转染IL-10的CD_4~+T细胞治疗哮喘小鼠分子机制的研究

目的:研究携带小鼠IL-10基因的重组腺病毒表达载体修饰的CD4+T细胞对哮喘小鼠气道NF-κB表达的影响,从而探讨IL-10治疗哮喘的可能分子机制。方法:BALB小鼠随机分成6组,正常对照组(A组,),哮喘模型组(B组),IL-10基因修饰CD4+T细胞治疗组(C组),LacZ基因修饰的CD4+T细胞治疗组(D组),未经任何基因修饰的CD4+T细胞治疗组(E组),生理盐水治疗组(F组),应用卵白蛋白激发的哮喘模型。应用流式细胞仪分离小鼠外周血CD4+T细胞,基因转染采用重组腺病毒表达载体。应用肺组织标本冰冻切片免疫组化染色以确定肺气道NF-κB的表达。结果:IL-10基因转染的CD4+T细胞在第7天表达IL-10最高,并可以持续维持高水平表达40d左右。C组与D组和E组NF-κB表达经统计学处理差异均具有显著性(P<0.05)。结论:IL-10基因转染的CD4+T细胞使哮喘小鼠气道NF-κB表达下降,提示IL-10治疗哮喘可能通过抑制NF-κB传导有关。     

原发性胆汁性肝硬化免疫发病机制的研究进展

目的探究原发性胆汁性肝硬化(PBC)免疫发病机制。方法选取该院2011年3月—2013年3月收治的100名PBC患者作为研究资料,根据他们病情的不同,分为PBC活动期组和PBC稳定期组,并选择同期的50名身体健康体检者作为对照组。抽取所有试验人员晨起空腹状态下的肘静脉血液,利用双色荧光标记技术,对所有血样中的CD4+CD25+T细胞亚群和CD4+CD28+T细胞亚群的变化情况,用流式细胞术进行观察和检测。结果 PBC活动期患者血液中的CD4+CD25+T细胞亚群含量比PBC稳定期患者和健康人群低(P<0.05),而CD4+CD28+T细胞亚群含量比PBC稳定期患者和健康人群高(P<0.05);同时,PBC稳定期患者血液中的CD4+CD25+T细胞亚群含量比健康人群低(P<0.05),而CD4+CD28+细胞亚群含量比健康人群高(P<0.05)。结论 CD4+CD25+T含量在PBC患者血液中的减少,打破了效应T细胞亚群和调节性T细胞亚群之间的动态平衡关系,患者维持自身免疫应答的稳态遭到破坏,最终引发PBC病症。     

儿童肺炎支原体感染对免疫功能影响的研究

目的探讨儿童肺炎支原体（MP）感染对机体免疫功能的影响。方法选取2019年1月至2022年1月嘉兴市第二医院收治的儿童MP肺炎84例为研究对象,其中重症组39例,轻症组45例,另选同期本院健康体检儿童40名作为对照组。抽取3组儿童静脉血,采用乳胶增强免疫散射比浊法检测超敏C-反应蛋白（hs-CRP）水平,ELISA法检测IL-6、TNF-α水平,速率散射比浊法检测IgA、IgG、IgM水平,流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T及CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）水平,Westernblot法检测Toll样受体4（TLR4）/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平;采用Pearson相关分析TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白与炎症因子、Ｔ淋巴细胞之间的相关性。结果重症组和轻症组患儿WBC、hs-CRP、IL-6、TNF-α、CD8+、CD4+CD25+Treg水平均高于对照组,重症组患儿WBC、hs-CRP、IL-6、TNF-α、IgM、CD8+、CD4+CD25+Treg水平均高于轻症组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。重症组和轻症组患儿IgA、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于对照组,重症组患儿IgA、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于轻症组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。重症组和轻症组患儿TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκB-α）水平均高于对照组,重症组患儿TLR4、MyD88、p-NF-κBp65、p-IκB-α水平均高于轻症组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Pearson相关分析显示,TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、MyD88、p-NF-κBp65、p-IκB-α表达水平分别与WBC、hs-CRP、IL-6、TNF-α、CD4+CD25+Treg均呈正相关（均P＜0.01）,与CD4+/CD8+均呈负相关（均P＜0.01）。结论MP感染可以激活患儿机体TLR4/NF-κB信号通路,促进炎症因子释放,引起Ig变化及淋巴细胞亚群失调,且与感染的严重程度相关。     

