益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠Notch3和Frizzled2 mRNA及蛋白表达的影响

 目的： 探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch3和Frizzled2 mRNA表达及这2种蛋白在海马CA1区表达的影响。方法：线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2 h,再灌注1周,随机分为假手术组、缺血再灌注组、益气活血方组和补肾生髓方组。采用Notch信号通路基因芯片PCR Assay检测额顶叶皮质Notch3和Frizzled2 mRNA表达,免疫组化EnVision两步法检测海马CA1区Notch3和Frizzled2蛋白表达。结果：缺血再灌注组Frizzled2 mRNA表达显著高于假手术组（P<0.05）,益气活血方组Notch3 mRNA表达显著高于缺血再灌注组（P<0.05）,补肾生髓方组Frizzled2 mRNA表达显著低于模型组（P<0.05）,益气活血方组Frizzled2 mRNA表达显著高于补肾生髓方组（P<0.05）。缺血再灌注组Notch3 和Frizzled2蛋白表达均高于假手术组（P<0.05）,2种中药复方组Notch3和 Frizzled2蛋白表达均高于缺血再灌注组（P<0.05）,补肾生髓方组Notch3蛋白表达高于益气活血方组（P<0.05）。结论：益气活血方和补肾生髓方能通过增强额顶叶或海马CA1区Notch3 mRNA及蛋白表达,降低Frizzled2 mRNA及蛋白表达,调节Notch信号转导通路,促进脑损伤修复。     

益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带Notch-1和Jagged1表达的影响

目的:探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带Notch-1和Jagged1蛋白表达的影响。方法:线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。随机分为假手术组、模型组、益气活血方防治组和补肾生髓方防治组。脑缺血2h,分别再灌注1周、2周、3周,采用免疫组化SABC法检测Notch-1和Jagged1蛋白表达的阳性总面积和平均吸光度。结果:在缺血侧额顶叶皮质缺血半暗带,再灌注各时点,模型组Notch-1和Jag-ged1蛋白表达的阳性总面积和平均吸光度显著高于假手术组(P0.05或P0.01),2种中药复方组再灌注各时点Notch-1和Jagged1蛋白表达的阳性总面积和(或)平均吸光度显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:2种复方能通过降低缺血半暗带Notch-1、Jagged1蛋白表达,抑制Notch信号转导通路。     

养阴益气活血方对干燥综合征NOD小鼠颌下腺BCL-6和CXCR5表达的影响

目的:研究滤泡辅助T细胞(Tfh)相关分子BCL-6和CXCR5表达与干燥综合征(SS)的相关性,探讨养阴益气活血方治疗SS的可能机制。方法:将NOD小鼠随机分为4组,即模型组、中药组、西药组、结合组,分别灌服等量的去离子水、中药养阴益气活血方2.25 g/ml、羟氯喹3 mg/ml、中药加羟氯喹,灌胃、给药8周后解剖摘取组织计算颌下腺指数,HE染色观察颌下腺病理形态,免疫组化检测颌下腺Tfh特异分子BCL-6、CXCR5的表达。结果:小鼠颌下腺指数比较模型组与各用药组之间差异无显著统计意义(P>0.05);而结合组显著高于西药组(P<0.05); HE病理结果显示各组淋巴细胞浸润和腺泡结构破坏不等,颌下腺组织病理评分结合组显著低于模型组(P<0.05),其他组之间差异无显著统计学意义;小鼠颌下腺组织BCL-6和CXCR5的表达中药组和结合组显著低于模型组(分别为P<0.01,P<0.05),在BCL-6中药组和结合组还显著低于西药组(P<0.01)。结论:Tfh细胞及其相关分子BCL-6、CXCR5可能参与干燥综合征的发病,养阴益气活血方可能是通过...     

天花粉蛋白对T细胞活化的抑制作用与信息传导

目的 观察天花粉蛋白经由ＴＣＲ／ＣＤ３介导的信号传递途径抑制Ｔ细胞活化增殖的效应方法 用各种不同的刺激信号来激活外周血淋巴细胞，然后观察天花粉蛋白对其增殖抑制的影响。接着测定天花粉蛋白对ＣＤ３单抗刺激后Ｔ淋巴细胞内一些信号传导物质变化的影响。结果 天花粉蛋白抑制经由ＴＣＲ／ＣＤ３信号传导途径诱发的淋巴细胞增殖。进而发现细胞内游离钙离子的升高，蛋白激酶Ｃ的转位和细胞内蛋白酪氨酸磷酸化受天花粉蛋白的抑     

