高糖环境下脂联素对人心肌细胞增殖的影响

目的 体外高糖培养人心肌细胞(HCM)及运用脂联素(ADPN)干预以探讨HCM增殖的影响,以揭示脂联素对高糖环境中的心肌细胞的可能保护作用.方法 将HCM分为正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖)、脂联素组 (30.0 mmol/L+2.5 μg/mlADPN),分别培养24 h、48 h、72 h,运用MTT测定HCM的增殖情况.结果 ①在24 h高糖组与正常组比较人心肌细胞增殖有促进作用(P<0.05),而高糖组与脂联素组比较没有统计学差异(P>0.05).48、72 h高糖组与正常对照组比较细胞增殖受抑制(P<0.05).在加入脂联素后48、72 h脂联素组与高糖组比较细胞增殖增加,随时间的延长细胞增殖增加明显,有统计学差异(P<0.05).结论 脂联素可以促进HCM增殖,对高糖环境下心肌细胞有保护作用.     

脂联素对高糖环境下人心肌细胞增殖和凋亡的干预作用

目的探讨脂联素（Adiponectin,ADPN）对高糖环境下人心肌细胞增殖、凋亡的影响,揭示脂联素在糖尿病心肌病变中的保护作用。方法将人心肌细胞用5.5mmol/L葡萄糖（正常对照组）、30.0mmol/L葡萄糖（高糖组）、30.0mmol/L＋2.5μg/mlADPN（脂联素组）分别培养24h,48h,72h后,运用MTT方法检测细胞增殖,Westernblotting检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达,用荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS水平,观察细胞凋亡。结果①高糖组人心肌细胞增殖被抑制（P〈0.05）,ROS水平、细胞凋亡增加,并呈时间依赖性。②高糖组人心肌细胞,脂联素（2.5μg/ml）干预后,细胞增殖接近正常对照组,ROS水平下降,延缓了细胞凋亡。高糖环境下随着时间的延长,可引起心肌细胞增生肥大,诱导其凋亡;脂联素可促进细胞增殖,延缓细胞凋亡。     

脂联素对高糖环境下人肾小球系膜细胞增殖及氧化应激水平的影响

目的 探讨脂联素(Adiponectin,ADPN)对高糖环境下人肾小球系膜细胞(HMCs,human Mesangial Cells) 增殖及氧化应激水平的影响,揭示脂联素在糖尿病肾病中的保护作用.方法 ①体外培养HMCs:①将HMCs随机分为正常对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖)、脂联素组(30.0 mmol/L葡萄糖+2.5 μg/ml脂联素),分别培养24、48、72 h后,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组不同时间点HMCs的增殖情况.②将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 后运用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定细胞上清液中MDA及SOD的含量.③再将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 h,运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定HO-1 mRNA的表达,观察细胞氧化应激指标变化.结果 ①24 h高糖组与正常对照组比较细胞增殖无统计学差异(P>0.05),48、72 h两组比较,高糖组细胞增殖明显受抑制(P<0.05).加入脂联素促进细胞增殖,与高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05);②24、48、72 h高糖组MDA含量均升高,SOD含量及HO-1 mRNA的表达均下降,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05).加入脂联素后,观察上述氧化应激指标均得到明显改善,差异有统计学意义(P<0.05).结论长期高糖刺激抑制人肾小球系膜细胞增殖,外源性加入脂联素可促进细胞增殖.高糖组均引起氧化应激指标升高,加入脂联素可降低系膜细胞氧化应激水平,提示其对细胞起保护作用.     

高糖环境下脂联素对人肾小管上皮细胞增殖和Caspase-3的影响

目的探讨脂联素（Adiponectin,ADPN）对高糖环境下人近曲肾小管上皮细胞增殖、凋亡及T-钙黏蛋白（T-cadherin）表达的影响,揭示脂联素在糖尿病肾病中的保护作用。方法将人近曲肾小管上皮细胞用5.5mmol/L葡萄糖（正常对照组）、30.0mmol/L葡萄糖（高糖组）、30.0mmol/L＋2.5μg/ml ADPN（脂联素组）分别培养24h,48h,72h后,运用MTT法测定细胞增殖,运用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞上清液中Caspase-3的含量,观察细胞凋亡。结果①高糖组人近曲肾小管上皮细胞增殖被抑制（P〈0.05）,加入脂联素（2.5μg/ml）后促进了细胞增殖（P〈0.05）,并呈时间依赖性。②高糖组人近曲肾小管上皮细胞凋亡增加（P〈0.05）,加入脂联素（2.5μg/ml）后延缓了细胞凋亡。结论高糖环境下随着时间的延长,可引起肾小管上皮细胞增生肥大,诱导其凋亡;脂联素可促进细胞增殖,延缓细胞凋亡。     

