血小板微颗粒对人脐静脉内皮细胞粘附因子表达的影响

目的：探讨血小板微颗粒对人脐静脉内皮细胞粘附因子E-selectin、ICAM-1、VCAM-1表达的影响,以揭示血小板微颗粒在冠心病中的可能作用机制。方法：分离制备血小板微颗粒,与人脐静脉内皮细胞CRL-1730共培养,应用半定量逆转录聚合酶链反应技术测定不同浓度血小板微颗粒作用不同时间,内皮细胞粘附因子E-selectin、ICAM-1、VCAM-1的表达。结果:当PMPS达到一定浓度,可促使内皮细胞(CRL-1730)表达E-selectin、ICAM-1和VCAM-1升高,差异有统计学意义（p<0.05）;而PMPs刺激内皮细胞(CRL-1730)不同时间,E-selectin、ICAM-1的表达无差异（p>0.05）。结论: PMPs可促使体外培养的人脐静脉内皮细胞(CRL-1730)表达E-selectin、ICAM-1和VCAM-1升高,从而从一方面解释了PMPs在冠心病中的可能的作用机制。     

血小板微颗粒对人脐静脉内皮细胞VEGF表达的影响

目的:探讨血小板微颗粒( PMPs)影响内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)释放的可能机制及其临床意义.方法:常规培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CRL-1730,配制不同干预浓度的PMPs与HUVECs共培养不同时间,应用半定量逆转录聚合酶链反应技术测定内皮细胞VEGF、VEGFⅡ型受体Fh/KDR、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)以及胞外信号调节激酶(ERK)mRNA的表达水平.结果:(1)VEGF mRNA的表达水平在0mg/L组高于PMPs10、30、50、100 mg/L干预组(均P＜0.05),VEGFⅡ型受体Flt/KDR mRNA表达水平在0mg/L组低于PMPs10、30、50、100 mg/L(均P＜ 0.05).ERK mRNA表达水平在PMPs50mg/L组高于0mg/L组(P=0.004),PI3K mRNA表达水平在PMPs100 mg/L组高于0 mg/L组(P=0.004).(2)50 mg/L PMPs干预细胞,VEGF mRNA的表达水平在0h组高于4h、24 h组(P＜0.05),KDR mRNA的表达水平在0h组低于4h、24h组(均P＜0.05),PI3K mRNA的表达水平在0h组低于24 h组(P=0.004).结论:PMPs可能通过VEGF受体,激活其下游信号转导通路,发挥促进血管和血管发生为基础的生物学效应.     

两色金鸡菊提取物对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨两色金鸡菊提取物对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法 MTT法检测细胞存活率,根据高糖半数抑制浓度确定高糖诱导浓度。HUVEC细胞分为五组:A、B、C、D组建立高糖诱导细胞损伤模型后,A、B和C组分别采用两色金鸡菊提取物25、50和100μg/mL干预;E组作为空白对照。采用ELISA法检测丙二醛(MDA)、SOD、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,Western blot检测VEGF和细胞间黏附分子1(ICAM1)蛋白表达。结果 A、B和C组的细胞存活率分别为(65.73±4.53)%、(72.32±0.88)%和(86.34±9.88)%,呈浓度依赖性升高(P<0.05)。C组细胞存活率高于B组(P<0.05)。与D组比较,A、B和C组MDA水平降低,SOD、CAT和GSH-Px水平升高(P<0.05)。与D组比较,A、B和C组VEGF和ICAM1蛋白表达呈浓度依赖性降低(P<0.05)。结论两色金鸡菊通过改善氧化应激水平和下调VEGF和ICAM1表达发挥对高糖诱导HUVEC损伤的保护作用。     

血透患者血清对人脐静脉血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:研究维持性血液透析(MHD)患者血清对体外培养人脐静脉血管内皮细胞细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响及其致内皮细胞功能紊乱的机制.方法:用10%胎牛血清1640培养液(对照组,A组)、10%正常人血清1640培养液(正常人组,B组)、10% MHD患者血清1640培养液(MHD患者组,C组)分别培养人脐静脉血管内皮细胞1、3、6、12 h,用免疫组织化学方法检测ICAM-1的表达情况.结果:不同血清刺激组人脐静脉血管内皮细胞 ICAM-1表达的差异有统计学意义(P < 0.05),与A组和B组比较,C组ICAM-1表达明显增加.不同刺激时间ICAM-1表达的差别有统计学意义(P < 0.05),不同血清刺激组ICAM-1的表达与刺激时间之间存在交互效应(P < 0.05).结论:慢性肾功能衰竭MHD患者血清可促进体外培养人脐静脉血管内皮细胞 ICAM-1的表达,从而导致内皮细胞功能失调.     

