抗人CD16单克隆抗体可变区基因的克隆和表达

目的：克隆抗人CD16单克隆抗体重，轻链可变区（VH，VL）基因并合成单链抗体（ScFv)基因。方法：从分泌抗人CD16单克隆抗体的杂交瘤细胞B88－9中提取总RNA，应用RT－PCR技术获得抗CD16单克隆抗体的VH，VL基因，用连接肽（Linker)肽VH和VL连接成具有VH－Linker-VL结构的ScFv基因，将其克隆到表达载体pcDNA3.1( )，并转杂COS－7细胞。结果：VH基因长度为354bp，属于鼠抗体可变区重链基因家族I（B）亚群，VL基因长度为333bp，属于鼠抗体可变区kappa轻链基因家族Ⅲ亚群，采用夹心ELISA方法检测到ScFv的表达。结论：抗人CD16单克隆抗体VH与VL基因的克隆和ScFv基因的构建为基于CD16的导向免疫治疗奠定了基础。     

抗CD4人-鼠嵌合抗体的表达和抗增殖效应

目的：制备抗CD4人－鼠嵌合抗体。方法：从分泌抗CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，通过RT－PCR扩增出VH和VL的DNA 片优，对VH和VL进行DNA序列测定和分析，证实VH和VL具有小鼠Ig可变区完整的结构功能后，将VH亚克隆至重链表达载体pγ1-Expr,VL亚克隆至轻链表达载体pκ－Expr转化XL2－Blue细菌，通过菌落或质粒PCR筛选阳性克隆，通过电转染将VH－Pγ1，LV－pκ共转染至小鼠骨髓瘤细胞X63Ag8,653，通过G418筛选，ELISA和免疫荧光鉴定。结果：得到分泌抗CD4人－鼠嵌合体的阳性转染瘤细胞克隆。所得到的嵌合抗体在体外对PHA和IL－2诱导的PBMC增殖具有抑制作用。结论：人－鼠嵌合抗体得到成功表达，并有可能作为免疫抑制剂应用于抗移植排斥和自身免疫疾病的治疗。     

黏附分子与树突状细胞在大鼠肝和肾缺血-再灌注损伤中作用及抗黏附干预的影响

目的本研究旨在探讨黏附分子P -选择素、ICAM -1及DC在大鼠肝和肾缺血 -再灌注损伤中作用 ,以及抗P -选择素Lectin -EGF功能域单抗 (PsL -EGFmAb)的抗黏附抑制及其防治效果。方法分别建立肝和肾缺血 -再灌注损伤大鼠模型90只 ,随机将两组模型各分为P -选择素单抗治疗组 (n=20)和非治疗组 (n=20) ,按不同再灌注时间 (1 ,3,6和24h)再分为4组 ,每组5只。治疗组于再灌注前5min静脉内注射自制的PsL-EGFmAb,剂量为2mg/kg。另各设假手术组(n=5)作为对照。采用免疫组化LSAB法和免疫双染与荧光图像分析法 ,分别观察和比较各组大鼠肝、肾组织P -选择素、ICAM -1表达及CD1a CD80 DC分布变化。结果①缺血 -再灌注1h起 ,伴随着肝、肾组织病理学改变 ,P -选择素即分别以肝窦内皮细胞或肾小管上皮细胞为主于肝和肾内广泛高表达 ,至24h仍维持一定水平。ICAM -1于缺血 -再灌注6h起持续以肝窦和肾血管为主表达上调和明显增强。②CD1a CD80 DC在假手术组大鼠肝、肾组织中分布甚少 ,而在非治疗组自再灌注1h起以肝窦和肾小管间质为主分布数量逐渐增多 ,至24h达峰 ,并与大鼠肝、肾功能密切相关。③经PsL -EGFmAb处理后 ,大鼠肝、肾组织P -选择素和I CAM -1表达受到抑制 ,CD1a CD80 DC分布及数量减少 ,组织病理损伤及肝、     

