慢性脊髓压迫及减压后骨骼肌细胞凋亡的实验研究

目的：研究大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后骨骼肌萎缩与细胞凋亡的关系以及凋亡相关基因P53的表达意义。方法：45只SD大鼠分成3组，压迫组15只，作成轻、中和重度慢性脊髓压迫损伤；减压组25只，将重度压迫组的压迫装置取出；正常对照组5只，不做任何处理。应用苏木精-伊红染色、终末脱氧核苷酰转移酶介导的原位末端标记法和原位杂交技术研究慢性脊髓压迫及减压后肌细胞萎缩、凋亡的特点。结果：随着压迫程度的增加肌细胞凋亡数量增加，P53mRNA表达增高；减压后肌细胞凋亡数量明显减少，P53mRNA表达减少。结论：慢性脊髓压迫后肌细胞出现凋亡，骨骼肌细胞的凋亡是肌肉失神经萎缩的机制之一，减压可通过抑制细胞凋亡阻止肌肉萎缩。     

慢性压迫性脊髓损伤后骨骼肌形态学及相关蛋白Myogenin和myoD表达的实验研究

目的观察慢性压迫性脊髓损伤后骨骼肌形态学改变及相关蛋白Myogenin和myoD的表达变化。方法50只Wistar雌性大鼠,随机分为正常组、假手术组和慢性压迫组。慢性压迫组置人平头塑料螺钉对大鼠脊髓进行后路渐进性压迫,于2个月后分别压迫到20％、40％、60％左右程度。处死大鼠后取腓肠肌作为标本,分别做成电镜标本及进行Myogenin和myoD的免疫组化染色。结果各压迫组的大鼠腓肠肌细胞肌丝、肌节结构发生退变,并且成肌细胞在数量增多的同时出现凋亡现象;压迫组与正常组、假手术组比较相关蛋白Myogenin和myoD的表达增高（P〈0．05）。结论脊髓压迫性损伤可引起靶器官肌肉的退变,其退变的程度和脊髓受压程度呈正相关,虽然同时存在骨骼肌的增殖反应,但完整的细胞分裂过程少见,这可能是慢性压迫性脊髓损伤后影响功能恢复的原因之一。     

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后凋亡调控相关基因p53的表达变化及意义

目的:探讨慢性压迫性脊髓损伤(chroniccompressivespinalcordinjury,CCSCI)后脊髓组织中凋亡相关基因p53的表达变化规律及意义。方法:通过制作Wistar大鼠慢性压迫脊髓损伤模型,应用免疫组织化学方法和原位杂交方法,研究压迫组、假手术对照组脊髓组织中p53mR-NA和p53蛋白表达的灰度值差异。结果:p53mRNA在脊髓受压后4h脊髓组织即有表达,1d后增高,7d后仍有表达,14d后无表达,而p53蛋白受压1d后呈弱阳性,之后无明显表达。结论:p53的表达规律提示它参与了CCSCI内源性机制的调控过程。     

复方丹参对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的:观察大鼠脊髓损伤后应用复方丹参对细胞凋亡的影响以进一步探讨其对急性脊髓损伤治疗的可能性。方法:成年大鼠随机分为正常组、脊髓损伤后应用复方丹参组和应用生理盐水对照组,损伤1,2,4周后按改良的联合行为评分combinedbe-(havioralscore,CBS)方法评价大鼠双后肢神经功能恢复情况,然后在不同时间点(,,,,,8h1371428d)处死。用苏木精伊红(H)染色观察损-E伤脊髓组织病理变化,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果:H染色镜检发现脊髓组织病理学改变复方丹参组明显轻于生理E盐水组。CBS评分在复方丹参组、生理盐水组,,71428d时间点间比较差异有显著性意义t=3.572,4.853,2.495,υ=8;P<0.05或P(<0.01);复方丹参组、生理盐水组两组均发现凋亡细胞,且神经细胞凋亡指数在生理盐水组、复方丹参组8h,1,3,7,14,28d时间点间比较差异有显著性意义(t=2.533,1.201,3.342,3.027,2.953,2.282,υ=18;P<0.05或P<0.01)。结论:复方丹参能抑制大鼠脊髓损伤后细胞凋亡,并对其继发性损害有多重的保护作用。     