番红花酸对人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达和单核-内皮细胞黏附的影响

番红花酸为天然类胡萝卜素类化合物,具有抗氧化、抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)等多种药理作用,但其抗AS作用机制未明。本研究采用体外培养人脐静脉内皮细胞,观察番红花酸(0.1、1、10μmol·L-1)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ,0.1μmol·L-1)诱导的血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)表达和单核内皮细胞黏附的影响,并观察番红花酸对核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)活化的影响。结果显示,番红花酸可明显减少AngⅡ诱导的VCAM-1表达及单核-内皮细胞黏附(P<0.05,P<0.01),降低细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和NF-κB活化水平(P<0.05,P<0.01)。番红花酸还可明显增强内皮细胞总抗氧化能力(P<0.01)和超氧化物歧化酶活性(P<0.05,P<0.01)。这些结果提示,番红花酸可有效抑制VCAM-1表达和单核-内皮细胞黏附,其机制可能与番红花酸增强内皮细胞抗氧化能力、减少细胞内ROS水平,进而抑制NF-κB活化有关。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的:研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法:以不同浓度乙醇(50、100和200mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞24h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果:乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论:乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。     

丁苯酞对缺氧人脐静脉血管内皮细胞Ang-2蛋白表达的影响

目的:探讨药物丁苯酞(NBP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤的保护作用及其对血管生成素2(Ang-2)表达的影响。方法:体外培养HUVEC,建立稳定的内皮细胞缺氧损伤模型。试验分为正常对照组、缺氧损伤模型组、NBP组,按要求分别给予药物处理后,用CCK-8法检测细胞活力,采用免疫细胞化学方法和图像定量分析技术检测平均吸光度,比较各组Ang-2蛋白表达的变化;Western Blot法检测各组Ang-2蛋白的表达情况。结果:NBP可提高HUVEC的存活率;与正常组比较,缺氧组Ang-2蛋白表达量明显升高(P<0.05);与缺氧组比较,NBP组Ang-2蛋白表达进一步增高(P<0.05)。结论:NBP可以上调Ang-2蛋白的表达,对HUVEC缺氧损伤有一定的保护作用。     

转化生长因子β1对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响

目的观察转化生长因子β1（TGF—β1）刺激增生性瘢痕成纤维细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖和趋化能力的影响。方法以增生性瘢痕成纤维细胞为实验组,正常皮肤为对照组,添加TGF—β1（10μg/L）为TGF—β1组,向TGF—β1组内添加丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）阻断剂Tricirlbine（5Ixmol／L）为Akt阻断剂组,二者皆未添加的瘢痕成纤维细胞为非干扰组,利用各组细胞上清液（条件培养基）培养HUVEC,使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察各条件培养基对HUVEC增殖的影响,并利用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验对HUVEC的趋化情况进行评估。结果对照组吸光度值为0．91±0．34,非干扰组1．75±0．15,TGF—B,组3．26±0．58,Akt阻断剂组1．14±0．81。非干扰组吸光度值与对照组和TGF-β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;而Akt阻断剂组成纤维细胞增殖吸光度值明显低于TGF—β1组（P〈0．01）。细胞划痕24h后,TGF—β1组促使HUVEC划痕的闭合率较非干扰组高（P〈0．01）;而Akt阻断剂组则明显减弱HUVEC划痕闭合的速度（P〈0．01）。Transwell细胞迁移实验中,TGF—β1组迁移的细胞较非干扰组多[TGF—β1组细胞迁移数目：（1718±15）个,非干扰组：（829±2）个,P〈0．01];而Akt阻断剂组阳性细胞迁移率又明显降低[Akt阻断剂组：（935±11）个,P〈0．01]。对照组血管内皮生长因子（VEGF）（65．2±0．3）ng／L,非干扰组（87．0±0．5）ng／L,TGF—β1组（132．7±0．4）ng／L,Akt阻断剂组（70．5±0．6）ng／L。非干扰组与对照组、TGF-β1组与非干扰组、Akt阻断剂组与TGF—β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论TGF—β1可以通过刺激增生性瘢痕成纤维细胞旁分泌VEGF等细胞因子对血管内皮细胞增殖、趋化等能力产生影响。     

油酰乙醇胺对人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的探讨油酰乙醇胺(OEA)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,分别加入3种不同浓度的OEA(10,50,100μmol/L)或非诺贝特(10,50,100μmol/L)共同孵育10 h,再加入TNF-α共同孵育6 h,采用实时定量逆转录聚合酶链式反应和酶联免疫吸附剂检测测定VCAM-1以及mRNA和蛋白的表达,并采用Western blot方法检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的蛋白表达。结果与非诺贝特相比,不同浓度的OEA更加显著地抑制人脐静脉内皮细胞VCAM-1mRNA和蛋白的表达,随着浓度的增大,抑制作用逐渐增强。Western bolt结果显示OAE能明显增强PPAR-α蛋白的表达。结论OEA对TNF-α引起的内皮细胞受损起到保护作用,其机理可能与上调过PPAR-α有关。     

