胸腺修饰联合照射预处理受体在猪-猴心脏移植中对补体的影响及机理探讨

目的：探讨补体在异种大动物猪-猴心脏移植排斥反应中的作用。方法：选用猪-新生猴腹腔心脏异位模型，通过异种胸腺修饰加^60C o γ照射途径。结果：预处理组移植前补体水平较空白组无明显变化，但随着IgM、IgG水平的上升，排斥时C3、CD46水平显著降低。在照射＋胸腺注射组中，猕猴特异性抗猪抗体IgM及IgG的上升速度均较照射组和空白组明显延缓，且存活期较空白组明显延长。MLR检测在照射＋胸腺注射组接受脾细胞胸腺内注射后第3周，其刺激效应较空白组、照射组下降明显（P〈0．01）。结论：补体通过经典途径参与超急性及延迟性异种排异反应的发生，补体本身并不直接损伤内皮细胞，而需要有抗体的参与。通过异种胸腺注射联合照射预处理在抑制T细胞免疫及体液免疫方面有重要作用，但尚无法起到抑制异种排异反应中补体激活的作用。     

大动物同种异体心脏移植供心存活期与IL-2、IL-10关系的研究

实验以大动物猪作为研究对象 ,使用胸腺内注射供体脾细胞和γ射线全身照射方法进行受体预处理 ,再行同种异体异位心脏移植 ,来评估在大动物实验中IL 2和IL 1 0与供心存活期的关系。结果表明在实验组预处理后第 2周 ,与照射前、照射 1周后以及单纯照射组相比混合淋巴细胞培养刺激效应有明显下降 (P <0 0 5 ) ,而单纯照射组无显著变化 (P >0 0 5 )。移植供心存活期实验组 (MST 5 6d )较空白组 (MST 2 4d )和照射组 (MST 2 2d )明显延长 (P <0 0 5 ) ,而空白组与单纯照射组比较无显著差异 (P >0 0 5 )。IL 2和IL 1 0检测的结果表明 ,实验组移植后 1～ 3dIL 2的水平明显低于对照组和空白组 (P<0 0 5 )。IL 1 0水平三组无显著差异 (P >0 0 5 )。以上结果表明胸腺内修饰和全身照射联合预处理受体 ,可以使受体产生短暂的免疫抑制。IL 2水平的变化与排斥反应的发生关系密切 ,它可以作为监测早期急性排斥反应发生的一个重要指标     

异种胸腺修饰和全身照射在猪-猴心脏移植模型中对抗体产生的影响

为观察胸腺修饰和全身照射预处理受体对猕猴抗猪抗体产生的影响,将受体中国猕猴随机分成空白组(A组)、全身照射组(B组)、照射+胸腺注射组(C组),用流式细胞仪法监测猕猴外周血细胞表面IgM、IgG阳性细胞的百分比在预处理前后及移植后的变化。结果表明:全身照射后,IgM类天然抗体阳性细胞的百分比水平较空白组踢显下降(P<0.01),而IgG类天然抗体阳性细胞的百分比水平无明显变化;在移植后,照射+胸腺注射组的IgM类诱生抗体阳性细胞的百分比水平及IgG类诱生抗体阳性细胞的百分比水平较空白组及全身照射组上升延缓。提示异种胸腺修饰能抑制IgM及IgG类诱生异种抗体的产生。     

