CD137信号对CIK细胞增殖和功能的调节作用

目的:探讨CD137信号对CIK细胞的增殖和功能调节作用.方法:分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),实验组在常规CIK培养体系中加入CD137单抗(CD137-CIK组),对照组在常规CIK培养体系中加入鼠IgG1同型对照(IgG1-CIK组).苔盼蓝拒染法细胞计数分析细胞增殖;流式细胞术检测细胞表型及细胞内因子的表达;LDH酶释放法检测CIK细胞杀伤活性.结果:CD137-CIK组细胞体外扩增效率显著高于IgG1-CIK组,CD137-CIK组细胞浓度最高达(9.87±0.57)×106/ml;IgG1-CIK组最高为(7.02±0.68)×106/ml;CD137-CIK组和IgG1-CIK组细胞中CD3 CD56 细胞比例至28天分别达到(39.86±4.69)%和(29.14±5.12)%(P＜0.05);经CD137mAb作用后,其体外杀伤肺癌细胞株A549活性明显高于对照组(P＜0.05);第0、7、14、21天流式检测IFN-γ表达,实验组CD3 CD56 细胞IFN-γ的表达显著高于对照组.结论:CD137mAb介导的共刺激信号可以促进CIK细胞的体外增殖活性,并增强CIK细胞体外抗瘤作用.其中CD137-CIK组CD3 CD56 细胞的比例及其IFN-γ表达显著提高,这可能是CD137信号增强CIK抗瘤作用的重要原因.     

氯化锂对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究氯化锂(LiCl)在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用液体培养试验，四唑盐(MTT)比色试验，集落培养试验为指标观察LiCl对：K562细胞增殖的影响，采用DNA片段凝胶电泳及细胞形态学改变为指标检测细胞凋亡。结果：①不同浓度的LiCl(10～50mmoL／L)对K562细胞具有抑制增殖的作用，这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。②在LiCl(30mmol／L)作用下，K562细胞形态学上可见凋亡细胞，且DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见“梯形带”(DNA ladder)。结论：LiCl能抑制K562白血病细胞增殖和诱导其凋亡。     

小檗胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗胺(BBM)对K562细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制.方法:K562细胞分为5组,前4组为实验组,分别加入终浓度为0.8、8.0、40.0、80.0 mg/L的BBM,对照组加入等量RPMI 1640,分别作用不同时间后,采用MTT法检测BBM对K562细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测各组Caspase-3蛋白和Survivin蛋白的表达.结果:BBM能呈时间剂量依赖性地抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡;免疫细胞化学结果显示BBM作用24 h后K562细胞Caspase-3蛋白表达升高,Survivin蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:BBM能抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与Caspase-3蛋白的表达增高及Survivin蛋白的表达降低有关.     

白藜芦醇对人CIK细胞功能的影响

目的探讨白藜芦醇对人C IK细胞生长以及体外杀伤活性的影响。方法体外常规法培养CD3＋CD56＋达15%以上的C IK细胞。用不同浓度的白藜芦醇诱导人CIK细胞48 h后：MTT比色法检测人CIK细胞增殖力、流式细胞术（FCM）测定CIK细胞表达的穿孔素和颗粒酶B的变化和乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤活性。结果白藜芦醇浓度在0～1.6μmol/L时能促进C IK细胞生长,并增加CIK细胞穿孔素、颗粒酶B的含量表达。当浓度大于3.1μmol/L时可抑制CIK细胞生长,并随着药物浓度的递增抑制率逐渐增加。结论白藜芦醇在一定浓度下可促进CIK细胞生长,提高CIK细胞的杀伤活性。     

川芎嗪对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨川芎嗪对K562细胞端粒酶活性及凋亡的影响,进一步研究川芎嗪抗白血病作用的分子机制。方法：用光学显微镜及透射电镜观察经川芎嗪作用后K562细胞具有的凋亡形态学改变,采用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;采用多聚酶链式反应酶联免疫测定法（PCR—ELIsA）检测白血病细胞端粒酶活性。结果：川芎嗪能抑制K562细胞端粒酶活性,随药物浓度增加和利用时间的延长,其抑制作用增强,并能诱导K562细胞凋亡,使Fas蛋白水平上调。结论：川芎嗪能显著抑制K562细胞端粒酶活性,其作用可能与诱导细胞凋亡有关。在此过程中,Fas也可能参与了细胞凋亡的调节。     

