Toll样受体在肺缺血/再灌注损伤中的作用研究进展

肺缺血/再灌注损伤(LIRI)可由多种临床情况引起,严重时可导致呼吸衰竭,目前已居人类死亡原因的第3位。近年来,LIRI受到越来越多的关注,许多研究从不同方面阐述了LIRI发生的机制。Toll样受体(TLRs)是一组高度保守的细胞表面受体,在非特异性免疫系统激活方面起核心作用。在缺血/再灌注情况下,TLRs可通过其介导的免疫反应,导致缺血/再灌注组织损伤加重。     

Toll样受体4与移植器官缺血/再灌注损伤

Toll样受体4(TLR4)是抵御病原体入侵和有害刺激的重要天然免疫受体之一。TLR4除了参与病原微生物触发的炎性反应外,还能识别缺血/再灌注损伤后释放的内源性配体,如热休克蛋白、高迁移率族蛋白B1等,经TLR4/髓样分化因子88等信号途径诱导多种炎性细胞因子的产生,参与移植器官缺血/再灌注损伤的炎性反应。实验表明,负性调节TLR4信号对移植器官缺血/再灌注损伤具有明显的保护作用。因此,针对TLR4信号的调节在移植器官保护方面具有一定的临床应用前景。     

小鼠肝脏部分缺血再灌注过程中Toll样受体2的激活及意义

目的探索Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)在小鼠肝脏部分缺血肝叶中的激活,分析TLR2的激活与肝功能损伤之间的关系.方法BALB/c小鼠复制肝脏部分缺血再灌注(缺血1h再灌注4h)损伤动物模型(I/R组),假手术对照组(SH组)同样行开腹手术但不夹闭血管.采用实时荧光定量PCR(Real-time-PCR)方法定量检测缺血肝叶中TLR2mRNA的表达变化,同时采用Western blot检测缺血肝脏组织中TLR2蛋白的表达变化,检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶(pALT)水平.结果肝脏部分缺血1h再灌注4h后,I/R组与SH组小鼠缺血肝叶TLR2 mRNA的表达(△Ct值)分别为(1.06±0.91)vs(5.08±1.32)(P＜0.01),由于△Ct值越小则基因表达水平越高,说明缺血再灌注过程中缺血肝叶TLR2mRNA的表达水平增高.且I/R组小鼠缺血肝叶TLR2蛋白的表达(OD值)水平较SH组高[(433.91±25.53)vs(102.86±13.58),P＜0.01],I/R组中门静脉血清ALT水平升高[(848.33±271.37)μ/Lvs(42.39±14.75)μ/L,P＜0.01].结论TLR2在肝脏缺血再灌注过程中缺血肝叶的表达增强,且这种变化与肝功能的损伤相关.     

TLR4蛋白在肾缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的观察大鼠肾缺血再灌注后TLR4蛋白的表达情况,探讨其参与肾缺血再灌注损伤的作用机理。方法SD雄性大鼠48只随机分为对照组(Control组,简称C组),缺血再灌注组(Ischem ia-reperfusion组,简称Ir组)两个实验组,每组各4个时相(6小时、12小时、24小时、72小时)。采用切除右肾,夹闭左肾动脉45m in后恢复灌流建立肾缺血再灌注损伤模型。观察肾组织病理变化,免疫组化二步法检测大鼠肾组织中TLR4蛋白的表达情况,测定髓过氧化物酶(Mpo)活性及血清肌酐(Scr)水平以反映中性粒细胞浸润及肾功能损害的程度。结果C组大鼠肾组织形态结构正常,TLR4蛋白几乎无表达;Ir组大鼠肾小管上皮细胞可见不同程度的损伤及炎细胞浸润,TLR4蛋白高表达(p<0.01)。与C组比较,Ir组血清肌酐(Scr)水平明显升高,髓过氧化物酶(Mpo)活性显著增加(p<0.01)。结论缺血再灌注后肾组织中TLR4蛋白表达增强,提示TLR4蛋白可能在肾缺血再灌注损伤中扮演了重要角色。     

