应用FITC系统建立非均衡竞争游离三碘甲腺原氨酸（FT3）化学发光法

目的制备抗人T3多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat,FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)的方法。方法以T3-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化并联接辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)。用FITC标记T3-类似物。采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,通过非均衡竞争法原理,固相抗原与血清中FT3竞争结合抗T3抗体-HRP,通过标准曲线计算FT3浓度,建立方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(Bovine serum gamma globulin,BGG)包被(非FITC系统)的检测系统相比较。将本方法应用于临床120份血清标本的检测,定量结果与德国罗氏2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elec-sys 2010)定量结果进行比较。结果抗体经酶联免疫吸附实验证明对T3、具有高度特异性。应用FITC系统建立的非均衡竞争化学发光免疫分析标准曲线的线性R>0.99,线性范围0.25～50 pg/ml,分析灵敏度为0.25 pg/ml,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测。对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys2010定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数r=0.962 2,两者的测定值无显著性差异。结论制备的抗人T3多克隆抗体特异性强,以FITC系统为平台建立的非均衡竞争FT3检测化学发光法具有精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,达到临床测定的需求,可代替进口化学发光产品用于临床样本的检测。     

应用FITC系统建立非均衡竞争游离甲状腺素化学发光法

[目的]制备抗人甲状腺素多克隆抗体并应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)系统建立非均衡竞争FT4化学发光法.[方法]以T4-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰兔,制备抗人T4多克隆抗体,亲和层析法吸附掉与3-碘-L-甲状腺原氨酸(3-iodo-L-tyrosine)、3,5-二碘-L-甲状腺原氨酸(3,5-diiodo-L-tyrosine)、D-三碘甲状腺原氨酸(D-T3)、L-三碘甲状腺原氨酸(L-T3)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)有交叉反应多抗,纯化特异性的抗人T4多克隆抗体并用FITC标记T4类似物,用抗FITC抗体包被微孔板.反应时,将FT4校准品或样品、FITC-T4类似物、T4抗体-HRP依次加入包被有抗FTTC抗体的化学发光板中,FITC -T4类似物与FT4校准品或样品,非均衡竞争结合T4抗体-HRP,从而在微孔板上形成免疫反应复合物T4类似物-T4抗体-HRP,通过酶促化学发光反应,就可以显示出与样品FT4浓度负相关的相对光单位(relative light unit,RLU),建立FT4化学发光检测方法.[结果]抗体经酶联免疫吸附实验证明对T4具有高度特异性,与3-iodo-L-tyrosine、3,5-diiodo-L-tyrosine、L-T3、D-T3、rT3无交叉反应.该方法建立的试剂盒标准曲线的线性相关系数不小于0.9900;分析灵敏度为0.9 pmol/L;线性检测范围0.9～130 pmol/L;精密度测试批内变异系数CV＜ 10％;与进口发光免疫分析系统做线性相关比较,线性回归系数为1.0852,相关系数为0.9673,临床符合率良好;本方法建立的试剂盒经加速稳定性试验37℃放置7d与2～8℃放置7d无异.[结论]综上所述,应用FITC系统建立的非均衡竞争FT4化学发光免疫分析灵敏度高、特异性好适于临床诊断应用.     

三种免疫分析系统检测抗甲状腺过氧化物酶抗体分析

目的：探讨不同免疫分析系统检测抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）结果的可比性,以评价不同检测系统间结果的相关性。方法：收集2019年10月12日—12月16日我院收治的甲状腺功能异常患者血液标本共80份,分别采用新产业化学发光免疫分析仪（CLIA法）、贝克曼化学发光免疫分析仪（CLIA法）和罗氏电化学发光免疫分析仪（ECLIA法）测定不同浓度水平标本的TPOAb值。分析三种免疫分析系统的检测结果是否有较好的一致性,是否能够满足临床的诊疗需求。结果：定性判断新产业CLIA法检测TPOAb,其符合率为83.75%,Kappa值0.644;贝克曼CLIA法检测TPOAb,其符合率为87.5%,Kappa值0.530。结论：新产业和贝克曼化学发光分析仪检测TPOAb结果与罗氏电化学发光分析仪检测结果有中等的一致性,可满足临床需求。     