螺旋藻多糖对CD3AK细胞增殖能力的影响

研究了螺旋藻多糖（ＰＳ）对ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ，ＣＤ３ＡＫ ｃｅｌｌｓ）增殖能力的影响。结果表明，当ＰＳ浓度为２．５μｇ／ｍｌ培养体系条件下，对ＣＤ３ＡＫ细胞具有明显的刺激细胞增殖作用（Ｐ〈０．０２）；对培养长达２３ｄ的ＣＤ３ＡＫ细胞杀伤肿瘤细胞（ＫＬ５６２细胞）的活性仍维持在较高的水平（４６．５％￣５０％）。     

录芝复方剂对K562白血病细胞增殖,分化的影响

用细胞培养、细胞形态学及联苯胺染色法观察中药灵芝复方对Ｋ５６２白血病细胞的增殖抑制及分化诱导作用。结果显示：灵芝复方在一定浓度范围内对正常人骨髓ＣＦＵ－ＭＧ生长有促进作用（Ｐ〈０．０５）,而对白血病细胞系Ｋ５６２细胞才殖表现出剂量和时间依赖性抑制（Ｐ〈０．０５）;在诱导分化剂量下,灵芝复方可促进Ｋ５６２细胞向红系分化。可见,灵芝复方有望成为一种抗白血病中药。     

三氧化二砷对转染表达两种早幼粒细胞性白血病融合蛋白的K562细 …

目的　探讨急性早幼粒细胞性白血病的特异融合蛋白PML RARα和PLZF RARα在三氧化二砷 (As2 O3 )效应中的可能作用。方法　应用逆病毒载体转染技术建立稳定表达PML RARα(KPML)、PLZF RARα(ΚPLZF)和空载体 (KV)的K5 6 2细胞克隆。通过活细胞计数、形态学观察、流式细胞仪检测细胞DNA含量和分化抗原。应用免疫荧光分析PML RARα蛋白的亚细胞分布。结果　 1 0μmol/LAs2 O3 不诱导KV 细胞凋亡和分化 ,但明显抑制其生长。在KPML和KPLZF细胞 ,As2 O3 也产生相似的生长抑制效应 ,但其效应强度明显增加。经 1 0 μmol/LAs2 O3 处理 3d时 ,KV、KPML和KPLZF的生长抑制率分别为 32 %± 3%、5 7%± 4%和 5 4%± 6 %。 1 0 μmol/L的全反式维甲酸也显示对KV 细胞克隆的生长抑制 ,但其效应明显低于As2 O3 。同时 ,全反式维甲酸的生长抑制效应在KPML的表现较KV 明显(P <0 .0 5 ) ,但在KV 和KPLZF之间差异无显著意义。此外 ,在 1 0 μmol/LAs2 O3 作用 2d时 ,KV 和KPML细胞内PML/PML RARα蛋白颗粒明显减少甚至消失。结论　PML RARα和PLZF RARα蛋白明显加强As2 O3 对K5 6 2细胞的生长抑制效应。     

