阿维A酸诱导皮肤鳞癌细胞凋亡及对caspases蛋白的影响

目的 探讨阿维A酸对人皮肤鳞癌细胞系SCC13细胞的生长抑制、凋亡的诱导作用以及对caspases蛋白的影响.方法 以体外培养的人皮肤鳞癌细胞系SCC13细胞为研究对象,采用MTT法观察5种浓度(5×10-7、1×10-6、5×10-6、1×10-5、5×10-5moL/L)阿维A酸对SCC13细胞的生长抑制作用.ELISA检测凋亡的诱导情况.流式细胞仪检测细胞周期.Western blot分析caspase-8和caspase-9的蛋白表达.结果 阿维A酸能显著抑制人皮肤鳞癌细胞的生长(第1、3、5天F值分别为83.64、96.34和123.17)、诱导其凋亡(第1、3、5天F值分别为74.45、107.37和64.28),具有浓度及时间依赖性(P均<0.05).阿维A酸能将细胞周期阻滞于G1期,作用SCC13细胞72 h后,G1期细胞比率明显上升为77.05%,而对照组仅为63.55%.阿维A酸作用SCC13细胞12 h后开始活化caspase-8蛋白,24 h后开始活化caspase-9蛋白,并具有时间依赖性(P均<0.01).结论 阿维A酸能抑制皮肤鳞癌细胞生长并诱导凋亡,这一效应可能由Fas死亡受体和线粒体途径共同介导.     

9顺维甲酸、全反式维甲酸诱导肺腺癌细胞株PG分化与凋亡的比较研究

维甲酸类化合物 (retinoids,RA)有调控细胞生长、分化、凋亡的重要作用。RA在体内的生理活性代谢产物包括全反式维甲酸 (ATRA)、1 3 顺维甲酸 (1 3 cis RA)和 9 顺维甲酸 (9 cis RA)。ATRA能抑制支气管上皮细胞的生长和鳞状分化 ,但体外实验表明大多数人肺癌细胞株对ATRA有显著的抗性作用。 9 cis RA比ATRA作用更广泛 ,副作用更小而倍受瞩目[1 3 ] ,为了解ATRA和 9 cis RA对肺癌细胞生长和分化的影响 ,我们比较了 9 cis RA和全反式维甲酸对肺腺癌细胞PG株细胞周期和凋亡的影响。1　材料与方法1 .1　材料　 9 cis RA、胎牛…     

全反式维A酸诱导U937细胞分化的研究

目的:探讨全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导U937细胞分化的可能机制。方法:以急性单核细胞性白血病细胞株U937细胞为体外模型,以细胞表面分化抗原CD11b、四唑氮蓝(nitro-blue tetrazolium,NBT)还原实验和形态学观察,评估细胞分化。应用蛋白印迹法,检测ATRA对C/EBPβ、C/EBPε和PU.1蛋白表达水平的影响。结果:MEK特异性抑制剂U0126预处理不影响ATRA诱导U937细胞分化。蛋白印迹检测显示,ATRA可提高PU.1、C/EBPβ和C/EBPε蛋白水平。结论 :ATRA诱导U937细胞分化可能与PU.1、C/EBPβ、C/EBPε的蛋白表达调控相关,而并不涉及MEK-ERK信号转导途径。     

全反式维A酸诱导的部分分化的白血病细胞具有去分化能力

目的:观察人急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞系NB4细胞株经全反式维A酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导分化作用后,部分分化的白血病细胞的去分化能力。方法 :采用1μmol/L的ATRA处理NB4细胞48 h、72 h、96 h、120 h、168 h、216 h、288 h、336 h后,并通过瑞氏染色观察细胞形态学,流式细胞术检测CD11b的表达,用单克隆形成实验分别检测分化细胞的核型及撤药后各时间点单个CD11b+细胞的克隆形成能力,用蛋白印迹法观察细胞PML/RARα、RARα及PU.1等蛋白的表达变化。结果:NB4细胞CD11b的表达水平在ATRA处理48 h后达到高峰,之后稳定表达;ATRA处理后,NB4细胞中成熟中性粒细胞的比例也随处理时间的延长而增加,ATRA处理120 h比处理96 h,成熟中性粒细胞的比例有明显的增加(P<0.01)。结论:人类APL系NB4细胞经ATRA诱导后发生不同程度的分化,在撤去ATRA后,处于部分分化阶段的白血病细胞仍能通过"去分化"而重新获得无限增殖的特性。     

