TLR9对胰腺癌裸鼠增殖生长及化疗耐药性的研究

目的 观察TLR9在不同的活化状态下对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长及药物抗性的影响.方法 建立人胰腺癌PANC-1细胞裸鼠移植肿瘤模型,并随机分为6组:无菌生理盐水组、TLR9激动剂、TLR9抑制剂组、吉西它滨组、TLR9抑制剂+吉西它滨组、TLR9激动剂+吉西它滨组进行实验.游标卡尺记录肿瘤体积大小及生长情况,采用免疫组化方法检测肿瘤TLR9受体表达情况,核磁共振成像(MRI)观察肿瘤生长、转移及周围组织侵犯情况.结果 吉西他滨组、TLR9激动剂+吉西它滨组、TLR9抑制剂+吉西它滨组肿瘤摘除后体积及生长速度明显小于其他组(P＜0.05),TLR9激动剂+吉西它滨组生长速度及肿瘤摘除后体积明显大于TLR9抑制剂+吉西它滨组及吉西他滨组(P＜0.05),TLR9抑制剂+吉西它滨组与吉西他滨组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),TLR9激动剂组、TLR9抑制剂组及生理盐水组差异无统计学意义(P＞0.05).种植后7周小鼠在MRI下观察,瘤成椭圆形,境界清楚,周围组织未见明显转移及对周围组织的侵犯;检测肿瘤组织中并鉴定表面明确有TLR9的表达.结论 胰腺癌裸鼠移植瘤中确有TLR9的阳性表达,TLR9的激活可以明显降低胰腺癌对吉西他滨化疗的敏感性,增加肿瘤的耐药性,相反促进肿瘤生长.     

用裸鼠模型研究肿瘤生物学行为

应用裸鼠模型进行人肿瘤生物学研究,极大地丰富和增进人们对肿瘤进展的认识,目前已成为研究人肿瘤在体内生物学行为的重要途径。     

OVA基因修饰的树突状细胞疫苗抗裸鼠肺肿瘤效应研究

目的 探讨OVA基因修饰的树突状细胞疫苗(DC-OVA)在肿瘤模拟抗原OVA(ovabumin)的裸鼠肺癌模型体内抗肺肿瘤的效应。方法 裸鼠右肺原位接种携带OVA的Lewis肺癌细胞(Lewis lung cancer cell-OVA, LLC-OVA)悬液,建立裸鼠肺癌模型。获取DC,经基因转导制备DC-OVA疫苗。Western 印迹法检测OVA蛋白的表达。获取T细胞,进而制备DC疫苗系统(DC-OVA/T)。CCK8试剂检测DC-OVA刺激后T细胞的增殖。模型建立2周后,尾静脉注射DC-OVA/T。Micro-CT扫描荷瘤裸鼠的胸部,观察肺部影像。H-E染色观察肺部及肿瘤组织形态结构。IHC方法观察脾、淋巴结、肿瘤组织中CD8的表达;观察肿瘤组织中SOX2、BMI1的表达。ELISA法检测血清中IL-12水平。结果 Western印迹法在样本中检测出清晰的OVA条带。DC-OVA强有效地刺激了T细胞的增殖(P<0.05)。DC-OVA/T治疗4周,疫苗组裸鼠肺micro-CT未见明显肿瘤阴影;取材,裸眼可见疫苗组病灶减小,H-E染色显示疫苗组的肿瘤组织较少,肺组织形态较完整。疫苗组裸鼠的脾、淋巴结、肿瘤组织内CD8阳性表达均明显高于对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.01),肿瘤组织中的SOX2、BMI1阳性表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.05);血清中的IL-12含量较对照组明显升高(P<0.001)。结论 基因修饰的DC疫苗在裸鼠体内具有强大的抗肺癌效应,为临床治疗肺癌提供了新的实验依据。     

