裸鼹鼠胸腺、脾脏及淋巴结解剖学、组织学与超微结构的初步观察

目的 探讨裸鼹鼠脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结的组织结构及超微结构特点.方法 分别取裸鼹鼠脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结组织进行HE染色和透射电镜观察.结果 裸鼹鼠胸腺退化明显,脂肪化程度较高;脾脏被膜和小梁较厚,脾小体较小,数量少,边界清晰;肠系膜淋巴结与C57BL/6J小鼠肠系膜淋巴结并无太大差异.结论 明确了裸鼹鼠脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结组织解剖学、组织学与超微结构特点,为今后裸鼹鼠开展相关研究奠定了基础.     

裸鼹鼠生物学特性的研究进展

裸鼹鼠是主要产于非洲肯尼亚、埃塞俄比亚等地的啮齿类动物,它诸多奇特的生物学特性为医学研究提供了一种新型应用面较广的实验动物,尤其是其在肿瘤、衰老、老年病、心血管病的发病机制研究和止痛药的研发方面更是有着无以伦比的优势,是近些年在国内外备受关注的一种新型实验动物.     

裸鼹鼠骨骼标本的制作及其形态学观察

目的采用传统方法制备裸鼹鼠骨骼标本,对其骨骼系统进行形态学观察。方法利用水煮法制作裸鼹鼠骨架,与C57BL／6J小鼠骨骼标本比较研究裸鼹鼠骨骼特点,并观察裸鼹鼠股骨三维结构。结果所制作的裸鼹鼠骨架完整洁净,没有骨质损伤,裸鼹鼠头骨、椎骨、肋骨、四肢骨均具有适应于穴居习性的特征。结论裸鼹鼠的骨骼具有典型的适应掘穴生活的特征。     

裸鼹鼠生化位点的初步研究

目的研究裸鼹鼠（NMR）的生化位点特征,初步建立裸鼹鼠生化位点的检测方法。方法以小鼠近交系的生化位点为参照,应用小鼠的检测方法,检测裸鼹鼠的11种同工酶的活性。结果裸鼹鼠的酯酶-1、转铁蛋白为慢带;葡萄糖磷酸异构酶-1、苹果酸酶-1、异柠檬酸脱氢酶-1为中间带;血红蛋白B链、肽酶-3、碱性磷酸酶-1、磷酸葡萄糖变位酶-1、酯酶-3、过氧化氢酶．2为快带。结论7只裸鼹鼠的11个生化位点为一致的条带,无多态性,表现为纯合型。     

裸鼹鼠的人工饲养繁育初步研究

目的 探索裸鼹鼠的人工饲养和繁育方法.方法 在科学的饲养管理和适宜的饲养环境下,采用全同胞兄妹交配的方法,观察统计裸鼹鼠的妊娠率、胎间隔、窝产仔数、离乳数和成活率.结果 通过7对裸鼹鼠的繁育观察,表明裸鼹鼠能适应人工环境.雌雄鼠初次交配年龄为8～12月龄,第1胎妊娠率为71.43％;5只母鼠第1胎平均产仔数9.20±3.90只/窝,离乳数7.60±5.03只/窝,成活率为75.10％±42.49％;第2胎胎间隔89.00±19.53 d、产仔数9.60±5.68只/窝、离乳数6.20±4.09只/窝,成活率为74.33％±34.19％;第3胎胎间隔99.60±17.17 d、产仔数12.40±4.77只/窝、离乳数10.00±3.08只/窝,成活率为82.91％±16.70％.结论 裸鼹鼠在人工环境适应后,繁殖性能大大提高,可以培育出实验动物化的裸鼹鼠.     

裸鼹鼠不同组织中低氧相关基因的表达

目的 检测幼年与成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中低氧相关基因的表达水平,分析裸鼹鼠耐低氧的分子机制.方法 分别提取幼年与成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中mRNA,采用RT-PCR方法检测低氧相关HIF-Iα、VEGFb、FLT-1、FLT-3、Fiz1、NKRF基因的表达.结果 成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中HIF-1α、VEGFb、FLT-1、FLT-3、Fiz1、NKRF的表达水平显著高于幼年裸鼹鼠.结论 裸鼹鼠体内低氧相关基因在不同年龄阶段表达水平不同.     

裸鼹鼠与C57BL/6J小鼠肾脏组织结构及超微结构比较

目的 比较新型实验动物裸鼹鼠与常用啮齿类实验动物小鼠肾脏的组织结构和超微结构的差异.方法 采用成年裸鼹鼠与C57BL/6J小鼠,处死后取肾脏,制作组织标本和电镜标本,利用光学显微镜和透射电镜观察其结构.结果 与C57BL/6J小鼠比较,裸鼹鼠肾小管上皮较薄,肾脏皮、髓质内存在较多的病理性钙化灶;肾小管上皮细胞内线粒体出现扩张甚至崩解,内质网扩张明显.结论 裸鼹鼠肾脏组织在结构上与C57BL/6J小鼠存在明显差异;裸鼹鼠肾小管上皮存在渐进性病理损伤,同时也存在较强的自我修复能力.     