脂联素对高糖环境下hRPE活性及VEGF mRNA表达的影响

目的观察脂联素对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞（hRPE）活性及血管内生长因子（VEGF）mRNA表达的影响,探讨脂联素对糖尿病视网膜病变（DR）可能具有的保护机制。方法①将hRPE随机分为对照组、高糖组、甘露醇组、脂联素组,培养48h后MTT法测定细胞活性。②再将hRPE分为对照组、高糖组、脂联素组,分别培养24、48、72h后用荧光定量PCR测定VEGF mRNA的表达。结果与对照组相比,甘露醇组细胞活性无明显改变（P〉0．05）,高糖组明显降低（P〈0．01）;加入脂联素后,细胞活性显著升高（P=〈0．01）。高糖组与对照组相比,mRNA表达明显上调,加入脂联素后表达呈时间依赖性下调,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论脂联素可以促进hRPE增殖,下调VEGF mRNA的表达。提示脂联素可通过下调hRPE VEGF mRNA的表达来抑制DR中病理性新生血管的形成。     

脂联素对高糖环境下肾小球系膜细胞转化生长因子β1及细胞间粘附分子1表达的影响

目的研究脂联素(ADPN)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞间粘附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法以培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为3组:正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖,NG组),高糖组(30mmol/L葡萄糖,HG组),高糖+不同浓度的脂联素组(30mmol/L葡萄糖,2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0μg/mlADPN)分别作用48h后,用ELISA法测定细胞内TGF-β1及ICAM-1表达。结果作用48h后,高糖明显上调细胞内TGF-β1及ICAM-1表达。加入低浓度脂联素对于TGF-β1、ICAM-1表达影响不大,而随着脂联素浓度的升高,TGF-β1及ICAM-1的表达明显下降,与高糖组相比,浓度为10～20mg/L的脂联素组TGF-β1及ICAM-1的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论中等以上浓度的脂联素能下调TGF-β1及ICAM-1表达,提示脂联素可能通过阻抑TGF-β1及ICAM-1表达起到抗纤维化,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用。     

高糖环境下HGF对肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1的影响

目的研究高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)的增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)的分泌、以及肝细胞生长因子(HGF)的干预作用。方法①将RMC分为3组:正常对照组;高糖组;高糖+HGF组(25.0mmol/L葡萄糖,50ng/mlHGF)。分别培养不同时间(12,24,48,72,96h)。运用MTT法测定细胞的增殖情况。②将RMC分为3组:正常对照组;高糖组;甘露醇对照组:(20.0mmol/L甘露醇)。分别于培养的12、24、48、96h收集细胞及上清夜,用ELISA法来检测TGF-β1分泌量。③将RMC分为:正常对照组;高糖组;高糖+HGF组(HGF浓度分别为25、50、100、200ng/ml)。分别培养48h后,用ELISA法测定此时TGF-β1分泌情况。以上各组正常组中葡萄糖浓度5.5mmol/L,高糖浓度25.0mmol/L。结果①25.0mmol/L高糖在24h促进RMC增殖,肝细胞生长因子(HGF)可以抑制细胞增殖。在48,72和96h高糖抑制细胞增殖。HGF对抗高糖对细胞增殖的抑制作用;而且呈时间依赖性。②高糖促进TGF-β1分泌,HGF可以抑制TGF-β1的分泌,且呈剂量依赖性。结论高糖刺激肾小球系膜细胞TGF-β1出现稳定高表达,而给予外源性的HGF后,系膜细胞TGF-β1的分泌减少,而且呈时间依赖性。     