替米沙坦对脂多糖诱导3T3-L1脂肪细胞炎症通路的影响

目的 研究替米沙坦对脂多糖诱导3T1-L1脂肪细胞炎症通路的影响,探讨替米沙坦的抗炎机制.方法将3T3-L1脂肪细胞诱导至90%成熟,按随机数字表法分为6组:对照组、LPS组、LPS+替米沙坦(0.01、0.1、1和10μg/ml)组(n=18),向对照组细胞中加DMSO,LPS+替米沙坦组细胞中加入不同浓度替米沙坦,孵育2h后,LPS组和LPS+替米沙坦组再加入脂多糖(1 μg/ml),孵育1h,Western免疫印记法比较各组核蛋白NF-κBp65、总蛋白p-IκBα、IκBα、p-ERK1/2、ERK1/2、P-p38MAPK、p38 MAPK的表达水平.结果 脂多糖刺激后IκBα磷酸化蛋白表达增强(P＜0.05),细胞核内NF-κBp65蛋白表达增多(P＜0.05),MAPK通路相关蛋白ERK1/2磷酸化和p38MAPK磷酸化水平明显增强(P＜0.05),替米沙坦可抑制IκBα磷酸化和NF-κBp65核转位,p-IκBα蛋白表达和核蛋白NF-κBp65表达均降低,大剂量替米沙坦(10 μg/ml)作用时该作用明显(P＜0.05).替米沙坦干预后,p-ERK1/2和p-p38MAPK蛋白表达也受到明显抑制(P＜0.05),大剂量(10μg/ml)时作用明显(P＜0.05).结论 在3T3-L1脂肪细胞中,替米沙坦可以抑制NF-κB通路中IκBα蛋白磷酸化、NF-κBp65蛋白核转位以及MAPK通路中ERK1/2蛋白和p38MAPK蛋白的磷酸化,从而发挥抗炎作用.     

GP73在肝癌患者外周血CD4+T淋巴细胞中的异常表达及其相关机制研究

目的 探讨肝癌患者外周血CD4+T淋巴细胞中高尔基体蛋白73(GP73)的异常表达及其对Th1/Th2/Th17亚型分化的影响.方法 选择该院2015年5月至2016年2月住院的肝癌患者50例为研究对象,50例健康志愿者作为对照.采集外周血并分离CD4+T淋巴细胞,采用实时荧光定量PCR检测CD4+T淋巴细胞中GP73表达水平;另将分选的20例健康者CD4+T淋巴细胞分别转染GP73小干扰RNA或过表达载体,实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测CD4+T淋巴细胞中GP73及核因子κB(NF-κB)表达水平,ELISA检测上清液中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)的分泌水平.结果 肝癌患者外周血CD4+T淋巴细胞中GP73 mRNA的表达与健康者相比明显上调,差异有统计学意义(P<0.05).GP73过表达组NF-κB表达水平明显升高(P<0.05),GP73干扰组NF-κB表达水平明显降低(P<0.05).过表达GP73导致CD4+T淋巴细胞中IL-4、IL-17水平明显升高,IFN-γ水平明显降低(P<0.05);沉默GP73导致CD4+T淋巴细胞IL-4、IL-17水平明显降低,IFN-γ水平明显升高(P<0.05).结论 GP73在肝癌患者的外周血CD4+T淋巴细胞中过表达,而GP73很有可能通过激活N F-κB参与炎症反应,导致患者体内T h1/T h2/T 17失衡,促进肝癌的发生与发展.     