TLR4蛋白在小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤中时序性表达及意义

目的通过研究Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)蛋白在小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型中的动态表达,探讨TLR4受体的激活与肝功能损伤间的关系.方法以BALB/c小鼠复制肝脏部分缺血再灌注损伤模型,采用免疫组织化学染色方法动态观察TLR4在肝脏的分布,并用HPIAS-1000图文报告系统分析结果,同时动态监测血浆谷丙转氨酶水平及门静脉血清内毒素水平.结果肝脏左中叶缺血1 h后,不同的再灌注时间,缺血肝叶内有增强的TLR4蛋白的阳性表达,以再灌注1 h的表达最为强烈,阳性细胞主要是Kupffer细胞及血管内粒单核细胞,且TLR4的动态表达与肝功能的损伤不平行.门静脉血清内毒素水平在各时间点与假手术组相比无显著差异(P＞0.05).结论在非内毒素血症下,TLR4蛋白在肝脏缺血再灌注损伤过程中有动态表达.TLR4的激活参与了肝脏缺血再灌注损伤的过程.     

大鼠肝移植缺血再灌注后Kupffer细胞Toll样受体4及其伴侣分子MD-2的表达

目的 :研究大鼠肝移植缺血再灌注后Kupffer细胞Toll样受体 4 (TLR4 )及MD - 2的表达 ,并探讨其在再灌注损伤中的作用。方法 :分离培养大鼠肝移植缺血再灌注后 0 (对照组 )、2、12、2 4h(再灌注组 )的Kupffer细胞 ,检测TLR4 /MD - 2mRNA、蛋白以及上清TNF -α的表达 ,并在培养液中加入抗TLR4抗体 (抗TLR4组 ) ,观察TLR4抗体对TNF -α分泌的影响。结果 :再灌注后Kupffer细胞TLR4 /MD - 2mRNA、蛋白以及TNF -α表达较对照组明显升高 (P <0 .0 1) ,应用抗TLR4抗体后 ,TNF -α量较再灌注组明显降低 (P <0 .0 1)。结论 :TLR4及其伴侣分子MD - 2在介导Kupffer细胞激活和肝移植缺血再灌注损伤中可能起重要作用。     

肺移植术中缺血再灌注损伤的保护

肺及心肺联合移植已经广泛应用于治疗各种晚期阻塞性、限制性、感染性肺部疾病和肺血管病，自1963年首例临床肺移植以后，全世界许多肺移植中心在肺移植方面取得了飞跃发展。其中围术期肺脏的损伤及其保护日益受到人们关注。肺损伤的确切机制并非完全清楚，不论是移植肺本身的原因，还是心功能不全，或是其它远处器官（如肝、肠）等的病变均会造成肺部的损伤，而其中供体肺经过保存和移植后复灌，缺血再灌注（I／R）损伤是其主要的病理生理过程。现就近几年对移植肺I／R损伤的保护方法综述如下：     

TLR4和NF-κBp50在肾缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的:观察大鼠肾缺血再灌注后Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)和细胞核因子kappa B(Nuclearfactor kappa B,NF-k B)p50蛋白的表达情况,探讨它们参与肾缺血再灌注损伤的作用机理.方法:SD雄性大鼠48只随机分为对照组(Control组,简称C组)、缺血再灌注组(Ischemia-repeffusion组,简称Ir组)2个实验组,每组各4个时相(6、12、24、72 h).采用切除右肾,夹闭左肾动脉45 min后恢复灌流建立肾缺血再灌注损伤模型.免疫组化二步法检测大鼠肾组织中TLR4和NF-kBp50蛋白的表达情况,测定髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,Mpo)活性及血清肌酐(Serum creatinine,Scr)水平以反映中性粒细胞活化及肾功能损害的程度.结果:TLR4和NF-kBp50蛋白在C组中几乎无表达,Ir组中表达明显增强(P＜0.01).与C组比较,Ir组Scr水平明显升高,Mpo活性显著增加(P＜0.01).结论:肾缺血再灌注损伤的发生可能与TLR4活化NF-kB诱导的炎症反应有关.     