不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果的评价分析

目的 探讨分析不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果的一致性.方法 选取于2009年8月—2011年12在该院接受治疗的感染乙型肝炎患者156例,对从这156例患者身上获得到的乙型肝炎标志物运用酶联免疫吸附试验(ELISA)、时间分辨免疫荧光法(TRFIA)和化学发光法(CLIA)3种方法进行检测患者的HBsAg水平,来评价这几种方法的灵敏度和精密度.结果 虽然不同检测方法的测定灵敏度各不相同,但相比之下化学发光法(CLIA)的检测灵敏度最高;同时对于低浓度HBsAg的检测时,化学发光法(CLIA)的阳性检出率也是三者中最高的,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 不同方法学对于乙型肝炎血清标志物检测灵敏度和精密度存在差异性,然而化学发光法(CLIA)因其检测灵敏度高、对HBsAg阳性检出率高的特点可作为临床检测HBsAg的较优选择,值得在今后的临床检验中广泛应用.     

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法检测丙型肝炎病毒抗体的效果比较

目的:比较化学发光免疫分析法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对丙型肝炎病毒抗体的检测效果。方法:回顾性分析行丙型肝炎病毒抗体检测的1 136例患者的临床资料,分别采用CLIA与ELISA法进行检测。对弱反应性样本(0.75≤S/CO<3.5)进行第3代重组免疫印记法(RIBA-3)检测,并将其作为金标准。采用Kappa法分析CLIA和ELISA法检测结果的一致性。比较两种方法对弱反应性标本的检测灵敏度、准确度和特异度。结果:Kappa一致性检验结果显示,两种方法的一致性较好(κ=0.948,P<0.05)。CLIA法对弱反应性样本的检测准确度和灵敏度均明显高于ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CLIA法和ELISA法对丙型肝炎病毒抗体的初筛效果相当,但对于弱反应性标本,CLIA法优于ELISA法。     

探讨化学发光免疫测定在梅毒螺旋体抗体检测中的临床价值

目的分析研讨化学发光免疫测定在梅毒螺旋体抗体检测中的临床价值。方法收集127例梅毒患者以及98例非梅毒病人的血清,分别应用化学发光免疫测定法、TPPA法、RPR法对血清中梅毒螺旋体抗体进行监测,将检测结果纳入对比研讨中。结果组间和组内在不同梅毒螺旋体抗体浓度下CV分别为6.81%、8.29%、8.48%和6.71%、8.43%、8.51%,皆小于10%。并且CLIA分析仪灵敏度比TPPA高,组间数据有统计学意义(P0.05);通过CLIA分析仪对梅毒螺旋体抗体进行检测,干扰物加入前后所测量得出的值差异为3.19%(吸光度/临界值);CLIA法与TPPA法所检测的阳性率对比无明显差异(P0.05);但两种检测结果均比RPR法要高,组间数据有统计学意义(P0.05)。结论化学发光免疫测定法检测梅毒螺旋体抗体的结果准确率较高,且灵敏度较高,不容易受到诸多外在因素干扰及限制,值得临床应用并推广。     

四种不同方法检测CA153的观察

目的:研究电化学免疫分析(ECLIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫法(RIA)四种方法检测的可靠性及在方法学上哪一种更具有优势。方法:用四种方法分别检测血清CA153,进行准确度、阴、阳性预测值、灵敏度和特异性方面的比较。结果:四种方法检测结果差异无显著性(P>0.05),并且相关良好(r=0.9973),但ECLIA和CLIA在分析灵敏度、特异性、精密度及抗干扰能力方面均优于放射免疫法。结论:ECLIA和CLIA完全能够替代RIA和ELISA法,实现分析程序自动化,并具有试剂稳定,标志物有效期长,对人体没有危害和适宜临床肿瘤标志物大批量样品检测等优点。     

HBsAg三种检测方法的实验室评价

目的:对三种HBsAg检测方法进行比较和评价。方法:103份乙肝患者血清作试验组及112份非乙肝患者血清作对照组,分别用ELISA(双抗体夹心一步法)、金免疫层析试验(GICA)、化学发光免疫分析(CLIA)进行检测。结果:ELISA和GICA的敏感度和特异度均低于CLIA,GICA与CLIA的灵敏度,差异有统计学意义;ELISA与CLIA灵敏度差异无统计学意义。而ELISA与CLIA的特异度差异有统计学意义;GICA与CLIA的特异度差异无统计学意义。结论:ELISA与CLIA操作简便,成本低廉,灵敏度高。     