补肾益气方调控TGF-β1对反复自然流产患者外周血Treg/Th17细胞平衡的影响

为探讨补肾益气方通过调控TGF-β1对反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者外周血Treg和Th17细胞平衡的影响,选取了15例RSA患者,孕42d起诊断为正常宫内妊娠后服中药,在服药前以及服药一个月后以流式细胞术检测Treg和Th17细胞数量,ELISA方法检测外周血TGF-β1及IL-10、IL-17水平。结果显示,中药治疗后RSA患者外周血Treg数量上升至(5.94±1.37)%,明显高于服药前(3.45±0.93)%(P0.05)。Th17细胞数量下降至(1.12±0.32)%,低于治疗前(2.61±0.70)%。中药治疗后,Treg/Th17细胞比值上升,从1.43±0.66升高至5.64±1.84%(P0.05)。Treg相关细胞因子IL-10水平从(17.90±4.18)pg/ml上升至(28.80±7.18)pg/ml,Th17细胞相关细胞因子IL-17则从(45.83±4.15)pg/ml下降至(31.21±5.62)pg/ml,同时发现中药治疗后血TGF-β1水平从(192.73±13.97)pg/ml上升为(334.07±61.53)pg/ml(P0.05),TGF-β1/IL-17比值从4.23±0.43提高至11.20±3.56,IL-10/IL-17比值从0.39±0.09上升至0.94±0.28(P0.05),差异有统计学意义。以上结果表明补肾益气方能够调控Treg/Th17细胞平衡,改变母体细胞因子分泌状态,保护胎儿不被排斥,其机制可能与母体TGF-β1水平上调有关。     

补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响

目的:探讨补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响及机理。方法:以培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL)或在试验体系中加入灌服补肾宁心方的兔血清,以孟加拉玫瑰红活细胞染色法测定人单核细胞系U937与HUVECs的粘附,并用流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)以及E-选择素的表达。结果:ox-LDL显著增强单核U937细胞与内皮细胞之间的相互粘附,如在试验体系中加入灌服补肾宁心方的动物血清,则粘附率明显降低(P＜0.01)。流式细胞仪分析结果显示ox-LDL能明显促进内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素的表达,补肾宁心方中药灌服血清可显著下调内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素的表达(P＜0.01)。结论:补肾宁心方含药血清可能通过下调内皮细胞表面粘附分子的表达抑制单核-血管内皮细胞粘附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

益气活血解毒方对小鼠Lewis肺癌生长转移及血管生成的作用

目的：研究益气活血解毒方对小鼠Lewis肺癌生长及自发性肺转移的作用并探讨其作用机制。方法:复制小鼠Lewis肺癌模型并随机分组,腹腔注射给药 10 d 后，观察抑瘤率，HE染色观察瘤组织病理学变化，免疫组化法检测瘤组织增殖细胞核抗原（PCNA）的表达；给药 20 d 后，观察肺转移瘤结节数、瘤组织微血管密度（MVD），免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果:益气活血解毒方能减少小鼠Lewis肺癌肿瘤重量和肺转移灶数，高低剂量(24 mg·kg^-1·d^-1,12 mg·kg^-1·d^-1)抑瘤率分别为48.29%、37.26%，肺转移结节数分别为1.67、3.50，对照组为6.44；并能抑制肿瘤细胞PCNA的表达，降低肿瘤组织微血管密度,抑制肿瘤细胞及血清中VEGF的表达。结论:益气活血解毒方能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制VEGF表达,减少肿瘤血管生成有关。     

扶正、补肾及益气补肾方药对肾虚老龄小鼠免疫功能的影响

目的　探讨补肾、扶正、益气补肾中药 ,对醋酸可的松所致肾虚老龄小鼠免疫功能的影响。方法　用醋酸可的松致老龄小鼠肾虚 ,经分别灌喂补肾、扶正和益气补肾方药后 ,用MTT比色法测定小鼠脾淋巴细胞的增殖 ;用胸腺细胞增殖法和ELISA法 ,观察脾淋巴细胞分泌IL 2和IL 12的水平 ;乳酸脱氢酶法检测脾脏NK细胞的活性 ;RT PCR法观察IL 2和IL 12mRNA的表达。结果　肾虚小鼠脾淋巴细胞的增殖活性 ,以及IL 2和IL 12的水平 ,均较正常小鼠明显下降(P <0 .0 5 ) ,两种细胞因子mRNA的表达也受到抑制。经补肾、扶正和益气补肾方药治疗后 ,以上检测指标均有不同程度的提高 ,其中益气补肾方药组提高最明显。结论　益气补肾方药可能是改善外源性糖皮质激素所致肾虚及免疫衰老的较理想的药物     