二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β/ERK/MMP-9通路及上皮间质转化的影响

目的探讨二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法以0、7.5、15.0、30.0、60.0、120.0mmol/L二甲双胍作用48h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HK-2细胞活力以筛选合适的二甲双胍作用浓度;将体外培养的HK-2细胞分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高渗组(24.5 mmol/L甘露醇和5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+7.5 mmol/L二甲双胍)和高糖+15 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+15 mmol/L二甲双胍),倒置显微镜观察各组HK-2细胞形态,免疫印迹法(Western blotting)检测各组HK-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β(TGF-β)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化(p)-ERK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β、ERK、MMP-9 mRNA表达水平。结果与对照组相比,30.0、60.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显升高,120.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显降低(P0.05),而7.5、15.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力差异无统计学意义(P0.05);与对照组比较,高渗组细胞形态无明显改变,且细胞中α-SMA、E-cadherin、TGF-β、MMP-9蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平差异均无统计学意义(P0.05),但高糖组细胞失去原有形态变为长梭形,且细胞中α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显升高,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显降低(P0.05);与高糖组比较,高糖+7.5mmol/L二甲双胍组、高糖+15.0mmol/L二甲双胍组细胞形态由长梭形逐渐变成圆形或椭圆形,且α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显降低,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显升高(P0.05),且高糖+15.0 mmol/L二甲双胍组细胞上述指标变化幅度大于高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组。结论二甲双胍可抑制高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β/ERK/MMP-9通路活化有关。     

水飞蓟宾对高糖诱导人足细胞中VEGF表达的影响

目的 探讨水飞蓟宾对高糖诱导的体外培养人足细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养的人足细胞分为7组:正常糖(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)组、甘露醇对照(MN,甘露醇24.5mmol/L+葡萄糖5.5mmol/L)组、高糖(HG,葡萄糖30mmol/L)组、HG+低浓度水飞蓟宾(HG+LS,水飞蓟宾5 μg/ml)组、HG+中浓度水飞蓟宾(HG+MS,水飞蓟宾10μg/ml)组、HG+高浓度水飞蓟宾(HG+HS,水飞蓟宾20μg/ml)组、HG+二甲亚砜(HG+D,DMSO 1 mg/ml)组.各作用48 h后,RT-PCR半定量法及Western印迹法检测足细胞VEGF mRNA及蛋白表达水平.结果 体外培养人足细胞表达基础水平的VEGF,HG刺激48 h后足细胞VEGF基冈和蛋白表达均显著增加(P＜0.05);与HG组比较,加用5～20μg/ml水飞蓟宾均可抑制HG所诱导的VEGF基因和蛋白表达(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论 HG可使足细胞表达VEGF增加,水飞蓟宾可通过抑制HG诱导足细胞产生过多VEGF而具有潜在保护足细胞和防治糖尿病肾病的作用.     

脂联素对高糖环境下RPE细胞氧化应激及凋亡的影响

目的 通过高糖环境下培养人RPE细胞建立RPE细胞的氧化应激模型,观察脂联素对RPE细胞各氧化应激指标及凋亡的影响,从而揭示脂联素对RPE细胞可能的保护机制.方法 将体外培养的人RPE细胞分为3组:正常对照组、高糖组、高糖+脂联素组,分别干预24、48、72 h.在倒置显微镜下观察RPE细胞形态变化,采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量,用黄嘌呤氧化酶法检测SOD含量和活性,用荧光定量RT-PCR法测定p66Shc、Ho-1在各个时间点上的表达,通过流式细胞术检测RPE细胞的凋亡率.结果 与正常对照组相比,高糖组MDA含量显著上升,SOD含量显著下降(P<0.05),与高糖组相比,脂联素组MDA含量显著下降,SOD含量显著上升(P<0.05),并且呈时间依赖性.与正常对照组相比,高糖组Ho-1 mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达亦增高(P<0.05).与正常对照组相比,高糖组p66Shc mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达降低(P<0.05),呈时间依赖性.流式细胞术RPE细胞凋亡高糖组细胞凋亡率较正常对照组明显增加,而脂联素组细胞凋亡率较高糖组显著下降.结论 脂联素可通过减少p66Shc表达,从而减少线粒体ROS产生、增加Ho-1表达,增加抗氧化能力,减少氧化应激反应,减少细胞凋亡,对糖尿病RPE细胞起保护作用.     