国产板式化学发光免疫分析系统与罗氏cobasE602免疫分析系统对肿瘤标志物检测结果的比对分析

目的通过比对分析国产科美板式化学发光免疫分析系统与罗氏电化学发光免疫分析系统测定糖类抗原199(Ca199)、糖类抗原125(Ca125)、糖类抗原153(Ca153)、总前列腺特异性抗原(t PSA)的检测结果,进而对国产科美板式化学发光免疫分析系统进行方法学评价。方法用科美板式化学发光免疫分析系统和罗氏cobas E602免疫分析系统按项目分组分别检测80份临床血清样本,以罗氏cobas E602分析系统为参考系统,对科美板式化学发光分析系统进行比对分析,计算两系统检测结果之间的灵敏度、特异度、两者检测符合率等指标,对两系统的检测结果做相关回归分析,并采用Kappa统计对两系统检测结果的一致性进行分析。结果科美板式化学发光分析系统(Y)与罗氏cobas免疫分析系统(X)的相关回归方程和相关系数为:t PSA(y=1.067x-0.798,r=0.973),Ca199(y=0.450x+45.06,r=0.913),Ca125(y=0.151x+48.29,r=0.779),Ca153(y=0.794x+11.12,r=0.740);两系统结果的灵敏度、特异度、符合率及一致性强度为:Ca199(灵敏度97.44%,特异度95.12%,符合率96.25%,Kappa=0.902,最强一致性),t PSA(灵敏度95.56%,特异度85.71%,符合率91.25%,Kappa=0.800,高度一致性),Ca153(灵敏度81.63%,特异度93.55%,符合率86.25%,Kappa=0.706,高度一致性),Ca125(灵敏度67.80%,特异度100%,符合率91.25%,Kappa=0.518,中度一致性)。结论科美板式化学发光免疫分析系统与罗氏cobas E602电化学发光免疫分析系统的检测结果相关性一般,检测Ca199、t PSA、Ca153的结果一致性较好,而Ca125需要修正参考区间以取得与罗氏cobas E602分析系统更好的结果一致性。     

对比3种不同免疫检验方法检测HIV抗体结果的可靠性

目的 对比酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析法、化学发光法检测人体免疫缺陷病毒(HIV)抗体的可靠性.方法 选取2018年9月至2020年9月于本院检测确诊为HIV的143例患者,采集血液样本,分别行酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析法、化学发光法检测,对比HIV抗体的检测结果.结果 酶联免疫吸附试验检测HIV抗体灵敏度为92.78％,特异度为93.48％,准确率为93.01％;胶体金免疫层析法检测HIV抗体灵敏度为91.75％,特异度为84.78％,准确率为89.51％;化学发光法检测HIV抗体灵敏度为98.97％,特异度为95.65％,准确率为97.90％;化学发光法检测HIV抗体的灵敏度高于酶联免疫吸附试验和胶体金免疫层析法,差异有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附试验、化学发光法检测HIV抗体的特异度、准确率均高于胶体金免疫层析法,差异有统计学意义(P<0.05).结论 化学发光法检测HIV抗体效能更高,疾病筛查时可有效避免漏检发生,值得临床推广运用.     

不同标本类型和检测方法对抗缪勒管激素结果影响的比对研究

目的以罗氏诊断电化学发光法(ECLIA)检测抗缪勒管激素(AMH)作为参照,对珠海丽珠化学发光法(CLIA)测定AMH结果进行评估。方法选取120例卵巢功能异常的女性血清样本,分别用罗氏Cobas 6000 e601全自动电化学发光免疫分析仪与珠海丽珠LEACL-600全自动化学发光免疫分析仪以双盲方式进行定量检测,通过统计学分析评估两者方法测定AMH的一致性。另外随机收集55例受试者同源血清、血浆,比较2种类型样本结果的一致性情况,评估其临床可接受度。结果120例血清样本共有效入组117例,罗氏诊断AMH结果均值6.06 ng/mL,结果中最高值为:15.11 ng/mL,最低值为0.248 ng/mL。2种方法检测的AMH结果高度相关(r=0.994,P<0.01);线性回归方程:y=0.9912x+0.0418,拟合度系数R²=0.9896>0.975。55例同源血清与血浆样本结果同样高度相关(r=0.997,P<0.01);线性回归方程:y=0.9963x+0.0627拟合度系数R²=0.9944>0.975。对方法学比对与同源标本比对的回归方程的系数进行t检验显示,截距(a)之差异均无统计学意义(P>0.05),而斜率(b)比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Bland-Altman一致性分析结果均在临床可接受范围内。结论2种方法检测AMH结果具有高度的相关性,珠海丽珠全自动化学发光免疫分析仪检测抗缪勒氏管激素可用于临床病情与疗效的监控,且同源血浆、血清样本对比试验结果一致性较好,临床接受度高。     

