调气消积汤对Lewis肺癌移植瘤MVD、MMP-9影响的实验研究

目的:探讨调气消积汤对Lewis肺癌移植瘤MVD、MMP-9表达的影响。方法:将48只C57BL/6J小鼠常规接种Lewis肺癌,5天后选取荷瘤成功的小鼠随机分4组:荷瘤对照组(MG)、调气消积汤组(TG)、顺铂组(DG)、综合组(调气消积汤+顺铂组)(ZG),每组10只。每天分别予饮用水、调气消积汤各0.4ml,灌胃12天;隔日1次腹腔注射生理盐水、顺铂0.13ml共3天。停药后24小时取材,应用免疫组化法检测Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的微血管密度(MVD)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白表达。结果:各治疗组的MVD和MMP-9蛋白的表达均低于荷瘤对照组,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01);调气消积汤组MVD和MMP-9蛋白的表达与顺铂组相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:调气消积汤能降低Lewis肺癌移植瘤的微血管密度(MVD);并通过下调基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达抑制肿瘤血管形成。     

调气消积汤对Lewis肺肿瘤小鼠抑瘤作用及细胞凋亡影响的实验研究

[目的]探讨调气消积汤对Lewis肺肿瘤的抑瘤作用及细胞凋亡的影响。[方法]C57BL/6小鼠常规接种Lewis肺肿瘤,随机分为:荷瘤对照组(MG)、调气消积汤组(TG)、顺铂组(DG)、综合组(ZG),每组10只。每天分别予饮用水、调气消积汤各0.4 mL灌胃,共12 d;隔日1次腹腔注射生理盐水、顺铂0.13 mL共3 d。观察其日常生活状况和肿瘤生长情况,应用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测调气消积汤对Lewis肺肿瘤细胞凋亡的影响。[结果]调气消积汤能改善Lewis肺肿瘤小鼠一般状况,与荷瘤对照组比差异有统计学意义(P<0.01)。各治疗组的瘤质量均低于荷瘤对照组,差异显著(P<0.01)。光镜下观察,各治疗组与荷瘤对照组比较,异型细胞较少,染色质浓缩边集,病理性核分裂较少。TUNEL法结果显示,各治疗组与荷瘤对照组相比凋亡细胞明显增多,绿色荧光强度高;尤以综合组增多最为明显[。结论]调气消积汤可以改善荷瘤小鼠的一般生活状况,对Lewis肺肿瘤有抑制作用,能促进肿瘤细胞凋亡。     

调气消积汤对Lewis肺癌移植瘤血管生成影响的实验研究

目的：探讨调气消积汤对Lewis肺癌移植瘤血管生成的影响。方法：将48只C57BL/6小鼠常规接种Lewis肺癌,5天后选取荷瘤成功的小鼠随机分4组：模型组、调气消积汤组、顺铂组、综合组（调气消积汤＋顺铂组）,每组10只。每天分别予饮用水、调气消积汤各0.4ml灌胃共12天;隔日1次腹腔注射生理盐水/顺铂0.13ml,共3天。停药后24小时取材,应用WesternBlotting法检测Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达。结果：各治疗组的MVD、VEGF和MMP-9蛋白的表达均低于模型组,差异具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;调气消积汤组MVD、VEGF和MMP-9蛋白的表达与顺铂组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：调气消积汤可抑制肿瘤血管形成达到抗肿瘤的作用。     

消积抑癌方对Lewis肺癌荷瘤小鼠MMP-2的影响

目的:探讨消积抑癌方对Lewis肺癌荷瘤小鼠MMP-2的影响。方法:建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为空白组、荷瘤组、消积抑癌方内服组、消积抑癌方外敷组、消积抑癌方内服联合外敷组。观察各组Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤体积、癌重、抑癌率,对比各组免疫器官重量及血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、干扰素(IFN)-γ、IL-10、TNF-α、IL-2水平。结果:第7天、第14天、第21天及第30天,联合组Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤体积、癌重、抑癌率均明显低于荷瘤组、内服组、外敷组; 内服组、外敷组Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤体积、癌重、抑癌率均明显低于荷瘤组,差异具有统计学意义(P<0.05); 空白组、联合组脾脏指数、胸腺指数与荷瘤组、内服组、外敷组比较,差异有统计学意义(P<0.05); 空白组、联合组MMP-2、VEGF、HIF-1α、IFN-γ、IL-10、TNF-α、IL-2水平比较,差异有统计学意义(P<0.05); 内服组、外敷组MMP-2、VEGF、HIF-1α、IFN-γ、IL-10、TNF-α、IL-2水平与荷瘤组、空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05); 荷瘤组MMP-2、VEGF、HIF-1α、IFN-γ、IL-10、TNF-α、IL-2水平与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:消积抑癌方内服联合外敷能够有效抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠体内肿瘤,降低MMP-2水平,调节机体免疫功能。     

