DNA甲基化和Syk基因甲基化与消化系肿瘤相关性的研究进展

消化道恶性肿瘤在所有恶性肿瘤的发病和死亡率中占居首位,其中一些肿瘤如肝癌、胰腺癌的预后非常差,严重威胁着人们的健康。脾酪氨酸激酶（spleentyrosinekinase,Syk）是一种非受体型蛋白酪氨酸激酶,对B细胞激活信号转导至关重要。近年来对Syk与肿瘤相关性研究证实,Syk可以抑制多种恶性肿瘤的生长,从而使非受体酪氨酸激酶在肿瘤发生、发展和转移过程中作用的研究日益成为热点。许多学者认为Syk在多种恶性肿瘤的发生、发展过程中起着极为重要的作用。     

RASSF2A基因启动子甲基化与肿瘤关系的研究进展

肿瘤抑制基因（TSG）的失活是癌症发病机制的关键因素。TSG失活可能是不可逆的,比如基因缺失或突变;TSG失活也可能通过表观遗传的机制,是可逆的,这为寻找更适合的治疗方法或治疗药物提供了理论基础。CpG 双核苷酸很少出现在人类基因中,但在某些基因的启动子区发现 CpG 保持或高于正常概率,即CpG岛,其甲基化在基因表达的调控上起关键作用。RAS相关区域家族2A（RASSF2A）位于染色体3p21．3,这个区域被证实在一些肿瘤中频繁缺失;其中RASSF2A的表观遗传失活是重要的分子改变。最近的一些研究已陆续阐明了RASSF2A启动子甲基化在肿瘤诊断和预后中的潜在意义,本文对其研究进展综述如下。     

膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态的研究

目的 探讨膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态及其意义。方法 收集30对新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织；采用甲基化特异聚合酶链反应（methylation specific PCR，MSP）检测hMLH1基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果 30对膀胱癌组织、癌周正常组织中hMLH1基因的甲基化阳性率分别为10／30、1／30，二者差异有统计学意义（P〈0．叭）；hMLH1基因甲基化阳性率在Ta-T1期、T2-T3期膀胱癌中分别为7／19、3／11，二者差异无统计学意义（P〉0．05）；在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌中分别为7／18、2／9、1／3，三者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化，但与膀胱癌的临床病理特点无显著相关性，提示hMLH1的异常甲基化可能参与了膀胱肿瘤的发生。     

DNA甲基化与基因沉默及肿瘤

DNA甲基化在胚胎发育及肿瘤演变过程中都扮演了重要角色,相关方面的研究日益受到关注。现对近年来DNA甲基化的分子学基础及其与基因沉默和肿瘤关系的研究进行综述。     

RUNX3基因甲基化和去甲基化与肿瘤的研究进展

人RUNT相关转录因子3(RUNX3)属于RUNT家族成员之一,是目前热门研究的一个抑癌基因。阐述RUNX3基因的结构特点,综述RUNX3基因的甲基化和去甲基化情况与肿瘤发生发展的关系,得出通过甲基化抑制剂可以诱导抑癌基因的重新表达,从而达到治疗肿瘤的目的。     

Slit2基因启动子甲基化与星形细胞肿瘤关系的研究

目的　探讨slit2基因启动子甲基化与星形细胞肿瘤的关系。方法　采用病理级别分别为WHOⅡ、Ⅲ、Ⅳ级的星形细胞肿瘤标本各 12例和正常脑标本 4例 ,提取基因组DNA及总RNA ,以亚硫酸氢钠修饰 直接测序法检测其slit2基因启动子甲基化状态 ,半定量RT PCR测定slit2基因表达情况 ,并对微卫星位点D4S15 4 6做等位基因杂合性缺失 (LOH)分析。结果　 17例 (47 2 % )星形细胞肿瘤可测得slit2基因启动子的甲基化 ,甲基化更多见于高级别 (Ⅲ、Ⅳ级 )星形细胞肿瘤 ;发生甲基化的slit2相对表达水平明显低于未甲基化者 ;仅 2例 (5 5 % )肿瘤有LOH表现。结论　slit2基因启动子甲基化引起的slit2转录抑制是抑癌基因失活的重要机制 ,可能在星形细胞肿瘤的发生、发展中起重要作用。     