非诺贝特对内皮细胞分泌E-选择素和细胞间黏附分子1的影响

目的 研究非诺贝特对内皮细胞产生E-选择素和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的影响.方法 培养人内皮细胞株(ECV304),用肿瘤坏死因子α(TNF-α,浓度5、10、25、50、100ng/ml)刺激;用100μM非诺贝特刺激不同时间(1、6、8、12、18、24h)后用10ng/ml TNF-α刺激24h;用不同浓度非诺贝特(0、1、10、100μM)刺激后用10ng/ml TNF-α刺激24h;用ELISA的方法检测培养上清液中的可溶性E-选择素和ICAM-1浓度.结果 各浓度的TNF-α刺激24h后E-选择素和ICAM-1浓度明显增加(P＜0.05);100μM非诺贝特刺激12、18、24h刺激后抑制E-选择素和ICAM-1分泌增多(P＜0.05);用10、100μM非诺贝特刺激后抑制E-选择素和ICAM-1分泌增多(P＜0.05).结论 非诺贝特可以抑制E-选择素和ICAM-1分泌.     

Study on the action of resistin-induced human umbilical vein endothelial cell dysfunction

The aim of this paper was to investigate the effects of resistin on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), and to explore its role and mechanism of action in atherosclerosis. HUVECs were incubated with recombinant human resistin (0, 50, 100 ng/mL) for 24 h. ICAM-1, VCAM-1 and reactive oxygen species (ROS) were assayed by flow cytometer. ET-1, eNOS and iNOS mRNA expression were measured by semi-quantitative RT-PCR. Incubation of HUVECs with resistin resulted in an increase in ICAM-1 expression and ET-1 mRNA expression. However, resistin had no effect on VCAM-1 expression and ROS release. eNOS and iNOS mRNA expression were not altered by resistin stimulation. Adipokine resistin exerted a direct effect in promoting HUVEC dysfunction by promoting ICAM-1 and ET-1 expression. These data suggest that adipocyte-endothelium cross-talk might play an important role in the pathogenesis of cardiovascular disease in diabetes mellitus. Translated from Journal of Sun Yat-Sen University (Medical Sciences), 2006, 27(3): 258–261 [译自: 中山大学学报 (医学科学版)]     

C肽对高糖状态下人脐静脉内皮细胞体外表达eNOS的影响

目的 :探讨在高糖状态下C肽对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)体外表达内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的影响。方法 :将培养成功的HUVEC在不同浓度的C肽和葡萄糖环境下孵育72h ,提取细胞总RNA ,应用半定量逆转录聚合酶链反应 (SQ -RT -PCR)法 ,检测eNOSmRNA表达的情况。结果 :生理浓度葡萄糖 (5 5mmol/L)状态下 ,低浓度的C肽 (0 3nmol/L)使HUVECeNOSmRNA表达减弱(P<0.01) ,生理浓度 (3nmol/L)和高浓度(30nmol/L)的C肽可使eNOSmRNA的表达明显增强(P<0.01) ;高浓度葡萄糖(33.3mmol/L)状态使HU VECeNOSmRNA表达减弱(P<0.01) ,加入生理浓度或高浓度C肽后 ,eNOSmRNA表达增强(P<0.01)。结论 :HUVEC体外eNOSmRNA表达可受C肽浓度影响 ;高浓度或生理浓度C肽可缓解高糖对HUVECeNOS表达的抑制作用。提示C肽可能对防治糖尿病大血管病变具有重要作用     

沙利度胺联合曲安奈德抑制人脐静脉内皮细胞增殖的研究

目的:研究沙利度胺(thalidomide)联合曲安奈德对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的药物作用.方法:Ⅰ型胶原酶消化法原代培养HUVEC, Ⅷ因子相关抗原检测法鉴定细胞.沙利度胺溶于0.5%二甲基亚砜(DMSO)中,分为3组.A组为沙利度胺组,分4个浓度梯度,分别为10、25、50和75 mg/L;B组为沙利度胺+曲安奈德组,为含1 mg/L曲安奈德的各浓度沙利度胺;C组为对照组.HUVEC传代植入96孔板,细胞密度为1×10~4/mL,过夜,加入不同浓度的药物,处理72 h; 在酶标仪570 nm波长处读取吸光度(A)值. 结果: 2组药物均对HUVEC的增殖有明显的抑制作用 (P < 0.01),抑制作用与药物浓度呈正相关;与A组相比,B组对HUVEC抑制作用更强(P < 0.05).结论:沙利度胺及曲安奈德对血管内皮细胞增殖有明显作用,这两类药物在治疗新生血管性疾病中可发挥一定作用.     