养阴清肺方调节荷瘤小鼠免疫功能及其机理的研究

目的 :研究养阴清肺方调节荷瘤小鼠免疫功能的作用及其作用机理。方法 :将Lewis肺癌细胞注入C5 7BL/ 6近交系小鼠皮下 ,制成Lewis肺癌小鼠模型。检测养阴清肺方治疗组和空白对照组小鼠NK细胞活性、T淋巴细胞转化功能 ,血浆PGEα含量及脾淋巴细胞内腺苷酸环化酶的活力和cAMP含量。结果 :养阴清肺方组荷瘤小鼠NK细胞活性、T淋巴细胞转化功能较空白对照组为高 ,血浆PGEα含量、脾淋巴细胞内腺苷酸环化酶活力和cAMP含量均较空白对照组为低 ,统计学分析两组有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :养阴清肺方具有增强荷瘤小鼠免疫功能的作用 ,其作用机理可能是通过降低荷瘤小鼠血浆PGEα含量 ,从而通过降低与其受体偶联的腺苷酸环化酶活力 ,降低淋巴细胞内cAMP的含量 ,进而促进了免疫淋巴细胞的吞噬功能。     

消岩汤对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及对髓源性抑制细胞的影响

[目的]观察消岩汤对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及对髓源性抑制细胞(MDSCs)的影响。[方法]选取C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌小鼠模型。成模小鼠随机分为模型组、环磷酰胺(CTX)组、消岩汤组、联合组,每组6只。另取正常小鼠6只为空白组。空白组、模型组:每日灌胃0.2 mL生理盐水;消岩汤组:每日予消岩汤灌胃2次,每次0.2 mL(28.77 g/mL);环磷酰胺组:每日腹腔注射CTX 0.2 mL(6 mg/mL);联合组:在消岩汤组基础上腹腔注射CTX0.2 mL(6 mg/mL)。7 d后处死小鼠,称量瘤质量、脾脏质量、胸腺质量,计算抑瘤率、脾指数、胸腺指数。流式细胞技术检测小鼠脾脏MDSCs表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠外周血白细胞介素(IL)-6,转化生长因子-β(TGF-β)表达水平。[结果]各组小鼠抑瘤率结果表明,消岩汤、环磷酰胺及联合用药干预均可抑制肿瘤生长,抑瘤率分别为20.3%、49.7%及56.7%。与模型组比较,消岩汤组及联合组脾指数及胸腺指数显著升高(P0.05)。与空白组相比,模型组小鼠脾脏中MDSCs百分比显著上升(P0.05);与模型组比较,消岩汤组、CTX组及联合组小鼠脾脏中MDSCs百分比均有不同程度显著降低(P0.05);与CTX组相比,联合组小鼠脾脏中MDSCs百分比降低更显著(P0.05)。与模型组相比,消岩汤组、CTX组及联合组小鼠血清中IL-6、TGF-β水平有不同程度降低(P0.05);与CTX组相比,联合组小鼠血清中TGF-β水平显著降低(P0.05)。[结论]消岩汤可以协同化疗药物抑制肿瘤生长,下调免疫负向调节因子IL-6、TGF-β水平,抑制MDSCs扩增,可能从重塑肿瘤免疫微环境角度发挥作用。     

玉郎伞多糖对小鼠免疫功能的调节作用

目的 研究玉郎伞多糖(YISPS)对小鼠免疫功能的影响.方法 考察YLSPS对小鼠肉瘤S<,180>的抑瘤率、荷瘤小鼠免疫器官指数、外周血白细胞数量的影响;MTT法检测YLSPS对荷瘤鼠、正常BALB/c及裸鼠脾淋巴细胞增殖的影响;ELISA法检测YLSPS对TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的影响.结果 YLSPS各剂量组(0.15,0.3,0.6 g·kg<'-1>)治疗小鼠S<,180>实体瘤的平均抑瘤率分别为39.7%,41.3%,52.6%;可提高荷S<,180>小鼠的脾脏和胸腺指数,可明显升高CTX降低的免疫器官指数和外周血白细胞数量,增强ConA诱导的脾淋巴细胞转化,而对LPS诱导的脾淋巴细胞转化无明显影响;能促进免疫细胞分泌TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-2.结论 YLSPS具有明显的免疫调节活性,其作用的靶细胞可能是T淋巴细胞与巨噬细胞,而对B淋巴细胞没有影响.     