大动物胸腺修饰诱导同种心脏移植免疫耐受的实验研究

使用胸腺修饰和γ射线全身照射方法预处理受体猪 ,来评估该诱导免疫耐受方法用于大动物同种异体心脏移植的可能性。动物分组 :空白组不加处理行异位心脏移植 ;对照组受体单用 2Gyγ 射线全身照射 ;实验组受体全身照射加胸腺内注射供体脾细胞 ,两组预处理后 ,观察外周血中淋巴细胞及其亚群CD4、CD8水平的变化以及使用混合淋巴细胞反应(MLR )来了解其免疫功能的相关改变。预处理后 14d ,行异位心脏移植 ,观察移植物生存时间 ,并检测术后IL 2、IL 10水平变化。接受照射 4 8h后淋巴细胞较照射前显著减少 (P <0 0 5 ) ,流式细胞仪计数CD4、CD8水平也明显下降 ,但CD4下降更为明显 ;实验组受体胸腺修饰后第 2周 ,混合淋巴细胞反应刺激效应有所下降 (P <0 0 5 ) ,而单纯照射组预处理前后无显著差异 (P >0 0 5 )。实验组供心存活期 (MST 7 4d )较空白组 (MST 4 2d )和照射组 (MST 4 6d )明显延长 (P <0 0 5 ) ,而空白组与单纯照射组比较无显著差异 (P >0 0 5 )。实验组移植后 1～ 5dIL 2的水平明显低于对照组和空白组 (P <0 0 5 ) ,IL 10水平三组无明显差异 (P >0 0 5 )。实验组预处理后 ,机体产生了一定程度的免疫抑制 ,但并未获得在小动物实验中所获得的所谓“永久性”免疫耐受 ,其原因有待进一步研究     

新生小鼠胸腺细胞免疫抑制功能探讨——Ⅱ.对同种半心移植排异反应的抑制作用

经~(60)Co轻度照射(200Rad)之成年CFW小鼠,在接受2×10~8同品系新生早期胸腺细胞及供体新生心肌细胞混悬液腹腔注射后,其对同种半心移植(C57BL CFW)的排异反应明显延缓。新生鼠胸腺细胞组之移植物平均存活期(20.0±1.8天)比对照组(12.9±1.5天)和成年鼠胸腺细胞组(16.2±3.0天)显著延长。提示新生小鼠胸腺细胞对排异反应有抑制作用。 就各种术前处理对移植物存活期影响所作的分析表明,照射对移植物存活期无显著影响,在照射后的5—7天,受鼠免疫系统功能已回复正常水平。而照射联合新生供体心肌细胞注射,则在一定程度上延长移植物的存活期。进一步的分析显示,成年鼠胸腺细胞组移植物的存活期之所以较长,可能是由于受照射联合新生供体心肌细胞注射的影响。     

异种胸腺修饰对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响

为观察异种胸腺修饰对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响 ,将供体豚鼠和受体SD大鼠随机分成对照组 (a组 )、全身照射组 (b组 )、照射 +胸腺注射组 (c组 ) ,a组大鼠腹腔内注射经处理的豚鼠脾淋巴细胞 (5× 10 6个 ) ,7d后流式细胞仪法检测抗豚鼠IgM及IgG类天然抗体水平的变化 ,b、c组在腹腔注射异种抗原前 17d接受全身照射 ,c组大鼠另在全身照射后 3d接受胸腺内豚鼠脾淋巴细胞注射。结果表明 :a组和b组中 ,腹腔注射后两类天然抗体的水平均明显上升 (P <0 0 1) ,c组中 ,腹腔注射后IgM类的水平亦明显上升 (P <0 0 1) ,而IgG类上升受抑。提示异种胸腺修饰能抑制IgG类天然抗体的生成 ,但对IgM类天然抗体的产生无明显影响。     

脂肪来源干细胞对辐射胸腺损伤中cyclin-D1和p53基因mRNA转录水平的影响

目的分析脂肪来源干细胞(ADSCs)干预后辐射诱发胸腺损伤修复后的胸腺细胞周期蛋白D1、p53基因的表达。方法 C57BL/6小鼠随机分为:对照组、照射组、照射+ADSCs组和假照射+ADSCs组8只。照射组为辐射诱发胸腺淋巴瘤动物模型组,照射+ADSCs组为尾静脉注射EGFP质粒转染ADSCs。检测胸腺细胞凋亡和细胞周期。结果在ADSCs注射后第7天,照射组小鼠胸腺G1期细胞的百分比较对照组明显降低(P0.05),而照射+ADSCs组小鼠胸腺G1期细胞的百分比较照射组明显增多;cyclinD1基因在ADSCs治疗组胸腺组织中的相对表达量较照射组增高,且差异有统计学意义(P0.01);而p53基因在照射组胸腺组织中的相对表达量较ADSCs治疗组增高,且差异有统计学意义(P0.05)。结论 ADSCs可能通过p53、cyclinD1等基因的表达水平变化来调控细胞周期,形成细胞G1期阻滞,抑制肿瘤的形成。     

