穹窿主体蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响?方法:分离培养野生型小鼠VSMCs,用血小板源性生长因子(PDGF-BB)或15% 胎牛血清(FBS)刺激VSMCs增殖,Western blot检测VSMCs的MVP表达水平,同时检测特异性分化标记物α-SMA和SM22α表达水平?然后用PDGF-BB刺激人主动脉平滑肌细胞(HAoSMCs),检测MVP的表达差异?再分别分离培养野生型小鼠和MVP敲除型小鼠的VSMCs,通过CCK8细胞增殖实验检测两者的增殖能力;同时用siRNA干扰的方法,使HAoSMCs中MVP低表达,检测其增殖能力的变化?结果:用PDGF-BB或15% FBS刺激VSMCs后,MVP表达水平呈浓度和时间依赖性下降,α-SMA和SM22α表达水平也相应降低?MVP缺失或低表达情况下,VSMCs的增殖能力均下降?结论:MVP在VSMCs增殖中起了重要作用?     

血脂康对培养的家兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨调脂中经血脂康对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法：在培养的家兔主动脉VSMC中加入不同浓度的血脂康共同孵育24h,分别采用细胞计数及^3H－胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入实验观察血脂康对VSMC增殖及MDA合成的影响。结果：血脂康明显抑制VSMC增殖（P＜0．05）和DNA合成（P＜0．01）。结论：血脂康既具有降低血脂作用,又可能通过抑制VSMC增殖而防止动脉粥样硬病变恶化及血管成形术后血管再狭窄等作用。     

慢性低氧对大鼠主动脉与肺动脉平滑肌细胞增殖影响的差异性

目的:探讨在整体和细胞水平下慢性低氧对大鼠主动脉及肺动脉平滑肌细胞增殖性是否有影响及其差异性。方法:分别采用整体慢性低氧模型复制及细胞培养的方法获得实验对象,整体动物上分为正常对照组和低氧3周组;细胞水平分为正常对照组及低氧24h组。分别采取HE染色,免疫组化法和图像分析的方法检测主动脉、肺内小动脉及培养的平滑肌细胞中PCNA的表达和含量的变化。MTT测细胞增殖情况。结果:正常组整体及细胞水平下PCNA在主动脉、肺内小动脉平滑肌细胞内均有微弱表达,整体实验低氧时只有肺内小动脉平滑肌细胞内其表达有增强,主动脉平滑肌细胞内PCNA的表达无明显差别。细胞低氧24h组PCNA表达明显增强,主、肺动脉平滑肌细胞之间无明显差别。结论:大鼠的主、肺动脉平滑肌细胞对慢性低氧的反应在整体水平和细胞水平是有差异的。     

三油酸甘油酯对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：研究三油酸甘油酯对大鼠主动脉血管平滑肌细胞（rat aortic smooth muscle cells,RASMC）增殖的影响。方法：采用体外细胞培养、油红染色观察细胞形态的变化;MTT法、流式细胞术检测三油酸甘油酯对RASMC增殖的影响。结果：油红染色结果显示三油酸甘油酯使RASMC失去原来长梭形外观,胞体变大;三油酸甘油酯浓度越高变化越明显,2 000 mg/dl已无正常细胞存在。三油酸甘油酯对RASMC增殖的影响与作用时间及三油酸甘油酯的浓度密切相关。在24 h≤125 mg/dl,表现为抑制增殖作用;24 h≥250 mg/dl及48~72 h≤500 mg/dl,表现为促进增殖作用,其中24 h,1 000 mg/dl时增殖率最大约为115.9%,与对照组相比差异有统计学意义（t=-3.74,P=0.002）;48~72 h>500 mg/dl及96~144 h,62.5~2 000 mg/dl表现为抑制增殖作用,其中,48、72 h这2个时间点在2 000 mg/dl的增殖率分别较对照组下降42.7%（t=13.08,P=0.000）和65%（t=129.53,P=0.000）,与对照组相比差异有统计学意义。流式周期结果表明,三油酸甘油酯组G0/G1期的百分比较对照组降低,而S期百分比增高。流式凋亡结果为,除了24 h和144 h外,其余各时间点的凋亡率较对照组降低,其中72 h及120 h的凋亡率分别为1.1%（F=14.39,P=0.019）,0.7%（F=9.96,P=0.034）,与对照组相比差异有统计学意义。另外,细胞增殖与凋亡的变化方向一致。结论：三油酸甘油酯对RASMC增殖的影响是双向的,即在低浓度短时间及高浓度长时间的抑制增殖作用,在中间合适的浓度及时间表现为促进增殖作用;细胞增殖周期试验结果也支持三油酸甘油酯具有一定的促进或抑制大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖作用;高浓度脂质对细胞的直接毒性作用、诱导细胞的增殖或凋亡作用,可能共同参与调控血管平滑肌细胞的数目及功能。     