抗MHC—I类分子单抗促进异基因小鼠皮肤移植耐受

目的：通过静脉注射异基因脾细胞和抗H－2^b单抗加腹腔注射环磷酰胺诱导成年B6小鼠对异基因皮肤移植物产生免疫耐受，方法：经C57BL／6（H－2b,B6)小鼠尾静脉注射BALB／c小鼠（H－2b)脾细胞，2d腹腔注射环磷酰胺（CP），随后2次尾静脉注射抗小鼠的H－2b单克隆抗体，然后进行皮肤移植，并于耐受30d对受体B6小鼠作混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction MLR)，迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity,DTH)等耐受状态检测。结果：BALB／c小鼠的皮肤移植物在耐受B6小鼠中存活期特异延长，MLR和DTH检验证明，B6小鼠对BALB／c小鼠的脾细胞产生特异性耐受，对无关第3者KM小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫反应。结论：抗MHC－1类分子单克隆抗体可明显促进“细胞＋CP”诱导的异基因皮肤移植耐受，克隆排除是诱导耐受的主要因素。     

抗P选择素免疫小鼠单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选

目的 构建抗P－选择素的全套单链抗体噬菌体表面展示文库，从中筛选与P－选择素高亲合力的单链抗体，为其临床应用奠定基础。方法 从P－选择素免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA，反转录成cDNA后，用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可变区基因，经重叠延伸反应，装配成单链抗体（ScFv)基因，将其克隆到噬菌体载体pHEN1中，构建单链抗体噬菌体抗体库。对抗体库进行亲合筛选后，ELISA法鉴定抗活化血小板单链抗体。结果 经过5轮“吸附－洗脱－扩增”的富集过程，phage-ELISA得到一个ELISA活性较高的与P－选择素结合的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。结论 成功构建了全套抗P－选择素单链抗体噬菌体展示文库，并筛选得到具有P－选择素结合能力的单链抗体基因。     

甲基强的松龙对大鼠颅脑损伤后ICAM-1和TNF的影响

目的观察甲基强的松龙对大鼠颅脑损伤后血脑组织中ICAM－1和TNF含量的影响，并探讨其作用机制．方法将55只SD大鼠随机分为3组，采用骨窗形成后硬膜外打击法造成鼠脑挫裂伤模型，正常组5只，麻醉后，只行开颅手术．不作头颅打击；治疗组大鼠致伤后即刻腹腔内注射30mg／kg甲基强的松龙，对照组则即刻腹腔内注射30mg／kg生理盐水．对照组和治疗组大鼠分别在伤后6h、24h、48h、72h、96h时间点断头取脑，对大鼠脑外伤后脑组织中TNF含量进行检测．结果大鼠脑皮质中的ICAM—1和TNF活性在伤后6h后较对照组升高显著（P〈0．01），48h达高峰并开始下降，96h降至基础水平．甲基强的松龙治疗组在伤后6h-48h ICAM－1和TNF活性较损伤组明显降低（P〈0．05）．结论颅脑损伤后，受损脑组织中ICAM－1和TNF含量升高。甲基强的松龙可通过抑制损伤后ICAM—1和TNF活性，起到保护创伤神经元的作用．     

抗TCRαβ单抗促进异基因皮肤移植耐受的研究

目的 探索抗ＴＣＲαβ单抗诱导异基因成年小鼠皮肤移植耐受的作用。方法 经５７ＢＬ／６（Ｈ－２ｂ,Ｂ６）小鼠尾静脉注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠（Ｈ－２＾ｄ）脾细胞,２ｄ后腹腔注射环磷胺（ＣＰ）,随后两次尾静脉注射抗小鼠－ＴＣＲαβ的单克隆抗体,然后进行皮肤移植,观察皮肤存活期并对耐受小鼠的ＭＬＲ,ＤＴＨ等耐受状态进行了检查。结果 耐受Ｂ６小鼠获得了供体特异性皮肤移植耐受,供体皮肤移植存活时间延长,ＭＬＲ和Ｄ     