猪-人-鼠嵌合体动物模型的建立及介导人T细胞对猪异种抗原的耐受

目的： 通过共移植人胎胸腺、胎肝组织及猪骨髓细胞于SCID鼠体内,建立猪-人-鼠嵌合体模型,介导人T细胞对猪异种抗原的免疫耐受。方法:实验鼠分成3组：A组为猪骨髓细胞移植组,B组为人胎胸腺、肝脏组织移植组,C组为猪骨髓细胞＋人胎胸腺+肝脏组织移植组;在移植后每3周,用流式细胞仪测定猪和人嵌合体的水平,直至20周;通过混和淋巴细胞反应确定人T细胞的功能及对猪异种抗原的耐受情况。 结果:猪嵌合体在所有实验鼠（包括共移植人组织的实验鼠）中持续时间均超过20周;在移植人胎组织20周时,T细胞的数量为0.7×106/L,在外周血细胞中所占的百分比为0.14%±0.01%;人嵌合体在所有实验鼠（包括共移植猪骨髓细胞的实验鼠）中持续时间亦超过20周。结论: 通过共移植人胎胸腺、胎肝组织及猪造血干细胞于SCID鼠体内,可以建立猪-人-鼠嵌合体模型,并能诱导人T细胞对猪异种抗原的免疫耐受。     

用单克隆抗母细胞抗体消除移植排斥

关于抗淋巴细胞血清(ALS)延长移植存活期的机制已有多种推测。应用单克隆抗体(MA),可对其假设机制进行检验。经抗T细胞单克隆抗体OKT_3治疗的移植排斥患者,常伴有外周血T细胞的急剧减少。而且,在早期排斥反应被消除后,多数患者可出现远期排斥现象。因此,外周血T细胞的单一清除虽有助于消除排斥,但并不能使移植存活期延长。抗母细胞单克隆抗体CBLl已在动物中进行了有关试验。结果表明,这种抗体可延长恒河猴     

用单克隆抗母细胞抗体消除移植排斥

关于抗淋巴细胞血清(ALS)延长移植存活期的机制已有多种推测。应用单克隆抗体(MA),可对其假设机制进行检验。经抗T细胞单克隆抗体OK73治疗的移植排斥患者,常伴有外周血T细胞的急剧减少。而且,在早期排斥反应被消除后,多数患者可出现远期排斥现象。因此,外周血T细胞的单一清除虽有助于消除排斥,但并不能使移植存活期延长。抗母细胞单克隆抗体CBL1已在动物中进行了有关试验。结果表明,这种抗体可延长恒河猴皮肤移植存活期。本文中,作者首次试用CBL1治疗肾移植排斥患者。研究对象为19例肾移植排斥患者,其中     

供体与受体移植前预处理延长大鼠移植心脏成活时间

目的：用供体品系大鼠皮肤致敏方法及腹腔内异位心脏移植模型研究雷公藤多式供体预处理及供体脾细胞受体胸腹内注射诱导免疫耐受对移植心脏存活影响及二种方法的协同效果。方法：SD大鼠作供体,Wistar大鼠作受体,所有受体在心脏移植前均无用供体皮肤致敏,A组作单纯心脏移植,B组作经供体预处理后的供心移植,C组用供体脾细胞胸腺内注射诱导耐受后作心脏移植,D组考察供受体两种预处理方法的协同效果。结果：各处理组供心存活时间均校对照组明显延长,C,D二组病检见淋巴细胞浸润及心肌坏死明显减轻,但微血管病变较严重。结论：两种方法均能明显延长移植供心成活时间,并有良好的协同效果,经胸腺途径诱导的耐受能明显抑制细胞免疫,但对急性血管排斥没有预防作用。     

