A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及对ERK/MAPK信号通路的影响

目的 探讨A型肉毒毒素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及对ERK/MAPK信号通路的影响。方法 采用组织块法将人增生性瘢痕成纤维细胞分离并培养。将其分为对照组及A型肉毒毒素组。A型肉毒毒素组则给予含有0.4U/L A型肉毒毒素的DMEM培养基进行培养。对照组采用单纯DMEM培养基培养。在第1、3、5、7天时采用CCK8试剂盒检测细胞增殖并比较。采用流式细胞术对对照组和A型肉毒毒素干预的成纤维细胞行凋亡检测。Western blot法检测对照组、A型肉毒毒素组及U0126干预组成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白（collagen Ⅰ）, p-ERK1/2及总ERK蛋白相对表达量。结果 A型肉毒毒素能够显著抑制成纤维细胞增殖活性,干预7天时,细胞数量仅为对照组的68.9%。A型肉毒毒素组成纤维细胞的凋亡比率为35.9%,显著高于对照组。三组成纤维细胞的总ERK1/2蛋白相对表达量比较差异无统计学意义（P>0.05）,而p-ERK1/2在对照组则仍显著高表达,但A型肉毒毒素组和U0126组的p-EKR1/2则显著受抑制,且低表达。Ⅰ型胶原蛋白则在对照组中高表达,显著高于A型肉毒毒素组和U0126组（P<0.05）。结论 A型肉毒毒素能够通过抑制ERK/MAPK信号通路而使得成纤维细胞凋亡增加,增殖活性减弱,Ⅰ型胶原蛋白分泌减少。     

结缔组织生长因子通过PI3K/PKB抑制人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡

目的 探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是否具有抑制人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic sear fibroblast,HSF)凋亡的作用及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路(PI3K/PKB)是否介导该效应.方法 体外培养HSF,实验分3组:①空白对照组,②CTGF刺激组(10 ng/ml),③PI3K抑制剂LY294002(10 μmol/L)预处理后CTGF刺激组(LY294002组).应用免疫印迹技术检测30 min后蛋白激酶B的活化情况,应用流式细胞术检测细胞凋亡.结果 和空白对照组相比,CTGF组细胞凋亡指数下降,蛋白激酶B的活化水平升高,具有统计学差异(P＜0.05);LY294002组细胞凋亡指数上升,蛋白激酶B的活化水平没有升高,与CTGF组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论 CTGF能够抑制HSF凋亡,PI3K/PKB介导该效应.     

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路对生长激素介导的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨生长激素（GH）对心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其作用机制。方法以不同浓度的重组人生长激素（rhGH）（100、200、500、1 000 ng/ml）和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）抑制剂LY294002（10μmol/L）单独或同时作用CFs 48 h后,采用MTT法检测细胞增殖,Wertern Blot检测PI3K/Akt信号途径中Akt和磷酸化Akt（p-Akt）的蛋白水平的变化。结果 rhGH呈浓度依赖性的促进CFs的增殖;rhGH增加p-Akt的蛋白水平;LY294002可阻断rhGH诱导的CFs的增殖。结论生长激素可通过激活PI3K/Akt信号通路促进心肌成纤维细胞的增殖。     

A型肉毒素预防人瘢痕成纤维细胞增生机制的初步研究

目的 探究不同浓度A型肉毒素(BTX-A)对瘢痕成纤维细胞的影响,初步阐释BTX-A治疗瘢痕及预防术后瘢痕增生的相关分子作用机制.方法 选取人瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的B T X-A(0.01、0.10、1.00 U/L及10.00 U/L)作用24 h后,激光共聚焦显微镜观察细胞黏附及骨架变化,并采用MTT及流式技术检测其增殖、凋亡及周期变化,同时采用实时荧光定量PCR(qRCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)方法 ,探究TGF-β、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2及MMP-9基因及蛋白的表达变化.结果 随着BTX-A剂量的升高,其细胞黏附数量及骨架荧光强度逐渐减弱;细胞增殖能力减弱且主要阻断在细胞G0/G1期;此外其凋亡也随着BTX-A剂量增大而逐渐增强.qPCR及Western blot结果显示,随着BTX-A剂量增大,MMP-1及MMP-2基因及蛋白均呈现高表达,而TGF-β及MMP-9呈现出低表达.结论 BTX-A通过阻断瘢痕细胞G0/G1期抑制其增殖,同时提高MMP-1及MMP-2的表达来减轻瘢痕形成,对瘢痕的治疗起着积极的作用.     