曼宋酮E对白血病 K562 细胞增殖和凋亡的影响

目的观察曼宋酮E对 K562 细胞增殖的影响,探讨其诱导凋亡作用及可能机制。方法台盼蓝拒染实验检测曼宋酮E对 K562 细胞的生长抑制作用;荧光显微镜观察细胞核形态的变化;流式细胞仪测定细胞凋亡率;免疫印迹法测定 caspase-3、caspase-8、caspase-9 及 PARP 的活性及 Bcl-2、Bax 和 Bcl-XL 的表达。结果 曼宋酮E抑制 K562 细胞增殖呈时间和浓度相关性;12.5 μg/mL 的曼宋酮E处理 K562 细胞 0、12、24、48 h 细胞凋亡率分别为 (2.1±0.8)%、(3.2±1.6)%、(15.3±8.9)%、(25.1±11.4)%;在曼宋酮E诱导 K562 细胞凋亡过程中,caspase-3 和 caspase-8 以及 PARP 出现活化断裂,casepase-9 表达无明显变化;Bcl-2 家族蛋白 Bcl-2、Bax 和 Bcl-L 表达无显著改变。结论 曼宋酮E可抑制诱导 K562 细胞增殖,并通过 caspase-8 途径介导凋亡     

自体CIK细胞治疗恶性肿瘤免疫表型和杀伤活性变化

目的观察自体CIK细胞治疗恶性肿瘤前后免疫袁型和杀伤活性变化。方法采用流式细胞术检测50例肿瘤患者CIK细胞治疗前、后免疫表型的变化,采用3H—TdR释放法检测杀伤活性的变化。结果CIK治疗后,CD3^＋、CD4^＋细胞百分率上升,CD8^＋细胞百分率下调,CD4^＋／CD8^＋比值上升,CD19细胞百分率下降,与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．05）,但CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞绝对值未达到健康者水平（P〉0．05）。治疗后NK细胞百分率明显升高（P〈0．05）,达到健康者水平（P〉0．05）。在杀伤活性的研究中,与CIK细胞治疗前（19±6）％相比,治疗后杀伤活性百分率（22±5）％明显升高,达17．5％（P〈0．01）,但未达到健康者水平（P〈0．05）。结论自体CIK细胞治疗能明显提高肿瘤患者细胞免疫功能。     

Antitumour activities of cytokine-induced killer cells and dendritic cells in vitro and in vivo

Solidtumourcellsshowaresistancetoimmunologicaleffectorcellsinvitro.1Theresistancemaybeonereasonwhythesetumours withstandimmunotherapeuticapproachesin humans.Dendriticcells(DC)playanimportant roleintheimmuneresponsetotumourassociated antigensinhumans.DCintheperipherycapture andprocessantigens,expresslymphocyte costimulatorymolecules,migratetolymphoid organsandsecretecytokinestoinitiateimmune response.Cytokine inducedkiller(CIK)cellsarethemajor histocompatibilitycomplex unrestrictedcytotoxic …     

CIK细胞的制作及对不同肿瘤细胞株体外抗肿瘤作用的研究

目的:制备细胞因子激活杀伤(CIK)细胞并观察其生物学特性及对不同肿瘤细胞株的杀伤作用.方法:外周血单个核细胞用无血清培养基经干扰素γ(IFN-γ),CD3McAb,白介素2(IL-2),白介素1α(IL-1α)诱导,制作CIK细胞,以淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)作为对照,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型,MTT法检测其对不同肿瘤细胞株的杀瘤活性.结果:CIK细胞与LAK细胞相比增殖速度快、最终增殖倍数高.CIK细胞主要由CD3和CD56双阳性细胞构成.CIK细胞对多种肿瘤细胞具有较强的杀伤活性.结论:CIK细胞过继免疫治疗是一种非常有前景的抗肿瘤治疗方法.     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗恶性黑色素瘤的临床观察

目的比较单纯细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与单纯化学治疗对晚期恶性黑色素瘤的疗效及不良反应。方法回顾性分析34例恶性黑色素瘤患者的临床资料,其中14例行单纯CIK治疗,20例行单纯化学治疗。观察指标包括客观反应率、疾病控制率、1a生存率及不良反应。结果CIK治疗组患者部分缓解2例,病情稳定5例,病情进展7例;客观反应率14．29％,疾病控制率50．00％,1a生存率57．14％。化学治疗组患者部分缓解3例,病情稳定8例,病情进展9例;客观反应率15．00％,疾病控制率55．00％,1a生存率40．00％。2组患者客观反应率、疾病控制率和1a生存率比较差异均无统计学意义（P〉0．05）,但CIK治疗组不良反应发生率显著低于化学治疗组（P〈0．05）。结论CIK治疗晚期恶性黑色素瘤与化学治疗疗效相当,但不良反应轻微,可作为治疗选择之一。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对食管癌EC9706细胞杀伤作用的实验研究

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对食管癌EC9706细胞的杀伤作用.方法:流式细胞仪检测EC9706细胞NKG2D配体的表达,乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性,裸鼠体内实验验证CIK细胞对肿瘤的影响.结果:EC9706细胞表达MICA和ULBP2,不表达MICB,ULBP1和ULBP...     