胸腺接种肝特异性抗原减轻移植肝细胞凋亡的发生

目的：研究肝特异性抗原（LSA）胸腺接种对移植肝细胞凋亡的影响。 方法： 实验为同种肝移植：Ⅰ组为Wistar→Wistar同基因对照组；Ⅱ组为SD→Wistar急性排斥组；Ⅲ组为SD→Wistar术前1周供体肝特异性蛋白受体胸腺内注射处理组。观察手术后一般状态、生存时间、肝细胞凋亡及肝组织T细胞活化连接蛋白（LAT）的表达情况，确定移植后的受体的生存情况及机体的免疫状态。 结果： Ⅰ组大鼠术后一般状态好，均长期存活；Ⅱ组大鼠体重进行性减轻，术后9-13 d内全部死亡；Ⅲ组大鼠术后一般状态同Ⅰ组，明显好于Ⅱ组，存活率明显高于Ⅱ组；实验组各时段凋亡肝细胞数均与同时段对照组无显著差异，明显低于SD-Wistar急性排斥组；实验组与对照组移植肝中均未见LAT的表达。 结论： 移植前胸腺接种供体LSA对移植肝细胞具有明显的保护作用。     

受体大鼠非清髓嵌合的建立及对供体细胞反应性的监测

目的：通过非清髓方式诱导嵌合体而产生免疫抑制。方法：动物分为三组：A组（BMC移植组）经全身辐照雌性SD大鼠于D0经尾静脉输注雄性Wistar大鼠骨髓细胞（BMC）。B组（BM-MSCs移植组）经全身辐照雌性SD大鼠于D0经尾静脉输注雄性Wistar大鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）。C组（对照组）经全身辐照大鼠于D0经尾静脉输注生理盐水0.8mL。随后测定异基因嵌合体量的变化,及单向混合淋巴细胞培养的刺激效应。结果：A、B组动物在21天后均检测到一定比例的嵌合体细胞,流式细胞仪检测A组嵌合率明显高于B组（P〈0.05）。两组在预处理后第35天观测发现嵌合率均明显降低。A组较B组和C组的受体淋巴细胞增殖显著减弱,B组较C组也显著减弱。结论：选用的非清髓预处理方案可使受者体内形成混合性嵌合体,大鼠耐受性较好,移植后供者细胞植入一定时间内嵌合稳定、死亡率低,是一种有效的移植免疫抑制诱导方法。     

Response of the xenograft endothelium in the concordant xenotransplantation

Objective: To investigate the response of the xenograft endothelium in the concordant hamster to rat cardiac xenotransplantation and the mechanism of acute vascular rejection. Methods: The animals were divided into 5 groups randomly: control group,CsA group, splenectomy group, D0 splenectomy+CsA group and D3 splenectomy+CsA group. Hamster heart was heterotopicaly transplanted to rat abdominal cavity. The graft survival was monitored by palpation of the rat abdominal wall. The histological and ultrastructural changes of the xenogafts were investigated. NF-κB and P-selectin expression in the xenograft were detected. Hene Oxigenase-1 and Bcl-2 expression were also detected in the xenografts of different groups. Results: The mean survival time of the xenografts in control group, CsA group, splenectomy group, D0 splenectomy+CsA group and D3 splenectomy+CsA group was 3.4±0.55, 3.8±0.45, 6.4±1.52, 30 and 7.4±1.14 days. The rejected graft showed typical acute vascular rejection in control group, CsA group,splenectomy group and D3 splenectomy+CsA group. Endothelial cells of the rejected xenograft showed dramatic assembly of ribosomes and expansion of the rough endoplasmic reticulum. However, the endothelium of the long-term survived grafts in D0 splenectomy+CsA group showed normal architecture. NF-κB and P-selectin expression were detected in the rejected xenografts. HO-1 expression was observed in the long-term survived xenografts in D0 splenectomy+CsA group. Conclusion: The endothelial cells of the xenograft might be activated during the acute vascular rejection. Expression of HO-1 might inhibit the upregulation of NF-κB and adhesion molecular which decreases the activation of the endothelium of the graft.     