应用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路抑制小鼠SGVHD的发生

目的：探讨抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路在小鼠同基因型移植物抗宿主病（SGVHD）诱导中的作用,以阐明SGVHD的发生机制.方法：用致死剂量的X射线照射受体小鼠后,移植同基因骨髓细胞,从移植的当天开始连续21天腹腔注射环孢素A（CsA）诱导SGVHD.于诱导的第10天起给治疗组小鼠腹腔注射抗CD137L单克隆抗体进行干预治疗.观察各组小鼠的临床症状（体重下降,腹泻）、组织病理学和细胞因子改变.结果：抗CD137L单克隆抗体治疗组小鼠SGVHD的发生率明显低于诱导组小鼠SGVHD的发生率（25% vs 67%）,两者差异具有统计学意义（P＜0.01）.SGVHD小鼠肝脏和结肠组织病理学呈严重炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α mRNA水平升高.而抗体治疗组小鼠织病理学呈轻度炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α mRNA水平较低或检测不到.结论：单独用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路可明显抑制小鼠SGVHD的发生,提示CD137/CD137L信号通路在小鼠SGVHD免疫反应中是较为重要的通路之一.     

阻断协同刺激分子对TGF-β1和PAI-1的表达及妊娠结局的影响

目的：探讨阻断CD86协同刺激分子对自然流产模型孕鼠TGF-β1和PAI-1的表达及妊娠结局的影响。方法：实验组于妊娠第4.5天腹腔注射大鼠抗小鼠CD86单抗，实验对照组注射大鼠同型IgG2b，而正常妊娠组不做任何处理。于妊娠第13.5天计算胚胎吸收率，用免疫组化测定TGF-β1和PAI-1的表达。结果：（1）实验组的胚胎吸收率显著低于实验对照组（P〈0.05）。（2）实验组蜕膜细胞中TGF-β1和PAI-1的表达均显著高于实验对照组（P〈0.05）。结论：妊娠早期阻断CD86协同刺激分子信号途径可使母胎界面中的TGF-β1和PAI-1分别通过各自不同的途径来发挥免疫耐受作用并且使自然流产模型孕鼠的胚胎吸收率降低至正常妊娠水平。     

DNAM-1在系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞的表达研究

目的：研究DNAM－1在SLE患者外周血T淋巴细胞亚群上的表达，以阐明DNAM－1抗原在SLE患者体内活化作用以及与SLE发病的关系。方法：31例SLE患者和30例健康志愿者外周血单个核细胞，在PHA刺激培养72小时后，三色荧光标记的单克隆抗体染色，利用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群膜表面DNAM－1抗原的表达。同时检测SLE患者抗dsDNA抗体、C3和C4补体，疾病活动性用SLEDAI记分。结果：SLE患者CD4^＋、CD8^＋淋巴细胞上DNAM－1表达率均高于正常对照组（P＜0．01）；活动期SLE组CD4^＋、CD8^＋细胞上DNAM－1表达高于正常对照组和静止期SLE组（P＜0．01），而静止期SLE组与正常对照组无明显性差异（P＞0．05）；SLE患者CD8^＋细胞DNAM－1表达与SLEDAI、抗dsDNA抗体之间呈显著正相关（P＜0．001），与C3和C4补体水平呈明显负相关（P＜0．05），CD4^＋细胞DNAM－1表达与SLEDAI、抗dsDNA抗体、C3和C4补体之间无明显相关性（P＞0．05）。结论：SLE患者内存在T细胞亚群异常活化；活动期SLE患者T淋巴细胞亚群DNA－1表达增高；SLE患者CD8^＋细胞DNAM－1表达异常与SLEDAI、抗dsDNA抗体、C3和C4补体之间有明显相关，CD8^＋细胞活化程度可能与SLE疾病严重程度有关，故DNAM－1可能参与了SLE的免疫发病机理。     

CD34抗原表达和P—gp高表达与急性白血病预后的关系

目的：探讨急性白血病（AL）CD34抗原表达和P－gp高表达与预后的关系。方法：对30例AL患者的单个核细胞用抗CO34和抗P－gp单克隆抗体标记后，通过流式细胞仪进行检测，其结果与临床的实际疗效作分析。结果：CD34和P－gp同时高表达的临床疗效差；两者之间比较，P－gp高表达者疗效较差。结论：CD34和P－gp同时高表达可作为AL预后不良的指标。     

鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制和生物学活性鉴定

目的 研制鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体,并对其生物学活性进行鉴定.方法 以前期原核表达的人硫氧还原蛋白-（PD-L1）融合蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,Western-Blot和酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞,竞争抑制法ELISA实验鉴定抗体的特异性亲和力,小鼠腹水法作大量抗体制备.结果 获得4株能够稳定分泌特异性抗PD-L1抗体的杂交瘤细胞,经验证所分泌的抗体具有较强的特异性亲和力,经过大量抗体制备和纯化获得效价大于1∶32000的纯化抗体;同时获得1株能稳定分泌抗硫氧还原蛋白抗体的杂交瘤.结论 成功制备了鼠抗人PD-L1单克隆抗体,为下一步应用研究奠定了基础.     