子宫内膜癌组织Syk基因的表达及其甲基化分析

目的探讨脾酪氨酸激酶（Syk）基因在子宫内膜癌组织表达及该基因启动子甲基化与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应检测52例子宫内膜癌组织及其癌周正常组织中Syk基因的表达,同时采用巢式双重甲基化特异性PCR（MSP）方法检测该基因启动子甲基化情况。结果Syk基因在子宫内膜癌中的表达显著低于相应的癌周正常组织（P-0．000）;子宫内膜癌有淋巴结转移组Syk基因表达率显著低于无淋巴结转移组（x^2=8．32,P〈0．01）。Syk基因启动子甲基化发生率在子宫内膜癌组织中明显高于相应的癌周正常组织（P=0．000）;子宫内膜癌有淋巴结转移组Syk基因启动子甲基化发生率显著高于无淋巴结转移组（x^2=8．15,P〈0．01）;发生甲基化的肿瘤组织中,均无SykmRNA的表达。结论Syk基因启动子甲基化可能是导致Syk基因失活的原因之一,Syk基因启动子甲基化可能与子宫内膜癌发生发展有关。     

肿瘤基因启动子区异常甲基化与肿瘤的发生

肿瘤的发生和发展是一个与多基因、多步骤的致癌因素相关的复杂过程,包括了原癌基因及肿瘤抑制基因的改变、错配修复基因的突变、DNA甲基化和微卫星不稳定性。癌基因的低甲基化与抑癌基因的高甲基化在肿瘤发生、发展中的基因表达调控、基因结构的稳定等方面发挥重要作用。DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶的催化下,以S-腺苷甲硫氨酸（SAM）为甲基供体,将甲基转移到特定碱基上的过程。甲基化异常被认为是肿瘤的一个特征,是基因组中一种重要的表观遗传修饰,与肿瘤的发生、浸润及转移相关。基因局部甲基化模式的改变已成为令人瞩目的研究领域。本文就DNA甲基化及肿瘤基因启动子区甲基化研究的相关进展作简要综述。     

Runx3基因启动子区甲基化与胃癌的关系

目的通过检测胃癌Runx3基因启动子区域甲基化状态，来探讨Runx3基因启动子区域甲基化在胃癌发生和发展过程中的临床意义。方法采用DNA甲基化特异性PCR（MSP）技术对37例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测。结果Runx3基因在37例胃癌及其癌旁组织中甲基化率分别为40．5％（15／37）和8％（3／37）。结论Runx3基因启动子区甲基化可能是肿瘤特异性的（P＜0．05），可作为胃癌早期诊断的分子标记物。     

造血系统肿瘤WT1基因启动子区域DNA甲基化及其调控的研究

目的 应用聚合酶链反应（PCR）的实验方法研究白血病细胞系中WT1基因启动了区域的DNA甲基化水平，及其与WT1基因表达的关系。方法 ①采用RT-PCR技术及甲基化特异性PCR（Methylation-spectific PCR，MSP）技术检测8226、HL-60、Jurkat、KG-1及Raji等血液系统肿瘤细胞系中WT1基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态；②以5-杂氮脱氧胞嘧啶（5-aza-CdR）对U937细胞系进行去甲基化处理，并观察WT1基因表达水平的改变。结果 ①HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中WT1表达水平高，而8226、Jurkat、Raji、U266和U937细胞系WT1表达水平则极低，同时检测到在8226、Jurkat、Raji、U266和U937这5个细胞系存和WT1基因启动子区域DNA高甲基化；②经去甲基化处理后，U937细胞系的WT1基因表达水平较未处理者上升，同时伴随着WT1启动子区域DNA甲基化水平的下降和未甲基化水平的升高。结论 WT1基因启动子区域DNA高甲基化是抑制其表达的机制之一。     

