亮菌多糖的分离纯化

目的 通过醇沉、色谱等分离提取技术对发酵得到的亮菌胞内多糖进行分离纯化,并对纯化的多糖进行结构及部分性质研究.方法 采用水提、醇沉、除蛋白等方法得到亮菌胞内粗多糖,然后通过离子交换色谱、分子筛色谱对粗多糖进行进一步的分离纯化,得到单一多糖.同时采用红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振法对该单一多糖进行结构研究,确定其单糖组成及糖链的连接方式.结果 通过去蛋白、醇沉、离子交换色谱和凝胶滤过色谱的方法得到亮菌胞内多糖IPS-B2,该多糖为直链α-D-(1→6)-吡喃型葡聚糖,不含蛋白质、多肽和氨基酸.结论 通过纯化得到了直链α-(1→6-葡聚糖(IPS-B2),该多糖在体内具有较好的抑瘤效果.     

板蓝根多糖的系统分离纯化与组成分析

目的建立板蓝根多糖的系统分离纯化方法,并对分离得到的均一多糖进行组成测定。方法以抗病毒活性较好的80%醇沉板蓝根粗多糖为研究对象,对其进行DEAE-Sepharose Fast Flow柱色谱、Sephacryl-200葡聚糖凝胶柱色谱以及高效凝胶色谱系统分离纯化。分别采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)和邻苯二甲醛(OPA)衍生化HPLC法对分离得到的板蓝根均一多糖进行单糖组成和氨基酸组成测定。结果利用系统分离纯化策略,从80%醇沉板蓝根粗多糖中分离得到2种均一板蓝根多糖(IRPS1A和IRPS1B)和2种均一板蓝根糖蛋白(IRPS2A和IRPS3A)。其中,IRPS1A与IRPS1B的单糖组成均为甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖;IRPS2A的单糖组成为半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖;IRPS3A的单糖组成为甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖。糖蛋白IRPS2A与IRPS3A均含有天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸,共14种氨基酸残基。同时,IRPS2A还含有酪氨酸残基。结论该系统分离纯化的策略可应用于板蓝根均一多糖(糖蛋白)的获取,为板蓝根多糖的结构分析及药理活性研究奠定基础。     

仙人掌多糖的分离、纯化及性质研究

目的分离、纯化具有降血糖作用的仙人掌多糖组分。方法经热水提取、乙醇沉淀、DEAE Sepharose fast flow离子交换色谱和Sephadex G系列凝胶滤过色谱纯化得到5种仙人掌多糖组分。醋酸纤维薄膜电泳检测多糖纯度,凝胶色谱测定相对分子质量,高效液相色谱测定糖的组成。结果5种多糖都已达到电泳纯。它们的相对分子质量依次为2.0×103、1.0×106、4.0×103、9.2×105、5.0×103。ODP1由鼠李糖组成,ODP2可能由鼠李糖和葡萄糖组成,ODP4可能由鼠李糖和D-半乳糖组成。ODP3和ODP5分别由鼠李糖和一未知糖组分组成。结论仙人掌多糖的提取没有必要采用脱蛋白、脱色素步骤,本实验所提取的仙人掌多糖是均一的。     

转基因西洋参冠瘿组织中多糖的分离和纯化

目的分离纯化转基因西洋参冠瘿组织中多糖组分,为从该转基因材料中寻找重要生物活性前体多糖药物提供科学依据。方法用水醇提取法,以DEAE Sepharose FF和Sephacryl S-100柱色谱进行多糖的分离纯化,采用高效液相色谱测定单糖组成,色谱和光谱学方法鉴定其纯度和化学结构。结果分离得到4个精多糖(PPQ50-1、PPQ50-2、PPQ70-1和PPQ70-2),凝胶色谱法(Sephadex G-200)和旋光法证实了它们为化学均一性多糖;凝胶色谱法测得4种精多糖的相对分子质量分别为4.7×104,2.9×105,7.5×104和1.3×105;对得量较多的PPQ50-2和PPQ70-2进行了结构分析,证明二者均为葡聚糖;并利用NaIO4氧化反应和核磁共振谱等方法对PPQ50-2的化学结构进行了初步的糖基键合分析。结论首次从转基因西洋参冠瘿组织中分离得到4种化学均一性多糖成分,其中PPQ50-2和PPQ70-2均为葡聚糖。     

小刺猴头多糖Ⅰ的分离纯化及组成分析

 目的从小刺猴头菌子实体中提出水溶性粗多糖(HP),从粗多糖中分离出均一多糖并研究其单糖组成。方法DEAE-SepharoseCL-6B及SephadexG-100柱色谱进一步纯化得HPⅠ,柱色谱,醋酸纤维素薄膜电泳等方法检验纯度,GC和PC测其单糖组成。结果HPⅠ为均一多糖,相对分子质量约为65000,单糖组成为:Fuc,Glc,Gal,摩尔比依次为0.423:1:2.110。结论HPⅠ为中性杂多糖,首次从小刺猴头菌子实体中提取获得。     