RGS22抑制裸鼠中人胃癌SGC-7901细胞转移的研究

目的探讨RGS22对人胃癌SGC-7901细胞在裸鼠体内转移的影响。方法将人RGS22基因克隆到逆转录病毒表达质粒LZRsPBMN中,构建重组质粒LZR-RGS22。以GFP为对照构建LZR-GFP。转染人胃癌SGC-7901细胞,Western blot法检测不同细胞中RGS22的表达。设计不同针对RGS22的RNAi片段和对照RNAi,将其构建入pSilenc-er2.1-U6 neo siRNA载体中,转染SGC-7901-LZR-RGS22细胞。RT-PCR法检测不同细胞中RGS22的表达。将不同组细胞注射于裸鼠腹腔内,观察不同肿瘤细胞的转移情况。结果 SGC-7901-LZR-RGS22细胞中146、112和76 ku片段RGS22蛋白表达较对照SGC-7901-LZR-GFP细胞表达均明显提高。RNAi 484片段和3313片段对RGS22的表达均有抑制作用。在裸鼠肿瘤转移实验中,RGS22能抑制SGC-7901肿瘤细胞向远处器官的转移,当其表达下调后,这种抑制效应又变弱。结论 RGS22能够抑制人胃癌SGC-7901在裸鼠中的转移。     

树突状细胞诱导肺癌特异性免疫应答治疗裸鼠移植瘤的实验研究

目的 利用树突状细胞递呈肿瘤抗原的能力诱导出肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),用其治疗人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤.方法 外周血单个核细胞体外经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4诱导产生树突状细胞,负载A549肺癌细胞裂解物诱导自体CTL,经细胞毒试验和EUSA测定CTL杀伤活性和细胞因子的分泌.同时制备荷瘤裸鼠模型,不同分组裸鼠一次或多次皮下注射CTL.结果 A549冻融抗原能促进CTL增殖,可诱导产生CTL对A549细胞的特异杀伤,在效靶比为40∶1时杀伤率可达79.6%;一次接种后荷瘤裸鼠肿瘤生长减缓,多次接种肿瘤明显缩小且生存时间较对照组显著延长,具有明显的保护作用.结论 树突状细胞能有效递呈肺癌冻融抗原,诱导产生具有一定治疗功效的抗肿瘤特异性CTL,提示临床应用以树突状细胞为基础的肺癌疫苗免疫治疗具有广阔前景.     

大黄素对裸鼠体内 K562 细胞移植瘤的抑制作用及其与调控Caspase3 和 Caspase9 表达的关系

目的 探讨大黄素对 K562 细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与 Caspase3 和 Caspase9 表达变化的关系。方法 建立裸鼠 K562 细胞皮下移植瘤模型,随机分为大黄素低、中、高剂量 (25、50、100 mg/kg) 3 个实验组,以及模型组和羟基脲 (120 mg/kg) 阳性对照组,每组 5 只,ip 连续给药 12 d,测量各组裸鼠肿瘤体积,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用 HE 染色光镜和透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡情况,应用 RT-PCR 检测肿瘤组织中 caspase-3 和 caspase-9 mRNA 表达水平。Western blotting 法检测肿瘤组织中 proCaspase3 和 proCaspase9 蛋白的表达。结果 大黄素低、中、高剂量组肿瘤相对体积 (RTV) 分别为 5.23±0.24、4.38±0.17、3.57±0.31;与模型组 (10.45±0.47) 相比,大黄素处理组肿瘤体积明显缩小,具有统计学意义 (〖WTBX〗P〖WTBZ〗＜0.01)。光镜和电镜结果表明大黄素能够诱导 K562 细胞发生明显的凋亡。RT-PCR 结果表明不同剂量的大黄素能够引起 caspase-3 和 caspase-9 mRNA 的表达上调且有剂量依赖性。与模型组相比,大黄素处理组的 proCaspase-3 和 proCaspase-9 蛋白均出现明显的下调。结论 大黄素能够明显抑制人 K562 细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与激活 Caspase-3 和 Caspase-9 信号转导通路有关。     

Th9细胞在肿瘤发生机制中的作用

Th9细胞是近年来发现和证实的辅助性T淋巴细胞亚型,由IL-4和TGF-β共同诱导产生,不参与Th2型细胞反应,也不具有免疫下调功能,其产生两种专一的、有着相反免疫效应的细胞因子,即IL-9和IL-10.近年来发现Th9细胞在激发炎症反应、参与变应性疾病和自身免疫性疾病中发挥重要作用;Th9细胞水平及其分泌的相关细胞因子在肿瘤的发生机制中也起到一定的作用,但其在肿瘤中的确切作用还需要深入的研究来验证.本文就Th9细胞对肿瘤发生机制的最新研究进展作一综述和展望.     

