线粒体呈现空泡样改变，有的出现凋亡小体。结论露蜂房蛋白在体内具有明显的诱导红白血病细胞凋亡的作啁，并且白血病细胞呈现典型细胞凋亡的超微结构改变。     

天花粉蛋白体外诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:本研究探讨天花蛋白(Trichosanthin,TCS)对HL-60细胞凋亡的影响。方法:采用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率;光学显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:TCS抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,随作用时间的延长、TCS浓度的增加,增殖抑制及促凋亡作用更加明显。结论:TCS对HL-60细胞有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应。     

参术抗白血病细胞作用的研究

目的 :探讨参术对白血病细胞有无杀伤或诱导凋亡及分化作用 ,从细胞和分子水平探讨其作用机理 ,为寻找一种选择性杀伤白血病细胞、高效低毒的诱导凋亡及分化的中药方剂提供实验依据。方法 :a.通过MTT试验、台盼蓝拒染检测活细胞数 ,观察不同浓度参术作用后 HL-60细胞增殖的改变 ;b.通过细胞形态学、流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳进行细胞凋亡的检测和观察 ;c.以药物维甲酸为阳性对照组 ,采用6.2 5 mg/m L浓度参术作用 HL-60细胞 72 h,通过细胞形态学观察、硝基四氮唑蓝 ( NBT)还原实验、细胞吞墨实验来观察参术作用后 HL-60细胞分化情况。结果 :a.在 6.2 5～ 5 0 mg/m L浓度范围内 ,参术对 HL-60细胞的增殖有抑制作用并呈剂量、时间依赖关系 ,半数抑制浓度约为 2 5 .0 mg/m L;b.典型的细胞形态学改变、DNA琼脂糖凝胶电泳条形梯带的出现和流式细胞仪检测亚 G1 峰的检出等证实参术能诱导白血病细胞凋亡 ;c.NBT还原实验和细胞吞墨实验 :在参术 (浓度为 6.2 5 mg/m L)作用 72 h后 ,NBT阳性反应率和细胞吞墨率分别为5 0 .8%和 5 6.0 % ,明显高于对照组 (分别为 7.8%和 8.0 % ) P <0 .0 5。全反式维甲酸 ( 1 0 - 6 mol/L)作用组 NBT阳性反应率和细胞吞墨率分别为 5 5 .3 %和 69.0 % ,稍高于参术作用组 ,但无     

碘化砷-硫脲诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡的研究

目的　研究新型砷剂配合物碘化砷 硫脲 (AsI3 Tu)诱导白血病HL 6 0细胞凋亡的生物学效应。方法　采用细胞形态学观察、细胞凋亡原位检测法 (TUNEL法 )检测凋亡细胞并测定其细胞蛋白质的含量。结果　① 1～16 μmol/LAsI3 Tu对HL 6 0细胞增殖有抑制作用 ,并与时间和剂量相关。②TUNEL法检测凋亡细胞明显增加。③AsI3 Tu能够抑制HL 6 0细胞蛋白质合成。结论　AsI3 Tu能有效诱导白血病细胞系HL 6 0细胞凋亡。     

通关藤提取物对白血病细胞的抑制作用及诱导凋亡研究

目的:探讨通关藤提取物对白血病细胞的抑制和凋亡作用。方法:以通关藤提取物处理白血病HL-60细胞、K562细胞,MTT法检测其对2种细胞的抑制作用,Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡程度,JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm) 水平。结果:通关藤提取物对HL-60细胞的抑制作用强于K562细胞,增加药物作用的浓度和时间可以增强其对K562细胞的抑制作用。较高浓度的通关藤提取物能降低细胞内ΔΨm,并促进HL-60和K562细胞的凋亡。结论:通关藤提取物对不同白血病细胞有不同程度的抑制作用,可能是通过降低ΔΨm途径触发白血病细胞凋亡。      

蜂房提取物体外抗人肝癌细胞株HepG2细胞作用的实验研究

目的观察不同蜂房提取物体外抗HepG2细胞的作用。方法用不同溶剂从蜂房中提取有效成分(A～G样品),通过3H-TdR渗入法观察各提取物体外对HepG2细胞的抑制作用,确定抑瘤效果最好的蜂房提取物。结果各蜂房提取物对HepG2细胞均有很好的抑制作用,其中蜂房醇浸石油醚提取物(F样品)与蜂房醇浸乙酸乙酯提取物(G样品)的抑制作用最明显,抑制率分别为38.6%～99.6%、21.4%～98.7%,并且具有较好的量效关系。结论蜂房提取物体外具有较强的抗肿瘤作用。     

蜂房提取物对三种口腔常驻细菌产酸影响的体外研究

目的研究蜂房提取物对三种口腔常驻细菌产酸的影响。方法选用变形链球菌ATCC25175,血链球菌ATCC10556,粘性放线菌ATCC19246,测定蜂房四个化学组分的最低抑菌浓度MIC。再以低于MIC的4个浓度配制含药的TPY液体培养基,测定蜂房各化学组分对上述三种细菌产酸能力的影响,动态监测蜂房化学组分对变形链球菌产酸的影响。结果蜂房各化学组分对上述三种细菌的生长有一定的抑制作用,并且蜂房组分NVE1、NVE3、NVE4对变形链球菌、血液链球菌、粘性放线菌产酸均有显著的抑制作用。而蜂房组分NVE2对变形链球菌和血液链球菌的产酸未见明显的抑制作用,NVE2的高浓度组能够抑制粘性放线菌的产酸,动态pH监测显示,蜂房组分NVE1能够明显抑制变形链球菌的产酸,而NVE2则无此作用。结论蜂房各化学组分对三种口腔常驻细菌的产酸都有一定的抑制作用,其抑龋作用的物质基础及药理作用机制尚待进一步研究。     