藤黄酸诱导SPC-A-1肺腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的研究藤黄酸(GA)对SPC-A-1肺腺癌细胞的生长抑制作用及诱导肺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法应用改良的MTT法及流式细胞术分别检测GA对SPC-A-1的生长抑制作用及诱导肺癌细胞凋亡的作用,并通过Western-blotting检测不同浓度的GA作用SPC-A-1细胞后Caspase9、Caspase10及p53蛋白表达的变化。结果GA对SPC-A-1细胞有明显的生长抑制作用,GA对其有显著的促凋亡作用。Caspase9、Caspase10及p53都参与了GA诱导的肺腺癌细胞凋亡,且随着GA浓度的增大,Caspase9、Caspase10及p53蛋白的表达均上调。结论GA对SPC-A-1有明显的生长抑制作用,具有显著的促SPC-A-1肺腺癌细胞凋亡作用,其分子机制可能与上调凋亡起始酶Caspase9、Caspase10及促凋亡蛋白p53的表达有关。     

9-顺维甲酸诱导肺癌细胞凋亡的流式细胞术检测

Rb基因是一种抑癌基因 ,cyclinD刺激CDK4介导Rb的磷酸化作用而导致细胞转化。维甲酸类化疗药物作为分化诱导剂可诱导调控细胞凋亡 ,而 9 顺维甲酸 (9 cisRA)的生物学活性强于其他维甲酸类化合物[1 2 ] 。本实验运用流式细胞技术检测细胞内cyclinD1及Rb的表达率 ,并通过细胞周期倍体分析 ,观察其凋亡的发生率 ,探讨 9 cisRA诱导肺癌细胞株凋亡与cyclinD1和Rb表达的相关关系 ,为 9 cisRA临床治疗肺癌提供实验依据。1　材料与方法1.1　主要试剂　 9 cisRA由Sigma公司提供 ;FITC标记cyclinD1单抗、Rb单抗及破膜剂均由PharMingen公司…     

全反式维A酸治疗急性早幼粒细胞白血病相关副反应的临床观察

全反式维A酸 (ATRA)自从应用于诱导分化治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL)以来 ,因其疗效好 ,完全缓解 (CR)率高 ,且具有治疗中不诱发弥漫性血管内凝血 (DIC)及无骨髓抑制等优点 ,目前已成为诱导缓解APL的首选药物之一[1] 。但随着ATRA临床应用的不断扩大 ,其副反应也渐被重视 ,特别是它的一些严重副反应如高白细胞综合征、维A酸综合征 (RAS)和高颅压综合征等若处理不当常危及患者生命。为加深对ATRA治疗相关副反应的认识 ,减少其在临床上的发生 ,进一步改善APL预后 ,我们对我院 36例初诊APL患者在服用ATRA诱导分化治疗过程中…     

依曲替酸上调Fas、FasL诱导皮肤鳞癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨依曲替酸通过上调Fas、FasL基因表达诱导皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）细胞系SCC13细胞凋亡的作用。方法：以体外培养的人皮肤鳞癌细胞系SCC13细胞为研究对象,采用酶联免疫分析法（ELISA）、AnnxinV-FITC/PI法检测凋亡的诱导情况。用实时荧光定量RT-PCR方法检测Fas、FasL mRNA的表达。用Fas中和抗体ZB4检测Fas、FasL在依曲替酸诱导SCC13细胞凋亡中的作用。结果：依曲替酸能诱导SCC13细胞凋亡,并具有浓度及时间依赖性。依曲替酸能上调肿瘤细胞内Fas、FasL mRNA表达水平。单独应用依曲替酸的早期凋亡率为（16.76±1.04）%,与ZB4共同处理SCC13后,早期凋亡率下降为（7.12±0.85）%,ZB4显著阻断依曲替酸诱导的凋亡（P〈0.05）。结论：依曲替酸能诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡,其机制可能与Fas死亡受体信号转导途径有关。     