乳癌组织TSLC1基因mRNA表达及启动子甲基化状态

目的探讨乳癌组织中非小细胞肺癌抑制因子（TSLC1）基因mRNA表达及其启动子甲基化状态。方法应用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR,分别检测39例人乳癌组织及对应癌旁组织中TSLC1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,并探讨二者之间的关系。结果乳癌组织中TSLC1mRNA的表达量是癌旁组织的0.44倍。乳癌组织及癌旁组织中TSLC1基因甲基化率分别为56.4%、10.3%,乳癌组织中TSLC1基因甲基化率明显高于相应癌旁组织（χ2=16.673,P〈0.01）。甲基化的癌组织中TSLC1mRNA的表达量是非甲基化者的0.60倍,表达TSLC1mRNA的癌组织的甲基化率为50%,不表达者为100%,两者之间差异有显著性（P=0.046）。结论 TSLC1基因异常甲基化是其在乳癌组织中表达缺失或下调的原因之一,在乳癌的发生发展中起一定作用,可能成为乳癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

乳腺癌相关基因过甲基化的研究进展

抑癌基因失活包括基因内突变、染色体丢失和启动子甲基化。DNA甲基化是目前抑癌基因的研究热点之一，是肿瘤发生的早期事件。甲基化表型早于恶性表型的出现。并且每种肿瘤具有独特的甲基化谱，检测乳腺癌抑癌基因过甲基化有助于早期发现有癌变倾向的乳腺细胞，对早期诊断和逆转因甲基化失活的抑癌基因，从而在一定程度上逆转具有恶性倾向的肿瘤有一定意义。     

LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系

为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS—PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示：白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态,并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态,并诱导该基因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论：甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一定的价值。     

Syk基因转染对人结肠癌细胞系影响的实验研究

目的构建Syk基因逆转录病毒载体,并观察其对人结肠癌细胞生物学特性的影响。方法通过RT-PCR扩增出Syk基因的部分cDNA片段,将其插入到逆转录病毒载体pLNCX上,构建成Syk基因的表达载体,并经酶切鉴定和测序确认。将Syk基因表达载体经脂质体介导转染人结肠腺癌细胞系LoVo,筛选出Syk基因稳定表达的细胞株,通过Southern blot检测Syk基因的整合;RT-PCR及DNA测序法检测Syk基因的转录;通过Western blot检测转染细胞Syk基因的表达;二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖。结果 Syk基因已整合入细胞并获稳定表达,并显著抑制人结肠腺癌细胞LoVo的增殖。结论 Syk基因逆转录病毒载体通过外源Syk基因mRNA水平的表达,从而抑制人结肠腺癌细胞的生长。     

ABO基因启动子CpG岛甲基化与白血病的相关性

近年来研究发现ABO血型与许多疾病的发生发展相关，某些肿瘤导致A、B血型物质减少的现象已日益引起关注。本研究探讨ABO基因启动子CpG岛甲基化与白血病的相关性。采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测了不同血型的健康人群和各种血液病患者外周血红细胞表面ABH抗原的相对含量，用PCR和MSP—PCR分别检测血液病患者和健康人ABO基因启动子DNA序列和CpG岛甲基化，以及ABO基因启动子-102位点的甲基化。结果发现，白血病患者均出现不同程度的A、B抗原减少；通过对比检测健康人和患者的ABO基因启动子序列，未发现有序列的不同，说明启动子序列高度保守；利用重亚硫酸盐对DNA样本进行修饰后，通过对健康人和患者的ABO基因启动子序列进行扩增和测序，发现健康人和再生障碍性贫血患者在ABO基因启动子的CpG岛区没有甲基化的位点，而急性髓性白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性粒细胞白血病（CML）和部分骨髓增生异常综合征（MDS）患者在位置为-102、-101、-100、-99和-97位置的C碱基均有甲基化的现象。结论：甲基化是造成白血病患者AB抗原下降的原因；-102、-101、-100、-99和-97这几个甲基化位点有可能是白血病的特异性表现；针对-102住点检测结果提示-102位点是否甲基化有可能作为白血病鉴别诊断中一个有意义的分子标识物。     