兔慢性颈脊髓压迫减压术后凋亡基因bcl-2和bax的表达

目的:通过观察兔慢性颈脊髓压迫症动物模型脊髓减压术后bcl-2和bax的表达,以期了解脊髓减压术治疗慢性颈脊髓压迫症的作用机制。方法:21只患有慢性颈脊髓压迫症的中国大白兔,改良Tarlov运动功能评分均为3分,随机分为两组:①减压组15只:退出螺钉进行减压。其中1只兔发生急性脊髓损伤,改良Tarlov运动功能评分降至1分,排除实验。②压迫组6只:不施行减压术。另取6只无神经功能障碍的健康大白兔作为正常对照组。分别在减压后第1,7,15,30,60天,观察减压术后脊髓的细胞凋亡和凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果:脊髓减压术后凋亡细胞逐渐减少。脊髓减压术后第1天,bcl-2和bax阳性细胞均较减压前增多。减压后第7天,bcl-2阳性细胞明显增多,bax阳性细胞减少。减压后第15,30天和第60天,bcl-2和bax阳性细胞均逐渐减少。至减压后第60天,bcl-2和bax阳性细胞表达与正常对照组相似。结论:脊髓减压术能有效抑制神经细胞凋亡。     

NT-3对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及脊髓损伤修复的作用

【目的】研究神经营养素-3（NT-3）对大鼠皮质脊髓束横断后神经细胞凋亡及脊髓损伤修复的影响及意义。【方法】健康Sprague-Dawley大鼠100只,分为损伤对照组（C组）和损伤NT_3注射组（NT-3组）。各组内分别行BBB评分、神经元中丝蛋白（NF）染色及RT—PCR检测Bax和Bcl-2基因表达的变化。【结果】①损伤后C组和NT-3组Bax及Bcl-2基因转录水平升高;②NT-3组与损伤对照组相比Bax基因转录水平下降而Bcl-2基因转录水平升高;③NT-3组NF平均灰度值小于C组。【结论】NT-3可能通过影响凋亡基因Bax和Bcl-2表达的变化对脊髓损伤起保护作用及修复促进作用。     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡与血管内皮细胞的关系

目的:观察大鼠急性脊髓损伤后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在邻近节段血管内皮细胞中的表达。探究脊髓继发性损伤中神经细胞凋亡的原因。方法:成年Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组,假手术组及脊髓压迫组。于手术后6,24,72h,7,14,28d取以损伤部位为起点头侧端脊髓1.5cm,采用电镜观察超微结构变化;以免疫组织化学技术检测Bax及Bcl-2的表达;以TUNEL法检测细胞的凋亡。结果:正常组及假手术组Bax和Bcl-2在血管内皮细胞中只有少量表达,压迫组于伤后6h出现Bax在血管内皮细胞中的强阳性表达,伤后3d达到高峰,一两周下降,4周时只有少数阳性细胞。电镜观察,内皮细胞有不同程度的细胞膜起泡,染色体边集,细胞凋亡。结论:在急性脊髓损伤后的继发损伤过程中,神经细胞的凋亡可能是血管内皮细胞损伤的结果。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的抑制

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用碱性成纤维细胞生长因子(basicfibrob-1ast growthfactor,bFGF)对脊髓损伤区细胞凋亡的影响.方法利用Allen氏WD(Weight drop,WD)技术,以10 g×2.5 cm致伤力造成SD大白鼠T8脊髓损伤模型,并于损伤平面以下蛛网膜下腔置细塑料导管.bFGF治疗组(A组)分别于术后即刻,1,2,4,8,12,24,及48 h经导管注入bFGF溶液20μL(含bFGF100u),以后每周经导管注入20 μL bFGF;对照组(B组)则在同时间注入等量生理盐水.损伤后1,3,7,14,28 d对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测(TUNEL),采用计算机图像分析技术进行定量分析并计算凋亡指数(AI),AI=凋亡细胞核数/总细胞核数计算.结果A,B两组中均发现凋亡细胞,A组损伤后不同时间段神经细胞凋亡指数分别为(4.57±0.43),(5 38±1.16),(3.43±0.65),(3.38±0.58),(2.63±0.43);B组分别为(7.36±0.68),(13.96±2.74),(9.26±1.03),(7.25±0.73),(5.79±0.57).B组细胞凋亡率大于A组结论bFGF能抑制脊髓损伤后脊髓损伤区的细胞凋亡.     

坐骨神经切断后脊髓神经细胞的凋亡变化

目的:研究一侧坐骨神经切断后,脊髓第7腰段的神经细胞的凋亡变化。方法:用DNA原位末端标记法。结果:在坐骨神经切断1d后脊髓后角内的神经胶质细胞开始出现凋亡,到第2天达到最大值,白质内的胶质细胞也发生凋亡;脊髓灰质后角感觉神经元的凋亡指数大于前角运动神经元的凋亡指数。结论:坐骨神经切断后的第1天脊髓神经细胞发生凋亡,传入神经元的凋亡大于传出神经元的凋亡,神经胶质细胞在细胞凋亡过程中发挥重要作用。     