Chemiluminescence determination of melamine with Luminol-K3Fe(CN)6 system

A sensitive chemiluminescence (CL) method was developed for determining melamine in urine and plasma samples based on the fact that melamine can remarkably enhance the chemiluminescence of Luminol-K₃ Fe(CN)₆ system in alkaline medium. The determination conditions were optimized. Under optimum conditions, the chemiluminescence intensity had a good linear relationship with melamine in the range of 9.0 × 10^?9 – 7.0 × 10^?6 g/mL with a correlation coefficient of 0.9992. The detection limits (3σ) were 3.54 ng/mL for urine sample and 6.58 ng/mL for plasma sample. The average recoveries of melamine were 102.6% for urine sample and 95.1% for plasma sample. Melamine in samples was extracted with liquid-liquid extraction procedures and the assay results coincided very well with that determined with flow injection chemiluminescence method. The method provides a reproducible and stable approach for sensitive detection and quantification of melamine in urine and plasma samples.     

两种化学发光系统检测甲胎蛋白的可比性研究

目的探讨州泰ZT-480型化学发光分析系统与贝克曼Access2型化学发光分析系统检测血清甲胎蛋白(AFP)的可比性及临床可接受性。方法收集120份新鲜血清标本,其AFP浓度范围覆盖AFP的可报告范围,分别在州泰ZT-480型及贝克曼Access2型化学发光分析仪上同时检测。以贝克曼Access2型化学发光分析仪为比较系统,对采用州泰ZT-480型化学发光分析系统检测的结果进行相关性分析,偏差分析,评估阴、阳性符合率。结果 AFP检测结果在两系统间的差异具有统计学意义(P<0.01),相关系数为0.977 3,在20ng/mL、400ng/mL处,相对偏差分别为24.1%、7.9%,两系统的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为100.0%、95.4%、96.7%。结论两系统的临床可接受性能具有可比性,州泰ZT-480型化学发光分析系统可用于AFP的临床检测。     

胱抑素C的IgG-和IgY-ELISA检测体系的建立与评价

目的建立适用于检测人胱抑素C（Cystatin C）的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗体IgG,并分别建立三种ELISA夹心检测体系,I：捕捉抗体IgG＋检测抗体IgY＋抗鸡IgY酶标抗体;Ⅱ：捕捉抗体IgG＋检测抗体IgY＋兔F（ab＇）2抗鸡酶标抗体;Ⅲ：捕捉抗体IgY＋检测抗体IgG＋抗兔IgG酶标抗体。通过比较Cystatin C的最低检测浓度和阴性对照的OD值评价三种夹心法的灵敏度和特异性。结果体系I的Cystatin C最低检测浓度为7.5ng/mL（阴性对照OD值为0.737）,体系Ⅱ的Cystatin C最低检测浓度为13ng/mL（阴性对照OD值为0.313）,体系Ⅲ的Cystatin C最低检测浓度为10ng/mL（阴性对照OD值为0.31）。结论成功建立了Cystatin C的双抗体夹心ELISA检测体系,体系I的灵敏度最高但其特异性差,体系Ⅱ和Ⅲ的检测灵敏度和特异性均较好,可以用于Cystatin C的检测。     

电化学免疫传感器超灵敏检测髓过氧化物酶的研究

目的：本研究拟建立一种电化学免疫传感器用于超灵敏检测人血清中髓过氧化物酶（MPO）水平的方法。方法通过石墨化多孔碳-金复合纳米材料（AuNPs＠ GMCs）将 MPO 抗体固定到玻碳电极表面,研制出一种新型 MPO 电化学免疫传感器,探讨了实验条件对传感器性能的影响,并与酶联免疫吸附试验（ELISA）进行方法学比较。结果在最优条件下该传感器对MPO 反应灵敏,其线性范围为2．000～300．000 ng／mL ,相关系数为0．999,检出限为0．5 ng／mL ,与 ELISA 法检测结果的相关系数为0．983。结论该电化学免疫传感器可实现对 MPO 的超灵敏检测。     