裸鼹鼠生长发育指标及主要脏器系数正常参考值测定

目的测定不同周龄裸鼹鼠的生长发育指标及脏器系数正常参考值。方法以本中心近3年来饲养繁殖的裸鼹鼠为数据来源,测量其生长发育指标及脏器系数。结果裸鼹鼠生长发育过程中雌雄差异不明显。结论裸鼹鼠生长发育各项指标及脏器系数参考范围的确定为其实验动物标准化及实验应用提供重要参考数据。     

裸鼹鼠血液生理生化及尿常规值的测定

目的对裸鼹鼠进行血液生理指标、生化指标和尿常规值测定。方法采用全自动血细胞分析仪、生化测定仪及尿液分析仪对不同月龄、不同性别裸鼹鼠的血液学指标、生化指标值及尿常规值进行测定。结果得到了3月龄、6月龄和9周龄以及不同性别裸鼹鼠血液生理生化值与尿常规值;部分血液生理指标受性别及月龄影响较大。结论明确了裸鼹鼠部分血液生理生化及尿常规正常范围值,为今后裸鼹鼠研究奠定了基础。     

裸鼹鼠在生物医学研究中的应用前景

裸鼹鼠是一种奇特的动物,具有寿命长、抗肿瘤、耐缺氧、新陈代谢率低、痛觉缺失、触觉灵敏、视觉功能低下、骨骼再生能力强等诸多特点。本文在概述裸鼹鼠上述生物学特点的基础上,结合当前肿瘤、衰老、低氧适应以及疼痛等领域研究趋势,对裸鼹鼠在生物医学研究中的应用前景进行分析与展望。     

氯化钴诱导低氧对裸鼹鼠肝星形细胞增殖及凋亡的影响

目的 比较研究氯化钴(CoCl2)对裸鼹鼠及C57BL/6J小鼠肝星形细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用活细胞计数试剂盒(CCK8)法和流式细胞术分别检测不同浓度CoCl2对裸鼹鼠和小鼠肝星形细胞增殖活力以及和凋亡水平的影响.采用蛋白印迹测定CoCl2处理后裸鼹鼠肝星形细胞低氧诱导因子1α(HIF-1α)和凋亡相关蛋白(BCL2、BAX)的表达水平.结果 低浓度(50 μtmol/L)CoCl2对C57BL/6j、鼠肝星形细胞增殖活性具有明显的抑制作用,并能显著提高其凋亡率,然而同样剂量的CoCl2能够显著提高裸鼹鼠肝星形细胞的增值活性,对细胞凋亡率亦无明显影响.高剂量CoCl2(＞200 μtmol/L)虽能导致裸鼹鼠肝星形细胞增殖活力的降低,及凋亡率的升高,但裸鼹鼠肝星形细胞的变化幅度明显小于小鼠.同时CoCl2处理后,裸鼹鼠肝星形细胞HIF-1α的表达或累积显著升高(P＜0.05),BCL2/BAX比率显著上调(P＜0.05).结论 与C57BL/6J小鼠相比,裸鼹鼠肝星形细胞具有更强的抵抗CoCl2引起的化学性低氧损伤的能力.同时HIF-1α可能参与调控裸鼹鼠抵抗化学性低氧环境造成的损伤.     

裸鼹鼠与C57BL/6小鼠自噬调节的比较研究

目的 比较裸鼹鼠与小鼠的自噬调节,以期为裸鼹鼠高自噬、抗癌、衰老缓慢等生物学特性的研究提供参考.方法 利用电镜技术和蛋白印迹检测新生裸鼹鼠和C57BL/6小鼠肝脏和肺脏组织的自噬水平.自噬干扰裸鼹鼠成纤维细胞和小鼠成纤维细胞,24、48、72h CCK-8细胞计数法检测细胞的增殖情况,蛋白印迹检测各组细胞各个时间点Beclin 1的表达水平.结果 与C57BL/6小鼠比较,裸鼹鼠组织的LC3B表达显著较高.裸鼹鼠细胞对自噬抑制剂3-MA具有一定的耐药性,自噬诱导剂雷帕霉素对裸鼹鼠细胞的增殖抑制显著高于小鼠细胞.结论 裸鼹鼠组织具有高自噬水平,应对外界的自噬抑制压力时,裸鼹鼠细胞的自身调节能力明显高于C57BL/6小鼠.     