维甲类化合物Ro13-7410对HL-60细胞凋亡及分化诱导作用

目的：观察第三代维甲类化合物（Ｅ）４［２５，６，７，８ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ５，５，８，８ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ２ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｙｌ１ｐｒｏｐｅｎｙｌ］ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ（Ｒｏ１３７４１０）对人白血病细胞系ＨＬ６０的影响。方法：应用剂量反应曲线，台盼蓝排斥法，光镜、电镜，凋亡细胞检测试剂盒以及硝基四氮唑蓝还原能力等测定观察Ｒｏ１３７４１０对ＨＬ６０细胞的作用。结果：Ｒｏ１３７４１０能明显抑制ＨＬ６０细胞增殖，并同时诱导ＨＬ６０细胞的凋亡和分化。结论：Ｒｏ１３７４１０作用于ＨＬ６０细胞后可使ＨＬ６０细胞发生凋亡和分化，其诱导的分化作用比同等浓度的全反式维甲酸弱     

MEK-ERK信号通路在全反式维A酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的作用研究

目的:研究MEK-ERK信号通路在全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞分化中的作用及其可能的机制。方法:采用APL细胞株NB4作为体外模型,以细胞表面分化抗原CD11b、四唑氮蓝(NBT)还原实验和形态学观察评估细胞分化;应用蛋白印迹法研究细胞MEK和ERK的活化状态及PU.1、C/EBPβ、C/EBPε和PML-RARα的蛋白含量。结果 :MEK-ERK信号通路在ATRA处理早期即活化,并维持48 h。抑制MEK活性,可使ATRA诱导的CD11b阳性率从(87.50±4.16)%下降到(38.01±2.79)%,NBT A540值从0.507±0.009下降到0.250±0.010,差异均有统计学意义(P<0.01和P     

全反式维A酸治疗急性早幼粒细胞白血病的毒副反应及其处理

１引言全反式维A酸（ATRA）分化治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）,具有疗效好（完全缓解率高达８５％至９０％）、不诱发DIC、不抑制骨髓功能、口服用药、治疗方法简便等优点,已被公认为治疗APL的首选药物之一。但仍可发生一些毒副反应,应予注意。２一般副反应主要表现为皮肤干燥脱屑、口干和口角皲裂占７１．５％至９０％,多数症状较轻。白细胞增多占７０％至８０％,可能与骨髓腔隙间白细胞急骤增殖有关。头痛、头晕占４６．６％。消化道反应（恶心、胃纳减退等）占４１．２％。骨、关节疼痛占２２．５％。肝功能损害１２．４％…     

全反式维甲酸对人肺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR基因表达的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR(apelin receptor)基因表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测ATRA对体外培养的A549细胞增殖的抑制情况,光学显微镜下观察细胞形态改变,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,western blot检测APLNR蛋白、cyclin D1及p16蛋白的表达情况。结果经ATRA作用后,A549细胞增殖受到明显抑制且抑制程度呈剂量及时间依赖性(P均0.01);其细胞形态发生明显变化,细胞周期被阻滞于G_0/G_1期且细胞凋亡率明显升高(P0.01);western blot结果显示,随着ATRA浓度的升高,APLNR蛋白及cyclin D1蛋白的表达水平降低,而p16蛋白的表达水平升高(P均0.01)。结论 ATRA可抑制A549细胞增殖并促进其凋亡,且能下调APLNR基因的表达。     

脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与p53和Bcl-2基因表达的关系

目的 探讨脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及其与Bcl-2和p53基因mRNA表达的关系.方法 取体重190～220 g的成年雄性SD大鼠42只,随机分为三组,脓毒症组30只,正常对照组6只,假手术组6只;脓毒症组以盲肠结扎穿刺法(CLP)复制脓毒症大鼠模型,于术后3 h、9 h、12h、24 h各处死6只大鼠,假手术组麻醉满意后打开腹腔,正常对照组仅行麻醉术,均取1.0 mm3大小的心肌组织,另外余下的6只脓毒症鼠术后待其自然死亡不取心肌.采用电镜和TUNEL法检测大鼠心肌细胞的凋亡,用RT-PCR方法检测大鼠心肌细胞Bcl-2和p53基因mRNA的表达.结果 电镜下大鼠凋亡的心肌细胞胞膜皱缩,核固缩、边集、碎裂,胞膜突起、凋亡小体形成,TUNEL法检测各时间点的脓毒症大鼠心肌细胞的凋亡率均较正常对照组和假手术对照组明显升高(P＜0.05),术后12h达到峰值;p53 mRNA表达明显升高(P＜0.05),其表达量与心肌细胞凋亡指数呈正相关性(r=0.976,P＜0.05);Bcl-2 mRNA表达明显降低(P＜0.05),其表达量与心肌细胞凋亡指数呈负相关性(r=-0.833,P＜0.05).结论 脓毒症大鼠心肌细胞的凋亡明显增高,p53和Bcl-2 mRNA的表达异常是其可能机制之一.     