血管平滑肌细胞不同细胞周期中Mfn2的表达变化

目的 探讨血管平滑肌细胞不同细胞周期中线粒体融合蛋白 2(mitofusin 2,Mfn2)表达水平的变化.方法 通过血清饥饿法、胸腺嘧啶核苷(thymidine)和诺考达唑(nocodazole)干预,使血管平滑肌同步化在不同的细胞周期(G0/G1期、G1/S期、S期、G2/M期);流式细胞仪鉴定细胞周期;Western blot检测Mfn2在不同细胞周期中的表达水平.结果 (1)流式细胞仪鉴定各组DNA含量百分比显示G0/G1期、G1/S期、S期、G2/M期均已同步化,符合本次实验要求.(2)Western blot示:同步化干预后,Mfn2在G0/G1期(静止期)的表达量显著高于G1/S期及S期(增殖期);自然状态下,Mfn2在G0/G1期表达量亦明显高于S期.结论 Mfn2表达量随细胞周期的变化而变化,Mfn2在细胞周期的静止期的表达量明显高于增殖期.     

胃促生长素对大鼠胃排空的影响

目的观察不同剂量的胃促生长素（Ghrelin）腹腔注射后大鼠胃排空效应,阐明Ghrelin在胃排空调节中的作用。方法将50只Wistar大鼠随机分为对照组和4个实验组（A、B、C、D）,每组各10只,4个实验组分别采用不同剂量的Ghrelin（0.5、1.0、1.5、2.0 nmol/kg）腹腔注射,对照组采用0.9%氯化钠注射液1ml腹腔注射,45min后每只大鼠半固体糊1.0ml灌胃,30min后处死,测定胃排空率,比较5组间胃排空率的差异。结果腹腔注射Ghrelin后大鼠胃排空率（36.08±5.57）%,与对照组的（27.18±2.37）%相比有明显加快（P＜0.05）,而且该效应与腹腔注射Ghrelin的量有一定的关系,小剂量Ghrelin（0.5nmol/kg）腹腔注射对胃排空无明显影响（P＞0.05）,但中、大剂量Ghrelin腹腔注射能明显加速大鼠胃排空效应（均P＜0.01）。结论中、大剂量Ghrelin腹腔注射能明显加快健康大鼠的胃排空效应。     

Mfn2介导缬沙坦抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的 研究缬沙坦对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响,并探讨其新的作用机制.方法 体外培养VSMCs,采用AngⅡ诱导其增殖,用不同浓度的缬沙坦(10-5、10-6、10-7mol/L)进行干预,细胞计数及四氮唑盐试验(MTT)检测VSMCs增殖情况,Western blot检测各组线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)、Raf、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signalregulated kinase 1/2,ERK1/2)表达水平的变化.结果 AngⅡ能够明显促进VSMCs的增殖,下调Mfn2的表达、增强Raf和ERK1/2的表达;缬沙坦10-5、10-6mol/L可以拮抗AngⅡ的上述作用,而缬沙坦10-7mol/L无此作用;缬沙坦对无AngⅡ刺激的VSMCs增殖无明显影响.结论缬沙坦能有效抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖,其机制与调节Mfn2的表达、抑制Ras-Raf-ERK/MAPK信号通路有关.     