补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌A549/DDP细胞的耐药逆转及MRP表达的影响

目的：探讨补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌细胞耐药逆转作用及机制。方法:采用MTT及流式细胞术，分别观察补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌A549/DDP耐药细胞的细胞毒作用和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的影响。结果:补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌耐药细胞有一定的杀伤作用，能增强顺铂（DDP）对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用，显著降低MRP的表达（P＜0.01），但对维拉帕米（VRP）的协同逆转作用不明显。结论:补肾化瘀解毒方药物血清具有增效和耐药逆转作用，其机制可能与其抑制肺癌耐药细胞MRP的表达有关。     

益气活血方对自发性高血压大鼠左心室肥厚的影响

<正>目的:观察益气活血方对自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚的影响。方法:40只12周龄SHR随机分为模型对照组、益气活血方高(10.8g生药/kg)、低(5.4g生药/kg)剂量组和络丁新对照组(1mg/kg)     

补肾醒脑解毒方对单纯疱疹病毒感染神经元的保护 …

单纯疱疹病毒(ＨＳＶ)是散发性病毒性脑炎的主要病原。近10年来由于抗病毒药无环乌苷(Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ,ＡＣＶ)的应用,ＨＳＶ脑炎的临床治疗有了很大进展,但存活病人仍约有半数遗留有不同程度的神经功能缺陷症状。并且,实验室和临床都已发现ＨＳＶ易对ＡＣＶ产生耐药。为从中草药中探寻治疗ＨＳＶ脑炎尤其是ＨＳＶ脑炎后遗症的药物,我们根据中医学传统理论与自己的临床经验,选用补肾醒脑解毒中药复方在体外对ＨＳＶ感染神经元细胞进行了实验研究,。1　材料和方法11　大鼠海马神经元培养　按文献方法取怀孕18ｄ的ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅ…     

补肾益气方通过上调滋养细胞IDO 的表达促进母胎界面NK 细胞的表型转化

目的:研究补肾益气方诱导母胎界面耐受状态的机制及吲哚胺2,3鄄双加氧酶(IDO)对蜕膜NK 细胞表型转化的影响。方法:用免疫组织化学方法测定正常绒毛组织和复发性流产患者绒毛组织内IDO 的表达。体外培养人滋养细胞HTR-8/ SVneo,用流式细胞术检测含药血清对HTR鄄8/ SVneo IDO 表达的影响。用含对照大鼠血清、含药大鼠血清及含药血清联合IDO 阻断剂1鄄甲基色氨酸(1-MT)的培养液分别处理HTR鄄8/ SVneo 后与人外周NK 细胞共培养,测定其对NK 细胞的调节作用。结果:正常绒毛组织中IDO 的表达较流产绒毛组织明显增加。含药血清可增强HTR鄄8/ SVneo IDO 的表达。外周NK细胞与含药血清处理过的HTR鄄8/ SVneo 共培养后,NK 细胞表面CD16 表达减低,CD56 表达增加,且CD16 的改变可被1-MT抑制。结论:补肾益气方可以通过上调滋养细胞IDO 的表达诱导外周NK 细胞向耐受型转变。     

健脾补肾药对脾虚大鼠环核苷酸及甲状腺激素水平的影响

目的 :观察健脾补肾方药对实验性脾虚证大鼠环核苷酸及甲状腺激素水平的影响 ,探讨该方防治脾虚证的作用机理及脾与肾相互关系的意义。方法 :选用SD雄性大鼠 ,随机分为 4组 :即正常对照组 ,脾虚模型组 ,健脾补肾方高、低剂量组 ,采用大黄复制脾虚证动物模型 ,观察各组动物血浆环磷酸腺苷 (cAMP)、环磷酸鸟苷 (cGMP)及血清甲状腺素 (T4)、三碘甲腺原氨酸 (T3 )、促甲状腺素 (TSH)水平的变化。结果 :脾虚模型组大鼠血浆cAMP含量及cAMP/cGMP比值均比正常对照组升高 (p <0 0 1) ,T3 、T4含量比正常对照组下降 (p<0 0 1)。而健脾补肾方药能降低实验性脾虚证大鼠体内cAMP含量及cAMP/cGMP比值 (p <0 0 1) ,提高T3 、T4含量 (p <0 0 1)及脾脏、胸腺比值 ,又可使肾脏组织重量减轻等作用。 结论 :健脾补肾中药可以消除大黄的药物影响 ,防止出现脾虚症候 ,其作用机理与调节cAMP、cGMP及甲状腺激素水平有关。脾肾相关理论对临床有指导意义     