去甲斑蝥素对裸鼠荷人胆囊癌移植瘤增殖和生长的抑制作用

目的　研究去甲斑蝥素对裸鼠人胆囊癌移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法　通过建立人原发性胆囊癌动物模型 ,应用去甲斑蝥素对裸鼠人胆囊癌移植瘤的增殖、生长进行药物对比抑制实验 ,观察、测定裸鼠移植瘤瘤体改变、抑瘤率和细胞凋亡率 ,并绘制生长曲线。结果　去甲斑蝥素的半数致死量 (LD5 0 )是 13 9.96mg·kg- 1,应用其 1/5LD5 0 剂量 ,即可使裸鼠移植瘤瘤体明显变小 (5.61± 0 .3 9vs. 9.78± 0 .61cm3 ,P <0 .0 5) ,抑瘤率达 42 .63 % ,瘤细胞凋亡率明显上升。结论　去甲斑蝥素对裸鼠人胆囊癌移植瘤的增殖和生长有明显的抑制作用     

人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的建立

目的　探讨建立人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的方法。方法　人卵巢癌细胞株 3AO和顺铂耐药细胞株 3AO/cDDP细胞体外培养。 4× 10 6个 3AO、3AO/cDDP分别接种于裸鼠腹腔 96h后 ,各随机分为 2组 ,分别腹腔内注射生理盐水和顺铂 (cDDP) ,观察各组裸鼠的致瘤率、生存期和生存延长率。采用流式细胞技术观察转移瘤LRP、MRP基因的表达情况。转移瘤瘤体行病理学检查。结果　 3AO、3AO/cDDP细胞的裸鼠致瘤率差异无显著性 ,P >0 .0 5 ;cDDP能提高 3AO荷瘤鼠的生存期及生存延长率 ,与 3AO/cDDP荷鼠相比 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ;3AO/cDDP转移瘤的LRP、MRP基因的表达水平显著高于 3AO转移瘤 ,P <0 .0 5 ;病理学检查提示裸鼠腹腔转移瘤细胞具人恶性特征。结论　该方法建立裸鼠卵巢癌腹腔转移模型具有成瘤率高的特点 ,并能保持顺铂耐药特征。     

SW-480裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的：建立生物学特性稳定的结肠高分化腺 裸小鼠移植瘤模型。方法：建立人结肠高化化腺瘤细胞株ＳＷ－４８０裸小鼠移植瘤模型，并确定移植瘤生长情况、组织学变化及细胞动力学改变等生物学特性。结果：移植瘤体内传代稳定，潜伏期７～８ｄ；保留了结肠腺癌的组织学特征；细胞动力学检测显示以四倍体细胞为主；移植瘤细胞具有分泌ＣＥＡ的功能。结论：本移植瘤模型地一个生物学特性较稳定的人结肠高分化腺癌裸小鼠移植瘤模型。     

Th9细胞在炎症性疾病及肿瘤中作用的研究进展

辅助性T细胞(helper T cell,Th)9细胞是近年新发现的一种CD4+T细胞亚群,特异性分泌白细胞介素9(IL-9)。Th9细胞的诱导分化受到多种细胞因子与转录因子的影响,且与其他T细胞亚群间存在相互影响。IL-4和转化生长因子β是诱导其分化的关键细胞因子,PU.1和干扰素调节因子4为调节其分化的重要转录因子。Th9细胞在炎症性疾病与肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用,其生物学效应具有双向性,研究Th9细胞的分化发育及其在相关疾病中的具体作用,将为疾病的诊断治疗等提供新的线索。     