睾酮对去势大鼠血管平滑肌细胞线粒体损伤的影响

目的：研究生理剂量睾酮对去势大鼠主动脉血管平滑肌细胞线粒体损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法选取8周龄雄性 SD 大鼠30只,随机分为假手术组,去势组和去势﹢睾酮组,每组10只。去势组行睾丸切除术,去势﹢睾酮组在去势后每天给予丙酸睾酮5.0 mg/ kg 肌肉注射。12周后测定各组血清睾酮浓度,并取大鼠胸主动脉,免疫印迹法检测血管平滑肌组织线粒体融合素2蛋白表达,激光共聚焦显微镜观察线粒体形态变化;JC -1检测线粒体膜电位;测定细胞总三磷酸腺苷（ATP）含量,超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH - Px）活性以及丙二醛（MDA）水平。结果与假手术组比较,去势组大鼠血清睾酮水平降低（ P ＜0.05）,线粒体融合素2表达降低（P ＜0.05）,线粒体聚集呈团块状,线粒体膜电位减低（P ＜0.05）,ATP 含量、SOD 和GSH - Px 活性降低（P ＜0.05）,MDA 水平增加（P ＜0.05）。与去势组相比,去势﹢睾酮组大鼠血清睾酮水平升高（P ＜0.05）,线粒体融合素2表达增加（P ＜0.05）,线粒体呈管状分布,线粒体膜电位增高（P ＜0.05）,ATP 含量、SOD 和 GSH - Px 活性增加（P ＜0.05）,MDA 水平降低（P ＜0.05）,与假手术组比较差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论生理剂量睾酮可维持去势大鼠血管平滑肌细胞的线粒体形态和膜电位水平,增加细胞 ATP 含量,降低氧化应激水平,对线粒体损伤具有保护作用,上调线粒体融合素2表达是其可能机制之一。     

脂质体介导10-23脱氧核酶对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :研究针对增殖细胞核抗原 (PCNA)基因特异性的 10 - 2 3脱氧核酶 (DNAzyme)对人血管平滑肌细胞(VSMC)PCNA的表达和细胞增殖的影响。方法 :应用脂质体转染法将不同寡聚核苷酸转入体外培养的人脐动脉VSMC。采用3 H -TdR掺入法观察空白对照组、脂质体组和等摩尔浓度 (1.0 μmol/L)的DNAzyme、反义寡核苷酸 (A SODN)、mDNAzyme在干预 2d后VSMC的DNA合成速率 ;免疫组化检测 1.0 μmol/L的DNAzyme和ASODN转染 2d后对PCNA表达的影响 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法分析不同剂量的DNAzyme(0 .12 5、0 .2 5、0 .5、1.0、2 .0 μmol/L)转染5d后VSMC增殖活性。结果 :1.0 μmol/LDNAzyme和ASODN转染 2d后 ,VSMC的3 H -TdR掺入量均较对照组显著减低 (P <0 .0 5 ) ,DNAzyme较ASODN更显著减低 (P <0 .0 5 ) ;1.0 μmol/LDNAzyme作用 2d后细胞增殖抑制率为 6 4 .5 % ,高于ASODN组 (37.7% )、mDNAzyme组 (11.9% )和脂质体组 (3.3% )。DNAzyme和ASODN处理细胞 2d后 ,PCNA的表达水平 (平均光密度值 )分别为 0 .2 95 6± 0 .0 2 5 1和 0 .3880± 0 .0 92 5 ,明显低于空白对照组 0 .7342± 0 .2 136 (P <0 .0 1)。转染 5d后 ,DNAzyme的作用呈剂量依赖性 ,0 .12 5 μmol/LDNAzyme处理后VSMC的增殖较对照组低 (P <0 .0 5 )。     