原发性胆汁性肝硬化患者单核细胞内miR-302e表达降低及意义

目的 研究miR-302e在原发性胆汁性肝硬化发病机制中的作用。方法 采用荧光定量PCR技术检测了10名选健康对照者和12名PBC患者的T细胞（CD3+）,B细胞（CD19+）及单核细胞（CD14+）内miR-302e的相对表达量。以100ng/mL的LPS刺激PBC患者、健康个体的单核细胞以及转染了miR-302e mimics或inhibitor的THP-1细胞、,24小时后采用ELISA法检测培养基内IL-6及TNF-α浓度的变化。结果 PBC患者外周血单核细胞内miR-302e的表达量较健康个体显著降低（P<0.001）。在LPS刺激的THP-1细胞中, miR-302e mimics和inhibitor分别可以抑制和促进IL-6和TNF-α的释放（P<0.05）。在LPS刺激下,PBC患者单核细胞释放IL-6及TNF-α的能力显著强于来自健康个体的单核细胞（P<0.05）。结论 miR-302e表达降低可能是导致其单核细胞对LPS刺激呈现高反应性的原因,miR-302e可能通过这种途径参与了PBC的发病机制。     

白细胞介素18经toll样受体4/髓样细胞分化因子88/核转录因子-κB通路促进支气管平滑肌细胞增殖与迁移

目的 探讨白细胞介素18 (IL-18)经toll样受体4 (TLR4)/髓样细胞分化因子88 (MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路促进支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖与迁移。方法 采用不同浓度IL-18、不同时间处理BSMC,确定实验条件。细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性,Transwell小室检测细胞迁移,Western blot法检测相关蛋白的表达。抑制剂Eritoran特异性阻断TLR4/MyD88/NF-κB通路,检测TLR4/MyD88/NF-κB通路阻断后对细胞周期、细胞增殖、细胞迁移及TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达的影响。结果 IL-18可促进支气管平滑肌细胞细胞增殖,提高细胞迁移能力,上调TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。Eritoran可抑制IL-18引起的BSMC细胞增殖,上调G1期细胞百分比,下调S期、G2期细胞百分比,抑制细胞迁移,降低TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。结论 IL-18可能通过上调TLR4/MyD88/NF-κB通路中信号分子的表达,促进了平滑肌细胞增殖和迁移。     

过表达miR-382的肿瘤相关巨噬细胞对三阴性乳腺癌生物学特性的影响

目的 探讨microRNA-382 (miR-382)在肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)中的表达对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞(4T1)生物学特性的影响.方法 以小鼠腹腔巨噬细胞(mouse peritoneal macrophages,PMs)作为研究对象,分为PMs组,TAMs组和L-TAMs组;Western blot与qRT-PCR检测极化指标(IL-10、TNF-α)、miR-382、PGC-1α和NF-κB的表达变化;流式细胞术检测TAMs的极化变化(CD86、CD206);激光共聚焦显微镜成像检测PGC-1α和NF-κB的表达变化;以4T1细胞作为研究对象,分为4T1组,4T1+PMs组和4T1+L-PMs组,流式细胞术检测细胞凋亡率与细胞周期;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果 与PMs组比较,TAMs组IL-10、CD206和PGC-1α表达明显增加(P＜0.05),miR-382、TNF-α和CD86表达明显降低(P＜0.05),NF-κB转录活性显著降低(P＜0.05),而L-TAMs组TNF-o、CD86和miR-382表达明显增高(P＜0.05),IL-10、CD206和PGC-1α表达明显降低(P＜0.05),NF-κB转录活性显著增强(P＜0.05);与4T1组比较,4T1+PMs组侵袭能力明显增强(P＜0.05),凋亡率明显下降(P＜0.05),而4T1+L-PMs组侵袭能力明显下降(P＜0.05),凋亡率明显增高(P＜0.05).结论 TAMs通过调节miR-382的表达可抑制TNBC的侵袭和增殖,其机制可能与TAMs中miR-382抑制PGC-1α的表达、增强NF-κB的转录活性,进而抑制TAMs的M2分化有关.     