大鼠脊髓损伤后p75早期表达对神经细胞凋亡的意义

目的:探讨p75与脊髓损伤后早期细胞凋亡的关系。方法:采用Allen's打击法制成大鼠脊髓损伤模型,分别在损伤后30min,1,3,6h,1,2,3d,1,2,4周应用免疫组织化学方法对p75免疫染色阳性细胞进行观察,并在电镜下观察凋亡细胞。结果:损伤后1h主要在灰质中的神经元细胞和胶质细胞有p75的阳性表达。损伤后6h在白质中也可见p75的表达,并出现凋亡现象。伤后1～3d,p75在灰质中表达减少,在白质中增加。在白质中表达持续至伤后2周。伤后4周,损伤的脊髓组织中没有免疫染色阳性细胞的存在。结论:p75在脊髓损伤后介导了凋亡过程。阻断p75系统可能是脊髓损伤治疗的一种新方法。     

脊髓损伤大鼠远端神经元及骨骼肌的变化

背景：目前针对脊髓损伤病灶的研究较多,而对脊髓损伤后远端神经、肌肉及运动终板三者形态结构实时变化观察和研究的文献很少。目的：观察大鼠脊髓损伤后远端肢体神经、运动终板和骨骼肌随时间推移形态学变化的自然病程。方法：将50只雌性SD大鼠随机分为对照组5只（不做处理）、假手术组10只和脊髓损伤组35只,假手术组行单纯椎板切除术,脊髓损伤组在椎板切除基础上,用横断法制成T10完全脊髓损伤模型,然后在第1,2,4,12,24周分别观察3组大鼠坐骨神经-运动终板-内侧腓肠肌的形态变化。结果与结论：①脊髓损伤组大鼠4周时部分有髓神经纤维髓鞘出现板层分离;24周时崩解髓鞘板层已模糊、碎裂髓鞘增多,薄髓与无髓神经纤维较12周时增多。②脊髓损伤组大鼠运动终板在脊髓损伤12周时明显退变突触结构与较完整突触结构并存;24周时已找不到运动终板。③脊髓损伤组大鼠内侧腓肠肌在脊髓损伤24周时,肌细胞融合,细胞核密集,融合细胞间可见大小不一空隙,结缔组织增生更加明显。结果表明大鼠在完全性横断性脊髓损伤后自然病程中,损伤平面以下周围神经、运动终板、骨骼肌的形态结构均呈规律性改变,损伤后12周时已有显著变化,24周时呈结构毁坏性改变。     

碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤后bcl-2及bax基因表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脊髓损伤后bcl-2和bax基因表达的影响。方法:利用AllenWD法以25gcf致伤SD大鼠脊髓制作损伤模型,经蛛网膜下腔导管于术后即刻,0.5,1,2,3,4,6,12,24,48h导管注入bFGF20μL(含bFGF200U);对照组相同时间点注入等量生理盐水作对照。术后2,6,12,24,48h取损伤脊髓组织,采用免疫组化和原位杂交方法分别检测Bcl-2、Bax蛋白和bcl-2mRNA基因的表达。结果:脊髓损伤后应用bFGF显著促进bcl-2基因的表达,2,6,12,24,48hBcl-2平均光密度值分别为0.165±0.020,0.254±0.081,0.312±0.017,0.415±0.021,0.304±0.031,(P<0.01,t=2.729～9.279),Bax平均光密度值分别为0.034±0.021,0.184±0.014,0.204±0.014,0.216±0.027,0.180±0.013(P<0.01,t=4.601～6.376),提高Bcl-2蛋白的含量,降低了Bax蛋白的水平,每组数据差异具有统计学意义。结论:bFGF通过促进bcl-2基因的表达、抑制Bax蛋白的表达抑制脊髓损伤后神经细胞的凋亡,从而保护脊髓组织,这可能是bFGF对脊髓损伤具有保护作用的机制之一。     

神经干细胞联合胶原蛋白支架移植脊髓损伤大鼠脑细胞的凋亡

背景：目前的研究表明,从胚胎大鼠大脑皮质分离的神经干细胞在胶原蛋白凝胶中可增殖并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 目的：观察神经干细胞联合胶原蛋白支架移植对脊髓损伤后鼠大脑神经细胞凋亡的影响。 方法：取45只SD大鼠制作脊髓半切损伤模型,随机分为3组,造模1周后,细胞移植组大鼠运动皮质后部在脊髓损伤部位注入同种异体神经干细胞悬液,联合组在脊髓损伤部位注入同种异体神经干细胞结合胶原蛋白悬液,模型组不植入任何物质。 结果与结论：移植后1-8周,3组大鼠肢体运动功能均有不同程度恢复,且联合组移植后8周BBB运动评分明显高于其他两组（P 〈 0.05）。移植后1周苏木精-伊红染色显示3组均可见少量凋亡细胞及Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞,大量Bax阳性细胞;随时间的推移,3组Bax凋亡蛋白阳性细胞、Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞逐渐减少,并且移植后8周联合组、细胞移植组Bax阳性细胞明显低于模型组（P 〈 0.05）,Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞高于模型组（P 〈 0.05）,此时3组均无凋亡细胞。表明神经干细胞联合胶原蛋白支架移植可抑制脊髓损伤后鼠大脑神经细胞的凋亡,促进脊髓神经功能的恢复。     