养阴清肺方调节荷瘤小鼠免疫功能及其机理的研究

目的；研究养阴清肺方调节荷瘤小鼠免疫功能的作用及其作用机理，方法：将Lewis肺癌细胞注入C57BL／6近交系小鼠皮下，制成Lewis肺癌小鼠模型，检测养阴清肺方治疗组和空白对照组小鼠NK细胞活性，T淋巴细胞转化功能，血浆PGEα含量及脾淋巴细胞内腺苷酸环化酶的活力和cAMP含量。结果；养阴清肺方组荷瘤小鼠NK细胞活性，T淋巴细胞转化功能较空白对照组为高，血浆PEGα含量，脾淋巴细胞内腺苷酸环化酶活力和cAMP含量均较空白对照组为低，统计学分析两组有显著性差异（P＜0．05），结论：养阴清肺方具有增强荷瘤小鼠免疫功能的作用，其作用机理可能是通过降低荷瘤小鼠血浆PGEα含量，从而通过降低与其受体偶联的腺苷酸环化酶活力，降低淋巴细胞内cAMP的含量，进而促进了免疫淋巴细胞的吞噬功能。     

紫龙金联合埃克替尼对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能及肿瘤血管生成的影响

目的：探讨紫龙金联合埃克替尼对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能及肿瘤血管生成的影响。方法：选用无特定病原体（SPF）级C57BL/6雄性小鼠50只,随机取10只用于制备Lewis瘤细胞悬液,余40只于其右前肢腋窝皮下分别接种0.2 mL的Lewis瘤细胞悬液,建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,并将其随机均分为模型组、紫龙金组、埃克替尼组、联合观察组,每组10只。对比各组肿瘤重量、肿瘤生长抑制率;用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血管内皮生长因子、小鼠肿瘤组织白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素(IFN-γ)水平;流式细胞术检测小鼠脾脏免疫细胞比例。结果：与紫龙金组及埃克替尼组比较,联合观察组小鼠的肿瘤重量和小鼠肿瘤生长抑制率高（均P<0.05）,血管内皮生长因子水平及微血管密度低（均P<0.05）,CD4+T、CD8+T及B淋巴细胞比例高（均P<0.05）,肿瘤组织的IL-2、TNF-α、IFN-γ水平低（均P<0.05）。结论：紫龙金和埃克替尼联合治疗具有协同作用,显著降低了Lewis肺癌荷瘤小鼠模型的肿瘤重量,抑制了血管生成,增强了免疫功能,减轻了炎症反应。     

木蹄复方提取物体内抗肿瘤作用研究

目的:考察木蹄复方提取物(ECF)的体内抗肿瘤活性,并探讨部分作用机制.方法:制备S 180和Lewis肺癌实体瘤小鼠模型,接种次日将2种实体瘤模型小鼠均分为模型组,EFC低、中、高剂量(0.05,0.1,0.15 g·kg-1)组和环磷酰胺(CTX)阳性对照组,分别连续给药8和15 d,观察ECF对荷瘤小鼠瘤质量、胸腺指数和脾脏指数、血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)水平的影响.结果:ECF低、中、高3个剂量组对S 180荷瘤小鼠肿瘤抑制率分别为11.8％,47.1％和58.8％;对Lewis肺癌实体瘤小鼠肿瘤抑制率分别为7.1％,57.1％和28.6％.与模型组比较,ECF高剂量组能抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长(P＜0.05),提高胸腺指数(P＜0.05),降低血清中M-CSF水平;中剂量组可抑制Lewis 肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长(P＜0.05),提高胸腺指数(P＜0.05),降低血清中M-CSF水平,3个剂量组均能提高血清中TNF-α水平(P ＜0.05,P＜0.01).结论:ECF对S 180荷瘤小鼠和Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长具有明显抑制作用,显示较强的体内抗肿瘤活性,其作用机制可能与提高免疫器官指数以及调节血清中TNF-α和M-CSF的表达有关.     