细胞因子诱导的杀伤细胞对人胃癌高侵袭腹膜转移细胞株体内外杀瘤过程中多种细胞因子的影响

目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)自分泌细胞因子及其体内外杀瘤过程中多种细胞因子含量的变化,探讨CIK细胞对抗肿瘤的作用机制.方法:取正常人的外周肝素抗凝血分离外周血单个核细胞(PBMC),体外诱导成CIK细胞;同时建立人胃癌高侵袭转移瘤(OCUM-2MD3)细胞裸鼠腹膜移植模型.检测CIK细胞中白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等细胞因子的分泌及其对OCUM-2MD3细胞株体内外杀瘤时上述细胞因子的变化.结果:①CIK细胞培养过程中其上清液IL-2、TNF-α、INF-γ、GM-CSF含量随时间增长而升高,至2周左右达最高峰,随后下降;②体外培养CIK细胞以E:T=25:1对OCUM-2MD3肿瘤细胞作用后,IL-2含量减低明显(P<0.05),TNF-α、GM-CSF含量均降低,INF-γ含量升高;③体内抗瘤实验结果表明,CIK治疗组血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF的含量均较生理盐水对照组显著增高(P<0.05).结论:CIK细胞分泌的细胞因子在2周左右具有最大生物学活性;CIK细胞可能通过其自身分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF等细胞因子参与抗肿瘤作用.     

A randomized controlled trial of postoperative tumor lysate-pulsed dendritic cells and cytokine-induced killer cells immunotherapy in patients with localized and locally advanced renal cell carcinoma

Background  It remains a challenge to inhibit the local recurrence or distant metastasis of localized or locally advanced renal cell carcinoma (RCC) after surgical resection. We investigated the feasibility, safety and efficacy of immunotherapy using autologous tumor lysate (TL)-pulsed dendritic cells (DCs) and cytokine-induced killer (CIK) cells in patients with localized or locally advanced RCC.

Methods  From January 2001 to July 2009, we collected 137 patients that met the selection criteria and randomly divided them into three groups. After surgery, immunotherapy with TL-pulsed DCs-CIK cells (DC-CIK group) and interferon (IFN)-α (IFN-α group) was performed in 46 patients, respectively. The other 45 patients received no postoperative adjuvant therapy (the control group). The changes in the numbers of T lymphocyte subsets, including CD4⁺CD25^high regulatory T cells (Treg), were determined before the operation and after immunotherapy. The overall survival was compared among the three groups.

Results  An increase of the CD4⁺/CD8⁺ ratio and a decrease of CD4⁺CD25^high cells were observed after TL-pulsed DC-CIK cells or IFN-α immunotherapy. All patients tolerated the TL-pulsed DC-CIK cells immunotherapy very well, and side effects in the DC-CIK group were less than in the IFN-α group. The metastasis and recurrence rates were significantly decreased after TL-pulsed DC-CIK cells or IFN-α immunotherapy compared with the control group (P <0.01). The Log-rank test showed that the overall survival rates were significantly higher in the DC-CIK group and IFN-α group than that in the control group (P <0.01), but there was no difference between the DC-CIK group and IFN-α group (P >0.05).

Conclusion  Postoperative immunotherapy with TL-pulsed DC-CIK cells may prevent recurrence/metastasis and increase the overall survival rate after surgery in localized or locally advanced RCC.