原发性胆汁性肝硬化患者协同刺激分子程序性细胞死亡分子-1的检测及意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者协同刺激分子程序性细胞死亡分子-1(PD-1)的表达及其与疾病发病机制的关系。方法采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法,分别检测36例活动期PBC患者、30例缓解期PBC患者、20例非PBC肝硬化患者和30例健康体检者外周血单个核细胞(PBMC)PD-1 mRNA的表达水平;采用流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞表面PD-1表达百分率,以及CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-2水平。结果 (1)活动期PBC患者PBMC中PD-1 mRNA表达水平及T淋巴细胞表面PD-1表达百分率显著低于缓解期PBC患者、非PBC肝硬化患者及健康对照者(P<0.01)。(2)活化后,活动期PBC患者CD4+T淋巴细胞表达水平显著高于缓解期PBC患者、非PBC肝硬化患者及健康对照者(P<0.01);活动期PBC患者CD8+T淋巴细胞表达水平显著低于缓解期PBC患者、非PBC肝硬化患者及健康对照者(P<0.05)。(3)活化后,活动期PBC患者细胞培养上清液中IL-2含量显著高于缓解期PBC患者、非PBC肝硬化患者及健康对照患者(P<0.01)。结论协同刺激分子PD-1对活动期PBC患者体内T淋巴细胞活化增殖及细胞因子分泌的抑制作用减弱,为研究PBC的发生发展和阐明PBC的发病机制提供了依据。     

基于HMGB1/NF-κB通路探讨温经通络汤对IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞炎症的影响

目的 观察温经通络汤对IL-1β诱导关节软骨细胞炎症的影响并探讨其作用机制。方法 从小鼠膝关节软骨中提取原代软骨细胞,并用甲苯胺蓝染色法鉴定;IL-1β诱导软骨细胞炎症模型,采用慢病毒RNAi-HMGB1转染软骨细胞,干扰HMGB1的表达;后用不同浓度的温经通络汤含药血清干预细胞;Western blot分析各组细胞中HMGB1、NF-κB信号通路蛋白的表达水平;qPCR检测HMGB1、NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清中炎症因子IL-6、PGE-2和TNF-α的表达水平。结果 与正常培养的细胞相比,IL-1β诱导软骨细胞炎症模型中HMGB1的表达水平显著上升(P<0.01),且p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平均有所提高(P<0.01);与模型组比较,RNAi-HMGB1慢病毒转染可显著下调HMGB1的表达水平(P<0.01),并抑制p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量(P<0.01)与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平...     

NLRP3/NF-κB通路在慢性前列腺炎的变化和意义

为探讨慢性前列腺炎患者中核苷酸结合寡聚化结构域 (NOD)样受体家族3 (NLRP3)炎症小体介导的核因子κB(NF-κB)信号通路的表达及变化。采用酶联免疫吸附法(Elisa)检测血清中NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1 (Caspase 1)、Toll样受体4(TLR4)和NF-κB的表达。采用Real-Time PCR检测患者血清中NLRP3、人细胞凋亡相关斑点样蛋白 (PYCARD)、Caspase 1、NF-κB mRNA表达。与健康对照组相比,慢性前列腺炎患者血清炎性因子NLRP3、TLR4和NF-κB含量显著升高,L-Iβ、IL-18、TNF-α和Caspase 1含量显著增高,NLRP3、PYCARD、Caspase 1、NF-κB mRNA含量显著增高。说明检测患者血清中NLRP3/NF-κB信号通路有利于了解患者慢性前列腺炎状态并协助前列腺炎患者的疾病监测。     