T细胞激活的信号传导及阻断

T细胞激活的信号传导长期以来一直是分子免疫学研究的热点,近年来发现的B7CD28／CTLA4共刺激途径使这一研究进一步深入。该共刺激信号是T细胞激活所必需的,并且还可调变TCR的早期信号。另外．其信号分子及传导路径也不同于TCR信号。在共刺激信号缺乏而出现免疫无能状态时,则表现为Ras途径缺陷。     

益气活血方对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及海马突触可塑性的影响

目的：探讨益气活血方(YQHXD)对脑缺血再灌注(I/R)大鼠学习记忆功能,海马区突触超微结构及脑源性神经营养因子(BDNF)、突触小泡蛋白(SYN)和突触后致密蛋白95(PSD95)蛋白的影响。方法：采用改良线栓法制备大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为模型组(I/R组)及YQHXD低、中、高剂量组,并设置假手术(sham)组作为对照,每组12只。YQHXD低、中、高剂量组分别按照4.2、8.4和16.8 g·kg^-1·d^-1的剂量灌胃,sham组和I/R组给予等体积生理盐水,于用药14 d后采用Longa评分法观察各组大鼠神经功能缺损情况,Morris水迷宫实验评估各组大鼠学习与记忆功能,苏木素-伊红(HE)染色观察缺血侧海马CA1区及齿状回(DG)病理变化,透射电镜观察海马区突触数量、突触后致密物(PSD)厚度和结构变化,Western blot检测海马组织BDNF、SYN和PSD95蛋白表达水平。结果：与sham组比较,I/R组大鼠神经功能缺损评分显著增高(P<0.01),水迷宫逃避潜伏期显著延长...     

全膝关节置换后服用健脾益气活血方患者肌力及疼痛的变化

背景：全膝关节置换后仍有部分患者存在术肢乏力、疼痛改善不理想的情况,临床发现健脾益气活血方可促进全膝关节置换后康复,但具体疗效仍然有待研究。目的：观察健脾益气活血方对初次单侧全膝关节置换后术肢肌力及疼痛的影响。方法：选择74例行初次单侧全膝关节置换的患者,随机分为试验组及对照组,每组37例。两组患者均采用相同手术方式及假体,对照组术后予常规止痛、抗凝、功能锻炼等治疗;试验组术后在对照组治疗基础上服用健脾益气活血方,持续治疗并随访1个月,统计两组术前、术后肌力(屈伸肌群峰力矩、总功量)、目测类比评分、美国特种外科医院评分的变化。结果与结论：(1)术后14 d及1个月,试验组的伸肌峰力矩、屈肌峰力距、伸膝总功量、屈膝总功量及美国特种外科医院评分相较于对照组改善更佳(P <0.05);(2)术后7,14 d及术后1个月试验组的目测类比评分相较于对照组改善更佳(P <0.05);(3)提示健脾益气活血方可有效提高术肢肌力情况,改善患者术后肢体疼痛,加快患者全膝关节置换后的康复。     

补肾壮督方含药血清对髓核细胞线粒体凋亡通路的影响

文题释义：线粒体凋亡通路：又称为内源性凋亡通路,可以通过多种应力刺激激活,导致线粒体外膜改变、线粒体DNA损伤等,这些改变将最终导致线粒体外膜通透性的增加,正常情况下存在于线粒体内外膜之间的凋亡相关蛋白将扩散至细胞质中,从而导致细胞凋亡的发生。中药血清药理方法：是指动物灌胃给予中药及制剂,经吸收进入机体血液循环,在一定时间内采集血液,分离所得血清中必定含有一定量的该药物成分,此时的血药浓度反映了机体的真实血药浓度,将此血清加入到体外细胞培养体系,观察其药理作用。背景：线粒体凋亡通路是细胞凋亡中的重要通路,前期动物实验发现补肾壮督方可通过抑制线粒体凋亡通路改善椎间盘退变,但其作用机制还有待研究。目的：观察补肾壮督方含药血清对人髓核细胞线粒体凋亡通路关键蛋白的影响,探讨其改善椎间盘退变的机制。方法：①37只SD雄性大鼠,随机分为正常组、低剂量中药组[0.506 g/(kg•d)]、中剂量中药组[1.012 g/(kg•d)]及高剂量中药组[2.024 g/(kg•d)],连续灌胃2周,灌胃结束后制备含药血清;②人髓核细胞随机分为正常组、模型组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组、高剂量含药血清组,模型组用200 μmol/L H₂O₂处理6 h,正常组不进行任何处理,低、中、高剂量含药血清组造模后用体积分数为2%含药血清干预48 h。透射电镜观察髓核细胞的超微结构,流式细胞术检测髓核细胞凋亡率和线粒体膜电位,qPCR和Western blot检测Apaf1、Bcl-2、Bax及Cytc的表达。结果与结论：①与正常组相比,模型组出现明显的细胞凋亡形态特征,髓核细胞凋亡率显著增加(P < 0.05),Apaf1、Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量均显著增加(P < 0.05),线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著下降(P < 0.05);②补肾壮督方含药血清干预后,髓核细胞凋亡率明显减少(P < 0.05),Apaf1、Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量均明显下降(P < 0.05),线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著增加  (P < 0.05);③补肾壮督方含药血清可有效抑制髓核细胞凋亡,并呈剂量依赖性,可能通过减少Apaf1、Cytc、Bax蛋白及mRNA表达,增加Bcl-2蛋白及mRNA表达,抑制线粒体凋亡通路,从而改善椎间盘退变。ORCID: 0000-0002-6045-9062(林一峰)中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