Community-based study of health-related quality of life in spinal cord injury,muscular dystrophy,multiple sclerosis,and cerebral palsy

Purpose: To assess health-related quality of life (HRQOL) in adults with spinal cord injury (SCI), muscular dystrophy (MD), multiple sclerosis (MS), and cerebral palsy (CP). Methods: This is a multicenter, community-based, cross-sectional study of adults diagnosed with CP (94), MD (99), MS (98), SCI (99), and healthy adults (105). The WHOQOL-BREF and WHOQOL-DIS questionnaire were used. Results: Significant differences in physical functioning between adults with CP and SCI and adults with MS (p?=?0.003 and p < 0.001, respectively), as well as between adults with SCI and MD (p?=?0.001) were found. Univariate tests revealed significant psychological functioning differences between adults with SCI and MD (p?=?0.02) and SCI and MS (p?=?0.001). There was a significant difference in physical functioning between controls and adults with SCI (p?=?0.049) and a significant difference in psychological functioning between controls and adults with MS (p?=?0.039). No statistically significant differences were found between the groups in social and environmental domains. Conclusions: Physical and physiological functioning were affected to various degrees in the studied neurodisabilities, while all groups reported similar levels of functioning and well-being in social and environmental domains.

Implications for Rehabilitation

• Health-related quality of life (HRQOL) in adults with neurodisabilities living in a community differs from HRQOL in these individuals sampled in clinical and/or rehabilitation settings.

• Psychosocial aspects of HRQOL relevant to physical disability were similarly affected across those groups.

• Physical and physiological domains in HRQOL were affected to various degrees among adults with neurodisabilities living in a community.

• Levels of functioning and well-being in social and environment domains of HRQOL are similar among adults with neurodisabilities living in a community.

• Community-based study of health-related quality of life in spinal cord injury, muscular dystrophy, multiple sclerosis, and cerebral palsy.

     

人脑挫裂伤后神经细胞凋亡的临床研究

目的:通过对人脑挫裂伤后脑组织中细胞凋亡的研究,了解人脑挫裂伤后脑组织中凋亡发生的情况及凋亡在颅脑损伤过程中所起的作用。方法:采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP生物素标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,同时显微镜观察病理切片。结果:66.7%出现TUNEL阳性,TUNEL阳性与阴性患者间的GCS评分(t=-2.88,P=0.01)、受伤时间(t=2.14,P=0.049)差异有显著性意义。TUNEL阳性与阴性患者间性别(χ2=0.26,P=0.61)、年龄(t=-1.06,P=0.30)、预后(χ2=0.26,P=0.61)差异无显著性意义。结论:人脑挫裂伤后脑组织中存在凋亡,并且与患者的病情严重程度及病程相关。其在颅脑损伤的病理过程中有一定作用,但只是颅脑损伤后复杂病理过程中的一种表现,即创伤后神经细胞死亡的一种方式,其在机体的病理变化过程中似有双重作用。     

滋补脾阴方药对大鼠脊髓损伤后IL-1β、caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的:研究大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)半胱氨酸天冬特异性蛋白酶(cysteingl aspartate specific protease,caspase)表达和细胞凋亡的规律及三者之间的关系、滋补脾阴方药对它们的影响.方法:将成年SD大鼠随机分为假手术组、损伤组和滋补脾阴方药组,于伤后不同时间点(1h、8h、24h、72h)处死,用免疫组化染色检测IL-1β、caspase-3阳性细胞,TUNEL法标记凋亡细胞.结果:免疫组化结果显示假手术组仅有少量IL-1β和caspase-3阳性细胞表达;损伤组的两者均在8h表达最多,24h减少,72h减少至略多于假手术组.TUNET标记阳性细胞的时间分布特点与IL-1β和caspase-3相似,8h最多,72h减少至较低水平.IL-1β、caspase-3表达阳性细胞率和细胞凋亡指数三者间呈正相关;滋补脾阴方药使IL-1β、caspase-3表达阳性细胞率和细胞凋亡指数降低.结论:大鼠脊髓损伤后,IL-1β和caspase-3表达增强,凋亡细胞大量出现,三者间存在正相关;滋补脾阴方药能够抑制脊髓损伤后的炎症反应,减少细胞凋亡,减轻脊髓继发性损伤.