同种MHC基因胸腺转移诱导小鼠心肌移植耐受

目的：通过胸腺内注射表达外源性主要组织相容性抗原复合物（MHC）抗原质粒PXN（N2－B19－H－2Kb），诱导异基因小鼠心肌移植耐受。方法：给BALB／C小鼠胸腺内注射质粒PXN（N2－B19－H－2Kb），将外源性的编码C57BL／6小鼠MHCI类抗原的H－2KbcDNA转移到BALBC／C小鼠胸腺，2周后行C57BL／6小鼠心肌移植。用聚合酶链反应（PCR），反转录聚合酶链反应（RT－PCR），单克隆抗体免疫萤光染色流式细胞仪检测BALB／C小鼠胸腺细胞DNA，mRNA和MHC蛋白质表达。结果：BALB／C小鼠胸腺细胞表面有外源性MHC分子表达，转染效率为5．1％，胸腺内注射质粒PXN（N2－mg－H－2Kb）能明显延长移植小鼠心肌的存活时间，平均17d，对照为8d（P＜0．01）。结论：同种MHC基因转移至受体鼠胸腺可以诱导特异性的免疫耐受。     

抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体并研究其生物活性.方法：分离纯化后的抗CD3 ScFv蛋白免疫BALB/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体;采用ELISA和Western blot鉴定其亚类和抗原结合特异性;采用FACS测定抗抗CD3 ScFv单克隆抗体对Jurkat细胞特异活性.结果：成功筛选出一株能稳定分泌抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的杂交瘤细胞株（10B7）,其分泌的抗体亚类为IgG1.该抗抗CD3 ScFv单克隆抗体直标后可特异性结合抗CD3 ScFv蛋白和抗CD3抗体.结论：文中所研制的抗抗CD3 ScFv单克隆抗体具有与抗CD3抗体、抗CD3 ScFv蛋白特异结合的活性,在肿瘤导向治疗中抗CD3/抗肿瘤双特异抗体的亲和层析纯化、药代动力学监测等方面具有广泛的应用前景.     

人T淋巴细胞通过整联蛋白α4/VCAM-1和LFA-/ICAM-1及ICAM-2与人扁桃体生发中心结合

该文为阐明介导T细胞与淋巴细胞组织不同区域结合的粘附分子的作用，应用原位杂交粘附实验及抗体封闭试验，检测T细胞与人扁桃体组织的结合。选用针对不同抗原的单克隆抗体：CD4（13B8．2），CDlla（25．3．1），CD18（7E4）．CD28（CD28．2），CD29（K20），CD45RA（ALBll），CD49d（HP2／1），CD54（84H10），CD102（B－TI），CD106（IGll）及鼠IgM抗体；细胞选用MOLT－4，JurkatT细胞系细胞和健康人活化的T淋巴细胞。细胞培养15至20天，流式细胞仪测定表明：CD3“细胞大于98％，CD19“细胞和CD14“细胞均小于05％…     

抗大鼠Ia抗原的单克隆抗体ICO-109,ICO-112

据报道人、小鼠、距翅蛙的主要组织相容性复合体回类抗原分子结构具有相同的抗原决定簇，因此人们将应用抗动物细胞抗原的单克隆抗体来研究免疫系统的进化。该文研究了抗大鼠Ia抗原的单克隆抗体ICD－109，ICO－112的部分免疫特性。研究方法：无菌提取出Wistar大鼠胸腺、脾脏、股骨骨髓和淋巴结的细胞以及大鼠外周血有核细胞、红细胞作为待检的抗原．用大鼠淋巴细胞免疫小鼠，然后提取小鼠脾细胞制备特异性单克隆抗体．分别命名为ICO－109，ICO－112，将这两种单抗作为实验组第一抗体，将已知抗大鼠la单一抗原决定簇的单克隆抗体OX3作…     