眼镜蛇蛇毒与全身照射在非协调性异种心脏移植排斥中作用的研究

供体豚鼠和受体SD大鼠各 32只随机分成空白对照、单用中华眼镜蛇蛇毒CCV (0 4mg/kg )、单用全身照射WBI (5Gy)、CCV与WBI合用 4组进行异位心脏移植 ,结果表明 :(1)存活时间CCV +WBI组 (12 36± 4 5 3h ) >CCV组 (7 0 6± 3 3h ) >WBI组 (0 42± 0 0 7h )和空白对照组 (0 36± 0 16h ) ,差别显著 ;WBI组与空白对照组无明显差别 (P >0 0 5 ) ;(2 )供心停跳后与移植前比较 :空白对照组血清IgG升高、IgM下降 ,而其余 3组IgG和IgM均下降 ;(3)病理检查空白对照组与WBI组呈超急性排斥 (HAR )改变 ;CCV组和CCV +WBI组呈延迟性异种排斥 (DXR )改变。结论 :在本模型中 ,CCV能延缓超急性排斥反应的发生 ,WBI能降低天然抗体水平 ,但不能延缓DXR的发生。WBI与CCV合用有协同作用 ,可能涉及抗体的减少。其中IgM与HAR有关 ,IgG与DXR有关。     

Observations on lymphomagenesis and lymphoma in AKR mice. A description of prelymphoma changes in the thymus and phenotypic diversity of lymphomas induced by SL3-3 virus.

These studies were designed to look for a correlation of intrathymic survival of virus-infected thymocytes with lymphomagenesis. Cells from the normal-appearing prelymphoma thymus of SL3-3 virus-treated AKR mice were studied. Also, phenotypic properties of the malignant cells from the virus-induced lymphomas are described. In this model system, 100% of mice inoculated with virus at three days of age develop thymic lymphoma between 60 and 90 days of age. The experiments show that cells with malignant potential do not appear in the thymus until 36 days after virus inoculation. These cells are initially thymus-dependent (TD) in that they produce lymphoma of donor-type in recipients after intrathymic inoculation with long latency. They do not produce lymphoma after subcutaneous inoculation in syngeneic hosts. At 39 days after virus inoculation, the first thymus independent (TI) lymphoma cells appear. These cells, like the cells isolated from thymi with overt tumors, produce lymphoma of donor-type after a short latency when inoculated by the intrathymic or subcutaneous route. Thymocytes from normal-appearing thymi of mice at 42 days after virus inoculation, which could be expected to include TD, TI or no lymphoma cells, were evaluated for their ability to survive in a recipient thymus for three weeks after intrathymic inoculation. They were compared to thymocytes from age-matched control mice. Thymi receiving the virus-infected thymocytes showed 15% to 80% donor cells at three weeks. The highest numbers of donor cells were from thymi which were shown to contain TI lymphoma cells. However, cells from thymi with TD and no lymphoma cells could also be detected in significant numbers at three weeks after intrathymic inoculation. Less than 2% of donor-type thymocytes could be found after inoculation of thymocytes from normal control AKR mice. These data provide evidence that virus infection of thymocytes, even before the appearance of cells with lymphomagenic potential, endows them with a capacity for prolonged intrathymic survival. This appears to be a necessary step for tumor progression in this model. A remarkable phenotypic diversity of the virus-induced lymphomas was shown. The effect of various growth environments, intrathymic, subcutaneous, and in vitro on lymphoma cell phenotypic expression revealed individual differences in each tumor and in each environment.