基于NF-κB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/lpr小鼠炎症反应的调节作用

[目的] 研究狼疮定对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)MRL/lpr小鼠炎症反应的影响，并分析其对核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路的调节作用。[方法] 将12只MRL/lpr小鼠随机分为模型组(6只)、干预组(6只)，另选取C57BL/6小鼠6只为对照组。干预组灌胃给予0.1 mL/10 g狼疮定浓缩液，对照组、模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液，所有动物均干预8周。给药前后分别测定血清炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、α-干扰素(interferon-α，IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor ɑ，IκBα)、NF-κB抑制蛋白α p50(NF-κB inhibitor ɑ p50，IκBαp50)、NF-κB抑制蛋白α p65(NF-κB inhibitor ɑ p65，IκBαp65)表达水平，采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system Real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction，ARMS-q PCR)检测NF-κB信号通路相关mRNA表达情况。通过苏木精-伊红染色检测肾组织损伤情况，采用免疫印迹法检测肾组织中炎性因子表达水平。[结果] 与对照组比较，模型组血清炎性因子IL-6、IFN-α、TNF-α、NF-κB信号通路相关蛋白(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平、NF-κB信号通路相关mRNA(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平均显著升高(P<0.05)，肾组织中IL-6、IFN-α、TNF-α表达水平升高(P<0.05)。模型组小鼠肾组织损伤明显，主要表现为肾小管扩张，肾小球硬化，结构严重破坏，且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应。干预后，MRL/lpr小鼠血清各指标水平均出现明显降低(P<0.05)，肾组织炎性损伤较模型组减轻。[结论] 狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠炎症反应，从而减轻炎性肾损伤，其作用机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

β-arrestin 1在原发性胆汁性肝硬化患者PBMCs中的表达

目的探讨β-arrestin 1 mRNA在原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中以及在各细胞亚群（CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、B细胞）中的表达情况。方法利用基于TaqMan-MGB探针建立的实时荧光定量RT-PCR技术,分别检测50例PBC患者、50例健康体检者和50例乙肝后肝硬化患者PBMCs中的表达;再利用磁珠分离PBC患者、健康体检者的CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、B细胞和单核细胞,经实时荧光定量PCR技术分析β-arrestin 1 mRNA在各细胞亚群中的表达情况。结果β-arrestin 1 mRNA在PBC患者PBMCs、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和单核细胞中的表达明显高于健康对照组和疾病对照组（P〈0.01）,在B细胞,PBC组与健康对照组没有明显差异（P〉0.05）;疾病对照组与健康对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论β-arrestin 1可能参与PBC发病机制,其中涉及CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和单核细胞。     

桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞Toll-MyD88信号通路炎性信号表达的影响

目的:基于Toll-My D88信号通路观察桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期分析其抗炎的药效作用机制。方法:以尿酸钠混悬液诱导大鼠巨噬细胞制备痛风性关节炎巨噬细胞模型,以桂枝芍药知母汤含药血清进行干预,ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、钙结合蛋白S100A8的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性;Western-Blot法检测髓性分化因子-88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信号衔接蛋白、核因子κB酶抑制剂-β(inhibitor kappa B kinaseβ,IKK-β)、核因子κB抑制蛋白α亚基(NF-kappa-B inhibitor alpha,IKB-α)表达水平;逆转录PCR检测Toll样受体-2(toll-like receptor-2,TLR-2)、TLR-4mRNA的表达。结果:尿酸钠混悬液诱导巨噬细胞造模2 h后,模型细胞对照组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、S100A8含量,NF-κB活性,My D88、IKK-β蛋白表达及TLR-2、TLR-4 mRNA表达较正常细胞对照组显著增高(P0.05),IKB-α表达较正常细胞对照组显著降低(P0.05);与模型细胞对照组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组细胞表达TLR-2、TLR-4 mRNA水平显著降低(P0.05);在不加受体抑制剂的实验中,桂枝芍药知母汤各剂量组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量,My D88、IKK-β蛋白表达水平显著降低(P0.05),高剂量组NF-κB活性显著降低(P0.05),高剂量组S100A8、IKB-α表达水平显著升高(P0.05)。结论:桂枝芍药知母汤抗炎作用机制与降低TLR-2、TLR-4 mRNA表达,抑制My D88、IKK-β蛋白表达,增加S100A8、IKB-α蛋白表达水平,抑制NF-κB激活,进而降低Toll-My D88信号通路相关炎性因子表达密切有关。     