HE法观察回药爱康方对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的:观察回药爱康方对小鼠Lewis肺癌的抑制作用。方法:将55只C57荷瘤小鼠随机分为荷瘤模型组为对照组,环磷酰胺(CTX)单纯化疗组,回药爱康方低剂量组、回药爱康方低剂量加化疗组、回药爱康方高剂量加化疗组均为实验组。治疗后观察各组小鼠生活状态,抑瘤率、免疫器官指数、HE染色法观察各组小鼠瘤细胞的病理学改变。结果:①与对照组比较,除CTX组外,其余各实验组小鼠体重差异均有统计学意义(P<0.05);各实验组小鼠瘤重与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);②病理切片观察:实验组均有细胞形态改变,以回药爱康方高剂量加CTX最明显,有大片肿瘤细胞坏死和凋亡。结论:回药爱康方对小鼠Lewis肺癌细胞生长有抑制作用,并呈现量效关系。     

四逆汤联合环磷酰胺对C57BL/6小鼠Lewis肺癌Caspase-3表达的影响

目的:探讨不同剂量四逆汤联合环磷酰胺(CTX)对C57BL/6小鼠Lewis肺癌的抑制作用机制。方法:通过建立C57BL/6小鼠肺癌模型,随机分为6组:空白对照组,CTX组,四逆汤组,CTX+四逆汤低、中、高剂量组,每组16只,连续灌胃给药21d,随机抽取各组10只于第21天处死小鼠。采用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹技术检测小鼠肿瘤组织中Caspase-3的表达。结果:CTX组、CTX+四逆汤中剂量组小鼠21d时肿瘤组织Caspase-3mRNA和蛋白表达均较空白组显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论:中剂量四逆汤联合CTX可上调C57BL/6小鼠Lewis肺癌Caspase-3表达促进肿瘤细胞凋亡。应用中剂量四逆汤联合CTX对治疗Lewis肺癌可能有较好的辅助作用。     

补康灵对Lewis肺癌小鼠化疗疗效及免疫功能的影响

目的:探讨补康灵对Lewis肺癌小鼠化疗疗效及血清CD4+/CD8+和IL-2水平的影响。方法:测定各组Lewis肺癌小鼠的肿瘤、胸腺和脾质量,计算抑瘤率、胸腺系数和脾指数;用ELISA检测小鼠外周血IL-2的水平;用流式细胞仪测定血清CD4+和CD8+T淋巴细胞含量,计算CD4+/CD8+值。结果:补康灵联合化疗各组Lewis肺癌小鼠肿瘤质量均明显少于模型对照组(P<0.05),联合化疗组脾系数和胸腺系数均明显高于模型对照组(P<0.05),联合化疗组均明显提高Lewis肺癌小鼠血清IL-2水平和T淋巴细胞CD4+/CD8+比值(P<0.05),其中以高浓度补康灵联合组最为显著。结论:补康灵可能通过提高Lewis肺癌小鼠免疫功能而发挥化疗增效的作用。     

麦粒灸对Lewis荷瘤小鼠Th1/Th2型细胞因子的影响

目的:探讨麦粒灸对Lewis荷瘤小鼠血清Th 1型细胞因子白介素2(IL-2)/血清Th 2型细胞因子IL-10的影响,为麦粒灸在今后肿瘤治疗方案中的运用提供实验依据。方法:30只雄性C 57BL/6J小鼠随机分为麦粒灸组、荷瘤组、空白组,每组10只。采用Lewis肿瘤细胞悬液皮下接种复制Lewis荷瘤小鼠模型。麦粒灸组予麦粒灸治疗"后三里",治疗10次后,观察各组小鼠一般状况,采用MTT法检测刀豆蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖能力,以双抗体夹心ELISA法测定血清IL-2、IL-10的表达水平。结果:麦粒灸组荷瘤小鼠与荷瘤组小鼠瘤体体积与体质量差异无统计学意义(P0.05);与空白组比较,荷瘤组血清Th 1型细胞因子IL-2表达降低(P0.05),血清Th 2型细胞因子IL-10增加(P0.05);与荷瘤组比较,麦粒灸组荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖能力增加(P0.05),血清Th 1型细胞因子IL-2表达增加(P0.05),血清Th 2型细胞因子IL-10表达降低(P0.05)。结论:麦粒灸可有效调节荷瘤小鼠的免疫功能,促进荷瘤小鼠Th 1型细胞因子的产生,有效纠正荷瘤导致Th 1/Th 2的失衡,增强机体的抗肿瘤免疫功能。     