     

Infusions of recipient-derived cytokine-induced killer cells of donor origin eradicated residual disease in a relapsed leukemia patient after allo-hematopoietic stem cell transplantation

A female patient diagnosed with acute myelocytic leukemia M5a (AML-M5a) relapsed 986 days after her allogeneic peripheral blood stem cell transplantation (allo-PBSCT) from an unrelated male donor with matched human leukocyte antigen (HLA). Three re-induction chemotherapies were administered, and partial remission was achieved. The patient was given repetitive infusion of cytokine-induced killer (CIK) cells expanded from recipient peripheral mononuclear cells of full donor chimerism due to loss of contact of quondam donor for donor lymphocyte infusion (DLI) and rejection of second transplantation. The patient achieved complete cytogenetical remission. This strategy might overcome the obstacle of donor unavailability and present an appealing new therapeutic alternative to donor-recruited adoptive immunotherapy for relapsed disease at post-transplantation.

     

TIGIT在CIK细胞上的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨TIGIT（T cell Ig and ITIM domain）在细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）上的表达及其对CIK细胞增殖、凋亡的影响.方法 分离肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMCs）,体外诱导为CIK细胞,分别检测培养前的PBMC和培养第7、14天的CIK细胞的TIGIT表达.同时培养2组CIK细胞,实验组在常规CIK培养体系中加入TIGIT单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）封闭TIGIT的功能,对照组在常规培养CIK体系中加入鼠IgG1同型对照抗体,CFSE染色检测2组CIK细胞的增殖活性,Annexin V/7-AAD凋亡试剂盒检测2组CIK细胞的凋亡率.结果 PBMC和CIK细胞均表达TIGIT,TIGIT表达的多少可能和细胞活化状态有关.实验组CIK细胞增殖指数较对照组升高7％,组间差异具有统计学意义（P＜0.05）,2组间细胞凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 封闭CIK细胞上的TIGIT可以扩大CIK细胞增殖,但不增加CIK细胞的凋亡.     

源于肝癌患者细胞因子诱导杀伤细胞的生物学特性及抗癌活性

目的 比较源于肝癌患者与健康人的细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞的生物学特性及抗癌活性.方法 提取肝癌患者和健康人的外周血单个核细胞,常规诱导培养CIK细胞,动态观察其增殖活性、细胞表型及细胞毒活性.选BALB/c裸鼠SMMC-7721肝癌模型,接种肿瘤细胞10d后,选择荷瘤大小相似的裸鼠30只,腹腔注射化疗药物后平分成A组(单独化疗组)、B组(健康人CIK治疗组)和C组(肝癌患者CIK治疗组),观察肿瘤大小的变化.结果 两种来源CIK细胞的增殖活性、细胞表型及细胞毒活性均差异无显著性,体外抗癌活性相似,均可提高化疗的效果.B组和C组治疗后肿瘤受抑制的程度差异无显著性,但均明显大于A组.结论 源于肝癌患者CIK细胞与源于健康人的CIK细胞具有相似的生物学特性及抗癌活性.     

H101腺病毒对K562白血病细胞的作用

目的 探讨E1B缺陷型腺病毒(H101)对K562白血病细胞的生长抑制作用.方法 选用不同浓度H101腺病毒,体外感染K562白血病细胞株,通过白血病细胞感染率、细胞生长曲线、台盼蓝蓝染细胞数、MTT法检测细胞抑制率等检测细胞的增殖受抑和细胞毒作用情况.结果 H101腺病毒转导K562细胞随浓度增加而有所增加, 但为很低的转染率; 诱导K562白血病细胞株死亡效率很低, 仅在高剂量组达到30%的死亡率; 对K562细胞的生长有一定的影响,与未转染组比较,随剂量加大, 生长受抑制程度逐渐明显, 高剂量组第4天为19.5%; MTT法测定细胞抑制率提示随剂量加大,对K562细胞抑制程度逐渐加大,高剂量组抑制率为22.7%.结论 E1B缺陷型腺病毒(H101)在体外人白血病细胞K562的生长有一定的抑制作用,但是杀伤作用不显著.