替米沙坦对2型糖尿病大鼠心肌脂联素受体2葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的探讨替米沙坦对2型糖尿病大鼠心肌组织脂联素受体2(AdipoR2)及葡萄糖转运蛋白4(GluT4)表达的影响。方法30只雄性Wistar大鼠,随机分为3组:健康对照组(A组),糖尿病组(B组)和糖尿病替米沙坦治疗组(C组),每组各10只。采用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法诱导糖尿病模型。用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)的方法测定大鼠心肌AdipoR2mRNA、GluT4mRNA的表达,用免疫组织化学法检测AdipoR2蛋白在心肌组织中的表达,用放射免疫法检测血浆脂联素水平。结果与A组比较,B组糖尿病大鼠心质量/体质量增加,血浆脂联素水平、心肌AdipoR2mRNA和蛋白表达以及GluT4mRNA表达均显著降低。替米沙坦治疗后,C组糖尿病大鼠心质量/体质量降低,血浆脂联素水平、心肌AdipoR2mRNA和蛋白表达以及GluT4mRNA表达均显著升高。结论2型糖尿病大鼠心肌AdipoR2及GluT4表达水平降低。替米沙坦上调2型糖尿病大鼠心肌AdipoR2及GluT4表达,促进心肌葡萄糖氧化,减轻心脏肥大,产生心脏保护作用。     

白藜芦醇通过Toll样受体4通路对高糖致H9C2心肌细胞损伤的作用研究

目的研究白藜芦醇通过Toll样受体4(TLR4)通路对高糖致H9C2心肌细胞损伤的保护作用。方法 100 mmol/L高糖处理H9C2心肌细胞48 h以建立H9C2心肌细胞高糖损伤模型,实验分为对照组、高糖处理组、白藜芦醇+高糖处理组,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,CCK8检测细胞增殖,AnnexinV/PI检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测TLR4蛋白的表达水平。结果高糖处理组较对照组LDH、MDA、TLR4表达明显升高,SOD明显降低,细胞增殖被抑制,细胞凋亡不明显;白藜芦醇预处理后LDH、MDA明显下降,TLR4表达有所降低,细胞增殖和细胞凋亡有所改善。结论高糖心肌损伤可引起TLR4表达增加,白藜芦醇可能在一定程度上通过抑制TLR4表达对糖尿病心肌细胞发挥保护作用。     

高糖波动对MG63细胞株护骨素与TRAIL表达的影响

目的研究波动性葡萄糖和恒定高葡萄糖对MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）、护骨素（osteoprotegerin,OPG）和其配体（osteoprotegerin ligand,OPGL）表达的影响,探讨高糖波动在糖尿病性骨质疏松症发病中的作用。方法体外培养的人成骨肉瘤MG63细胞株,随机分为正常对照组（NG组,葡萄糖浓度为5.5 mmol/L）;恒定高葡萄糖组（HG组,葡萄糖浓度为33.3 mmol/L）;波动性葡萄糖组（FG组,葡萄糖浓度为5.5 mmol/L与葡萄糖浓度为33.3 mmol/L两种培养液,每8 h更换一次）,共作用24 h。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率。RT-PCR法检测TRAIL、OPG、OPGL mRNA的表达。结果①高糖及高糖波动可抑制MG63细胞的增殖,与HG组相比,FG组的抑制效应更加明显。②高糖及高糖波动可阻滞MG63细胞周期,使G1期细胞比例增加,S期比例减少,诱导细胞凋亡。FG组作用更加明显（P〈0.05）。③高糖作用下MG63细胞中TRAIL和OPGL基因表达增加,而OPG基因表达下降,FG组较HG组上述作用更加明显（P〈0.05）。结论高糖波动可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少,抑制成骨细胞增殖,阻滞其细胞周期,诱导细胞凋亡,可能是糖尿病性骨质疏松症的一个重要的发病机制。     