成人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养

目的:建立成人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养方法:方法:无菌条件下分离出成人胸主动脉的平滑肌层,剪成1 mm×1 mm×1 mm的碎片,用组织块贴壁法,以含胎牛血清的DMEM培养基进行培养,牛长融合的细胞用0.25%的胰酶消化、传代。观察培养细胞的形态学特点,并用免疫荧光的方法检测血管平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的表达。结果:在贴壁培养10～12天后,组织块的边缘开始有少量细胞爬出,呈长梭形,胞浆透亮、丰富:继续培养1～2周后组织块边缘融合,呈典型的"峰谷"样表现。消化传至3～8代,细胞的生长特性未见明显改变,免疫荧光显示细胞α-SMA的表达丰富。结论:组织块贴壁法培养人主动脉血管平滑肌细胞是一种稳定、可行的实验方法。     

Valsartan inhibits angiotensin II-induced proliferation of vascular smooth muscle cells via regulating the expression of mitofusin 2

Angiotensin Ⅱ (ANGⅡ) plays an important role in the pathogenesis of atherosclerosis by inducing proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs).In our study,we observed the effects of valsartan on proliferation of cultured VSMCs treated with or without ANGⅡ by cell counting and methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay,and detected the expression of mitofusin 2 (Mfn2),a newly discovered cell proliferation inhibitor and a related cell proliferation signaling pathway pro-tein by Western blotting.ANGⅡ at a concentration of 10-6 mol/L significantly stimulated VSMCs proliferation,down-regulated the expression of Mfn2 and upregulated the expression of Raf and ERK1/2.Valsartan inhibited such effects of ANGⅡ at concentrations of 10-5 and 10-6 mol/L,but not at 10-7 mol/L.Valsartan had no significant effect on the proliferation of untreated VSMCs.These results suggest that valsartan inhibits ANGⅡ-induced proliferation of VSMCs in vitro via Mfn2-Ras-Raf-ERK/MAPK signaling pathway.     

血管舒缓素对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨了血管舒缓素对血小板趋化生长因子（ＰＤＧＦ）诱导培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法 取ＳＤ大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行培养,传至５代后,分组观察ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ＋血管舒缓素组、ＰＤＧＦ＋血管舒缓素＋缓激肽受体拮抗剂组等。干预因素作用于血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）,对＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）的掺入及原癌基因ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达的影响。结果 １．ＰＤＧＦ可促进ＶＳＭＣ     

自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞异常增殖是血管增殖性疾病的病理基础,自噬是真核生物维持细胞内环境稳态的一种自我保护机制。近年来的研究发现,自噬参与多种细胞因子、血管活性物质、剪切应力、ncRNA等诱导的血管平滑肌细胞增殖,一些抗血管增生性疾病的药物往往通过调节自噬通量和自噬活性发挥抗血管平滑肌细胞增殖作用。本文综述了自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响,为探索血管增生性疾病的病理生理机制提供新的思路。     

香蒲新苷对人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究香蒲新苷对人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法①采用组织贴块法原代培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),并用α-actin抗原检测进行鉴定,3~4代细胞用于实验。②香蒲新苷以1.00×10-5mol/L为最大浓度,依次倍比稀释,共11个浓度,并设空白对照组,分别刺激24、48、72 h,采用MTT比色法检测其对HUASMC有无毒性。③香蒲新苷以1.00×10-6mol/L为最大浓度,依次按1/4等比稀释,共6个浓度,并设空白对照组,分别刺激24、48、72 h,采用MTT比色法观察其对HUASMC增殖的影响。结果①镜下观察细胞染色均为阳性。②香蒲新苷在9.77×10-9~1.00×10-5mol/L的浓度范围内,刺激24、48、72 h,对体外培养的HUASMC均无明显的毒性。③香蒲新苷在9.77×10-10~1.00×10-6mol/L的浓度范围内,刺激24 h或48 h,对HUASMC的增殖均无明显的抑制作用;而在作用72 h后,在1.56×10-8~2.5×10-7mol/L之间,对HUASMC的增殖有明显的抑制作用,其作用强度随剂量增加略有增强,但无显著差异,抑制率达9.91%~14.99%。结论香蒲新苷具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用,其有效剂量范围较广,但起效缓慢。     