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??OBJECITVE To study the inhibitive effect of plumbagin on Lewis lung cancer. METHODS Cell proliferation was determined by CCK8 assay. Apoptosis was determined by flow cytometry. The expression of Bcl-2 and VEGF protein was studied by Western blot assay. The model of C57BL/6 mice bearing Lewis lung cancer was established by subcutaneous seeding of Lewis lung cancer cells, and randomly divided into 5 groups (n=6). Tumor-bearing mice were injected with normal saline, plumbagin(low, medium, high dose) or cyclophosphamide (CTX) in each group. The tumor volume was measured. All mice were sacrificed on Day 22nd under aseptic condition for the tumor collection. The transplanted tumors were weighed for calculation of the tumor inhibition rate; Immunohistochemical method was applied to assessing the VEGF expression in tumor tissue. RESULTS CCK-8 assay showed that plumbagin had an obvious inhibition on Lewis lung carcinoma cells line in a dose-dependent manner(r=0.953, P<0.05). Plumbagin significantly increased cell apoptosis rate(P<0.05). The protein levels of Bcl-2 and VEGF were significantly reduced by plumbagin (0, 2.5, 5, 10 ??mol??L^-1) treatment(P<0.05). In plumbagin(low, medium, high dose) groups and CTX group, the tumour volume, tumour weight and the expression of VEGF were significantly less than those in the control group (P<0.05). CONCLUSION The plumbagin effectively inhibits Lewis lung carcinoma cells proliferation and tumor growth of Lewis lung carcinoma cells in mice. The mechanism involved is down-regulating the expression of Bcl-2 ,VEGF and inducing cell apoptosis.     

清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞中ACO1,ACL,FFA,CHO的影响

目的：观察清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞顺乌头酸酶(Aconitase closing odor,ACO1)、ATP柠檬酸裂解酶(ATP citrate lyase,ACL)、游离脂肪酸(Free fatty acids,FFA)、胆固醇(Cholesterol,CHO)含量的影响。方法：C57BL/6J雄性小鼠,随机分为5组,分别为清燥救肺汤高剂量组、中剂量组、低剂量组,模型组,环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)组,每组10只,共50只。于小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤低、中、高剂量组剂量分别为2.75 ,5.5,11g.kg_^-1.d_^-1,先灌胃给药2周然后造模,CTX组以50 mg.kg_^-1.(2d)_^-1进行腹腔注射给药,模型组用等体积的生理盐水进行灌胃给药,接种后继续灌胃给药2周,处死小鼠取瘤组织。酶联免疫吸附测定(Enzyme-linkedimmunesorbent assay,ELISA)检测FFA、CHO的含量；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测ACL mRNA的表达；蛋白质免疫印记法(Western blot)检测ACO1蛋白表达。结果：与模型组比较,CTX组及清燥救肺汤高、中、低剂量组中肺癌细胞ACO1蛋白表达,ACL mRNA的表达及FFA、CHO含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01)。结论：清燥救肺汤可有效抑制荷Lewis肺癌细胞增殖,减少肺癌细胞能量生成,ACO1、ACL、FFA、CHO可能是其药效作用靶点。     

金复康口服液对Lewis肺癌荷瘤小鼠PD-1、PD-L1表达及相关免疫因子的影响

目的:观察金复康口服液对Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境中程序性死亡受体1(PD-1)、配体(PD-L1)表达及相关免疫因子的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,而后随机分为模型组、中药低、中、高剂量组每组8只; 实验第1天开始中药低、中、高剂量组小鼠分别按15、30、60 g/(kg·d)灌胃给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药14 d; 称取各组小鼠的瘤质量,计算抑瘤率; 荧光定量PCR检测荷瘤小鼠肿瘤组织中PD-1和PD-L1的mRNA,Western blot法检测肿瘤组织PD-1、PD-L1的蛋白表达水平,HE染色观察肺组织,同时ELISA法检测血清中免疫因子IFN-γ和IL-12表达量。结果:与模型组比较,金复康口服液中、高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率分别是36.35%和28.59%; 金复康口服液中、高剂量组能明显降低肿瘤组织 PD-1、PD-L1 mRNA含量,抑制PD-1、PD-L1蛋白表达; HE染色显示中、高剂量组肺组织形态完整,未见明显癌巢; 中剂量组明显增加血清中IFN-γ和IL-12的含量。结论:金复康口服液对肺癌移植瘤的生长有一定抑制作用,机制可能与降低肿瘤微环境中PD-1、PD-L1水平并增加血清中免疫因子IFN-γ和IL-12的含量有关。