高糖对人肾近端小管细胞TGF-βmRNA表达的影响

目的 观察高糖对人近端肾小管细胞(HPTC)转化生化因子(TGF-β)mRNA表达的影响以及血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)受体1拮抗剂Irbesartan(Irb)对其干预作用。方法 无血清培养HPTC后，(1)用不同浓度葡萄糖(5．5、22．2、30、40mmol／L)培养48h，(2)用高糖(22．2MMol／L)培养6、12、24、48、72h，(3)高糖培养液中加入不同浓度的Irb(10^-3、10^-5、10^-7mol／L)作用48h；采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定HPTC表达TGF-βmRNA的水平变化。结果 高糖能促进HPTC TGF-βmRNA的表达，且呈浓度和时间依赖性。Irb能部分降低高糖诱导HPTC TGF-βmRNA的表达，且呈剂量依赖性。结论 高糖可刺激肾小管细胞表达TGF-β增加，并可能与激活局部肾素血管紧张素系统有关。     

黄荆子木脂素3对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及对蛋白激酶Akt、ERK1/2信号通路的影响

目的:研究黄荆子木脂素3对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,及其与丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的关系。方法:以人肝癌HepG2细胞为研究对象,采用MTT法检测空白对照组和0.1、0.3、1.0、3.0、10.0、30.0μmol/L黄荆子木脂素3组(n=3)细胞作用48h后的增殖抑制率;采用细胞计数法检测黄荆子木脂素3(10.0μmol/L)组、5-氟尿嘧啶(5-FU,10.0μmol/L)组、溶媒(含0.1%二甲基亚砜的完全培养基)组、空白对照组(n=3)细胞作用24、48、72h后的活细胞数量;采用蛋白印迹法检测溶媒组、黄荆子木脂素3(10.0μmol/L)组、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY294002(10.0μmol/L)组及其混合组(n=3)细胞作用24h后的磷酸化(p-)Akt和p-ERK1/2蛋白表达。结果:与空白对照组比较,1.0～30.0μmol/L黄荆子木脂素3组对细胞的抑制率明显升高(P<0.01);与溶媒组和空白对照组比较,黄荆子木脂素3组作用不同时间的活细胞数量均明显减少(P<0.01);与5-FU组比较,黄荆子木脂素3组作用72h后的活细胞数量明显增加(P<0.01);与溶媒组比较,黄荆子木脂素3组、LY294002组及其混合组细胞内p-Akt和p-ERK1/2蛋白表达均明显降低(P<0.01),但后3组间差异无统计学意义。结论:黄荆子木脂素3呈浓度和时间依赖性抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能与抑制Akt、ERK1/2蛋白磷酸化水平有关。     

丝裂霉素联合塞来昔布对膀胱癌T24细胞增殖的影响研究

目的:研究体外丝裂霉素(MMC)联合塞来昔布对浅表性膀胱癌T24细胞增殖的影响及其可能机制。方法:体外培养浅表性膀胱癌T24细胞,分为MMC[0(对照组)、2、5、10、25、50μmol/L]组及其与塞来昔布(50μmol/L)混合组,每个浓度5个复孔,采用MTT法检测作用24h后细胞的增殖抑制率。采用免疫组化法、实时定量聚合酶链式反应法、酶联免疫吸附测定法检测对照组、MMC(50μmol/L)组和混合[塞来昔布+MMC(50μmol/L)]组作用48h细胞中Bcl-2蛋白、作用24h细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达及作用96h内VEGF蛋白浓度。结果:MMC能明显抑制细胞增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性;塞来昔布能明显增强MMC对细胞的增殖抑制作用(P<0.05);与对照组比较,MMC组和塞来昔布+MMC组细胞中Bcl-2蛋白、VEGF mRNA表达均明显降低(P<0.05),且后2组组间比较有统计学差异(P<0.05);塞来昔布+MMC组细胞中VEGF蛋白浓度随作用时间延长明显降低(P<0.01)。结论:塞来昔布可协同增强MMC抑制T24细胞增殖的作用,其机制可能与降低Bcl-2、VEGFmRNA表达水平和抑制细胞分泌VEGF蛋白作用有关。     