全反式维A酸对大鼠肝脏缺血再灌注损伤肝组织锰超氧化物歧化酶的影响

目的探讨全反式维A酸对大鼠肝脏缺血再灌损伤时肝脏组织锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的影响。方法将18只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成3组(每组6只):假手术组、对照组、实验组。实验组腹腔注射全反式维A酸15mg.kg-1.d-1,对照组腹腔注射同体积中介液二甲基亚砜(DMSO),共14d。建立肝脏70%缺血再灌注模型,缺血1h复流24h后采集各组大鼠肝脏和血清,测定血清中ALT和AST,HE染色光镜下观察肝组织的变化;采用比色法检查肝组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blot和实时RT-PCR检测MnSOD蛋白含量和mRNA表达。结果相对于对照组,全反式维A酸能明显降低缺血再灌注后血清ALT水平[(138.61±54.63)U/Lvs.(458.53±83.17)U/L,P=0.001)]和AST水平[(355.57±70.92)U/Lvs.(1152.48±135.86)U/L,P=0.001)];明显改善缺血再灌注引起的肝脏组织学损伤;明显降低MDA的活性[(0.47±0.03)nmol/mgvs.(0.77±0.04)nmol/mg,P=0.001)],增加SOD的活性[(221.36±14.18)U/mgvs.(158.01±13.17)U/mg,P=0.001)];增加肝脏缺血再灌注后MnSOD的蛋白水平和MnSOD mRNA的表达(1.39±0.22vs.0.40±0.07,P=0.001)。结论全反式维A酸可以明显增加缺血再灌注时肝组织MnSOD表达,增加SOD的活性,减少细胞脂质过氧化,降低MDA的水平,从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

重组人P53腺病毒对逆转非小细胞肺癌细胞株A549/顺铂耐药的研究

目的 探讨重组人P53腺病毒(Ad-P53)对已产生顺铂耐药的人肺腺癌细胞的耐药逆转作用.方法 将重组腺病毒载体所携带的野生型p53基因导入人肺腺癌耐药细胞株A549/顺铂,并联合应用化疗药物顺铂,通过Western blot法分析外源野生型p53基因在细胞内的表达,MTT法观察其对细胞生长的影响.结果 Western blot法证实外源p53基因能在A549/顺铂细胞中高效表达.MIT法观察到Ad-P53对肺癌细胞的抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性效应(P均<0.05).100MOI Ad-PS3与0.5 mg/L顺铂联合应用后72 h,对A549/顺铂细胞的生长抑制率达(41.53±0.59)%,显著高于单用Ad-P53组[(15.69±0.96)%]和顺铂组[(7.40±1.13)%,P<0.001].结论 Ad-P53腺病毒可以逆转肺腺癌细胞对顺铂的耐药性.     

藤黄酸诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的机制及其与转铁蛋白受体的关系

目的探讨藤黄酸（GA）对细胞表面转铁蛋白受体（TFR）表达差异的SPC—A-1肺腺癌、SK．MES．1肺鳞癌细胞的促凋亡作用及其诱导其凋亡的分子机制。方法采用免疫组化法检测SPC-A．1及SK—MES-12组肺癌细胞表面TFR的表达,采用流式细胞术检测不同浓度的GA作用于两组肺癌细胞24h后细胞的凋亡率;并通过Western-blotting检测不同浓度的GA作用于2组细胞后Caspase2、Caspase9、Caspasel0及促凋亡蛋白Bax、p53的表达。结果GA对2组肺癌细胞有明显的促凋亡作用。相同浓度下细胞表面TFR表达强的SPC-A-1细胞对GA诱导其凋亡的敏感性高。凋亡起始酶Caspase2、caspas毋、Caspasel0及促凋亡蛋白Bax、p53的表达都参与了GA诱导的肺癌细胞凋亡,且随着GA浓度增大表达均上调。结论GA通过与TFR组成配体,诱导SPC-A-1及sK-MEs-1细胞凋亡,内外源性凋亡通路都参与了GA诱导的SPC．A．1及SK．MES-1细胞凋亡;GA是一种高效的、有着广泛前景的抗肿瘤药物。     