A型肉毒毒素对兔肌腱成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的 探讨A型肉毒毒素在体外动物实验中对兔趾伸肌腱成纤维细胞的增殖活性的抑制作用,以及对相关细胞因子TGF-β1和bFGF表达的影响。方法 体外分离兔趾伸肌腱,培养肌腱成纤维细胞,采取CCK8实验检测A型肉毒毒素在不同浓度条件下对成纤维细胞活性的影响。ELISA试剂检测肌腱成纤维细胞中TGF-β1和bFGF的表达含量。结果 与对照组相比,不同浓度的A型肉毒毒素对肌腱成纤维细胞的增殖活性有不同程度的抑制作用,在30 U/mL浓度时,抑制作用较低浓度10 U/mL和高浓度50 U/mL更为明显。采用ELISA实验检测标本中TGF-β1和bFGF的表达含量。在三种A型肉毒毒素浓度条件下(10 U/mL、30 U/mL、50 U/mL),实验组中TGF-β1的表达浓度均低于对照组。在浓度为30 U/mL时,浓度降低最为明显(P0.05)。而实验组中bFGF的浓度均高于对照组,在浓度为30 U/mL时,浓度升高最为明显(P0.05)。结论 A型肉毒毒素能够明显抑制体外培养的兔肌腱成纤维细胞的增殖活性,降低TGF-β1的表达水平,提高bFGF的表达水平,在适合的浓度下,作用强度达到高峰,改善肌腱粘连症状。     

PI3K/PKB信号通路参与结缔组织生长因子促人增生性瘢痕纤维化

目的探讨结缔组织生长因子对人增生性瘢痕成纤维细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B的激活作用。方法应用免疫印迹技术检测10ng/mL结缔组织生长因子作用于人增生性瘢痕成纤维细胞不同时间(0、5、15、30、60、120min)后蛋白激酶B的活化情况(以磷酸化蛋白激酶B和总蛋白激酶B比值表示),以及用同法检测磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002对结缔组织生长因子活化蛋白激酶B的作用。结果10ng/mL结缔组织生长因子作用于人增生性瘢痕成纤维细胞15min时,蛋白激酶B的活化水平(0.614±0.015)已明显高于对照组(0.308±0.021,P<0.05),30min时最明显(0.724±0.017,P<0.01),而且持续至少达120min,与对照组相比较,差异有统计学意义。10μmol/L LY294002作用人增生性瘢痕成纤维细胞后蛋白激酶B的活化水平下降(0.135±0.025),同对照组(0.422±0.015)相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结缔组织生长因子可激活人增生性瘢痕成纤维细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路,LY294002可抑制结缔组织生长因子对此通路的激活。     

钙通道阻滞剂对增生性瘢痕成纤维细胞三维培养模型收缩的抑制作用

目的：观察钙通道阻滞剂对增生性瘢痕成纤维细胞三维培养模型收缩情况的影响,探讨进一步应用于临床治疗增生性瘢痕挛缩的可能性． 方法： 对人增生性瘢痕成纤维细胞进行体外培养,并构建含成纤维细胞的胶原网络支架（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｐｏｐｕｌａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｌａｔｔｉｃｅ, Ｆ Ｐ Ｃ Ｌ）,即三维培养系统． Ｂｉｏｇｒａｐｈｙ： Ｗ Ａ Ｎ Ｇ Ｚｈｅｎｇ（ｍ ａｌｅ,ｗ ａｓ ｂｏｒｎ ｏｎ Ｊａｎ． １３, １９７４ ｉｎ Ｘｉ＇ａｎ Ｃｉｔｙ, Ｓｈａａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ） ｉｓ ａ ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔ ｓｔｕｄｅｎｔ ｏｆ Ｆｏｕｒｔｈ Ｍ ｉｌｉｔａｒｙ Ｍ ｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．　 Ｔｕｔｏｒ： Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ Ｌ Ｕ Ｋａｉ Ｈｕａ, Ａｄｄｒｅｓｓ： Ｄｅｐａｒｔｍ ｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｓｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ, Ｘｉｊｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ, Ｆｏｕｒｔｈ Ｍ ｉｌｉｔａｒｙ Ｍ ｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．　 Ｔｅｌ：（０２９）３３７５３０５ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｄａｔｅ：１９９９┐０１┐１５;　 Ｒｅｖｉｓｅｄ ｄａｔｅ：１９９９┐０３┐２６ 结果：通过对６ 例手术切除的增生性瘢     

TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：观察外源性TGF－β3对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）生长增殖的影响，为临床治疗提供理论依据。方法：用MTT比色法检测TGF－β3对HSFB增殖活性的影响，^3H-脯氨酸掺入法检测细胞内胶原合成，免疫组化检测I，Ⅲ型胶原及TGF－β3蛋白表达情况。结果：TGF－β3可抑制HSFB细胞增殖，下调TGF－β1蛋白及I型胶原蛋白表达。结论：TGF－β3具有抗瘢痕形成作用，有望在临床中应用。     

增生性瘢痕成纤维细胞P物质表达的研究

目的研究P物质（substance P，SP）在人增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞的表达情况及其与正常皮肤之间的差异，探讨增生性瘢痕组织SP表达增高的原因。方法以酶消化法体外培养成人增生性瘢痕以及正常皮肤的成纤维细胞，将SP（终浓度为10^-7mol／L）加入培养液中刺激成纤维细胞，分别于刺激前和刺激后1、3、6、12、24h采用RT—PCR检测细胞内SP基因的表达情况，ELISA检测培养液中SP浓度。正常皮肤对照组及瘢痕对照组除不应用SP外，余处理均相同。结果未受SP刺激时，人增生性瘢痕及正常皮肤体外培养的成纤维细胞均能分泌一定浓度的SP，两者之间差异有统计学意义（P〈0．01）。SP刺激后，正常皮肤体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达均在1～3h内达到高峰，随后迅速下降，24h后仍高于其正常水平；而增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达在3～6h内达到高峰，随后缓慢下降，24h后仍高于其正常水平。两种成纤维细胞SP的分泌差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性SP可诱使成纤维细胞内SP的分泌增加，而增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞SP的分泌情况有明显差异。     

增生性瘢痕成纤维细胞生长特性的研究

目的：研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长特性的差异。方法：应用消化法建立成纤维细胞系，在倒置相差显微镜下观察细胞形态，应用细胞计数方法绘制细胞生长曲线，测定细胞生长速度。结果：增生性瘢痕成纤维细胞比正常皮肤成纤维细胞胞体大，形态不规则。前者细胞倍增时间约为6d，后者细胞倍增时间为3d。细胞融合后前者细胞数为后者的56％。结论：增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞是两种不同基因表现型的细胞。     

肉毒素在大鼠内脏痛模型中对血清TNF的影响

目的:探讨A型肉毒素(BTX-A)在大鼠化学性内脏损伤中的止痛作用及对血清肿瘤坏死因子(TNF)的影响。方法:8周的Wistar雄性大鼠72只,随机分为4组:A组为对照组,腹腔注射生理盐水2 mL;B组、C组、D组分别腹腔注射含2 U、4 U、6 UBTX-A的生理盐水2 mL。4周时各组随机取6只应用结直肠气囊扩张方法测定结直肠痛阈。分别于注射BTX-A后1周、4周各组随机取6只,腹腔内注射乙酸,观察大鼠扭体反应45 min,进行行为学评分和比较。应用放射免疫法测定血清TNF的含量。结果:给药后4周各组大鼠结直肠痛阈与A组结果无明显差异。给药后1周,总的疼痛积分C组、D组均少于A组(P<0.05);D组血清TNF较A组明显减少(P<0.05)。4周时,B、C、D组大鼠疼痛积分与A组相比均明显减少(P<0.05);C组、D组血清TNF较A组明显减少(P<0.05)。结论:腹腔注射BTX-A能缓解乙酸所致的大鼠内脏损伤的疼痛行为学反应,减少血清TNF释放,BTX-A可能通过减少血清TNF释放,减轻炎性反应,减少疼痛刺激。     