α-硫辛酸对高糖 高同型半胱氨酸诱导的小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨α-硫辛酸对高糖、高同型半胱氨酸(Hcy)作用下小鼠足细胞凋亡及Nephrin mRNA表达的影响。方法将体外培养的足细胞用高糖(25mmol/L)、Hcy(1mmol/L)、α-硫辛酸(0.5mmol/L)干预,分别在干预24、48、72h时收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Nephrin mRNA表达。结果 24h时,高糖组、高Hcy组及混合组未见明显细胞凋亡(P>0.05);48h时,上述3组可见明显的细胞凋亡,且混合组凋亡更加明显(P<0.01);72h时,上述差异更加明显(P<0.01);α-硫辛酸可对抗高糖、高Hcy引起的足细胞凋亡(均P<0.05),且有一定的时间依赖性;高糖、高Hcy环境下,足细胞Nephrin mRNA表达呈下降趋势,且有一定的时效性;α-硫辛酸可对抗上述趋势。结论α-硫辛酸可减弱高糖、高Hcy对足细胞促凋亡作用,还可对抗其下调Nephrin mRNA的表达。     

高糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞中c-fos的影响研究

目的观察高糖作用人脐静脉内皮细胞时c—fos基因mRNA和蛋白的表达的变化。方法提取并体外培养人脐静脉内皮细胞,分别加入不同浓度葡萄糖（5．5mmol/L、11mmol/L、22mmol/L、44mmol/L）并分别作用不同时间,应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测c—fos基因mRNA的表达,免疫细胞化学检测c—fos蛋白表达。结果经高糖处理的人脐静脉内皮细胞中,c—fos基因mRNA的转录水平明显高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。但是脐静脉内皮细胞经22mmol/L葡萄糖作用1h,c—fos基因的mRNA水平不再升高,而呈下降趋势（P〈0．05）。经22mmol/L葡萄糖作用2h后,c—fns蛋白表达达到最高峰。结论高糖能引起脐静脉内皮细胞c—fosmRNA和蛋白表达增高。     

硝化应激在高糖致心肌细胞损伤记忆效应中的作用

目的观察体外高糖因素对心肌细胞的损伤是否存在"代谢记忆"效应,并探讨硝化应激在此效应中的作用。方法将培养的心肌细胞分为四组:正常糖组(NG,5.5mmol/L D-葡萄糖×8d)、高糖组(HG,25mmol/L D-葡萄糖×8d)、记忆组(M,25mmol/L D-葡萄糖×4d+5.5mmol/LD-葡萄糖×4d)和记忆+氨基胍组(MA,25mmol/L D-葡萄糖×4d+5.5mmol/L D-葡萄糖×4d+0.5mmol/L氨基胍)。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达并进行半定量分析,ELISA法检测3-硝基酪氨酸(3-NT)含量。结果与NG组相比,HG组和M组细胞存活率下降(P<0.05),凋亡率上升(P<0.05),iNOS表达和3-NT含量增多(P<0.05)。与M组相比,MA组细胞存活率上升(P<0.05),凋亡率下降(P<0.05),iNOS表达和3-NT含量减少(P<0.05)。结论高糖致心肌细胞损伤存在"代谢记忆"效应,且硝化应激可能参与了此效应。     

高糖环境对小鼠肝脏枯否细胞增殖及分泌功能的影响

目的：探讨高糖环境下枯否细胞( kupffer cells, KCs)增殖及分泌功能的变化。方法将小鼠原代KCs培养扩增后,参照文献随机分为正常对照组(11.1 mmol/L D-葡萄糖)、低糖组(5.6 mmol/L D-葡萄糖)、中糖组(12.5 mmol/L D-葡萄糖)和高糖组(25.0 mmol/L D-葡萄糖),培养24、48和72 h后,血球计数板进行细胞计数,流式细胞仪检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖,并收集细胞上清液,应用Luminex xMAP技术检测肿瘤坏死因子-α( tumornecrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β( interleukin-1β, IL-1β)和 IL-6水平。结果培养24、48和72 h时,高糖组和低糖组KCs扩增数量、OD值明显低于对照组和中糖组(P<0．01,P<0．05)。培养24 h时高糖组和低糖组G0/G1期明显高于对照组和中糖组,S期和G2/M期明显低于对照组和中糖组(P<0．01)。培养24、48和72 h时高糖组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显低于对照组(P<0．05)。结论高糖环境下KCs活性明显下降,增殖及分泌功能受到抑制。