恒磁场对人脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制效应

目的　探讨恒磁场对离体人脐动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响 .方法　将培养至 3～ 10代的人 VSMC,分别置于磁感应强度为 10 ,5 0 Gs的恒磁场中培养 48h,用MTT法和3 H- Td R掺入法检测实验组和对照组 VSMC的增殖数量 ,流式细胞仪分析细胞周期 .结果　在恒磁场的作用下 ,实验组人脐动脉 VSMC的增殖数量在 10 Gs(0 .5 6 5±0 .0 96和 34 9± 82 )和 5 0 Gs(0 .6 42± 0 .0 92和 387± 91)显著低于对照组 (0 .716± 0 .0 48和 42 7± 86 ) (P<0 .0 5 ) ,而且阻止平滑肌细胞由静止期 (G0 / G1 期 )进入 DNA合成期 (S期 )和有丝分裂期 (G2 / M期 ) .结论　平均磁感应强度为 10 ,5 0 Gs的恒磁场抑制人脐动脉 VSMC增殖 ,磁疗对 PTCA术后冠脉再狭窄可能具有防治作用     

Eukaryotic Expression of Human Arresten Gene and Its Effect on the Proliferation of Vascular Smooth Muscle Cells

Arresten,human noncollagenous domain 1 oftheα1 chain of type Ⅳcollagen,is derived fromthe carboxy terminal of type Ⅳcollagen[1].It wasidentified as a powerful inhibitor of angiogenesisrecently .In earlier studies , human arresten wassuccessfully amplified from placenta tissue , andmolecular cloning and DNA sequencing verifiedthat the coding sequence obtained was correct[2].Prokaryotic expression vector of arresten gene hasbeen constructed[3]. Excessive proliferation andmigration to endome…     

shRNA 沉默趋化素对小鼠主动脉平滑肌细胞增殖能力的影响及可能的机制

目的 探讨shRNA 沉默趋化素（Chemerin）对小鼠主动脉平滑肌细胞增殖能力的影响及可能的机制。方法 构建Chemerin 基因RNA 干扰慢病毒载体,培养小鼠主动脉平滑肌细胞（ASMC）,分成4 组：Sham 组、PDGF 组、对照序列组和Chemerin 沉默组。Chemerin 沉默组和对照序列组分别转染携带Chemerin干扰基因和对照基因序列的慢病毒,分别向PDGF 组、对照序列组和Chemerin 沉默组细胞中加入PDGFBB,Sham 组则加入等量的PBS。利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞中Chemerin基因表达,细胞计数实验和BrdU 掺入法测定各组细胞增殖能力,Western blot 法检测各组细胞中Chemerin、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK 和p-JNK 蛋白表达。结果 Chemerin 沉默组细胞中Chemerin 基因和蛋白相对表达量分别为（0.35±0.09）和（0.32±0.09）,与其他3 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,均低于其他3 组,且对照序列组和PDGF 组均高于Sham 组;Chemerin 沉默组细胞数和吸光度A 值分别为（34.27±3.08）×103个/cm2 和（1.26±0.07）,与其他3 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,均低于其他3 组,且对照序列组和PDGF 组均高于Sham 组;Chemerin 沉默组细胞中ERK1/2 和JNK 蛋白相对表达量高于对照序列组和PDGF 组,低于Sham 组,Chemerin 沉默组细胞中p-ERK1/2 和p-JNK 蛋白相对表达量低于其他3 组,而对照序列组和PDGF 组高于Sham 组,均差异有统计学意义（P <0.05）。结论 特异性沉默Chemerin 基因可阻止ASMC 的增殖作用,其机制可能与抑制ERK1/2 和JNK 信号通路有关。     

Effect of vascular endothelial growth factor and its receptor KDR on human airway smooth muscle cells proliferation

Airway remodeling with inflammatory cell infiltration, epithelial shedding, basement membrane thickening and increased mass of airway smooth muscle (ASM) is an important determinant of bronchial obstruction and hyperresponsiveness in asthma. Increased ASM mass is by far the most important abnormality responsible for excessive airway narrowing and compliance of the airway wallin asthma.