白血病骨髓基质细胞促进Jurkat细胞抗药物诱导凋亡研究

目的探索骨髓基质细胞增强白血病细胞抗凋亡、抗药特性的可能机制.方法体外分离培养骨髓基质细胞模拟骨髓微环境功能,与白血病细胞Jurkat体外共培养.0.5 μmol/L DNR处理Jurkat 细胞诱导凋亡,应用Annexin V/PI 双标法流式细胞仪检测白血病细胞凋亡率.PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 0.1～2.0 μmol/L浓度范围DNR作用一定时间后,Jurkat细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高.共培养后骨髓基质细胞抑制药物诱导的白血病细胞凋亡,白血病细胞凋亡率明显低于单独悬浮培养组(P<0.05).白血病骨髓基质对白血病细胞的屏蔽效应强于正常骨髓基质细胞[白血病细胞凋亡率分别是(5.73±1.78)%, (8.39±4.08)%, (P<0.05)].DNR处理共培养组Jurkat细胞G0/G1期阻滞,而正常与白血病骨髓基质细胞屏蔽的白血病细胞G0/G1期阻滞现象无显著性差异(P>0.05).结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡.骨髓基质细胞抑制化疗药物诱导的白血病细胞凋亡,这种保护作用可能部分通过阻滞白血病细胞于G0/G1期实现.白血病骨髓基质细胞对白血病细胞的屏蔽效应可能存在较细胞周期阻滞更复杂的机制.     

葡萄皮渣中原花青素对HL-60细胞作用的研究

目的探讨原花青素(GPC)在体外对人白血病细胞(HL-60细胞)增殖抑制及细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养HL-60细胞,分别用100、200、300、400、500μg/mL GPC作用。MTT法检测不同浓度GPC作用24、48、72h后HL-60细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测24h后HL-60细胞的凋亡情况。结果随着GPC药物浓度的增加,其对HL-60细胞的增殖抑制率逐渐增高,呈时间-剂量依赖效应关系;GPC在低浓度(200μg/mL)时可引起少量的细胞发生凋亡,随着GPC浓度的增加,细胞凋亡率也在不断增加,呈明显的量效关系。结论 GPC可在体外抑制HL-60细胞的增殖,并诱导HL-60细胞凋亡。     

细胞周期检测点激酶Chk1和Chk2在急性白血病骨髓单个核细胞中表达的研究

目的　探讨细胞周期检测点激酶 1,2 (Chk1,2 )在急性白血病中表达的意义。方法　用RT PCR方法、免疫组织化学方法及共聚焦显微镜检测Chk1和Chk2的mRNA和蛋白在白血病细胞株K5 6 2及急性白血病骨髓单个核细胞中的表达。结果　Chk1和Chk2的mRNA水平在急性白血病与增生性贫血之间无显著差异 ,Chk1和Chk2在K5 6 2细胞及白血病骨髓单个核细胞的细胞质和细胞核中均有表达 ,Chk1蛋白在初治及骨髓幼稚细胞大于 30 %的复治白血病的骨髓单个核细胞中核表达显著增高 ,Chk2蛋白在白血病骨髓单个核细胞中核表达与增生性贫血相比无显著差异。结论　Chk1和Chk2的mRNA水平与白血病发生无关 ,但Chk1蛋白表达水平与白血病发生有一定的相关性 ,Chk1有作为白血病治疗靶点的可能性 ,Chk2蛋白表达水平与白血病发生无关。     

TAT PTD-BCR/ABL SH3融合蛋白对白血病细胞系K562凋亡诱导作用

目的研究基因重组HIV-1反式激活蛋白(TAT)的蛋白转导域(PTD)与BCR/ABL SH3结构域融合蛋白(PTD-BCR/ABL SH3)导入白血病细胞株(K562)的细胞后对K562细胞增殖、凋亡的影响. 方法通过台盼蓝拒染法、流式细胞术、透射电镜(TEM)、激光共聚焦显微镜(CLSM)及凋亡细胞原位标记(TUNEL)等方法,测定了PTD-BCR/ABL SH3融合蛋白作用于K562细胞后细胞的增殖、形态学变化、细胞凋亡和细胞周期参数的改变. 结果≥5 μmol*L-1的PTD-BCR/ABL SH3融合蛋白对K562细胞生长有抑制作用,浓度越高,抑制作用越强;苔盼蓝拒染法、细胞形态学、电镜超微结构、TUNEL原位杂交和FCM检测的观察证明,PTD-BCR/ABL SH3融合蛋白可引起K562细胞的凋亡和坏死;FCM检测显示该融合蛋白可将细胞阻滞在G2/M期. 结论 PTD-BCR/ABL SH3融合蛋白进入K562细胞后可引起细胞凋亡和坏死,导致细胞增殖抑制. 这一结果可能为慢性粒细胞性白血病(CML)的治疗提供一种新的治疗策略.     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。