沉默miRNA-16对肺结核模型小鼠免疫功能的调控作用及其机制研究

目的研究沉默miR-16对肺结核模型小鼠免疫功能的调控作用及其机制。方法选取CD2F1雌性小鼠40只,分为正常组、模型组、过表达组、沉默组各10只,模型组、过表达组、沉默组建立肺结核模型,建模成功后,过表达组、沉默组小鼠肺部无菌注射10μL miR-16慢病毒悬液。检测肺组织中T淋巴细胞亚群、胸腺指数、肺部炎症因子以及Toll样受体(TLRs)信号通路因子水平。结果过表达组小鼠CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、胸腺指数、IL-10水平低于模型组,CD8+、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、NF-κB水平高于模型组(P 0. 05)。沉默组小鼠CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、胸腺指数、IL-10水平高于模型组,CD8+、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、NF-κB水平低于模型组(P0. 05)。沉默组小鼠CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、胸腺指数、IL-10水平高于过表达组,CD8+、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、NF-κB水平低于过表达组(P0. 05)。结论沉默miR-16可能通过作用于TLRs信号通路,抑制通路因子的异常表达,调节机体免疫反应,改善机体免疫障碍而起到调控肺结核小鼠免疫功能的作用。     

TLR4 及MD2 反义基因对内毒素诱导的肺泡Ⅱ型细胞活化的影响

目的 观察Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)及myeloid differentiation protein 2(MD2)反义基因对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺泡Ⅱ型细胞NF-κB活化的影响. 方法 培养的肺泡Ⅱ型细胞分为:正常细胞(对照)组、LPS组、LPS+转染空载体组、LPS+转染TLR4反义基因组、LPS+转染MD2反义基因组、LPS+转染TLR4-MD2反义基因组(n=8).Northern blot检测转染细胞的TLR4 及MD2 mRNA表达,Western blot检测转染细胞TLR4及MD2蛋白表达,电泳迁移率改变法检测 NF-κΒ的活性,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α和IL-6含量. 结果 与对照组比较,LPS刺激后的细胞TLR4及MD2 mRNA和蛋白表达、NF-κB活性、TNF-α和IL-6的生成均显著增加(P<0.01);而转染反义基因组细胞与其他LPS刺激组比较,TLR4 及MD2 mRNA和蛋白的表达、NF-κB活性及TNF-α和IL-6的含量均明显降低(P＜0.01). 结论 TLR4及MD2反义基因能有效抑制LPS诱导的肺泡Ⅱ型细胞的活化.     

肥胖症患者血清对人源单核细胞细胞上Toll样受体4/转录因子-κB信号通路的影响

目的 探讨肥胖症及伴相关代谢紊乱患者血清对人源单核细胞(THP-1)细胞表面Toll样受体4/转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的活化作用.方法 分别用10例单纯性肥胖及伴不同代谢紊乱患者血清干预THP-1细胞株24、48 h后,测定THP-1细胞表面TLR4和细胞内NF-κB p65磷酸化的表达水平及其分泌白细胞介素(IL-1)β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的能力.Western印迹检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清液中IL-1 β和TNF-α的水平.结果 THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化的蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力差异有统计学意义(P＜0.05);THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力随肥胖症代谢紊乱组分的增加而增高,并随干预时间的延长而增高(P＜0.05).正常对照组、单纯性肥胖组、肥胖伴高血糖组、肥胖伴血脂紊乱组以及肥胖伴3种代谢紊乱组血清孵育THP-1细胞48 h,TNF-α的浓度(ng/L)分别为(222±32)、(246±52)、(322±32)、(322±34)和(490±83),IL-1β(ng/L)分别为(94±19)、(133±19)、(174±22)、(180±30)、(279±38)(P＜0.05).结论 单纯性肥胖及肥胖伴不同组分代谢紊乱患者的血清可不同程度地诱导TLR4/NF-κB信号通路的活化,伴代谢紊乱组分越多的肥胖患者的血清诱导TLR4/NF-κB信号通路活化的能力越强.     