抗Tac单克隆抗体对ConA诱导小鼠实验性肝损伤的影响

本研究采用ＣｏｎＡ诱导，建成小鼠肝损伤模型，并检测其血浆肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）含量的变化，发现模型组鼠血浆ＴＮＦ－α含量为０．１９±０．０６ｎｇ／ｍｌ，而正常对照组未检出ＴＮＦ－α，二者比较有极显著差异（Ｐ＜０．００１）。预先注射抗Ｔａｃ单克隆抗体可减少ＣｏｎＡ注射后小鼠ＴＮＦ－α的产生，与模型组比较（分别为０．０３±０．０２和０．１９±０．０６），二者有极显著差异（Ｐ＜０．００１），而且注射抗Ｔａｃ单抗组无肝损伤发生。上述结果表明，ＣｏｎＡ诱导的肝损伤与ＴＮＦ－α等的介导有关，抗Ｔａｃ单克隆抗体对ＣｏｎＡ诱导的肝损伤有保护作用。     

由人免疫球蛋白转基因小鼠制备人抗乙酰胆碱受体单克隆抗体

目的：从人免疫球蛋白（Ig）转基因小鼠制备人源性抗乙酰胆碱受体（AChR）单克隆抗体。方法：以电鳐（Torpedo）AChR（tAChR）作为基础免疫原，分别以tAChR或人AChR（hAChR）α亚单位1～210位氨基酸（Hα1-210）与thioredoxin（Trx）融合制备的融合蛋白Trx-Hα1-210作为加强免疫原，注射人Ig转基因小鼠。应用ELISA检查由该小鼠制备的杂交瘤细胞培养上清液中人源性抗tAChR或抗Trz-Hα1-210单克隆抗体的分泌，应用放射免疫测定法（RIA）测定抗tAChR或抗Trx-Hα1-210单克隆抗体与hAChR的交叉反应性。结果：从tAChR作为加强免疫原组小鼠得到433株分泌人源性抗tAChR单克隆抗体的细胞株，从抗Trx-Hα1-210作为加强免疫原组小鼠得到20株分泌人源性抗Trx-Hα1-210单克隆抗体的细胞株。但这些人源性抗体均不能与hAChR起交叉反应。结论：由人Ig转基因小鼠制备人源性抗AChR单克隆抗体是可行的。     

糖尿病大鼠血管糖基化终产物含量与其受体的ICAM—1表达的关系

探讨糖尿病大鼠血管组织糖基化终产物（AGEs)含量与其受体（RAGE）和细胞间粘附因子－1（ICAM－1）表达的关系。复制糖尿病大鼠模型,采用荧光法、RT－PCR及原位杂交方法检测主动脉及心肌组织的AGEs含量以及RAGE和ICAM－1基因的表达。发现糖尿病大鼠主动脉和心肌组织AGEs含量升高（P＜0．01）;RAGE和ICAM－1基因表达增强（P＜0．05－0．05）;AGEs含量与RAGE及ICAM－1呈明显正相关（P＜0．01）;氨基胍治疗可缓解上述指标的变化。提示 AGEs可诱导RAGE和ICAM－1的表达。推测AGEs-RAGE相互作用是引起糖尿病血管内皮细胞功能紊乱和损伤的关键环节。     

MCAb、PcAb不同标记ELISA技术对HBeAg／抗－HBe检测的评估

用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和多克隆抗体（ＰｃＡｂ）进行辣根过氧化物酶标记或生物素标记作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测乙型肝炎病毒ＨＢｅＡｇ／抗－ＨＢｅ标志物。结果显示，ＭｃＡｂ的灵敏性高于ＰｃＡｂ，且标记用的抗体量较少，一孔一期法同时测ＨＢｅＡｇ／抗－ＨＢｅ只能使用ＭｃＡｂ。利用生物素与亲和素系统与ＭｃＡｂ建立的Ｍｃ－ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ技术，其灵敏性与放射免疫法（ＲＩＡ）相同，特异性好，稳定性优于ＲＩＡ。生物素标记抗体至少１年保持效价不变，是一种新的较理想的检测ｅ系统的方法之一。