化学发光法测定CA50及CA242方法学评价*

目的：对科美CHEMCLIN 1500全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤相关抗原50（CA50）、肿瘤相关抗原242（CA242）的分析性能进行方法学验证。方法：参照美国临床实验室标准化委员会（NCLLS）EP文件要求,应用科美CHEMCLIN 1500全自动化学发光免疫分析仪定量测定CA50、CA242,评价检测CA50、CA242的精密度、正确度、检出限和分析测量范围。结果：CA50、CA242批内精密度变异系数均＜15%,批间精密度变异系数均＜15%;测定CA50、CA242定值校准品与靶值的偏倚＜5%,正确度满足判断标准;CA50、CA242检出限分别为0.68 U/mL、0.56 U/mL;CA50浓度在19.43～131.55 U/mL范围内其测定的线性相关系数r2为0.9895,CA242在15.86～191.25 U/mL范围内其测定的线性相关系数r2为0.9971。结论：本次研究所验证的科美CHEMCLIN 1500全自动化学发光免疫分析仪检测CA50、CA242的精密度、正确度、检测限、线性范围均与厂家声称值一致,表明该检测系统具有精密度好、正确度高、良好的线性等优点,能够满足临床检测的性能要求。     

可替宁单克隆抗体的制备及其在免疫学检测中的应用

目的: 研制可替宁单克隆抗体（单抗）,并建立检测人体尿液样本中可替宁的免疫检测方法。方法: 利用人工合成的可替宁-牛血清白蛋白（COT-BSA）免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术筛选一种对可替宁具有高特异性和敏感性的单抗,并将该单抗用于建立间接竞争ELISA（ic-ELISA）和胶体金免疫层析试纸,检测人体尿液中可替宁的含量。结果: 所研制的可替宁单抗经ic-ELISA鉴定,半数有效抑制浓度为21 ng/mL,经胶体金免疫层析试纸鉴定,截断值为100 ng/mL。所建立的ic-ELISA方法检测限为0.1 ng/mL,回收率为99.41%~117.98%,批间和批内变异系数分别小于等于15.31%和15.07%。所建立的胶体金免疫层析试纸稳定性和重复性检测准确率均为100%。结论: 以制备的可替宁单抗为基础开发的ic-ELISA和胶体金免疫层析试纸可快速、可靠地检测人体尿液中可替宁含量,可作为环境烟草烟雾在人体内暴露程度的有效检测方法。     

儿童非典型呼吸道病原体感染与维生素D水平的相关研究

目的 探讨儿童非典型呼吸道病原体感染与维生素D(VitD)水平之间的关系.方法 应用呼吸道十一联检测试剂盒(间接免疫荧光法)对414例儿童呼吸道感染患者的血清样本进行11项非典型呼吸道病原体的IgM抗体检测,包括呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(Adv)、流感病毒A型(FluA)、流感病毒B型(FluB)、副流感病毒(PFlu)、肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)、柯萨奇病毒B型(CoxB)、柯萨奇病毒A型(CoxA)和嗜肺军团菌(LP)等;同时应用电化学发光法检测血清样本的VitD水平.结果 414份标本中共有214份检出病原体IgM(51.69%),检出率居前3位的依次为FluB、FluA及MP,阳性检出率分别为32.13%、23.19%、13.77%.在IgM抗体阳性病例中,17.63%的患儿发生单一感染,34.06%的患儿为混合感染.IgM抗体阳性组的VitD水平(中位数23.60 ng/mL,3.37~71.50 ng/mL)与阴性组(中位数23.95 ng/mL,3.00~81.70 ng/mL)之间差异无统计学意义(P>0.05).VitD偏低组与VitD正常组之间总感染阳性率、单一感染阳性率和混合感染阳性率差异均无统计学意义(P>0.05),VitD偏低组与VitD正常组之间FluB、FluA及MP IgM抗体阳性率差异均无统计学意义(P>0.05).非典型呼吸道病原体与VitD之间无相关性(r=0.005,P=0.912).结论 非典型呼吸道病原体感染可能与VitD水平降低无关.