Th17细胞及相关细胞因子在原发性胆汁性肝硬化患者的表达

目的观察PBC患者外周血Th17/CD4＋T细胞相关细胞因子（IL-17、IL23、IL21、IL6、TGFβ）的表达,探讨Th17/CD4＋T细胞在PBC发病中的作用.方法收集26例PBC患者（PBC组）,20例HBV患者（HBV组）和20例健康人群（HC组）的外周血,采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定3组患者血清IL-17、IL-23、IL-21、IL-6、TGFβ的水平,比较3组间的表达情况.结果 PBC患者血清IL-17、IL-23、IL-21的表达明显高于HBV患者和健康对照组（P〈0.05）;PBC组IL-6、TGFβ表达明显高于健康对照组（P〈0.05）,而与HBV组比较差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 Th17/CD4＋T细胞及其分泌的特异细胞因子在PBC的免疫发病发挥着重要作用.     

吡格列酮对胰腺炎相关性腹水诱导的人单核细胞炎症信号通路的影响

目的 用胰腺炎相关性腹水(PAAF)刺激人单核细胞,探讨PPARγ激动剂吡格列酮对细胞炎症信号通路的影响.方法 PAAF收集自重症胰腺炎患者.将体外培养的人单核细胞THP-1分为4组:对照组(C组)、实验组(A组)、吡格列酮组(P组)、GW9662(G组).A组用PAAF刺激细胞;P组加入终浓度为20 μmol/L吡格列酮,2h后再用PAAF刺激细胞;G组先加入PPARγ拮抗剂GW9662,30 min后加入吡格列酮,2h后再用PAAF刺激细胞.12 h后收集4组细胞,采用实时定量PCR方法检测细胞TNF-α、IL-6的mRNA表达,蛋白质印迹法检测NF-κB p65、p38MAPK的活化程度和IκB蛋白表达变化.结果 PAAF刺激后,A组细胞促炎细胞因子TNF-α、IL-6的mRNA表达增加,NF-κB、p38MAPK活化,IκB蛋白水平降低,与C组相比差异有统计学意义(P＜0.05) ;P组经吡格列酮干预后,TNF-α、IL-6的mRNA表达降低,NF-κB、p38MAPK活性下调,IκB蛋白表达升高,与A组比较差异有统计学意义(P＜0.05);G组应用GW9662后可拮抗吡格列酮降低促炎细胞因子的作用,TNF-α、IL-6的mRNA表达增加,NF-κB、p38MAPK活化,IκB蛋白水平降低,与P组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 吡格列酮可能通过抑制NF-κB、p38MAPK炎症信号通路活化,减少促炎细胞因子产生,控制炎症发生发展.     

NF-κB抑制剂对脂多糖刺激的退变人椎间盘髓核细胞炎症因子表达的影响

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)与炎症因子表达及相互关系.方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,设立对照组、LPS (500 μg/mL)刺激组、NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500 μg/mL)刺激组.ELISA方法检测各组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β的含量,免疫荧光法检测各组髓核细胞内p65的表达及定位,Western blot检测TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65以及磷酸化p-p65的表达,Real-time PCR检测TNF-α及IL-1β的表达.结果 LPS刺激髓核细胞后,p65入核增多,p-p65表达明显增加,ELISA实验结果表明LPS刺激组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平升高(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显上升(P＜0.05);而与LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组p65入核减少,p-p65表达明显降低,细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平降低(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显下降(P＜0.05).结论 LPS能够通过激活人退变髓核细胞NF-κB信号通路,促进炎性因子TNF-α及IL-1β表达增多,抑制NF-κB信号通路后可明显减轻炎性因子的表达.