卵巢上皮癌中DNA错配修复基因启动子区甲基化状态研究

目的探讨卵巢上皮癌中DNA错配修复基因（hMLH1、hMSH2）启动子区甲基化状态及其在卵巢癌发生发展中的作用。方法用甲基化特异性PCR（MSP）法检测20份正常卵巢组织，25份良性卵巢肿瘤，56份卵巢上皮癌中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态；同时检测5-氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine，5-Aza-CdR）处理前后卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中hMLH1、hMSH2甲基化改变；逆转录（RT）-PCR法检测5-Aza—CdR（1μm/L）处理前后卵巢癌细胞株中hMLH1和hMSH2 mRNA表达水平。结果正常卵巢癌组织中均未见hMLH1、hMSH2启动子甲基化；良性卵巢肿瘤中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为4％（1／25）、8％（2／25）；卵巢上皮癌中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为30．4％（17／56）、51．8％（29／56）；且与肿瘤细胞的分化程度和淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。5-Aza—CdR处理卵巢癌细胞株后，可逆转hMLH1和hMSH2启动子区的甲基化，细胞株的hMLH1和hMSH2 mRNA表达均有不同程度的增加。结论DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2甲基化为卵巢癌发生发展中的早期基因改变，有可能成为卵巢癌早期诊断、评价疗效和判定预后的分子生物学指标。hMLH1和hMSH2甲基化与mRNA表达密切相关，是表达调节的重要方式之一，这种改变可被甲基化酶抑制剂所逆转。     

胃癌中p16蛋白表达和p16基因启动子甲基化的研究

目的:探讨胃癌中p16基因的失活机制。方法:采用免疫组织化学SP方法检测40例胃癌组织和43例正常胃黏膜组织中p16蛋白的表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法研究40例胃癌组织和35例正常胃黏膜组织p16基因启动子的甲基化状况。结果:23例胃癌组织的p16基因启动子发生了甲基化,甲基化发生率为58%,正常胃黏膜组织中未发现甲基化,两组间比较差异有显著性(P<0.01)。31例胃癌组织中的p16蛋白表达阴性,正常胃黏膜组织中6例表达阴性,两组间差异有显著性(P<0.01)。胃癌组织中,MSP方法和免疫组织化学方法结果间差异无显著性(P>0.05)。结论:胃癌的发生与p16基因失活关系密切,启动子甲基化可能抑制了蛋白的表达,这种途径可能是胃癌中p16基因失活的重要机制。     

急性白血病Id4基因启动子区甲基化状态研究

本研究探讨正常人和不同疾病状态急性白血病（AL）患者Id4基因启动子区甲基化状态差异。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）对正常人和AL患者骨髓进行Id4基因启动子区甲基化状况检测。结果表明：Id4基因在正常骨髓中呈完全性非甲基化状态，初治AML和ALL患者中Id4基因甲基化比例分别为84％和86％。8例复发难治的AL患者中Id4基因全部甲基化，14例Id4基因甲基化的完全缓解ALL患者中有8例在12个月内复发，而9例Id4基因非甲基化的完全缓解ALL患者中12月内复发仅1例；Id4基因呈甲基化状态的完全缓解的AML患者中12个月内复发率为62．5％，而在非甲基化的患者中12个月内复发率仅为10％，两者差异有显著性意义。完全缓解的ALL患者甲基化比例为64．3％，而完全缓解的AML患者甲基化比例为28．6％，两者差异有显著性意义。39例初治AL中。有33例Id4基因呈甲基化状态，8例复发难治的AL患者的Id4基因均呈甲基化状态，58例完全缓解的AL中。有24例Id4基因呈甲基化状态。结论：与正常人不同，AL患者中Id4基因都发生了不同程度的甲基化改变，缓解状态患者的甲基化比例低于非缓解状态患者，Id4基因甲基化模式的改变与AL的发生密切相关。     

DNA修复基因甲基化修饰与肿瘤研究进展

真核生物DNA修复的主要途径包括错配修复(mismatch repair,MMR)、碱基切除修复(base excision repair,BER)、核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)、直接修复及重组修复等,共同构成维持遗传信息稳定的保护机制.DNA修复相关基因的表达缺陷可能导致遗传物质损伤积累,在多种疾病,特别是肿瘤的发生中具有重要作用.