依曲替酸诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨依曲替酸对皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）细胞的生长抑制及凋亡的诱导作用。方法：体外培养人皮肤鳞癌细胞株SCC 13,分别用不同浓度依曲替酸作用,采用四唑盐比色法观察依曲替酸对SCC 13细胞的生长抑制作用,ELISA法及Annxin-V和PI结合试验检测细胞凋亡情况,透射电子显微镜下观察细胞形态学变化。结果：随着依曲替酸浓度的增加,SCC 13细胞的存活率降低,凋亡程度升高;在相同的作用浓度下,随着药物作用时间的延长,增殖抑制及凋亡作用明显增强,呈时间依赖性（P均〈0.05）。对照组早期凋亡率仅为6.2%,1×10-5mol/L的依曲替酸处理SCC 13细胞72 h后,细胞早期凋亡率为26.3%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。透射电子显微镜下可见经依曲替酸处理的SCC 13细胞呈典型的凋亡征象。结论：依曲替酸具有抑制皮肤鳞癌细胞生长及诱导凋亡作用。     

全反式维A酸对慢性阻塞性肺疾病患者外周血中Th17/Treg平衡的影响和意义

目的检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血Th17细胞、Treg细胞分别占CD4+T细胞比例及全反式维A酸(ATRA)对其影响,探讨ATRA对COPD患者外周血Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg的影响及其对COPD的意义。方法收集COPD急性加重期患者23例(A组),COPD缓解期患者23例(B组),肺功能正常健康吸烟者23例(C组),肺功能正常健康非吸烟者23例(D组);分别抽取试验对象外周静脉血制备单个核细胞悬液(PBMC),分为空白对照组和ATRA干预组,应用流式细胞术检测所有对象ATRA干预前后Th17细胞、Treg细胞分别占CD4+T细胞的比例。结果 CD4+Th17细胞占外周血CD4+细胞比例:空白对照组均高于ATRA干预组(P<0.05),空白对照组中,A组[(6.95±2.33)%]高于B组[(5.21±1.37)%]、C组[(4.15±1.23)%]、D组[(2.84±1.21)%](P<0.05),B组高于C、D组(P<0.05),C组高于D组(P<0.05);ATRA干预组中,A组[(4.66±1.86)%]高于B组[(2.77±1.10)%]、C组[(3.10±1.28)%]、D组[(1.68±0.80)%](P<0.05),B组和C组相比差异无统计学意义(P>0.05),二者均高于D组(P<0.05);CD4+Treg细胞占外周血CD4+细胞比例:各ARTA干预组均高于空白对照组(P<0.05),空白对照组中,C组[(4.64±1.36)%]高于A组[(2.50±1.21)%]、B组[(3.46±1.29)%]、D组[(3.55±1.59)%](P<0.05),B组和D组相比差异无统计学意义(P>0.05),二者均高于A组(P<0.05),ATRA干预组中,C组[(6.28±1.44)%]高于A组[(3.26±1.44)%]、B组[(4.53±1.54)%]、D组[(4.45±1.94)%](P<0.05),B组和D组相比差异无统计学意义(P>0.05),二者均高于A组(P<0.05)。结论 Th17和Treg的失衡可能和COPD的发病机制相关,且Th17和Treg比例失衡程度和患者病情严重程度相关,ATRA在一定程度上能纠正Th17和Treg失衡。     

全反式维甲酸与干扰素-γ协同抑制人肝癌细胞的生长并诱导凋亡

目的 探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）和干扰素-γ（Interferon-gamma,IFN-γ）联合作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,对于细胞的影响,观察两者是否具有协同作用.方法 用ATRA和IFN-γ处理SMMC-7721细胞后,应用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,光镜观察细胞彤态的变化,电镜及流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测增殖绌胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）及核因子（Nuclear Factor-kappaB,NF-κB）的表达变化.结果 ATRA作崩于SMMC-7721 24h后,细胞生长受到抑制,并且诱导细胞凋亡发生,和IFN-γ联合作用后,该作用加强;SMMC-7721细胞中NF-κ B和PCNA的表达在ATRA作用后减少,ATRA与IFN-γ联合作用后进一步减少.结论 ATRA与IFN-γ联合作用于肝癌细胞后,对于肝癌细胞的生长抑制及诱导凋亡具有协同作用,该协同作用可能是通过下调NF-κ B和PCNA的表达实现的.