马齿苋多糖POPⅢb的分离纯化及其结构特征

目的研究从马齿苋全草中得到的多糖POPb的组成和结构特征。方法经热水提取、乙醇沉淀的方法从马齿苋全草中提取粗多糖,通过Sevage法脱蛋白质后,再经DEAE-纤维素柱色谱和Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱色谱分离纯化得到马齿苋精多糖,由醋酸纤维薄膜电脉和Sephadex G-200葡聚糖凝胶过滤法检验其均一性。通过薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)、红外光谱(IR)和核磁共振(NMR)等分析手段初步测其结构组成。结果马齿苋多糖POPb为均一性组分,其单糖组成为阿拉伯糖、木糖和半乳糖醛酸,摩尔比为4.6∶1.1∶4.8,POPb具有典型的多糖吸收峰,其结构中存在α-,β-型糖苷键。结论马齿苋多糖POPb属果胶类多糖。     

黄精中的多糖组分及其免疫活性

目的研究黄精Polygonatum sibiricum中的多糖组分的结构特征及免疫活性。方法黄精水提粗多糖用DEAE-纤维素柱色谱和凝胶过滤色谱进行分离纯化,用化学及光谱方法分析各多糖组分的结构特征,并进行免疫活性测试。结果黄精水提粗多糖经分离纯化,得到5种多糖。PSW1B-b为中性半乳聚糖,PSW2A-1和PSW3A-1为酸性多糖,PSW4A和PSW5B为糖蛋白,其中PSW3A-1、PSW4A、PSW5B具有一定免疫活性。结论5种多糖为首次从黄精中分得,并都以半乳糖为主要构成单元,其中3种具有免疫活性。     

香菇多糖的药理及临床研究进展

1　化学研究1 1　多糖的组成与结构研究　香菇 (Lentinusedodes)子实体经热水提取 ,乙醇沉淀 ,得香菇多糖粗品 (Le) ,脱游离蛋白、脱色 ,经DEAE 纤维素柱及纤维素凝胶柱分离纯化得到Le 1、Le 2和Le 33个组分。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和SepharoseCL 6B柱层析鉴定为分子量分布均一的蛋白多糖。凝胶渗透色谱法测得Le 1、Le 2和Le 3分子量分别为 95 4 0 0 0、90 0 0 0和 14 0 0 0 ,3个组分均由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸组成。Le 1、Le 2和Le 3、Le 1、Le 2和Le 3葡萄糖醛酸含量 (% )分别为 2 4、10和 34,蛋白…     

太子参均一多糖的分离与表征

目的:对太子参抗二型糖尿病多糖活性部位(PF40),进行分离纯化得到均一多糖并对其进行结构表征。方法:太子参粉碎后,通过水提醇沉法(40%乙醇)得到太子参粗多糖,采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱对其分离纯化,得到一种均一多糖,采用高效凝胶渗透色谱法测定分子量,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)-柱前衍生高效液相色谱法分析单糖组成。结果:分离得到一种均一多糖,由葡萄糖组成,分子量为18400Da,命名为HPh-1-1。结论:太子参均一多糖HPh-1-1是一种葡聚糖。     

白毛藤多糖的分离、纯化和鉴定

目的分离、纯化和鉴定白毛藤S olanum ly ra tum中的多糖的成分。方法经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、酶-Sevag法脱蛋白得到的粗多糖,再经DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换和Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱色谱分离得到纯化的白毛藤多糖(SLPS),用红外光谱和紫外光谱分析鉴定该多糖,凝胶渗透色谱(GPC)法测定其相对分子质量,运用薄板色谱(TLC)和纸色谱(PC)法初步测其结构组成。结果红外光谱分析具有典型的多糖特征吸收峰,紫外光谱分析未见蛋白质(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰。结论本实验所提取的白毛藤多糖为单一组分的多糖。     

山豆根多糖的性质和化学组成

 目的研究山豆根中各种水溶性多糖的性质、组成和类型。方法山豆根脱脂后,用热水,1mol·L^-1NaOH,2.5 mol·L^-1NaOH依次进行提取,分离纯化,进行组成分析和性质测定。结果共分离得到8种均一的多糖：山豆根水提多糖Ssa^-1,Ssa^-2,Ssa^-3,Ssa^-4,山豆根碱提多糖SSb-1FA, SSb^-2,SSb^-3和SSc^-1,根据组成和性质,它们分属于5种结构类型。结论山豆根中的可溶性多糖包括：淀粉、类淀粉、半纤维素、果胶,其中淀粉的含量最多,其次为果胶类多糖。     