应用通用荧光引物筛选裸鼹鼠微卫星位点方法的建立

目的 建立使用通用荧光引物分步PCR法筛选裸鼹鼠微卫星位点的方法.方法 在特异性引物F链的5'端连接通用引物,先以特异引物R链和加长引物F链进行PCR,再加入通用荧光引物进行第二步PCR,最后使用琼脂糖电泳和毛细管电泳检测扩增产物,同时以传统的荧光引物PCR为对照.结果 琼脂糖电泳结果显示,通用荧光引物PCR产生的目的片段清晰,引物特异性强,目的片段多态性与传统PCR产生的多态性一致,且片段大小均比传统PCR产生的目的片段大15 bp左右,与预期一致.毛细管电泳结果也显示,通用引物PCR结果检测的等位基因数与传统荧光引物PCR方法产生的数量完全一致,无杂带,扩增效率高,具有较强的可操作性.结论 使用通用荧光引物分步PCR法结果可应用于裸鼹鼠基因组大量微卫星位点的筛选.     

裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平的检测

目的 检测生长期和成年期裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平,以了解裸鼹鼠的正常免疫水平.方法 通过眼眶静脉丛采集6月龄和12月龄裸鼹鼠外周血,提取外周血白细胞mRNA,反转录成cDNA后,实时定量PCR检测各组裸鼹鼠外周血中白细胞IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-12、TN F-α、IFN-γ的mRNA表达水平.结果 除了IFN-γ、IL-4各组间无显著差异,6月龄裸鼹鼠的IL-2、TNF-α显著高于12月龄裸鼹鼠,尤其是6月龄雄性裸鼹鼠的表达水平显著较高.而细胞因子IL-1,IL-6中,6月龄雄性裸鼹鼠的表达水平也显著高于12月龄裸鼹鼠.另外,对细胞因子IL-8、IL-12表达检测结果表明,12月龄雌性裸鼹鼠的IL-8表达水平最低,而12月龄雄性裸鼹鼠的IL-12表达最低.结论 生长期雄性裸鼹鼠的细胞免疫水平和体液免疫水平均高于同龄的雌性动物和成年动物.     

裸鼹鼠与C57BL／6J小鼠骨骼肌结构与摄氧能力比较

目的分析比较裸鼹鼠与C57BL／6J小鼠的骨骼肌结构和摄氧能力。方法采集裸鼹鼠与小鼠的腓肠肌经石蜡切片苏木精-伊红染色,以及经冰冻超薄切片和染色后,然后用光学显微镜和投射电镜观察两个物种骨骼肌的形态结构;同时对骨骼肌组织进行CD34免疫组化染色,将骨骼肌匀浆后取上清用分光光度法对肌红蛋白的含量进行测定,观察两个分析两个物种摄氧能力的高低。结果裸鼹鼠骨骼肌肌原纤维比C57BL／6J小鼠粗大,而且肌块、肌束甚至肌原纤维外围都有较多结缔组织;肌细胞中线粒体数目明显大于C57BL／6J小鼠,而体积则较小,其线粒体的表面积大于C57BL／6J小鼠;骨骼肌组织中微血管密度明显大于C57BL／6J小鼠;骨骼肌中肌红蛋白的含量是C57BL／6J小鼠的1．5倍。结论裸鼹鼠骨骼肌比C57BL／6J小鼠发达和粗壮,结缔组织较C57BL／6J小鼠丰富,肌肉更为柔软和灵活;线粒体总表面积、微血管密度和肌红蛋白含量都较C57BL／6J小鼠高,其摄氧能力比后者更为强大。     

裸鼹鼠成纤维细胞原代培养方法的建立

目的建立裸鼹鼠成纤维细胞的原代培养方法,研究裸鼹鼠成纤维细胞的生长特性。方法结合传统的消化培养法和组织培养法进行裸鼹鼠和小鼠成纤维细胞原代培养,CCK-8（cell countingkit）细胞计数比较研究两种物种成纤维细胞的生长速率和细胞周期。以不同浓度接种裸鼹鼠肝脏成纤维细胞,CCK-8计数细胞24h、72h、96h、144h细胞密度。结果结合消化培养法和组织培养法两种细胞原代培养方法,裸鼹鼠及小鼠成纤维细胞的生长状态良好。裸鼹鼠成纤维细胞的增殖速率显著高于小鼠成纤维细胞,处于对数生长期的细胞比例与小鼠比较,显著较高。以1．5×10^4／ml以上的浓度接种裸鼹鼠成纤维细胞能使细胞在两天内进入细胞生长对数期。结论结合消化培养法和组织培养法的原代培养方法能提高细胞原代培养的效率,裸鼹鼠成纤维细胞的增殖能力显著高于小鼠。