乌司他丁对大鼠单肺移植后缺血再灌注损伤的作用

目的研究乌司他丁(UTI)在大鼠原位异体左肺移植模型中对供肺缺血再灌注损伤的治疗作用。方法16只接受原位异体左肺移植的SD大鼠随机分为2组,每组8只。对照组受体在供肺通气和再灌注开始时静脉注射生理盐水,UTI治疗组大鼠也在供肺通气和再灌注开始时接受UTI10 000U/kg,静脉注射。2h再灌注后取供肺肺静脉血测血气,处死动物,取部分供肺行组织学观察,其余部分保存于液氮中,测量供肺干湿重比,提取肺匀浆,测量髓过氧化物酶浓度(MPO),细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的mRNA表达和IL-8浓度。结果在UTI组,供肺肺静脉血气示PaO2/FiO2显著高于对照组[(38.62±0.75)kPavs(31.57±1.85)kPa,P<0.05)],移植肺干湿重比[(4.74±0.28)vs(5.00±0.12),P<0.05]、ICAM-1mRNA表达和MPO[(0.63±0.23)vs(0.84±0.22),P<0.05]浓度均低于对照组,病理示治疗组组织损伤轻于对照组。但治疗组IL-8[(173.43±27.64)vs(76.22±12.42),P<0.001]浓度显著高于对照组。结论UTI对大鼠单肺移植模型中移植肺的缺血再灌注损伤有保护作用。     

Toll样受体4蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的 探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的表达与脑组织缺血再灌注损伤的关系.方法 线栓法制备局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用免疫组织化学法观察TLR4在不同再灌注时间点缺血侧脑组织的分布和表达,同时应用酶联免疫吸附方法检测白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)在不同再灌注时间点缺血脑组织内的浓度.结果 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤过程中,TLR4蛋白在皮质缺血半影区及邻近纹状体区有表达,且在再灌注后1 h即达高峰;IL-1β在再灌注后3 h明显升高[(4.47±2.13) ng/ml],表达高峰在再灌注后12 h [(14.39±2.58) ng/ml].结论 脑组织缺血再灌注过程中TLR4蛋白的表达有可能作为重要炎性受体介导脑缺血炎性损伤.     

血红素加氧酶-1在肺早期缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的研究血红素加氧酶-1（HO-1）与供肺缺血再灌注损伤之间的关系。方法采用改进的套管吻合技术，建立同系大鼠左肺原位再灌注损伤的动物模型。采用HO-1的诱导剂钴原卟啉（CoPP）和抑制剂锌原卟啉（ZnPP）分别进行干预处理后，运用免疫组织化学技术和RT-PCR技术分别检测HO-1蛋白在供肺组织中的表达以及供肺中HO-1mRNA的表达；运用TUNEL技术检测供肺组织中细胞凋亡。结果肺组织发生缺血再灌注时可诱导HO-1蛋白的表达，且随着再灌注时间的延长，表达逐步增多，再灌注8 h后达到高峰；再灌注前使用CoPP进行预处理，可以诱导HO-1蛋白的表达上调。HO-1蛋白表达上调可以降低肺缺血再灌注后细胞凋亡的发生率。结论肺缺血再灌注损伤可诱导HO-1表达上调，CoPP诱导的HO-1过表达可以抑制肺缺血再灌注损伤诱导的肺细胞凋亡，从而减轻供肺的再灌注损伤。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤中肿瘤坏死因子的实验研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子 (TNF)在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制。方法 :应用大鼠Langendorff离体心脏灌注模型 ,通过酶联免疫法测定心肌组织TNF含量 ,原位杂交检测TNFmRNA的表达情况。结果 :对照组心肌组织中可以检测到一定含量的TNF ,但实验组心肌组织中的TNF水平较对照组明显升高 (P <0 .0 5 )。对照组心肌组织中没有TNFmRNA表达 ,染色呈阴性 ;实验组心肌组织中的TNFmRNA表达明显 ,染色呈强阳性或极强阳性 ,并将阳性表达的细胞定位于心肌细胞。结论 :TNF是在离体的、缺血心脏中产生的 ;TNF表达主要定位于心肌细胞 ,在心肌缺血再灌注损伤过程中 ,心肌细胞是影响心肌功能的TNF的重要来源     

移植肝缺血/再灌注损伤的研究进展

肝移植是治疗终末期肝病最有效的方法,而在肝移植领域缺血/再灌注损伤(IRI)与早期移植肝的无功能和肝功能障碍密切相关。目前对于肝移植的并发症及其防治方法研究很多,也取得了很大的进步,但严重肝脏IRI所引起的移植肝功能受损始终未能解决,影响肝移植的效果。现对肝脏IRI的分子机制、病理学特点、预防及治疗等方面予以综述。     