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??OBJECTIVE To purify polysaccharides from Pteridium revolutum (Blume.) Nakai and determine their relative molecular weights, monosaccharide compositions and immunomodulating activities.METHODS Crude polysaccharide was extracted from P. revolutum with hot water and then purified by DEAE Sepharose Fast Flow and Sephadex G-200 chromatography column after removing proteins by Seveg method. The immunomodulating activities of the polysaccharides were investigated on macrophage cells RAW264.7.RESULTS Three homogenous polysaccharides, PRP0, PRP1 and PRP2, were obtained from the crude polysaccharide. Their molecular weights were 1.04??10⁶, 8.39??10⁵ and 7.37??10⁵, respectively. Monosaccharide composition analysis by gas chromatography revealed that all three homogenous polysaccharides were composed of arabinose, fucose, galactose, mannose, glucose, rhamnose, and xylose in different ratios. The crude polysaccharide and three homogenous polysaccharides could promote the proliferation of RAW264.7 cells at the concentration of 12.5-100 ??g??mL^-1 and significantly induce the production of NO from RAW264.7 cells in a dose-dependent manner.CONCLUSION P. revolutum polysaccharides can improve immunity activity.     

Complement activity of polysaccharides from three different plant parts of Terminalia macroptera extracted as healers do

Ethnopharmacological relevance

Water decoctions of the root bark, stem bark and leaves of Terminalia macroptera are used by traditional healers in Mali to cure a wide range of illnesses, such as wounds, hepatitis, malaria, fever, cough and diarrhea as well as tuberculosis. Plant polysaccharides isolated from crude water extracts have previously shown effects related to the immune system. The aims of this study are comparing the properties of the polysaccharides among different plant parts, as well as relationship between chemical characteristics and complement fixation activities when the plant material has been extracted as the traditional healers do, with boiling water directly.

Materials and methods

Root bark, stem bark and leaves of Terminalia macroptera were extracted by boiling water, and five purified polysaccharide fractions were obtained by anion exchange chromatography and gel filtration. Chemical compositions were determined by GC of the TMS derivatives of the methyl-glycosides and the linkage determined after permethylation and GC–MS of the derived partly methylated alditol acetates. The bioactivity was determined by the complement fixation assay of the crude extracts and purified fractions.

Results

The acidic fraction TRBD-I-I isolated from the root bark was the most active of the fractions isolated. Structural studies showed that all purified fractions are of pectic nature, containing rhamnogalacturonan type I backbone. Arabinogalactan type II side chains were present in all fractions except TRBD-I-II. The observed differences in complement fixation activities among the five purified polysaccharide fractions are probably due to differences in monosaccharide compositions, linkage types and molecular sizes.

Conclusion

The crude extracts from root bark and stem bark have similar total activities, both higher than those from leaves. The root bark, leaves and stem bark are all good sources for fractions containing bioactive polysaccharides. But due to sustainability, it is prefer to use leaves rather than the other two plant parts, and then the dosage by weight must be higher when using leaves.     

沙棘叶水溶性多糖的分离纯化及体外清除自由基活性研究

通过采用热水提取、乙醇沉淀获得沙棘叶水溶性粗多糖,再经酸性乙醇分级,将沙棘叶水溶性粗多糖分为三个级分SJ1、SJ2和SJ3,将对自由基有初步清除作用的SJ2脱蛋白后经DEAE-SephdexA-25进行分离纯化得SJ22。SJ22经纸层析、醋酸纤维薄膜电泳和SephroseCL-4B柱层析纯度鉴定表明:SJ22为分子量均一的纯多糖。分子量为7万。纸层析显示SJ22单糖组成为Xy1、Ara、G lc、Gal、GalA。抗衰老活性研究结果表明,SJ22能有效清除.OH、O2-.自由基,对脂质自由基.R效果不明显。     

橘黄裸伞子实体中的多异戊二烯多醇类化合物分离鉴定

目的:发现更多的高等真菌次级代谢产物,研究法国野生致幻真菌橘黄裸伞Gymnopilus spectabilis子实体的化学成分。方法:采用常压硅胶柱色谱、凝胶色谱和中压液相色谱、制备高效液相色谱等手段对橘黄裸伞子实体的三氯甲烷-丙酮-甲醇(1∶1∶1)提取物进行分离纯化,利用核磁共振波谱和高分辨质谱等方法鉴定化合物结构。结果:从法国野生真菌橘黄裸伞子实体中分离得到了6个多异戊二烯多醇类化合物,分别是gymnopilene A (1),hypsiziprenol B_(10),A_(10),A_(11)(2～4),gymnopilin A_(10),3a(5,6)。结论:化合物1为新化合物,命名为gymnopilene A。化合物1～4为首次从橘黄裸伞中分离得到。     