高糖对人脐静脉内皮细胞凋亡及bcl-x、bax和 eNOS表达的影响

目的:探讨高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响,及其与bcl-x、bax和eNOS表达的相关性。方法:将培养成功的HUVEC以不同浓度的葡萄糖孵育72h,提取细胞总RNA。采用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法检测内皮细胞bcl-x、bax以及eNOS表达。用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法进行内皮细胞凋亡定性。结果:高浓度葡萄糖(33.3mmol)可诱导HUVEC凋亡增加(P<0.01),eNOS及bcl-x表达减弱。HUVEC凋亡与eNOS表达呈负相关。结论:糖尿病状态下高血糖诱导内皮细胞凋亡,可能与bcl-x及eNOS表达减弱有关。     

血浆sTM和sICAM-1在急性冠脉综合征患者中的表达

目的：探讨血浆可溶性血栓调节蛋白（sTM）和可溶性细胞问黏附因子-1（sICAM-1）的水平在急性冠脉综合征患者（ACS组）发病中的作用。方法：用酶联免疫吸附法测定ACS组及对照组血浆sTM及sICAM-1的水平。结果：ACS组sTM水平低于对照组（P〈0．01），其中AMI组sTM水平高于UAP组，但差异无统计学意义（P〉0．05）；sICAM-1水平AMI组高于对照组和UAP组（均P〈0．01）。AMI组sTM与sICAM-1呈正相关（r=0．656，P〈0．01）。sTM及sICAM-1与肌钙蛋白Ⅰ（TnI）呈正相关（r分别为0．453和0．34，均P〈0．01）。结论：sTM、sICAM-1水平是反映ACS患者内皮细胞损伤程度和范围的良好标志。炎症反应、内皮损伤在ACS发生过程中起协同作用，炎症反应促进了急性血栓形成。     

血小板内皮细胞黏附分子-1基因Leu 125 Val分子变异与冠心病相关性

目的 :研究血小板内皮细胞黏附分子 - 1(PECAM - 1)基因Leu 12 5Val分子变异与中国人群冠心病的关联。方法 :选择 90例冠心病患者 (冠心病组 )及年龄、性别相匹配的 115例正常者 (对照组 ) ,用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)方法检测其PECAM - 1基因型。比较 2组基因型及等位基因频率分布。结果 :冠心病组V V基因型频率 (40 .0 0 % )明显高于对照组 (2 3.4 8% ) ,差别有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;与对照组相比 ,冠心病组V等位基因频率 (5 8.89% )明显升高 ,L等位基因频率 (41.11% )明显降低 (P <0 .0 5 ) ;吸烟使V V基因型者冠心病发病危险度由 2 .17上升至 3.5 0 (P <0 .0 5 )。结论 :PECAM - 1基因Leu 12 5Val分子变异与冠心病相关 ,V V基因型可能是中国人群冠心病的遗传易患因子。     

大黄素对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞的影响

目的:研究大黄素对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的增殖和凋亡的影响。方法:体外培养HUVEC,利用MTT法评价不同浓度的大黄素(10、20、40、80μmol·L-1)对HUVEC增殖的影响;观察其对HUVEC细胞形态的影响;利用DNA梯状条带观察不同浓度大黄素对HUVEC凋亡的影响。结果:不同浓度的大黄素作用于HUVEC24、48、72h后,可明显抑制细胞的增殖,并能够导致细胞发生皱缩和变圆;不同浓度大黄素作用HUVEC细胞72h以后,细胞出现明显的DNA梯状条带。结论:大黄素对体外培养的HUVEC的增殖具有抑制作用,而这种作用可能是通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡而产生的。     

肾衰宁对系膜细胞产生细胞间黏附分子的影响

目的：探讨具有益气固本、化瘀泄浊作用的中药复方制剂肾衰宁灌肠液（简称肾衰宁，SSN）防治慢性肾功能衰竭（CRF）的作用机制。方法：采用双抗夹心ELISA法，观察体外培养的人肾小球系膜细胞分别加入重组rhIL-1β（A组）及rhIL-1β＋SSN大鼠血清（B组）后产生细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）的水平。结果：A组人肾小球系膜细胞产生ICAM-1和VCAM-1增加，B组低于A组，且随SSN药物浓度的增加ICAM-1和VCAM-1越少。结论：SSN对rhIL-1β刺激后肾小球系膜细胞所产生的ICAM-1和VCAM-1有明显的抑制作用。提示SSN抑制系膜细胞自分泌ICAM-1和VCAM-1是预防肾小球硬化发生发展的重要作用机制之一。