小细胞肺癌患者外周血中Th9细胞水平检测及其临床意义

目的: 检测小细胞肺癌(SCLC)患者血清中白细胞介素9(IL-9)的水平和外周血中Th9的细胞比例,探讨Th9在SCLC疾病进展过程中的作用。方法: 选择20例局限期SCLC患者(局限期SCLC组)、16例扩散期SCLC患者(扩散期SCLC组)和10名健康对照者(健康对照组)。ELISA法检测各组研究对象血清中IL-9水平,流式细胞术检测各组研究对象外周血Th9细胞在CD4⁺T细胞中所占比例。结果: SCLC组患者外周血中Th9细胞比例高于健康对照组(t=3.731,P<0.01),局限期SCLC患者外周血中Th9细胞比例低于扩散期SCLC组(t=2.825,P<0.01)。SCLC组患者血清IL-9水平高于健康对照组(t=4.001,P<0.01),局限期SCLC组患者血清中IL-9水平低于扩散期SCLC组(t=3.089,P<0.01);结论: Th9可能通过分泌IL-9直接促进SCLC的疾病进展,外周血中Th9细胞和IL-9可能成为评价小细胞肺癌的分子标志。     

薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤转移的抑制作用

目的：探讨薏苡仁酯（coixenolide,CXL)对实验性鼻咽癌转移的抑制作用。方法：采用裸鼠移植瘤淋巴转移模型观察CXL的药效,MTT法检测该药物对免疫功能的影响。结果：CXL以量效方式抑制人鼻咽癌细胞CNE－2Z的转移,累积ID50为10^-3.282mol/kg,与接种部位“原发瘤”的缩小相一致（累积50=10^-3.387mol/kg)。组织学检查可见,CNE－2Z的侵袭能力降低,与淋巴结转移率下降同步。同时CXL能促进荷瘤小鼠NK细胞活性的恢复。结论：CXL能拮抗CNE－2Z的淋巴道转移,其机理可能与直接抑制及提高免疫力有关。     

BAC_5单抗的制备及其在鼻咽癌细胞上的反应

ＢＡＣ＿５单抗的制备及其在鼻咽癌细胞上的反应肖锡宾，张昌卿，刘长征，冯凯涛，孙韵，叶永照，李经略（１中山医科大学肿瘤医院中心实验室，广州，５１００６０；２中山医科大学核医学教研室）主题词鼻咽肿瘤／病理学，单克隆抗体，裸鼠中国号７３９．６３为了研究鼻咽...     

辛伐他汀裸鼠体内诱导K562细胞凋亡的分子机制

目的:探讨不同剂量的辛伐他汀处理裸鼠体内K562细胞的信号通路的分子变化,以说明辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:体外培养K562细胞并经皮下接种Balb/c-nu/nu裸小鼠K562细胞,构建裸小鼠的K562细胞动物模型.采用缺口末端标记技术TUNEL法检测辛伐他汀诱导K562细胞早期凋亡的变化.采用RT-PCR检测K562细胞中Ras分子和PI3K-AKT信号通路的n-ras,pi3k,akt1,nf-κb1 mRNA的差异表达.结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P＜0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起n-ras,pi3k,akt1,nf-κb1 mRNA的表达差异(P＜0.01).结论:辛伐他汀能够引起参与K562细胞凋亡的Ras 分子和PI3K-AKT信号通路的基因变化,从一定的角度说明辛伐他汀在体内能够诱导K562细胞凋亡.     

肿瘤抗原负载DC激活的CTL对裸鼠移植瘤作用的研究

目的研究负载人喉癌细胞系Hep一2冻融抗原的树突状细胞（DC）体外活化的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）在裸鼠Hep一2移植瘤发生、发展中的作用。方法以健康人外周血贴壁单核细胞体外诱导DC并负载Hep一2冻融抗原,经MTT法检测其激活的同基因型T淋巴细胞在体外对Hep-2的杀伤活性后,将此Hep一2特异性CTL预防性接种于裸鼠皮下（预防组6只,对照组16只）,3天后接种Hep-2,观察其移植瘤的发生率：再将此CTL分以1次、2次治疗性接种于已荷瘤裸鼠皮下（对照组6只;治疗组和加强治疗组各5只）,观察移植瘤的生长情况。结果预防组Hep一2移植瘤的发生率明显低于对照组（预防组33％,对照组00％,P=0．0002）;治疗组与加强治疗组裸鼠荷瘤体积明显小于对照组（P〈0．05,P〈0．01）,且加强治疗组裸鼠荷瘤体积明显小于治疗组（P〈0．05）。结论负载Hep一2冻融抗原的DC活化的CTL不仅能预防裸鼠Hep一2移植瘤发生而且能抑制其移植瘤的生长。