丹参多糖的提取分离及结构鉴定

目的：对中药丹参中多糖进行研究。方法：丹参药材经过水提醇沉得到丹参粗多糖,以DEAE-Sepharose Fast Flow 纯化后,以H₂O₂脱色,流水透析,冷冻干燥后得到2个浅黄色均一多糖SMP 1,SMP 0.5,经¹3C-NMR,DEPT,IR谱,单糖组分分析、部分酸水解等方法鉴定其结构。结果：SMP 1,SMP 0.5相对分子质量分别约为1.39×10⁶,4.03×10⁵,SMP 1主要以α-(1→6)D-Glc聚合而成,有少量的α-(1→2)D-Glc聚合；SMP 0.5主要由α-(1→6)D-Glc聚合而成。结论：SMP 1,SMP 0.5为从丹参中首次分离得到的中性均一多糖。     

赤芝子实体的化学成分研究

目的 研究赤芝子实体的化学成分.方法 应用多种色谱方法进行分离和纯化,通过1H,13C-NMR 和MS 等波谱技术确定化合物的结构.结果 从赤芝子实体中分离得到8个化合物,分别被鉴定为:灵芝醇B(ganoderiol B,1)、灵芝酸A (ganoderic acid A,2)、赤芝酸A(lucidenic acid A,3)、灵芝萜酮二醇(ganodermanondiol,4)、 3,7,11,15,23-5O-5α-羊毛甾-8-烯-26烷酸(3,7,11,15,23-pentaoxo-5α-lanosta-8-en-26- oic acid,5)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五烷酸酯(ergosta-7,22-dien-3β-ol- pentadecanoate,6)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(ergost a-7,22-dien-3β-ol,7)及正二十六烷酸(n-hexacosanoic acid,8).结论 其中化合物8为从该植物中首次分离得到.     

粗茎秦艽多糖GCP-1的分离纯化、结构表征及抗炎活性评价

目的从粗茎秦艽Gentianacrassicaulis中分离纯化多糖,初步分析其结构特征并研究其体外抗炎活性。方法采用热水浸提粗茎秦艽粗多糖(Gentianacrassicaulispolysaccharide,GCP),再经CelluloseDE-52纤维素离子交换柱、Sephadex G-100柱进行分离纯化,得到GCP-1。采用高效凝胶色谱法(HPGPC)鉴定纯度并测定其相对分子质量;采用高效液相色谱(HPLC)测定其单糖组成;采用红外光谱(IR)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)和核磁共振波谱法对该多糖的结构进行初步分析;采用CCK-8法检测其对小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7增殖的影响;利用ELISA试剂盒测定其对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、一氧化碳(NO)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)释放量的影响。结果从粗茎秦艽中分离纯化得到GCP-1多糖,相对分子质量为6.87×10⁴,由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖7种单糖组成,其物质的量比为0.07∶3.07∶0.42∶1.98∶1.33∶5.22∶6.76;IR、GC-MS和核磁共振波谱分析表明,GCP-1是一种典型的果胶多糖,含有HG和RGI区域及AGI和AGII侧链;质量浓度在10~200μg/m L时,GCP-1能明显促进小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7的增殖(P<0.05),并能明显抑制小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7分泌IL-1β、NO和TNF-α。结论GCP-1为从粗茎秦艽中分离得到的天然来源的均一多糖,其结构和活性初步研究为秦艽多糖成分的开发提供了一定参考。     

铁皮石斛原球茎多糖的研究

 目的 研究铁皮石斛原球茎多糖的理化性质。方法 经过水提醇沉、脱蛋白和透析等步骤获得铁皮石斛粗多糖（CDO）和原球茎粗多糖（CDOP）;CDOP经过纤维素DE-52和葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析获得6个均一多糖;用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定均一多糖的纯度及相对分子质量;用气相色谱法（GC）分析粗多糖和均一多糖的单糖组成;用高碘酸氧化-Smith降解反应研究均一多糖的一级结构。结果 CDO主要由甘露糖和葡萄糖组成,物质的量比为4.29∶1.00;CDOP主要由半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,物质的量比为2.80∶1.00∶0.61。从CDOP中获得了6个质量均一的多糖,分别为DOPW-1（78×103）、DOPW-2（37×103）、DOPS1-1（287×103）、DOPS1-2（351×103）、DOPS1-3（335×103）和DOPS1-4（171×103）;它们的单糖组成及物质的量比等特点与DOP的相同;各均一多糖分子中的1→3糖苷键均主要由半乳糖组成,还含有阿拉伯糖、葡萄糖和鼠李糖;除DOPS1-4外,各均一多糖的一级结构中均不存在1→4糖苷键。结论 这6个均一多糖为首次从铁皮石斛原球茎中得到。