膀胱不同部位注射A型肉毒素治疗女性难治性膀胱过度活动症的临床研究

目的：观察膀胱不同部位注射A型肉毒素治疗女性难治性膀胱过度活动症的疗效。方法40例入选病例,随机分为逼尿肌注射组（A组）、逼尿肌联合三角区注射组（B组）,评估患者治疗前及治疗后4周的临床症状（平均每日日间排尿次数、平均每次排尿量、夜尿次数、尿急次数）及尿动力学指标（初始尿意膀胱容量、最大膀胱容量）和 OABSS 评分、QOL 评分情况。结果经过A型肉毒素注射治疗4周后,A组平均每日日间排尿次数、平均每次排尿量、夜尿次数、尿急次数以及OABSS评分, QOL评分、最大膀胱容量均较B组有明显改善（P＜0．05）。结论 A型肉毒素膀胱内注射治疗难治性膀胱过度活动症疗效好,无明显毒副作用,是治疗难治性膀胱过度活动的经济、有效的新方法;采用逼尿肌联合三角区部位的注射,症状缓解更为明显,值得进一步的研究及推广。     

益母草总生物碱对药物流产大鼠蜕膜绒毛组织排出的促进作用及其机制

探讨益母草总生物碱对药物流产大鼠蜕膜绒毛组织排出的促进作用，并阐述其可能的作用机制。     

斑蝥素通过MAPK途径对肺癌A549细胞周期阻滞及其分子机制的研究

目的：探讨斑蝥素对人肺癌A549细胞的周期阻滞作用及其分子机制。方法：采用MTT法检测斑蝥素对A549细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测细胞周期；以蛋白印迹法分析斑蝥素作用后细胞周期蛋白B1（cyelinB1）、p34^cdc2、phos-p34^cdc2、p21、survivin、ERK1／ERK2、phos-ERK1／phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变。结果：斑蝥素能抑制A549细胞的增殖；斑蝥素作用于A549细胞后引起G2／M期阻滞；斑螯素处理后，p34^cdc2、phos-p34^cdc2。表达量没有改变，cyclinB1、survivin蛋白表达量减少，p21蛋白表达量增加。ERK1／ERK2、phos-ERK1／phos-ERK2表达量降低。结论：斑蝥素通过调节cyclinB1、p21、survivin、ERK1／ERK2、phos-ERK1／phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变引起G2／M期阻滞。     

运动对2型糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号通路PI3K/PKB磷酸化与表达的影响

目的 探讨运动对2型糖尿病大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)与蛋白激酶B(PKB)磷酸化和蛋白表达及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和mRNA表达的影响.方法 30只SD雄性大鼠随机分为对照组、糖尿病组与糖尿病运动组.糖尿病组与糖尿病运动组大鼠经高脂饲料喂养8周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,30mg/kg),注射后3周确认2型糖尿病建模成功,糖尿病运动组大鼠进行4周游泳训练.糖尿病组与糖尿病运动组大鼠建模过程始终喂养高脂饲料;对照组大鼠喂养普通饲料.糖尿病运动组大鼠4周游泳训练结束,于最后一次运动后恢复48 h,取材各组大鼠腓肠肌.采用Western blot法分析PI3K与PKB的磷酸化水平和蛋白表达,检测GLUT4蛋白表达:RT-PCR检测GLUT4 mRNA表达.结果 与糖尿病组比较,运动改善2型糖尿病大鼠腓肠肌PKB磷酸化水平与蛋白表达(P<0.05);增加了糖尿病大鼠腓肠肌GLUT4蛋白与mRNA表达(P<0.01,P<0.05).结论 运动可能通过改善2型糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号通路蛋白激酶磷酸化和蛋白表达,增加对葡萄糖的吸收与利用.     

增生性瘢痕组织中细胞外信号调节激酶和增殖细胞核抗原蛋白的表达

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)传导通路对增生性瘢痕的作用.方法:采用免疫组织化学方法检测40例增生性瘢痕、20例非病理性瘢痕和20例正常皮肤组织中磷酸化ERK(p-ERK)和增殖细胞核抗原(PC-NA)蛋白的表达.结果:与非病理性瘢痕、正常皮肤组织比较,增生性瘢痕组织中p-ERK、PCNA阳性率及PCNA指数均升高(P均＜0.05),而非病理性瘢痕及正常皮肤组织间差异均无统计学意义(P＞0.05).增生性瘢痕组织中p-ERK与PCNA蛋白表达呈正相关(P＜0.05).结论:增生性瘢痕的形成可能与激活ERK信号传导通路、促进成纤维细胞增殖有关.