茶多酚对肠缺血再灌注大鼠血浆和肺细胞间黏附分子-1的影响

目的研究茶多酚对大鼠肠缺血再灌注（I／R）后血浆和肺细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白表达的影响。方法SD雄性大鼠32只随机分4组（n=8）：（1）YR组：夹闭肠系膜上动脉（SMA）1h后开放2h;②预处理组（P1）：缺血前10min予茶多酚;③处理组（P2）：再灌注前10min予茶多酚;④假手术组：仅暴露SMA。茶多酚首剂10mg／kg,后以10mg／（kg·h）持续输注。用酶联免疫吸附法和免疫组化法测定。结果肠I／R后血浆ICAM-1含量增加,肺组织ICAM-1蛋白表达明显增加。而茶多酚可以抑制上述改变,以P1组效果最为明显。结论ICAM-1在肠FR后肺损伤的发生中发挥重要作用。肠I／R早期应用茶多酚可更明显减少肺组织ICAM-1表达,在一定程度上减轻肺损伤。     

再灌注后移植肺组织ICAM-1的表达及其意义

目的 :探讨再灌注后移植肺组织ICAM 1表达的变化及其意义。方法 :4 2只大鼠随机分成正常对照组、假手术组、缺血再灌注组。建立大鼠自体左肺模拟原位移植模型 ,采用免疫组化法检测肺组织ICAM 1表达的变化 ,并进行图像分析。结果 :①正常对照组及假手术组ICAM 1仅在少量肺血管内皮细胞 (VECs)和肺泡Ⅰ型上皮细胞 (PⅠ )中呈弱阳性表达 (分别为 1.0 8± 0 .0 4和 1.0 8± 0 .0 5 ) ;②再灌注后肺VEC、PⅠ、肺泡巨噬细胞及支气管上皮细胞等均可见大量ICAM 1表达 ,至再灌注 12h达到最高峰 (3.4 3± 0 .6 6 ) ,与再灌注 0h比较 ,P <0 .0 1;③ICAM 1表达呈强阳性部位伴有中性粒细胞的聚集。结论 :再灌注后移植肺组织ICAM 1表达上调 ,可能参与移植肺再灌注损伤     

丹皮酚对心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的 探讨丹皮酚(PA)对心肌缺血再灌注(MI/R)损伤的保护作用.方法 通过结扎左冠脉前降支30min再灌注2h建立MI/R大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、PA组(10、20、40mg/kg),每组10只,各组于术前1周开始灌胃给药,每天1次.再灌注后取血清,采用比色法测定肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平;取心脏,染色法测定心肌梗死面积;取心肌匀浆,比色法测定髓过氧化物酶(MPO)活力.结果 PA高剂量可明显缩小MI/R损伤大鼠的心肌梗死面积,与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,PA各剂量可显著降低血清CK活性(P<0.05或P<0.01),PA高、中剂量可明显降低LDH活性(P<0.05或P<0.01);PA各剂量组心肌MPO活力明显降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);PA各剂量组血清TNF-α和IL-1β水平均比模型组显著降低(P<0.05或P<0.01).结论 PA预处理可抑制中性粒细胞浸润、减少炎性细胞因子的释放,实现对MI/R所致心肌损伤的保护作用.     

黄芪对兔肺缺血再灌注损伤保护作用的病理观察

目的:探讨黄芪减轻肺缺血再灌注损伤的机制。方法:将24只健康大白兔随机分两组,肺缺血再灌注模型组(12只)、黄芪干预组(12只),气管切开后利用人工呼吸机行单肺通气,左肺门阻断2h后,恢复双肺通气4h后左肺下叶组织取材,应用光镜、电镜和免疫组织化学染色等病理检测方法观察肺缺血再灌注后肺组织病理形态学和免疫表型改变。计算受损肺泡百分率。结果:模型组肺缺血再灌注后左肺出血加重,肺间质及广泛肺泡腔内有水肿液,肺泡上皮细胞肿胀,线粒体广泛空泡化和嵴溶解。同例对照右肺大致正常。干预组因术前使用黄芪汤,左肺组织结构完整,少数肺泡上皮细胞线粒体轻度肿胀和空泡化。黄芪干预组受损肺泡百分率(P<0.05)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达量明显低于缺血再灌注模型组(P<0.01)。结论:中药黄芪对兔肺缺血再灌注损伤有一定的保护作用。