补肾活血方影响子宫内膜容受性的实验研究

目的 探讨补肾活血中药对多囊卵巢综合征（PCOS）患者促排卵后子宫内膜容受性的影响。方法 随机给予患PCOS不孕妇女两种不同的促排卵治疗，A组为用克罗米芬（CC）／绒毛膜促性腺激素（HCG）促排卵成功者；B组为用补肾活血方加CC／HCG促排卵成功者。月经周期正常妇女设为C组。用半定量逆转录-聚合酶链反应技术（RT—PCR）检测三组妇女着床期子宫内膜降钙素（CT）mRNA的表达，同日用阴道B超测定子宫内膜厚度，用电化学发光免疫法测血清雌二醇（E2）及孕酮（P）水平。结果 着床期子宫内膜CTmRNA表达比较，A组分别低于B、C组（P分别〈0．05、0.01），B组和C组之间无差异（P〉0．05）。着床期血清E2、P水平及子宫内膜厚度比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论 补肾活血方增强了着床期子宫内膜CT的表达，推测中药可改善子宫内膜容受性，有利于胚胎着床和临床妊娠率的提高。     

补肾益气方对TNF-α/IFN-γ诱导的早孕期人滋养层细胞凋亡的影响

目的：探讨补肾益气方对TNF-α/IFN-γ诱导的早孕期人滋养层细胞凋亡的调节作用。方法：TNF-α/IFN-γ和含药血清共培养细胞后,采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞亚二倍体峰,原位缺口末端标记法（TUNEL染色）、caspase-3活性检测试剂盒检测凋亡,Western blot检测Bcl-2和XIAP蛋白。结果：TNF-α和IFN-γ联合给药培养后,细胞活力降低,亚二倍体细胞较未处理组明显增多,凋亡细胞数明显高于正常对照组,caspase-3酶活性明显升高,TNF-α/IFN-γ与含药血清共培养后,细胞活力升高,亚二倍体细胞数和凋亡细胞数却明显减少,caspase-3酶活性降低,Bcl-2和XIAP蛋白增加,并呈时间和剂量依赖性。结论：补肾益气方降低TNF-α和IFN-γ诱导的滋养层细胞凋亡的发生率。     

益气活血类药物血清对嗅鞘细胞增殖及相关因子分泌的影响

背景：益气化瘀是中医药对脊髓损伤的主要治则,但疗效不确切。那么,益气活血类中医药治法能否结合现代科技共同治疗脊髓损伤从而提高疗效呢？ 目的：观察益气活血类汤剂促进嗅鞘细胞增殖及分泌神经生长因子、脑源性神经营养因子的作用。 方法：组织块培养法体外培养新生大鼠嗅鞘细胞;采用MTT法检测补阳还五汤和痿症方含药血清对嗅鞘细胞增殖的影响;采用Western-Blot法测定培养上清中神经生长因子、脑源性神经营养因子水平。 结果与结论：MTT结果显示补阳还五汤药物血清及痿证方药物血清均能促进嗅鞘细胞增殖,且两者促增殖作用无差异;Western-Blot结果显示补阳还五汤药物血清及痿证方药物血清均能促进嗅鞘细胞分泌神经生长因子、脑源性神经营养因子,两组间细胞因子分泌水平也无明显差异。